多种神经组织修复成鼠脊髓损伤的实验研究

背景：脊髓损伤后以游离周围神经片断(雪旺氏细胞)与胚胎脊髓联合移植能协同诱发宿主再生潜能，而带血管蒂周围神经移植后有更多的雪旺氏细胞存活，但其与胚胎脊髓协同作用的研究较少。目的：探讨不同神经组织移植修复成鼠急性脊髓损伤的能力。设计：单盲随机对照实验。地点和对象：实验在解放军第三军医大学大坪医院全军战创伤中心骨刨伤科完成，研究对象为150只4月龄雌性Wistar属成年大鼠，由解放军第三军医大学实验动物中心提供。干预：成鼠胸髓损伤后，分别移植游离正中神经(FPN组)、带血管蒂正中神经(VPN组)、孕14天胚胎脊髓(Fsc组)、游离正中神经加胚胎脊髓(P+F组)、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓(V+F组)。主要观察指标：术后8周行神经解剖及电生理检查。结果：V+F组再生轴突和存活雪旺氏细胞数目．胚胎脊髓体积增长速度和神经元密度显著高于对照组(P&;lt;0．01)，细胞分化较好，突触较成熟。SEP的P1，N1波潜伏期显著缩短(P&;lt;0．01)。结论：带血管蒂周围神经与胚胎脊髓联合移植，在解剖和电生理上均优于其他组织，对FSC的生长发育及损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。     

带血管蒂周围神经在联合移植修复脊髓损伤中的作用

目的探讨带血管蒂周围神经促进胚胎脊髓修复成鼠脊髓损伤的能力。方法成鼠胸段脊髓损伤后,分别移植带血管蒂正中神经(VPN组)、孕14天胚胎脊髓(FSC组)、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓(V+F组)。术后8周行组织学及电生理检查。结果V+F组移植神经与脊髓连接紧密,有较多新生轴突长入,雪旺氏细胞大量存活和增殖,神经丝蛋白、100％饱和硫蛋白阳性反应均明显高于VPN组(P＜0.01);胚胎移植物与受体融合佳,体积增长速度、神经纤维和神经元数目显著高于FSC组(P＜0.01),大部分细胞分化较好,突触较成熟;SEP检查示P1、N1波波伏期显著缩短(P＜0.01)。结论带血管蒂周围神经与胚胎脊髓联合移植,对FSC的生长发育、对损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。     

胚胎脊髓对损伤脊髓的修复作用研究

目的探讨不同条件下胚胎脊髓移值修复成鼠急性脊髓损伤(SCI)的能力。方法成鼠胸髓损伤后分别移植孕14d胚胎脊髓(FSC组)、游离正中神经加胚胎脊髓(P＋F组)、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓(V＋F组),术后8周行组织学检查。结果V＋F组胚胎脊髓与受体融合佳,体积增长速度、神经纤维和神经元数目显著高于P＋F、FSC组（P<0.01）,细胞分化比较好,突触较成熟,界面区也无明显的胶质增生。结论带血管蒂周围胚胎脊髓联合移植,对FSC的生长发育、对损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。     

诱发电位在组织移植复脊髓损伤中的变化及意义

目的通过测定诱发电位变化探讨不同神经组织移植对成鼠损伤脊髓功能恢复的影响.方法成鼠胸髓损伤后,分别移植带血管蒂正中神经(VPN组)、孕14d胚胎脊髓(FSC组)、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓(V+F组).术后1,2,4,8,12周行体感诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)检查.结果各组SEP和MEP的峰潜伏期在2～8周内均有恢复,V+F组显著优于对照组(P<0.05).结论带蒂神经与胚胎脊髓联合移植对脊髓传导功能的恢复有较好作用.     

