RT／PCR检测CMLbcr／abl mRNA及α－干扰素治疗后残留病灶观察

应用逆转录／多聚酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）及双扩增ＰＣＲ方法检测了４４例慢性期、缓解期及加速（或）急变期慢性粒细胞白血病患者的ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ，所有患者均为阳性。各期患者均以表达ｂ＿３ａ＿２融合方式为主。１４例患者单用α－２ｂ干扰素或合用小剂量羟基脲治疗后，１３例患者ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ仍阳性，有３例单次扩增结果阴性，提示白血病细胞负荷较低，１例孤立性骨髓外粒细胞白血肉瘤患者经治疗后复查ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ转阴。但按作者应用的剂量及疗程对大多数患者尚难彻底清除残留病灶。     

慢性粒细胞白血病异基因骨髓移植后残留白血病观察

目的：观察慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）异基因骨髓移植（ａｌｏ－ＢＭＴ）后残留白血病情况。方法：用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术测定４６例经ａｌｏ－ＢＭＴ植活的ＣＭＬ患者骨髓细胞Ｍ－ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ表达。结果：ａｌｏ－ＢＭＴ能使约７０％ＣＭＬ患者在移植后３个月ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ转阴。其中４例患者在移植后＋１．５～２．０个月时为ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ（＋），于＋３个月转为阴性；１例于＋９个月转阴。１例无病存活６年以上患者，其ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ为阳性；另１例无病存活４年以上患者ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ为阴性。结论：ＲＴ－ＰＣＲ是当前检测残留白血病最灵敏的方法，但不能忽视其局限性。     

筑巢式PCR检测白血病微量残留bcr／ablmRNA

采用逆转录－筑巢式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）技术检测３３例不同临床阶段的慢性粒细胞白血病（ＣＭｕ及１８例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）患者的ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ。结果：３３例ＣＭＬ中３１例阳性，其中２１例表达ｂｃｒｅｘｏｎ３／ａｂｌｅｘｏｎ２ｍＲＮＡ，７例表达ｂｃｒｅｘｏｎ２／ａｂｌｅｘｏｎ２ｍＲＮＡ，２例同时表达这两种ｍＲＮＡ。在１８例ＡＬＬ中阳性６例，其中４例表达ｈｒｅｘｏｎ３／ａｂｌｅｘｏｎ２ｍＲＮＡ，２例表达ｂｃｒｅｘｏｎ３／ａｂｌｅｘｏｎ２＋ｂｃｒｅｘｏｎｌ／ａｂｌｅｘｏｎ２ｍＲＮＡ。本实验的敏感度达１０￣（－６）～１０￣（－７）水平，有助于临床上白血病微量残留病的早期诊断。     

竞争聚合酶链反应定量bcr-abl mRNA方法的建立及应用

竞争聚合酶链反应定量ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ方法的建立及应用李巍杜传书我们根据ｂｃｒ－ａｂｌ基因的特点，用重组聚合酶链反应（ＰＣＲ）法定点改建ｂ３ａ２型ｂｃｒ－ａｂｌｃＤＮＡ，得到ｂ３ａ２和ｂ２ａ２型ｂｃｒ－ａｂｌｃＤＮＡ的通用竞争内标物。在此基础上，...     

RT／PCR检测CMLbcr／abl mRNA及α—干扰素治疗后残留病灶观察

应用逆转录／多聚酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）及双扩增ＰＣＲ方法检测了４４例慢性期，缓解期及加速（或）急变期慢性粒细胞白血病患者的ｂｃｒ／ａｂｌ ｍＲＡＮ，所有患者均为阳性。各期患者均以表达ｂ３ａ２融合方式为主。１４例患者单用α－２ｂ干扰素或合用小剂量羟基脲治疗后，１３例患者ｂｃｒ／ａｂｌ ｍＲＮＡ仍阳性，有３例单次扩增结果阴性，提示白血病细胞负荷较低，１例孤立性骨髓外粒细胞白肉瘤患者治疗后复查ｂｃｒ／     

反义bcr／abl寡核苷酸诱导K562细胞凋亡的研究

反义ｂｃｒ／ａｂｌ寡核苷酸诱导Ｋ５６２细胞凋亡的研究戴木水罗绍凯戴丽君洪文德彭爱华慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）细胞表达ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因，其引起ＣＭＬ发病的机制可能是抑制髓系细胞的凋亡，因而如何抑制ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ的表达，诱导髓系细胞的凋亡是...     

