霉菌性阴道炎患者体内真菌分布、T淋巴细胞及相关细胞因子水平变化特点及意义

目的探讨霉菌性阴道炎患者体内真菌分布、T淋巴细胞及炎性细胞因子水平变化特点及意义。方法选取2017年1月—12月在我院治疗的霉菌性阴道炎患者182例作为观察组,同时选取女性健康志愿者110例作为对照组,检测2组受试者阴道分泌物中T淋巴细胞及细胞因子水平,同时对观察组阴道分泌物进行真菌培养。结果 182例患者中,病原菌以白色念珠菌为主,占43.41%;观察组阴道分泌物CD3~+、CD4~+和CD8~+T淋巴细胞水平分别为(52.12±10.45)%、(33.30±8.23)%和(25.10±9.22)%,明显低于对照组(P均0.05);观察组阴道分泌物IL-2、TNF-α和IFN-γ分别为(7.21±1.42)pg/ml、(17.90±4.55)pg/ml和(19.81±4.50)pg/ml,明显低于对照组(P均0.05),而IL-4和IL-10分别为(40.32±8.33)pg/ml和(25.66±4.33)pg/ml,明显高于对照组(P均0.05);复杂性霉菌性阴道炎患者阴道分泌物CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞以及IL-2、TNF-α和INF-γ水平明显低于普通霉菌性阴道炎患者(P均0.05),而IL-4和IL-10明显高于普通霉菌性阴道炎患者(P均0.05)。结论霉菌性阴道炎病原体以白色念珠菌为主,Th1/Th2细胞介导的细胞免疫参与了疾病过程。     

HBeAg对树突细胞分泌白细胞介素6和12的影响

目的 研究HBeAg对脂多糖(LPS)诱导树突细胞(DCs)分泌炎症因子白细胞介素(IL)-12和IL-6的影响. 方法 密度梯度离心法分离浓缩白细胞获得单个核细胞,经贴壁法纯化的单核细胞由刺激因子诱导得到未成熟DCs,形态学观察及免疫表型鉴定DCs;加入不同浓度(1、2、5 μ g/ml)HBeAg,LPS刺激摄取抗原的DCs,酶联免疫法测定培养上清液中IL-12和IL-6水平.细胞表型比较用Mann-WhitneyU检验,不同浓度组间数据的多重比较用LSD-t检验(方差齐)或Dunnett'sT3检验(方差不齐).结果 HBeAg 1、2、5 μg/ml组及对照组上清液的IL-6分泌水平分别为(1177.64±167.38)pg/m1、(1092.88±60.90) pg/ml、(793.65±96.29) pg/ml和(1612.38±244.59)pg/ml,HBeAg 1、2、5μg/ml组的IL-6水平均低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为3.35、4.00和6.32,P＜0.05或P＜0.01),HBeAg 1 μg/ml组IL-6分泌水平明显高于5 μg/ml组(t=2.96,P＜ 0.05);HBeAg 1、2、5μg/ml组及对照组上清液的IL-12分泌水平分别为(1037.64±58.46)pg/ml、(885.31±13.00) pg/ml、(804.34±15.25) pg/ml和(1101.46±30.76) pg/ml,HBeAg1 μg/ml组与对照组的IL-12分泌水平差异无统计学意义(t=1.67,P＞0.05),2μg/ml和5μg/ml组IL-12分泌水平较对照组明显下调(t值分别为11.21和14.99,P值均＜0.01),5 ug/ml组IL-12分泌水平明显低于2 μg/ml组(t=7.00,P＜0.05).结论 HBeAg能下调DCs分泌炎症因子IL-12和IL-6,这可能是HBV持续感染的免疫逃逸机制之一.     