诱发电位在组织移植修复脊髓损伤中的变化及意义

目的:通过测定诱发电位变化探讨不同神经组织移植对成鼠损伤脊髓功能恢复的影响。方法:成鼠胸髓损伤后,分别移植带血管蒂正中神经(VPN组)、孕14d胚胎脊髓(FSC组)、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓(V+F组)。术后1,2,4,8,12周行体感诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)检查。结果:各组SEP和MEP的峰潜伏期在2-8周内均有恢复,V+F组显著优于对照组(P<0.05)。结论:带蒂神经与胚胎脊髓联合移植对脊髓传导功能的恢复有较好作用。     

诱发电位的组织移植修复脊髓损伤中的变化及意义

目的：通过测诱诱发电位变化探讨不同神经组织移植对成鼠损伤脊髓功能恢复的影响。方法：成鼠胸髓损伤后，分别移植带血管蒂正中神经（VPN组）、孕14d胚胎脊髓（FSC组）、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓（V＋F组）。术后1，2，4，8，12周行体感诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检查。结果：各组SEP和MEP的峰潜伏期在2－8周内均有恢复，V＋F组显优于对照组（P＜0．05）。结论：带蒂神经与胚胎脊髓联合移植对脊髓传导功能的恢复有较好作用。     

高压氧与带血供周围神经移植修复鼠脊髓损伤的研究

目的探索联合应用高压氧与带血供周围神经移植修复脊髓损伤的作用。方法将40只雌性Wistar成年鼠分为A、B两组,A组为单纯带血供的正中神经移植修复脊髓损伤;B组为带血供的正中神经移植后给予高压氧治疗。结果在组织学、神经传导速度及移植神经内再生轴突形态计量分析诸方面,效果明显好于A组。结论带血供周围神经是修复脊髓损伤较为理想的移植材料,高血氧能够提高带血供周围神经移植修复脊髓损伤的能力。     

周围神经移植修复急性脊髓损伤研究的进展

１　历史与现状早在三、四十年代,人们就发现游离周围神经（ｆｒｅｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｒｖｅｓ,ＦＰＮ）脊髓内移植可使损伤轴突出芽,到了七、八十年代,很多学者以令人信服的形态学证据证实,ＦＰＮ脊髓内移植能使损伤神经元发挥很大的再生潜能,生长突破宿主－移植物界面,移植的神经能被较好地神经化,再生轴突的胞体多分布于损伤处附近。长传导束（如皮质脊髓束）的再生则较困难,有作者认为,神经元胞体至损伤处的距离可能是影响轴突再生的重要因素。Ｃｈｅｎｇ等〔１〕则持不同见解,认为长脊髓束的再生并非受单一因素作用…     

不同移植方式对胎鼠脊髓移植物成活生长的效果评估

目的：通过单纯胚胎脊髓移植和胚胎脊髓大网膜双重移植两种方式,分析胎鼠脊髓移植物成活生长情况及形态学变化,为脊髓损伤找寻一条新的治疗途径.方法：实验于2000-01/2002-01在武汉科技大学附属博爱医院神经外科实验室完成.选取Wistar大鼠90只,随机分为两组：单纯胚胎脊髓移植组48只,胚胎脊髓大网膜双重移植组42只.显微镜下造成两组鼠脊髓半侧损伤,取孕14 d的胎鼠脊髓1.0～2.0 mL移植于单纯胚胎脊髓移植组大鼠的脊髓损伤处,胚胎脊髓大网膜双重移植组在此基础上用大网膜覆盖于胚胎脊髓损伤处.术后14 d将两组存活的实验鼠按Ducker＇s评级方法进行瘫痪肢体功能测定（0级：完全瘫;1级：能自主运动,但不能支撑体质量;2级：能站立但不能行走;3级：能行走,但困难伴痉孪;4级：能跑,但有轻度共济失调;5级：正常运动）.分别于术后15,60,120 d将大鼠断头处死,电镜观察移植物存活生长情况及形态学变化.结果：实验纳入大鼠90只,移植术后死亡43只,共47只大鼠进入结果分析.①术后14d两组大鼠移植物的存活率：单纯胚胎脊髓移植组有9只大鼠的移植物存活,存活率52.94%;胚胎脊髓大网膜双重移植组有26只大鼠的移植物存活,存活率86.67%,两组差异显著（P＜0.05）.②术后14 d两组大鼠瘫痪肢体的肌力恢复情况比较：单纯胚胎脊髓移植组移植物存活的9只鼠中仅有2只肌力恢复至Ⅰ～Ⅱ级,胚胎脊髓大网膜双重移植组移植物存活的26只鼠其肌力均得到恢复,其中18只恢复正常.③术后不同时间两组大鼠存活移植物的形态学变化：术后15 d,电镜下移植物内神经细胞生长分化,细胞器增多,结构正常,生长旺盛,并见幼稚神经元发出的粗大神经生长锥;术后120 d则演变为成熟神经元,移植物与宿主有血管沟通现象及新生血管和新髓鞘形成.结论：胚胎脊髓大网膜双重移植治疗脊髓损伤的效果明显优于单纯胚胎脊髓移植,大网膜移植是移植物成活生长及肢体肌力功能恢复的重要因素,提示胚胎性神经组织移植在中枢神经系统损伤的治疗中具有独特作用.     