切割bcr/abl核酶的逆转录病毒载体构建及其对K562细胞的影响

目的：研究ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因在慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中的作用以及探索ＣＭＬ基因治疗的可能性。方法：合成针对ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因转录本ｂ３ａ２断裂点“锤头状”核酶的ｃＤＮＡ序列，定向克隆于逆转录病毒载体内，通过脂质体介导的ＤＮＡ转染法，将核酶基因导入Ｋ５６２细胞，并通过克隆分析法、流式细胞术（ＦＣＭ）、逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）、ＤＮＡ电泳及电镜观察等方法检测核酶对Ｋ５６２细胞的影响。结果：①核酶转染Ｋ５６２细胞后４８小时克隆形成抑制率达８５％；②细胞内Ｐ２１０蛋白合成受到明显抑制；③ＲＴＰＣＲ半定量检测ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ表达水平明显下降；④核酶处理组Ｋ５６２细胞发生凋亡，表现为：在ＦＣＭ图谱上可见明显的凋亡峰；ＤＮＡ电泳分析出现典型的梯状ＤＮＡ带；电镜观察呈现凋亡早期形态学改变。结论：核酶基因通过逆转录病毒载体导入Ｋ５６２细胞后可成功表达，使Ｋ５６２细胞ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ及Ｐ２１０蛋白表达水平下降，抑制Ｋ５６２细胞增殖，同时诱导Ｋ５６２细胞发生凋亡。     

反义bcr／abl RNA的体外转录和杂交

为了转录出反义ｂｃｒ／ａｂｌＲＮＡ，我们用逆转录。聚合酶链反应技术将ｂｃｒ／ａｂｌ嵌合转录体接合区扩增，并反向插到ｐＧＥＭ－４Ｚ质粒ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶转录起始点下游作为体外转录的模板。限制酶切分析和ＤＮＡ序列分析结果都证实插入片段序列与Ｋ５６２ｍＲＮＡ接合区完全一致。利用体外转录技术，我们成功地转录出跨ｂｃｒ／ａｂｌ接合区反义ＲＮＡ。体外杂交实验的结果表明，该反义ＲＮＡ具有杂交捕获ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ接合区的功能，可应用于选择性抑制含ｂｃｒ／ａｂｌ基因的白血病细胞。     

直接原位逆转录-聚合酶链反应检测慢性粒细胞白血病bcr/abl mRNA

逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)检测慢性粒细胞白血病(慢粒 )ｂｃｒ ａｂｌｍＲＮＡ已应用于临床诊断和微小残留病的检测 ,但该方法不能反映ｂｃｒ ａｂｌｍＲＮＡ和细胞结构之间的关系 ,且ＲＮＡ提取操作要求较高 ,应用受到一定的限制。我们拟建立直接原位ＲＴ ＰＣＲ检测慢粒ｂｃｒ ａｂｌｍＲＮＡ的方法。材料和方法1　细胞　抽取经临床确诊的慢粒患者外周静脉血 ,Ｆｉｃｏｌｌ分离出外周血单个核细胞。2　细胞涂片及固定　取 2× 10 6 /ｍｌ单个核细胞悬液 5 0 μｌ,离心涂片于包被 0 .2ｇ Ｌ多聚赖氨酸的载片上 ,用体积分数为4%的…     

IFN—α联合IL—6对CGL患者内髓细胞生长及生长—凋亡相关基 …

目的 探讨α干扰素（ＩＦＮ－α）及ＩＦＮ－α联合白细胞介素６（ＩＬ－６）对慢性粒细胞白血病（ＣＧＬ）患者骨髓单个核细胞生长及ｂｃｒ／ａｂｌ,ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。方法 以２００Ｕ／ｍｌ ＩＦＮ－α或２００Ｕ／ｍｌ ＩＮＦ－α联合１００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－６液体培养ＣＧＬ慢性期患者骨髓单个核细胞,采用逆转录－联合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）相对定量分析培养２４ｈ的骨髓单个核细胞中β－ａｃｔ     