四种刺激剂对日本血吸虫感染小鼠脾脏CD8~+T细胞内细胞因子及表面分子CD62L的影响

目的探讨4种常用刺激剂佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,P)、离子霉素(ionomycin,I)、布雷非德菌素A(brefeldin A,B)和莫能霉素(monensin,M)对日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染小鼠脾脏CD8+T细胞内细胞因子及表面分子CD62L的影响。方法 21只C57BL/6雌性小鼠腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴,(20±2)条/鼠。感染后第8周和第12周,分别取小鼠脾脏制备单细胞悬液,用P(50 ng/ml)+I(1μmol/L)+M(2μmol/L)体外刺激4 h,采用流式细胞术检测分泌γ干扰素(IFN-γ)的CD8+T细胞比例,同时检测细胞表面CD62L的表达情况。制备感染后4周的小鼠脾脏单细胞悬液,按I组(1μmol/L)、P组(50 ng/ml)、B组(1μg/ml)、M组(2μmol/L)、P+I组、P+I+M组、P+I+B组、P+I+M+B组分组,用对应刺激剂体外刺激4 h后,利用细胞因子微球检测法检测各组培养上清中白细胞介素4(IL-4)、IL-17A、IFN-γ、IL-10、IL-1β和集落刺激因子(G-CSF)等细胞因子水平,同时用流式细胞术检测CD8+T细胞表面CD62L的表达情况,计算平均荧光强度(MFI)。结果流式细胞术检测结果显示,小鼠感染日本血吸虫后第8周和第12周,产生IFN-γ的CD8+T细胞比例分别降至(1.3±0.8)%和(0.7±0.2)%,均低于未感染对照组的(5.6±0.8)%(P0.05),但两者差异无统计学意义(P0.05)。健康对照组和感染组小鼠CD8+T细胞表面均未检测到CD62L阳性群。不同组合刺激剂作用感染后4周,小鼠脾脏细胞培养上清细胞因子的检测结果显示,P+I组和P+I+M组的IL-4水平分别为(177.2±56.0)和(13.7±2.2)pg/ml;P+I组和P+I+M组的IL-17A浓度分别为(361.8±81.3)和(33.7±2.9)pg/ml;P+I组和P+I+M组上清中的IFN-γ浓度分别为(1 534.0±316.6)和(135.3±16.1)pg/ml;P+I组、P组和I组上清中IL-10的浓度分别为(705.5±179.6)、(34.8±13.9)和(43.1±13.9)pg/ml;P组和P+I组中G-CSF的浓度为(44.6±8.0)和(21.7±2.9)pg/ml;P组、I组和P+I+M组中IL-1β的浓度分别为(3.9±1.0)、(6.4±0.2)和(3.7±0.3)pg/ml;上述各组与其对应的对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。流式细胞术检测结果显示,P+I组、P+I+B组、P+I+M组和P+I+B+M组中CD62L峰较对照组明显左移,MFI分别为2.7±0.1、2.6±0.2、2.5±0.1、2.5±0.1,低于对照组(P0.01)。结论日本血吸虫感染晚期,小鼠脾脏细胞产生IFN-γ的CD8+T细胞比例减少,经P+I刺激后,CD62L表达明显下调。     

非甲基化的CpG寡核苷酸对鼠巨噬细胞Toll样受体9及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响

目的探讨非甲基化的CpG寡核苷酸(CpG-ODN)对鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7 Toll样受体9(TLR-9)的表达及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法体外培养小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7,置24孔培养板中,随机将细胞分为四组,分别为CpG-ODN组,Non-CpG-ODN组,CpG-ODN+氯喹组和对照组,分别添加CpG-ODN(0.3μg/ml),Non-CpG-ODN(0.3μg/ml),CpG-ODN+氯喹组(CpG-ODN和氯喹各0.3μg/ml),培养基。逆转录聚合酶链反应及Western blot检测24h后巨噬细胞TLR-9的表达,放免法及ELISA法检测刺激前后巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及IL-12的表达水平。结果刺激24h后,巨噬细胞TLR-9mRNA的表达,CpG-ODN组与Non-CpG-ODN组比较,差异有统计学意义(t值为7.12,P<0.01);CpG-ODN组与对照组比较,差异有统计学意义(t值为8.04,P<0.01);CpG+氯喹组与Non-CpG-ODN组比较,差异有统计学意义(t值为4.25,P<0.05);CpG+氯喹组与对照组比较,差异有统计学意义(t值为5.58,P<0.01)。TLR-9蛋白,CpG-ODN组为1.35±0.18,高于Non-CpG(1.01±0.04)及对照组(0.91±0.10),差异有统计学意义(t值分别为3.21、3.67,P值均<0.05)。CpG-ODN+氯喹组为1.34±0.15,高于Non-CpG及对照组,差异有统计学意义(t值分别为3.71、4.10,P值均<0.05),而CpG-ODN组及CpG-ODN+氯喹组比较,差异无统计学意义(t值为0.10,P>0.05)。细胞上清液中TNF-α水平CpG-ODN组[(0.48±0.12)ng/ml]高于Non-CpG-ODN组[(0.29±0.23)ng/ml]、CpG-ODN+氯喹组[(0.32±0.24)ng/ml]和对照组[(0.29±0.19)ng/ml],差异有统计学意义(t值分别为2.84、2.38、3.25,P值均<0.05);IL-6,IL-12水平:CpG-ODN组分别为[(27.69±15.61)pg/ml和(48.59±25.17)pg/ml]与Non-CpG-ODN组分别为[(17.02±10.66)pg/ml和(59.58±32.89)pg/ml]、CpG-ODN+氯喹组分别为[(28.58±24.08)pg/ml和(41.30±13.17)pg/ml]和对照组分别为[(16.12±17.70)pg/ml和(61.54±39.69)pg/ml],差异无统计学意义(t值分别为1.94、0.75,P值均>0.05)。结论CpG-ODN刺激可引起鼠巨噬细胞TL     