胚胎脊髓和大网膜联合移植对脊髓损伤犬行为学和诱发电位的影响

目的:胚胎脊髓移植治疗脊髓损伤的实验研究已进行多年,效果并不理想,带蒂大网膜移植可建立及时有效的血供是肯定的,对脊髓损伤的疗效尚无定论。为此探讨采用犬胚胎脊髓和大网膜联合移植治疗脊髓损伤的效果。方法:选用西北犬24只,雌雄不拘,按随机数字分成4组:单纯损伤组;大网膜移植组;单纯胚髓细胞移植组;胚胎脊髓和大网膜联合移植组。致伤前及治疗后2个月行脊髓体感诱发电位,动作诱发电位检查,观察行为变化,并行电镜及苏木精-伊红染色检查。结果:伤后2个月胚胎脊髓和大网膜联合移植组左后肢脊髓体感诱发电位潜伏期71.65±3.33)ms与各组间对比差异具有显著性意义F=3.891,((P=0.037),脊髓体感诱发电位波幅1.04±0.11)μV与各组间对比差异(具有显著性意义(F=5.516,P=0.013),左后肢动作诱发电位潜伏期(6.28±1.45)ms与各组间对比差异具有显著性意义(F=6.49,P=0.008),行为学有恢复;胚髓细胞在术后2个月可存活。结论:胚胎脊髓与大网膜联合移植治疗脊髓损伤动物从行为学和诱发电位均优于其他组,但尚需进一步研究以确定其功能。     

高压氧促进成鼠脊髓损伤后功能恢复的实验研究

目的研究高压氧(HBO)对带血供周围神经(VPN)移植修复成鼠脊髓损伤(SCI)功能恢复的作用。方法将40只成年Wistar大鼠做成脊髓半切损伤模型,随机分为A、B两组,A组单纯VPN移植修复SCI,B组为VPN移植后给予HBO治疗。手术后1、2、4、8、10周进行感觉诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)检查。结果SEP和MEP潜峰时的恢复B组优于A组。结论HBO与VPN移植对成鼠损伤脊髓功能恢复有较好的促进作用。     

