紫杉醇治疗卵巢癌裸鼠移植瘤过程中WT1的表达及意义

研究紫杉醇治疗卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤过程中WT1基因的表达和意义。方法:建立卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤模型,随机进行紫杉醇化疗（紫杉醇组）及生理盐水（对照组）处理,测量移植瘤体积并对移植瘤标本进行苏木精-伊红染色、流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期改变、免疫组化检测Bcl-2及WT1蛋白表达、RT-PCR检测WT1 mRNA的表达。结果:紫杉醇化疗对裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,与对照组相比,紫杉醇组细胞凋亡率增加（P<0.05）;同时,移植瘤组织中Bcl-2、WT1蛋白及WT1 mRNA的表达均显著下降（P<0.05）。结论:WT1基因在卵巢癌凋亡过程中可能发挥着一定的作用,其作用机制或许与抗凋亡基因Bcl-2有关。      

EBV-LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1细胞凋亡的影响

背景与目的:已证实EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latentmembraneprotein,LMP1)具有转化致瘤作用,在鼻咽癌的发生发展中起重要作用。LMP1的转化致瘤作用可能与细胞凋亡有关,本实验目的是观察EBV-LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1细胞凋亡的影响,探索LMP1在鼻咽癌发生发展中的可能机制。方法:用电转染的方法将带有绿色荧光蛋白GFP报道系统的EB病毒LMP1基因真核表达质粒导入CNE1,用荧光显微镜检测报道基因GFP的表达情况;用免疫组化法及Westernblot法检测目的基因LMP1的表达情况;用流式细胞仪、荧光染色及DNA片段分析等方法检测在有地塞米松磷酸钠或无血清饥饿诱导的情况下LMP1对CNE1细胞凋亡的影响。结果:CNE1G细胞(转染空载质粒PAT-GFP的CNE1细胞)及CNE1GL(转染目的基因质粒PAT-GFP-LMP1的CNE1细胞)有绿色荧光蛋白表达,CNE1细胞(未经转染的CNE1细胞)无绿色荧光蛋白表达;CNE1GL细胞LMP1呈阳性表达,而CNE1及CNE1G细胞均为阴性。CNE1、CNE1G及CNE1GL3组细胞分别用地塞米松磷酸钠或无血清1640培养液处理后均有凋亡出现,且两种诱导方法均能使CNE1GL组细胞的凋亡指数(apoptosisindex,AI)较CNE1及CNE1G组明显增高(P<0.05),而CNE1与CNE1G组的凋亡指数无明显差别。3组细胞常规培养下则无凋亡出现。结论:LMP1基因成功导入CNE1细胞     

野生型p53基因转染对卵巢癌细胞生长及药物敏感性影响

目的：探讨野生型p53基因转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3的体外生长及裸鼠体内致瘤性抑制作用。并了解p53基因与SKOV-3细胞对顺铂敏感性之间的关系。方法：利用脂质体介导,将含有人野生型p53cDNA的真核表达质粒pCB6-p53导入SKOV-3细胞中,观察该细胞体外生长和裸鼠体内致瘤性改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,MTT法检测细胞药物敏感性改变。结果：免疫组化法证实外源性p53基因在阳性细胞克隆稳定存在;转染野生型p53基因的SKOV-3细胞体外生长速率下降,裸鼠体内致瘤性丧失;G1/G0期细胞百分比（81.5%)和凋亡细胞百分比（11%）增高;p53表达阳性的SKOV-3细胞对顺铂的敏感性明显增强。结论：野生型p53基因转染能使SKOV-3细胞出现生长抑制和对顺铂的化疗敏感性增强。     

野生型p53基因转染对卵巢癌细胞生长及药物敏感性影响

目的:探讨野生型p53基因转染对人卵巢癌细胞株SKOV-3的体外生长及裸鼠体内致瘤性抑制作用,并了解p53基因与SKOV-3细胞对顺铂敏感性之间的关系.方法:利用脂质体介导,将含有人野生型p53cDNA的真核表达质粒pCB6-p53导入SKOV-3细胞中,观察该细胞体外生长和裸鼠体内致瘤性改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,MTT法检测细胞药物敏感性改变.结果:免疫组化法证实外源性p53基因在阳性细胞克隆稳定存在;转染野生型p53基因的SKOV-3细胞体外生长速率下降,裸鼠体内致瘤性丧失;G1/G0期细胞百分比(81.5%)和凋亡细胞百分比(11%)增高;p53表达阳性的SKOV-3细胞对顺铂的敏感性明显增强.结论:野生型p53基因转染能使SKOV-3细胞出现生长抑制和对顺铂的化疗敏感性增强.     