对2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化症患者白介素37表达的观察

目的观察T2DM合并颈动脉粥样硬化(CAS)患者白介素37(IL-37)的表达。方法选取2017年4月至2018年1月于滨海县人民医院内分泌科就诊的T2DM患者72例。分为T2DM组(n=38),T2DM合并CAS组(T2DM+CAS,n=34),另选取本院体检健康者35名作为对照组(NC)。体外分离培养PBMCs,分为空白组(Con)、脂多糖(LPS)刺激组和IL-37+LPS刺激组。检测各组血清IL-37、IL-1β,IL-6和TNF-α;LPS刺激后检测IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达。结果NC组、T2DM组、T2DM+CAS组血清IL-37浓度表达依次降低[6.72(5.34,7.63)vs 5.65(5.21,6.75)vs 5.18(4.61,5.73)pg/ml,P0.05],血清IL-1β、IL-6浓度表达依次升高[27.85(21.52,33.64)vs 32.46(29.31,44.72)vs 41.32(30.45,52.17)pg/ml,P0.05;5.44(4.21,11.56)vs 8.15(5.76,19.33)vs 11.73(7.52,21.64)pg/ml,P0.05]。与NC组比较,T2DM组、T2DM+CAS组血清TNF-α浓度表达升高[9.73(6.92,15.34)vs 14.56(8.71,22.35)vs 16.14(8.63,26.17)pg/ml,P0.05]。与LPS刺激组比较,IL-37+LPS刺激组IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达降低。结论 T2DM合并CAS患者血清IL-37浓度降低,体外研究证实IL-37可降低炎性细胞因子表达。     

熊去氧胆酸联合微生态制剂治疗原发性胆汁性胆管炎患者对肠道菌群的影响*

目的 研究熊去氧胆酸(UDCA)联合微生态制剂治疗原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者对粪肠道菌群的影响。方法 2017年6月～2019年6月我院收治的128例PBC患者被随机分为两组,每组64例,分别给予UDCA和UDCA联合双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊治疗24周。采用实时荧光定量PCR法检测粪肠道菌群,采用放射免疫分析法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),采用ELISA法测定血清白介素2(IL-2)、IL-6、IL-17和IL-22水平。结果 治疗后,观察组粪双歧杆菌和拟杆菌菌落数分别为(8.7±0.9)lg CFU/g和(8.9±0.9 lg CFU/g,显著高于对照组【分别为(8.0±0.6)lg CFU/g和(8.1±0.6)lg CFU/g,P＜0.05】,而酵母样真菌和大肠埃希菌菌落数分别为(4.3±0.7)lg CFU/g和(8.7±0.6)lg CFU/g,显著低于对照组【分别为(5.1±0.7)lg CFU/g和(9.2±0.7)lg CFU/g,P＜0.05】;治疗后,观察组血清TNF-α、IL-2、IL-6、IL-17和IL-22水平分别为(5.9±1.6)pg/ml、(65.5±12.6)pg/ml、(5.6±1.1)pg/ml、(7.6±2.3)pg/ml和(17.5±2.7)pg/ml,显著低于对照组【分别为(7.0±2.1)pg/ml、(85.7±20.1)pg/ml、(6.7±1.5)pg/ml、(9.2±3.2)pg/ml和(23.3±4.4)pg/ml,P＜0.05】;治疗后,观察组血清HA、Ⅳ-C和PⅢP水平分别为(113.2±24.1)μg/L、(145.5±19.8)μg/L和(134.6±21.5)μg/L,显著低于对照组【分别为(168.4±47.2)μg/L、(178.4±51.7)μg/L和(170.5±48.2)μg/L,P＜0.05】。结论 应用UDCA联合微生态制剂能有效纠正PBC患者肠道菌群失调,调节血清细胞因子水平,缓解肝纤维化程度。     

肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎患者血清与腹水TNF-α、IL-6和IL-8水平差异比较

目的观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)在肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎(SBP)患者血清、腹水中的水平,并探讨其临床意义。方法 112例失代偿期肝硬化患者被分为并发SBP组(n=58)和未并发SBP组(n=54);在SBP患者,根据预后又分为好转(n=38)和恶化(n=20),采用ELISA法检测血清和腹水TNF-α、IL-6、IL-8水平。结果 SBP患者治疗前血清TNF-α、IL-6、IL-8水平分别为(103.2±42.1)pg/ml、(77.2±31.4)pg/ml、(44.1±20.7)pg/ml,腹水分别为(252.8±77.2)pg/ml、(144.6±58.4)pg/ml、(106.2±42.0)pg/ml,明显高于非SBP组[血清分别为(63.7±26.8)pg/ml、(34.6±17.5)pg/ml、(20.1±11.2)pg/ml,腹水分别为(91.8±45.9)pg/ml、(62.7±29.2)pg/ml、(50.1±21.5)pg/ml,P0.05];经抗感染治疗后,SBP患者血清和腹水TNF-α、IL-6、IL-8水平均较治疗前明显降低(P0.05);好转患者血清和腹水TNF-α、IL-6、IL-8水平明显低于恶化患者(P0.05)。结论血清和腹水TNF-α、IL-6、IL-8水平可作为诊断肝硬化并发SBP患者的敏感指标。     

HIV/HCV共感染者外周血辅助性T细胞17和IL-17A水平检测

目的探讨HIV/HCV共感染者外周血辅助性T细胞17(Th17)及白细胞介素(IL)-17A的免疫调节作用。方法随机选取HIV/HCV共感染者、HIV感染者、HCV感染者和健康人各30例,使用流式细胞仪检测外周血CD4+T细胞数量和Th17数量,采用ELISA法检测血清IL-17A水平。结果 HIV感染者和HIV/HCV共感染者CD4+T淋巴细胞分别为(310.23±114.35)个/μl和(218.42±112.47)个/μl,均较健康人明显降低[(735.46±121.52)个/μl,P0.05],HIV/HCV共感染者较HIV感染者CD4+T淋巴细胞更低(P0.05),HCV感染者CD4+T淋巴细胞数为(719.47±123.72)个/μl,与健康人比较无显著性差异;HIV感染者Th17百分比和IL-17A水平分别为(2.48±0.90)%,和(25.18±12.63)pg/ml,均较健康人显著降低[(3.95±1.23)%和(39.15±16.30)pg/ml,P0.05],HCV感染者Th17百分比和IL-17A为(5.48±0.90)%和(45.24±15.72)pg/ml,显著高于健康人(P0.05),而HIV/HCV共感染者Th17百分比为(1.76±0.42)%,IL-17A为(16.49±7.54)pg/m L,均显著低于HIV感染者[(2.48±0.90)%和(25.18±12.63)pg/m L,P0.05]。结论合并HCV感染可能通过影响Th17及其细胞因子IL-17A进一步影响HIV患者的免疫功能。     

锌离子螯合剂对脂多糖诱导的小胶质细胞中细胞因子表达的影响

目的研究锌离子螯合剂四吡啶甲基乙二胺(TPEN)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞中细胞因子表达的影响及机制。方法体外培养小鼠小胶质瘤细胞系小胶质细胞后分为对照组、LPS组(100 ng/ml LPS,30 min或4h)、TPEN+LPS组(25μmol/L TPEN,1 h+LPS,30 min或4 h)、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059+LPS组(PD98059+LPS组,25μmol/L PD98059,30 min+LPS,4 h),采用实时定量PCR法分析细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达,Western blot法检测pERK1/2蛋白的表达。结果与对照组比较,LPS组pERK1/2蛋白表达和IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与LPS组比较,TPEN+LPS组pERK1/2蛋白表达和IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),而PD98059+LPS组IL-1β、IL一6、TNF-αmRNA表达明显降低(P<0.01)。结论 TPEN可能通过减少pERK1/2表达来抑制LPS诱导的细胞因子的大量释放。     