高压氧联合神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

背景：单纯神经干细胞移植已应用于对受损脊髓组织的修复。目的：以神经干细胞移植同时应用高压氧治疗大鼠脊髓损伤,观察联合作用对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响。方法：雌性SD大鼠60只,以半切法制成胸段脊髓半横断大鼠模型。随机分成单纯损伤组、神经干细胞移植组及高压氧治疗组,每组20只。伤后第4周取材行病理切片苏木精-伊红染色及BrdU免疫组织化学染色,第8周取材行辣根过氧化物酶示踪,透射电镜观察轴突的再生情况,通过体感诱发电位观察神经电生理恢复情况。造模后1,2,4,6,8周进行BBB评分和斜板实验等运动功能检测。结果与结论：观察伤后4周病理切片,单纯损伤组未见神经轴索通过,神经干细胞移植组可见少量神经轴索样结构,高压氧治疗组可见较多神经轴索样结构。BrdU的阳性细胞数及辣根过氧化物酶阳性神经纤维数,高压氧治疗组最多,神经干细胞移植组次之,单纯损伤组最少,且各组之间差异有显著性意义（P〈0.05）。透射电镜下神经干细胞移植组、高压氧治疗组正中横断面可见新生的无髓及有髓神经纤维。高压氧治疗组大鼠体感诱发电位的潜伏期短于神经干细胞移植组,波幅高于神经干细胞移植组（P〈0.05）,明显优于单纯损伤组（P〈0.01）。伤后4周神经干细胞移植组、高压氧治疗组大鼠后肢运动功能均有较明显恢复,高压氧治疗组较神经干细胞移植组恢复快（P〈0.05）;单纯损伤组亦有所恢复,但程度较轻。提示神经干细胞移植对于脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复有促进作用,联合应用高压氧有协同效果。     

大鼠松质骨中降钙素基因相关肽在脊髓损伤后的变化

背景:细胞因子异常及神经功能的异常、激素水平的改变均参与了脊髓损伤后骨质疏松的发生,以往对细胞因子及激素改变的研究较多,而对神经异常对骨调节的研究相对较少.目的:课题创新性地应用血生化与免疫组织化学相结合的方法,观察脊髓损伤后大鼠松质骨中神经多肽降钙素基因相关肽的变化,分析其在脊髓损伤后骨质疏松中的意义.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-09/12在解放军第四军医大学骨科研究所实验室完成.材料:3月龄SD大鼠48只,体质量为(210±16)g,随机均分为脊髓损伤组与对照组,每组24只.方法:脊髓损伤组于T_(10)处完全横断脊髓;对照组仅行椎板切除术.主要观察指标:术后1,3,6周分批每组随机取8只动物处死.测定血骨特异性碱性磷酸酶、I型胶原氨基末端肽;对股骨髁松质骨行降钙素基因相关肽免疫组织化学染色,结合计算机图像分析系统对降钙素基因相关肽免疫阳性神经的染色强度进行定量分析.结果:脊髓损伤组各时间段血清I型胶原氨基末端肽浓度显著高于对照组(P<0.05或0.01),各时间段血清骨特异性碱性磷酸酶活性低于对照组,但差异无显著性意义(P>0.05).对照组各时间段分布于小梁骨内的降钙素基因相关肽免疫阳性神经呈强阳性,脊髓损伤组降钙素基因相关肽较对照组减弱(P<0.05或0.01).结论:脊髓损伤后松质骨内降钙素基因相关肽的减弱可能与脊髓损伤后骨质疏松的发生有关.     

骨髓间充质干细胞移植联合吡拉西坦修复大鼠脊髓损伤

背景:单纯的干细胞移植对脊髓损伤的修复作用并不理想,主要是因为脊髓损伤后损伤区域神经组织的水肿、缺血、缺氧等引起继发性损伤造成的。目的:在骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的同时应用吡拉西坦,观察两者对大鼠脊髓损伤恢复的影响。方法:雌性Wistar大鼠参照改良Allen打击法制备大鼠脊髓损伤模型。随机分成3组,即单纯损伤组、骨髓间充质干细胞移植组及骨髓间充质干细胞移植联合吡拉西坦组。于伤后1,2,4,6,8周进行BBB评分和斜板实验等运动功能检测。第4周取材行病理切片苏木精-伊红染色,通过SRY-PCR检测雄性大鼠Y染色体上特有的基因SRY,从而得知移植骨髓间充质干细胞是否存活。8周后取材,行辣根过氧化物酶示踪观察,并通过透射电镜观察轴突的再生情况。结果与结论:伤后4周,骨髓间充质干细胞移植组、联合治疗组大鼠后肢运动功能均有较明显恢复,联合治疗组较骨髓间充质干细胞移植组恢复快(P<0.05)。单纯损伤组亦有所恢复,但程度较轻。病理切片单纯损伤组未见神经轴索通过;骨髓间充质干细胞移植组可见少量神经轴索样结构;联合治疗组可见较多神经轴索样结构。骨髓间充质干细胞移植组、联合治疗组有SRY基因表达,单纯损伤组未检测到SRY基因。辣根过氧化物酶阳性神经纤维数联合治疗组﹥骨髓间充质干细胞移植组>单纯损伤组,差异具有显著性意义(P<0.05)。透射电镜下,骨髓间充质干细胞移植组、联合治疗组正中横断面可见新生的无髓及有髓神经纤维。提示骨髓间充质干细胞移植联合吡拉西坦促进大鼠损伤脊髓结构和功能恢复的效果明显优于单纯细胞移植组,两者联用具有协同效应。     