人胚绒毛提取液对NCI446细胞生长的影响及其作用机制

目的探索人胚绒毛组织提取液（Human Embryonic Chofion Extract，HECE）中是否存在抑瘤物质。方法本研究将妊娠30～50d左右的人胚绒毛组织制成匀浆，收集上清，即人胚绒毛提取液（Human Embryonic Chofion Extract，HECE），采用MTT法检测其NCI446（人小细胞肺癌）肿瘤细胞株的生长作用。本实验对NCI446细胞进行了系统的研究：HECE对NCI446细胞不同时间的生长作用，凋亡的检测及对转染人类多药耐药基因（MDR1）的NCI446细胞的生长作用。结果HECE对NCI446细胞有明显的抑制作用，呈剂量依赖关系，NCI446细胞与HECE共育48h，原液组存活率为58．10％，延长对NCI446细胞作用时间至72h，仍有抑制作用，但结果与48h基本一致。采用TUNEL法检测凋亡，可见凋亡细胞，阳性率可达31％（3次实验），对已转染MDR1基因的NCI446细胞这种抑瘤作用降低。结论这种提取液中存在着天然的抑瘤成份，这种抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的，但不排除可引起细胞坏死。     

肾母细胞瘤WT_1基因缺失

目的　对 30例散发性肾母细胞瘤WT1基因缺失进行检测 ,并分析其与组织类型的关系。方法　采用Southern印迹分子杂交技术。结果　 2例WT1基因内缺失为间质优势型肾母细胞瘤。结论　肾母细胞瘤的病因学十分复杂 ,WT1基因缺失可能与间质优势型肾母细胞瘤的发生有关。     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡过程中Par-4及WT1基因表达的变化

 目的　探讨三氧化二砷（As2O3）诱导K562细胞凋亡过程中前列腺凋亡反应因子-4（Par-4）和WT1基因表达的变化。方法　用不同浓度As2O3（2～10 μmol／L）处理K562细胞24～72 h,MTT法测定细胞增生活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用荧光定量RT-PCR检测Par-4和WT1基因 mRNA表达变化,Western blotting检测Par-4和WT1蛋白表达的变化。结果　不同浓度As2O3作用于K562细胞,随浓度增加能明显抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。同时Par-4基因mRNA和蛋白表达逐渐增加;而WT1基因mRNA及蛋白表达逐渐下降。结论　As2O3可抑制K562细胞生长,诱导细胞凋亡,Par-4与WT1基因可能参与As2O3诱导K562细胞凋亡的调控。     

转染wt－p53对小鼠移行细胞癌 生物学行为影响的研究

目的为进一步探讨膀胱肿瘤的治疗途径。方法利用Lipofectamine将外源性野生型p53基因导入小鼠膀胱移行细胞癌BST739细胞中，并得到表达。结果细胞在体外标准条件下，生长增殖率降低。流式细胞计检测细胞周期分析显示G0＋G1细胞比例明显增高，凋亡指数升高，细胞生长速度减低，细胞增殖能力下降，体内接种致瘤性下降。结论增加野生型p53的基因表达能抑制恶性肿瘤的生长。     

转染REGγ基因对乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究转染蛋白酶体激活因子REGγ基因的乳腺癌MDA-MB-231细胞在裸鼠体内的成瘤作用及其机制.方法:以脂质体转染法将构建的重组质粒pcDNA3.1-REGγ导入MDA-MB-231细胞,以G418(600 mg/L)筛选获得稳定高表达该基因的细胞株(实验组).以转染空载体及未施加处理因素的细胞作为对照组.将此3组细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长情况并计算抑瘤率.RT-PCR检测REGγ基因在移植瘤中的表达,FCM检测移植瘤的肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)中CD16的表达以及肿瘤细胞周期和细胞凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤中p21的表达.结果:与对照组相比,实验组的移植瘤生长速度较快、体积较大,瘤体质量明显增加(P＜0.05);REGγ基因在移植瘤中的表达增加(P＜0.01);FCM检测提示CD16阳性率明显降低(P＜0.05);G0/G1和G2/M期细胞减少,S期细胞明显增多,肿瘤细胞的凋亡率明显降低(P＜0.05);p21的表达明显降低(P＜0.05).结论:REGγ基因在体内具有促进乳腺癌发生、发展的作用,其机制可能与加速细胞周期、抑制细胞凋亡、抑制自然杀伤细胞活化以及对p21的特异性降解有关.     