沉默信息调节因子1在具核梭杆菌诱导肠上皮细胞炎症和凋亡中的作用

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在具核梭杆菌(Fn)诱导肠上皮细胞炎症和凋亡中的作用。方法建立Fn感染肠上皮细胞模型并分为3组,即Fn感染组、Fn+Sirtinol组(SIRT1抑制剂)、Fn+白藜芦醇组(SIRT1激动剂),另设未感染对照组。在Fn感染肠上皮细胞6 h后,采用qRT-PCR、ELISA、Western blot、流式细胞术检测4组细胞中SIRT1基因mRNA和蛋白表达情况、炎症因子的量、NF-κB信号通路的表达、凋亡率、凋亡相关蛋白的表达。结果与Fn感染组相比,Fn+白藜芦醇组细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的表达升高,Fn+Sirtinol组细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的表达降低(P0.01)。Fn+Sirtinol组上清液中4种炎症因子含量[IL-1β:(35.975±2.995)pg/ml,IL-6:(954.250±37.340)pg/ml,IL-8:(598.500±23.014)pg/ml,TNF-α:(398.296±20.663)pg/ml]显著高于Fn+白藜芦醇组[IL-1β:(6.925±1.053)pg/ml,IL-6:(242.009±18.850)pg/ml,IL-8:(5.375±6.067)pg/ml,TNF-α:(79.537±8.334)pg/ml]和Fn感染组[IL-1β:(11.125±1.374)pg/ml,IL-6:(525.425±21.247)pg/ml,IL-8:(262.000±14.071)pg/ml,TNF-α:(180.412±11.826)pg/ml](P0.01)。Fn+Sirtinol组细胞中3种NF-κB信号通路相关蛋白质的表达量与其余3组比较差异有统计学义(P0.01);Fn感染组细胞中3种蛋白质的表达量明显高于Fn+白藜芦醇组和对照组(P0.01,P0.05)。Fn+Sirtinol组细胞在Fn感染6 h后凋亡率达峰值[(27.028±3.319)%],与其余3组的细胞的凋亡率比较差异有统计学义(P0.01);Fn感染组细胞的凋亡率[(16.864±2.213)%]明显高于Fn+白藜芦醇组[(5.584±1.148)%]和对照组[(2.510±0.763)%](P0.01)。Fn+Sirtinol组细胞中Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白高表达,与其余3组比较差异有统计学义(P0.01)。Fn+Sirtinol组细胞中Bcl-2蛋白低表达,与Fn+白藜芦醇组和对照组表达量比较差异有统计学义(P0.01或P0.05),Fn+白藜芦醇组组细胞中Bcl-2蛋白的表达量则明显高于对照组(P0.01)。结论在Fn感染的体外模型中,SIRT1可抑制肠上皮细胞分泌炎症因子,下调NF-κB信号通路的表达,可能通过线粒体凋亡途径抑制细胞的凋亡。     

2型糖尿病合并乙型肝炎肝硬化患者不同糖化血红蛋白水平的血清细胞因子变化及其临床意义

目的观察T2DM合并乙型肝炎肝硬化(HBLC)患者不同HbA1c水平的血清细胞因子的变化。方法选取T2DM合并HBLC患者65例,根据HbA1c水平分为血糖控制良好组及血糖控制欠佳组,检测两组血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、干扰素γ(INF-γ)及TNF-α水平。结果血糖控制良好组血清细胞因子IL-2、TNF-α[(42.7±20.5)pg/ml、(30.5±20.2)ng/ml]低于血糖控制欠佳组[(58.2±23.8)pg/ml、(43.5±33.7)ng/ml],血糖控制良好组IL-4、IL-6、IL-8水平[(3.2±1.1)、(7.1±3.7)、(58.3±50.8)pg/ml]高于血糖控制欠佳组[(1.1±0.5)、(3.0±1.3)、(35.5±17.6)pg/ml,P0.05]。血清IL-8、INF-γ水平两组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 T2DM合并HBLC患者血糖控制良好组对比血糖控制欠佳组辅助性T细胞1和2(Th1/Th2)细胞因子差异明显,其意义有待进一步探究。     