周围动脉闭塞性病变治疗前后脊髓及背根神经节P物质的变化

背景:周围动脉闭塞性病变是一种常见的周围动脉疾病,发病机制及病变过程尚不完全明确,其临床症状多较重,且治疗效果不佳。目的:观察肢体负压对周围动脉闭塞性病变犬中枢神经脊髓及背根神经节中P物质免疫反应阳性神经纤维的影响。设计:随机对照的实验研究。单位:武警陕西总队医院麻醉科和解放军第四军医大学西京医院普外三科。对象:实验于2003-04/2004-05在解放军第四军医大学西京医院动物实验室完成。选用健康杂种清洁级犬17只,体质量12～18kg,动物编号后,按随机数字表法分为3组,治疗组10只,非治疗组5只,正常对照组2只。方法:将治疗组动物制作左后肢缺血模型,在造模后14d开始行患肢负压治疗,1次/d,15min/次,负压治疗10d后行动物灌注。分别切取L1～L5的脊髓及背根神经节,行免疫组织化学染色,检测P物质免疫反应阳性神经纤维;非治疗组除不进行患肢负压治疗外,处理、检查均同治疗组。正常对照组不行缺血模型制作及负压治疗,仅行免疫组织化学染色检测。主要观察指标:各组犬脊髓及背根神经节的感觉神经纤维中P物质的变化。结果:非治疗组脊髓及背根神经节中,患侧P物质免疫反应阳性纤维(平均灰度值分别为:70.20±3.70,67.00±3.30)较正常对照组(20.00±2.80,35.50±6.40)染色明显加深,而治疗组(48.50±6.60,51.70±4.00)较非治疗组染色变浅,但仍较正常对照组加深(P均<0.01)。结论:周围动脉闭塞性疾病发病后,脊髓及背根神经节中的P物质免疫反应阳性神经纤维数量明显增多,可能是机体的一种自身保护机制。肢体负压疗法可减少肢体动脉闭塞性病变伤害性刺激的传入,缓解肢体疼痛。     

动脉闭塞犬中枢神经系统感觉神经纤维中前列腺素E1的变化及肢体负压的干预效应

背景:肢体负压治疗周围动脉闭塞性病变,具有方便、安全、无创伤和改善疼痛症状的作用。前列腺素E1可直接松弛血管平滑肌,对神经痛有良好的止痛效果。目的:观察肢体负压对周围动脉闭塞性病变模型犬中枢神经系统感觉神经纤维中前列腺素E1免疫反应阳性神经纤维的影响。设计:随机对照的动物实验。单位:南方医科大学附属珠江医院肿瘤中心,解放军第四军医大学西京医院普外三科。材料:实验于2003-04/2004-05在解放军第四军医大学西京医院动物实验室完成。健康成年杂种犬17只,随机数字表法随机分为3组,治疗组10只、非治疗组5只和正常对照组2只。方法:治疗组和非治疗组均将动物制作左后肢缺血模型,治疗组在模型制作后14d开始行患肢负压治疗,压力为-12kPa,持续15min,1次/d,连续10d;非治疗组不做负压治疗。正常对照组不干预。主要观察指标:各组均于实验开始后24d将动物麻醉后处死,切取L1～L5的脊髓及背根神经节,3组均行脊髓及背根神经节免疫组化染色,检测前列腺素E1免疫反应阳性纤维平均灰度值。结果:犬17只全部进入结果分析。非治疗组、治疗组和正常对照组脊髓前列腺素E1免疫反应阳性纤维平均灰度值分别为75.23±4.3,43.22±3.7,22.00±5.8;背根神经节前列腺素E1免疫反应阳性纤维平均灰度值分别为67.12±2.3,40.08±3.8,27.64±2.7,各组比较差异显著(P均<0.01)。结论:周围动脉闭塞性疾病发病后,远端肢体脊髓及背根神经节中的前列腺素E1免疫反应阳性神经纤维数量明显增多,可能是机体的一种自身保护机制。肢体负压疗法可缓解肢体疼痛,并能减少肢体动脉闭塞性病变伤害性刺激的传入。     