鼻咽癌细胞系SUNE中EBV-LMP1基因对永生化人胚肾上皮细胞生长特性的影响

目的研究鼻咽癌细胞系ＳＵＮＥ中ＥＢ病毒潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ１）基因对上皮细胞生长特性的影响，探索ＬＭＰ１在鼻咽癌发生中所起的作用。方法用ＬＭＰ１基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞，检测ＬＭＰ１的表达，观察细胞的生长状态、生长速度、在软琼脂中的集落形成能力及对裸鼠的致瘤能力。结果被ＬＭＰ１基因转染的细胞生长旺盛，丧失接触抑制，生长速度增快，在软琼脂中能够形成多个集落，并能在裸鼠体内成瘤。结论ＬＭＰ１基因能明显改变上皮细胞的生物学行为，促进细胞的生长、增殖和转化，使转染的上皮细胞获得肿瘤细胞的生长特征。     

Tumorigenicity associated with chromosome 11p15 alterations in sv40-transformed human kidney-cells

Chromosome 11p15 has been suggested to be a potential site for a second Wilms' tumour gene (a childhood nephroblastoma). Human foetal kidney cells and normal kidney cells from Wilms' tumour patients were transformed with SV40 derivative vectors. As some of the cell lines progressed to tumorigenicity, we observed that chromosome 11p13, site of the WT1 suppressor gene, did not show any allelic loss. However, RFLP analysis showed that chromosome 11p15 was affected by allelic losses on different genes in some cell lines but not necessarily prior to the appearance of tumorigenicity. We also observed that the most aggressive cell Line (SVCU/NK), derived from the normal kidney cells of a Wilms' tumour patient, showed increased expression of c-Ha-ras proto-oncogene at later passage and in the tumour tissue extracted from nude mice. Finally we report a lack of tumour suppression activity of one cell line SVT1B6/NK, when fused with the tumorigenic G401 cell line (the latter has been used in tumour suppression experiments as a Wilms' tumour cell line before being identified as a Rhabdoid tumour cell line). These experiments are consistent with the existence of a suppressor gene at chromosome 11p15.     

Human homologue of Drosophila lats, LATS1, negatively regulate growth by inducing G(2)/M arrest or apoptosis

The lats gene encodes a family of proteins conserved from insects to humans. Drosophila carrying lats mutant cells or mice deficient for Lats1 develop tumors in various tissues. The mammalian LATS1 protein was previously shown to bind to CDC2, suggesting that LATS1 may modulate G(2)/M cell cycle progression by affecting CDC2 activity. In this study, we introduced human LATS1 into LATS(-/-) MEF cells by adenovirus-mediated gene transfer. Overexpression of LATS1 causes G(2)/M arrest through inhibition of CDC2 kinase activity. Furthermore, overexpression of LATS1 significantly suppressed the human tumor cell growth in vitro and tumorigenicity in vivo by inducing either cell cycle arrest in G(2)/M or apoptosis. These observations suggest that LATS1 is a potent growth suppressor and, like other tumor suppressors, it suppresses growth by inducing cell cycle arrest or apoptosis.     

Effect of adenoviral transduction of the fragile histidine triad gene into esophageal cancer cells

Reintroduction of a tumor suppressor gene product in cancer cells is a promising strategy for cancer gene therapy. The fragile histidine triad (FHIT) gene has been identified in a region at chromosome 3p14.2, which is deleted in many tumors, including esophageal cancer. Previous studies have shown frequent biallelic alterations of the FHIT gene in numerous tumors, and have demonstrated a tumor suppressor function of Fhit. We have studied the biological effects of adenoviral-FHIT transduction in esophageal cancer cell lines. Results showed suppression of cell growth in vitro in three of seven esophageal cancer cell lines, all seven of which showed abundant expression of the transgene. Adenoviral-FHIT expression, but not control adenoviral infections, induced caspase-dependent apoptosis in two esophageal cancer cell lines, TE14 and TE4, which express no or very little Fhit, respectively. Treatment of TE14 cells with adenoviral-FHIT vectors resulted in abrogation of tumorigenicity in nude mice. A third esophageal cancer cell line, TE12, without detectable endogenous Fhit, showed accumulation of cells at S to G2-M and a small apoptotic cell fraction after adenoviral-FHIT transduction. Thus, adenoviral-FHIT expression can inhibit the growth of esophageal cancer cells, at least in part through caspase-dependent apoptosis, suggesting that adenoviral-FHIT infection should be explored as a therapeutic strategy.