细菌脂多糖诱导小鼠B细胞对日本血吸虫发育的影响

目的研究细菌脂多糖诱导BALB/c小鼠B淋巴细胞对日本血吸虫发育的影响。方法取T细胞缺陷的BALB/c nude小鼠18只,以及T/B细胞联合缺陷的BALB/c SCID小鼠23只,每鼠感染日本血吸虫尾蚴(30±1)条。用细菌脂多糖(LPS)腹腔注射诱导(100μg/ml,0.2 ml/只,2周1次,共2~3次)nude小鼠(NL组,9只)和SCID小鼠(SL组,12只)。同时设置对照组,即以PBS处理nude小鼠(N组,9只)和SCID小鼠(S组,11只)。感染后28 d、36 d,分别解剖N、NL、S和SL各组小鼠(n=4/5,4/5,5/6,6/6),肝门静脉灌注法收集血吸虫成虫,计算成虫检获率,测量体长,记录雌雄合抱数。取肝组织经5%KOH溶液消化后,计数虫卵,计算每克肝组织虫卵数。摘除眼球取血,检测外周血中转化生长因子(TGF-β)、γ干扰素(IFN-γ)和白介素10(IL-10)水平。取脾组织制备脾细胞悬液,检测脾淋巴细胞中调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)所占比例。结果感染后28 d,NL、N组雄虫体长分别为(7.66±2.85)mm和(5.28±1.64)mm(P0.01),雌虫体长分别为(9.64±1.99)mm和(7.49±1.63)mm(P0.01)。感染后36 d,NL组每克肝组织虫卵数(1 088±297)明显高于N组(715±404)(P0.05),SL组的(217±33)明显低于S组(573±160)(P0.01)。感染后28 d、36 d,N组脾淋巴细胞中CD1dhi CD5+CD19+Bregs所占比例分别为(12.73±0.96)%和(37.15±3.04)%(P0.05),与NL组比较差异无统计学意义(P0.05)。感染后28 d,N、NL组血清中TGF-β水平分别为(101.75±46.72)pg/ml和(260.90±45.34)pg/ml,IFN-γ水平分别为(7.91±1.62)pg/ml和(14.11±3.72)pg/ml,两组比较差异均有统计学意义(P0.01)。感染后36 d,S、N组血清中IL-10分别为(41.85±3.14)pg/ml、(66.25±4.16)pg/ml,SL、NL组分别为(44.48±3.87)pg/ml、(72.22±17.76)pg/ml,两种小鼠比较差异具有统计学意义(P0.01),但LPS处理组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 LPS可诱导日本血吸虫感染BALB/c小鼠B细胞释放TGF-β等细胞因子,促进日本血吸虫雌雄成虫的早期发育。     

拉米夫定联合苦参素治疗慢性乙型肝炎患者外周血T细胞亚群和细胞因子的变化

目的观察拉米夫定联合苦参素治疗对慢性乙型肝炎患者血清细胞因子水平的影响和T细胞亚群的变化。方法 86例慢性乙型肝炎患者被随机分为治疗组42例和对照组44例,治疗组给予拉米夫定联合苦参素治疗,对照组单用拉米夫定治疗,在48周末观察结果。采用ELISA双抗体夹心法检测IL-2、IL-6、IL-10和IFN-γ水平;采用FACScalibur流式细胞仪检测外周血T细胞亚群。结果在治疗48周末,治疗组和对照组谷丙转氨酶复常率分别为90.2%和83.3%(P>0.05);治疗组HBeAg转阴率、HBeAg/HBeAb转换率和HBV DNA转阴率分别为57.1%、35.3%和88.5%,显著高于对照组的30.2%、19.8%和67.1%(P<0.05);治疗组和对照组IL-2水平分别为181.1±26.1pg/ml和86.9±10.7pg/m(l P<0.05),IFN-γ水平分别为47.5±4.3pg/ml和27.8±4.4pg/m(l P<0.05),IL-6水平分别为13.2±5.8pg/ml和27.1±6.4pg/m(l P<0.05),IL-10水平分别为109.7±32.1pg/ml和169.5±36.2pg/m(l P<0.05);治疗组和对照组CD4+T淋巴细胞百分率分别为37.2±5.8%和27.8±6.4%(P<0.05),CD8+T淋巴细胞百分率分别为20.8±5.2%和26.3±6.2%(P<0.05),CD4+/CD8+比值分别为1.56±0.3和1.34±0.2(P<0.05)。结论拉米夫定联合苦参素治疗可以纠正慢性乙型肝炎患者Th1和Th2型细胞因子紊乱,改善T细胞亚群中各成分的比值,对慢性乙型肝炎患者细胞免疫有一定的调节作用,因而具有治疗作用。     