细胞凋亡相关基因与白血病

细胞凋亡是当前生命科学研究的热点之一，凋亡相关基因ｂｃｌ－２，Ｐ５３，ｃ－ｍｙｃ，ＩＣＥ家族，ＡＰＯ＝－１／Ｆａｓ，ｂｃｒ－ａｂｌ，ＰＭＬ－ＲＡＲα等涉及白血病发病机制，治疗和耐药，通过调控凋亡相关基因促进白血病细胞凋亡，可能是治疗白血病的新途径。     

荧光原位杂交法检测慢性粒细胞白血病bcr基因重排

目的：检测慢性粒细胞白血病ｂｃｒ基因重排。方法：应用荧光原位杂交技术，以自行筛选和制备的酵母人工染色体为探针进行荧光原位杂交，检测慢性粒细胞白血病ｂｃｒ基因的重排。结果：用２２号染色体ｂｃｒ基因附近的ＹＡＣ７６５Ｅ３，在９例慢性粒细胞白血病中，发现５例慢性期患者，２例急变期患者和１例经α干扰素治疗后的患者存在ｂｃｒ基因重排，１例自体骨髓移植后患者的核型呈嵌合状态，即同时存在正常的和具有ｂｃｒ基因重排的核型。结论：ＹＡＣ７６５Ｅ３是一个有用的检测ｂｃｒ基因重排的探针，荧光原位杂交技术可能成为白血病治疗效果的监测和微量残留病检出的一种重要手段。     

小儿急性淋巴细胞白血病bcl-2和c-myc转录水平表达及其意义

采用原位分子杂交方法，检测了５４例小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平，并与患儿临床表现进行对比分析。结果表明：小儿ＡＬＬｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达与非白血病对照组比较普遍增高，呈显著性差异（Ｐ＜００１）；ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ与ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平呈明显相关（ｒ＝０８０４８，Ｐ＜００１）；两者的表达水平表明复发病例明显高于初诊病例；高危型明显高于普危型（Ｐ＜００１）。结果提示：ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因的异常表达在小儿ＡＬＬ的发生发展过程中起重要作用。综合分析ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因表达情况可作为评价小儿ＡＬＬ病情和恶性程度的重要指标，也可作为判断预后的指标。     

bcr／abl基因抑制髓系细胞凋亡与慢性髓细胞白血病反义基因治疗

ｂｃｒ／ａｂｌ基因抑制髓系细胞凋亡与慢性髓细胞白血病反义基因治疗戴木水综述洪文德审校慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）细胞遗传学特征是具有Ｐｈ染色体，即ｔ（９；２２）（ｑ２３；ｑ１１），结果形成ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因，编码２１万的ｂｃｒ／ａｂｌ融合蛋白（Ｐ２...     

RT—PCR一步法检测慢性粒细胞白血病bcr／abl融合基因

应用ＲＴ－ＰＣＲ一步法检测了４２例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因，均显示ｂｃｒ／ａｂｌ基因阳性，其中２１例为１６８ｂｐ扩增带，１８例为９３ｂｐ扩增带，３例同时具有１６８ｂｐ和９３ｂｐ二条扩增带。ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因检测，对ＣＭＬ的诊断、治疗及预后判断均有重要意义。ＲＴ－ＰＣＲ一步法特异性好，敏感性高，简单快速，可节省试剂，值得推广应用。     

bcr／abl反义RNA片段启动人ph^＋白血病细胞凋亡过程

为探讨ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因对维持细胞生存方面的作用，通过脂质体介导的方法将表达ｂｃｒ／ａｂｌ融合区反义ＲＮＡ片段的重组质粒导入Ｋ５６２和ＢＶ１７３细胞系，对细胞的超微结构、细胞大小的改变以及核ＤＮＡ降解等进行观察。结果：表达ｂｃｒ／ａｂｌ反义ＲＮＡ片段的细胞呈典型的细胞凋亡形态，细胞核ＤＮＡ降解。证实ｂｃｒ／ａｂｌ反义ＲＮＡ片段启动人Ｐｈ＋白血病细胞系凋亡过程。提示ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因是Ｐｈ＋白血病细胞存活能力增强的重要因素，也为慢性髓系白血病的治疗指出了新的方向     