延迟植入嗅鞘细胞修复成鼠的胸髓损伤

背景:脊髓损伤后在一定的微环境中有再生的能力。嗅鞘细胞兼具星形胶质细胞和许旺细胞的特性,具有促进脊髓轴突再生的能力。目的:制作成鼠胸髓损伤模型,观察嗅鞘细胞对损伤脊髓轴突再生的作用。设计:观察性实验。单位:中山大学附属第二医院。材料:实验于2001-01/2002-11在中山大学附属第二医院完成。20只成年SD雄性大鼠,体质量(380±20)g,由中山大学实验动物中心提供(机构许可证号:SYXK(粤)2004-0020)。低糖的DMEM培养液(L-DMEM,GibcoBRL公司)、胎牛血清(Hyclone公司)、MBP(髓磷脂碱性蛋白,Sigma公司)、抗神经生长因子受体抗体(Sigma公司)。应用随机数字表完全随机化分为细胞移植组和对照组,每组10只。方法:将成年SD大鼠麻醉断颈处死,无菌条件下取出完整嗅球分嗅神经。采用改良Allen法打击脊髓建立胸髓损伤模型。细胞移植组于损伤脊髓处注入10μL嗅鞘细胞悬液(2.5×1010L-1),对照组仅注入相同剂量DMEM/F12(1∶1)培养液。移植后6周通过组织学和免疫组织化学方法观察嗅鞘细胞对脊髓轴突再生的影响。主要观察指标:①抗神经生长因子受体抗体染色鉴定嗅鞘细胞。②髓磷脂碱性蛋白染色观察髓鞘的修复。③嗜银染色观察神经轴突再生。结果:细胞移植组有2只动物死亡,对照组有3只死亡,共15只大鼠进入结果分析。①细胞移植组可见损伤脊膜完整,较正常脊髓稍变细。苏木精-伊红染色见损伤区有多极细胞,且与脊髓组织有移行过度现象,说明存活的嗅鞘细胞与宿主融合良好。新生的轴突多呈束状,周围有小圆淋巴细胞浸润。嗜银染色可见再生轴突长入损伤区组织中,多与束状排列的多极细胞伴行;对照组脊髓损伤处明显变细,脊膜尚完整。苏木精-伊红染色见脊髓损伤区未见新生轴突。嗜银染色未见再生轴突。②细胞移植组可见多极细胞,多呈束状排列,胞浆内有大量抗神经生长因子受体抗体阳性颗粒存在,进一步证明嗅鞘细胞移植6周后仍然存活,且与宿主融合良好。髓磷脂碱性蛋白染色见损伤区有呈线状髓磷脂碱性蛋白阳性纤维,提示损伤区两端均有髓鞘样物质产生,且互相靠拢。同时多极细胞中也发现有髓磷脂碱性蛋白阳性物质存在,说明移植的嗅鞘细胞有产生髓鞘样物质的作用。对照组未见轴突再生。结论:嗅鞘细胞延迟植入成鼠打击伤后脊髓后,可存活并产生髓鞘样物质,促进宿主脊髓轴突再生。