不同浓度白介素-18联合树突状细胞对慢性乙型肝炎患者外周血细胞因子及细胞毒性T淋巴细胞的影响

目的:研究不同浓度白介素(IL)-18联合树突状细胞(DC)对慢性乙型肝炎患者外周血细胞因子及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的影响。方法:分离慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞,培养成DC,用表位多肽刺激成熟的DC,分别将不同浓度IL-18加入DC与淋巴细胞培养液中(观察组)10天,ELISA法检测细胞因子及LDH法检测CTL杀伤活性。结果:高浓度IL-18与自体淋巴细胞共育后产生的IL-2、IFN(干扰素)-γ及CTL杀伤活性分别为(497.8±88.5)pg/ml、(812.4±278.3)pg/ml、(29.7±3.0)%,明显高于低浓度IL-18的(302.5±21.1)pg/ml、(614.1±135.2)pg/ml、(19.2±2.7)%及对照组的(154.2±38.3)pg/ml、(467.1±87.3)pg/ml、(13.8±1.7)%,P0.05;3组Th2类细胞因子的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:随着IL-18浓度的增高,可增强Th1类细胞因子的表达,并增强CTL的杀伤活性,对Th2类细胞因子的表达无影响。     

聚乙二醇干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群和血清细胞因子水平变化

目的研究聚乙二醇干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群和血清细胞因子水平的变化。方法 2014年1月~2016年1月我院收治的184例慢性乙型肝炎患者,92例接受聚乙二醇干扰素α-2b联合恩替卡韦治疗48 w,另92例只接受恩替卡韦治疗。使用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群,采用放射免疫法检测血清IL-6、INF-ɑ、IL-4,采用酶联免疫吸附法检测血清IL-17、TGF-β1和HBV标记物,采用荧光定量PCR法检测血清HBV DNA、核转录因子RORγt、Foxp3、IL-17mRNA。结果在停药随访24 w,联合组与恩替卡韦组血清HBV DNA阴转率分别为86.96%和84.78%(P0.05);联合组血清HBeAg阴转率为28.89%(13/45),与恩替卡韦组的15.22%(7/46)比,无显著性差异(P0.05);联合组血清ALT水平为(34.6±11.6)U/L,显著低于恩替卡韦组【(64.6±20.5)U/L,P0.05】;联合组外周血CD3~+、CD4~+细胞和CD4~+/CD8~+比值分别为(75.6±14.5)%、(42.7±10.3)%和(1.4±0.6),显著高于恩替卡韦组【(66.8±14.4)%、(36.7±8.5)%和(1.0±0.5),P0.05】,CD8+细胞百分比为(29.3±7.3)%,显著低于恩替卡韦组【(34.8±8.5)%,P0.05】,两组NK细胞百分比比较无显著性差异(P0.05);治疗前两组血清IL-6、IL-17、IL-4、INF-ɑ、TGF-β1水平比较无显著性差异(P0.05),治疗后联合组血清IL-6水平为(6.8±1.2)pg/ml,显著高于恩替卡韦组【(3.5±0.8)pg/ml,P0.05】,IL-17水平为(0.7±0.3)pg/ml,显著低于恩替卡韦组【(2.8±0.9)pg/ml,P0.05】,IL-4水平为(1.4±0.5)pg/ml,显著低于恩替卡韦组【(3.8±1.5)pg/ml,P0.05】,INF-ɑ水平为(4.0±1.3)pg/ml,显著高于恩替卡韦组【(2.6±0.9)pg/ml,P0.05】,两组血清TGF-β1水平比较无显著性差异(P0.05);治疗前两组血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平比较无显著性差异(P0.05),治疗后联合组血清RORγt水平为(0.86±0.31),显著低于恩替卡韦组【(1.56±0.43),P0.05】,而两组血清Foxp3和IL-17mRNA水平比较无显著性差异(P0.05)。结论聚乙二醇干扰素α-2b能通过调控细胞因子和核转录因子水平,从多个环节调控慢性乙型肝炎患者免疫功能,发挥抗病毒作用。     