抗凋亡基因bcl－2在急性白血病骨髓与细胞株中的转录水平表达

采用原位杂交方法检测了急性白血病骨髓活检标本及细胞株中ｂｃｌ－２基因表达水平。结果２２例白血病患者骨髓中２１例（包括髓系和淋巴系）存在ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ高表达；６种白血病细胞株中５种ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ阳性（Ｍｏｌｔ－４例外），它们分别为ＣＥＭ、Ｒａｊｉ、ＨＬ－６０、Ｕ９３７及Ｋ５６２。表明造血系统肿瘤中广泛存在ｂｃｌ－２基因转录水平激活，其基因产物可能通过抑制细胞凋亡过程而影响急性白血病细胞的生物学特性。     

抗凋亡基因bcl—2在急性白血病骨髓与细胞株中的转录水平表达

采用原位杂交方法检测了急性白血病骨髓活检标本及细胞株中ｂｃｌ－２基因表达水平。结果２２例白血病患骨髓中２１例存在ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ高表达；６种白血病细胞株中５种ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ阳性（Ｍｏｌｔ－４例外），它们分别为ＣＥＭ、Ｒａｊｉ、ＨＬ－６０、Ｕ９３７及Ｋ５６２。表明造血系统肿瘤中广泛存在ｂｃｌ－２基因转录水平激活，其基因产物可能通过抑制细胞凋亡过程而影响急性白血病细胞的生物学特性。     

慢性肺心病急性加重期血小板内Ca^2＋cAMP和TXB2含量关系的探讨

目的：为探讨慢性肺心病急性加重期患者血小板内游离Ｃａ２＋、ｃＡＭＰ和ＴＸＢ２之间的相互关系及意义。方法：用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光技术测定了３０例慢性肺心病患者急性加重期和２５例正常对照的血小板内游离Ｃａ２＋含量，用放射免疫分析法测定其血小板内ｃＡＭＰ和ＴＸＢ２的含量。结果：患者血小板内游离Ｃａ２＋和ＴＸＢ２含量明显高于正常对照（Ｐ均＜０．０１），而血小板内ｃＡＭＰ含量则明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），且患者中血小板内Ｃａ２＋含量和ＴＸＢ２含量均与血小板内ｃＡＭＰ含量成负相关（ｒ分别为－０．７６６和－０．５３３，Ｐ均＜０．０１），而Ｃａ２＋含量与ＴＸＢ２含量之间则呈明显的正相关性（ｒ为０．７０７，Ｐ＜０．０１）。结论：慢性肺心病急性加重期血小板处于活跃状态，可能与其内Ｃａ２＋含量升高、ＴＸＢ２生成增加、ｃＡＭＰ含量降低有关，三者相互作用来激活血小板     

BCR—ABL融合蛋白多样性及其与白血病表型的关系

本文报告ＢＣＲ－ＡＢＬ融合蛋白的变化及其与白血病表型的关系。首先报告各种ＢＣＲ－ＡＢＬ融合基因的结构及其转录本。可分为三种类型，即Ｍ－ｂｃｒ，ｍｂｃｒ和μ－ｂｃｒ，以及它们见于那些白血病。其次报告ＢＣＲ断点位置的变化，ＡＢＬ的特殊断点，ＢＣＲ－ＡＢＬ信息ＲＮＡ的拼接。ＢＣＲ－ＡＢＬ融合蛋白的结构和白血病的关系。引外ＢＣＲ／ＡＢＬ细胞还带有染色体的其它异常，Ｐｈ染以体的变种等。最后论述了ＢＣＲ／ＡＢ