干扰素α-2b与聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性乙型肝炎患者疗效比较研究

目的观察干扰素α-2b与聚乙二醇干扰素α-2a(PEG-IFNα-2a)治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的临床疗效。方法将116例CHB患者分成两组,每组58例。给予对照组普通干扰素α-2b治疗,给予观察组PEG-IFNα-2a,疗程均为48 w。检测血清层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)及血清白介素4(IL-4)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)和干扰素γ(IFN-γ)变化。结果在治疗结束时,观察组HBV DNA转阴率、HBe Ag转阴率、HBe Ag血清转换率和ALT复常率分别为75.9%、29.3%、22.4%和70.7%,显著高于对照组的51.7%、19.0%、10.3%和55.2%(P0.05);观察组血清LN为(148.5±46.0)μg/L,显著低于对照组【(162.6±26.7)μg/L,P0.05】,血清HA为(158.7±67.9)μg/L,显著低于对照组【(201.4±55.1)μg/L,P0.05】,血清Ⅳ-C为(108.3±33.4)μg/L,显著低于对照组【(119.2±62.4)μg/L,P0.05】,血清PⅢP为(145.8±47.2)μg/L,显著低于对照组【(155.3±36.7)μg/L,P0.05】;观察组血清IL-4水平为(1.5±0.6) pg/ml,显著低于对照组【(3.9±1.6) pg/ml,P0.05】,而IL-6水平为(6.9±1.3) pg/ml,显著高于对照组【(3.6±0.9) pg/ml,P0.05】,IL-10水平为(22.6±13.4) pg/ml,显著低于对照组【(17.3±11.4) pg/ml,P0.05】,IFN-γ水平为(37.2±10.2) pg/ml,显著高于对照组【(28.3±10.5) pg/ml,P0.05】;观察组血小板计数减少发生率为51.7%,显著高于对照组的12.1%(P0.05)。结论 PEG-IFNα-2a治疗CHB患者临床疗效优于普通干扰素α-2b,能持久有效地抑制HBV复制,改善血清肝纤维化指标,但不良反应较大,应及时处理。     

不同疾病阶段乙型肝炎病毒感染者的树突状细胞功能及血清细胞因子表达水平

目的 探讨HBV感染后不同疾病阶段(免疫耐受期、肝炎活动期、非活动携带状态)者断面的树突状细胞(DC)亚群功能和血浆细胞因子水平的差异及其可能的原因.方法 30例HBV感染后不同疾病阶段者,分为免疫耐受组、肝炎活动组和非复制携带组,每组10例;另选10名健康人作为对照组.收集研究对象外周血,检测白细胞介素(IL)-12、IL-10、干扰素(IFN)α、IFN γ、肿瘤坏死因子(TNF)α的表达水平,分析髓样树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)的功能(以IL-12含量代表mDC的功能,以IFN α含量代表pDC功能)及其他细胞因子在不同组别间表达水平的差异.细胞因子表达水平的比较,总的HBV感染组与健康对照组比较用t检验,4组间两两比较用秩和检验.结果 HBV感染组IL-12总含量及单个核mDC IL-12含量均低于对照组[分别为(153.12±159.30)pg/ml比(338.48±142.92)pg/m和(9.48±9.57)fg比(15.10±6.25)fg,F值分别为0.225和0.684,P值均＜0.01],两组IFN α总含量及单个核pDC IFN α含量差异无统计学意义[分别为(575.87±477.02)pg/ml比(662.37±356.06)pg/ml和(85.14±68.44)fg比(62.11±627)fg,F值分别为1.467和1.804,P直均＞0.05].组间两两比较结果显示,健康对照组IL-12总含量[(338.48±142.92)pg/ml ]高于其他3组(Z值分别为-3.039、-2.967和-2.949,P值均＜0.01),单个核mDC IL-12含量[(15.10±6.25)fg]也高于其他3组(Z值分别为-3.027、-2.671和-2.863,P值均＜0.01);健康对照组IFN α总含量为(662.37±365.06)pg/ml,单个核pDC IFN α含量为(62.11±27.04)fg,均高于肝炎活动组(Z值分别为-3.016和-3.176,P值均＜0.01).HBV感染不同组别中,仅IFNα水平[分别为(86.17±12.02)pg/ml、(91.76±39.64)pg/ml和(139.32±207.35)pg/ml]高于健康对照组[(53.30±23.92)pg/ml],差异有统计学意义(Z值分别为-2.967、-2.896和-3.054,P值均＜0.01).结论 HBV感染后,DC功能和IFN α水平存在不同程度的异常,但是HBV不同转归期DC功能无明显差异.DC功能缺陷和IFN α水平异常可能是HBV感染慢性化的原因之一.     

并殖吸虫病患者血清IL-5、IL-4、IL-13及胸腺基质淋巴细胞生成素水平检测

目的 研究并殖吸虫感染者Th2免疫应答产生的细胞因子IL-5、IL-4、IL-13、胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)的水平,筛选出可以用于临床诊断并殖吸虫病的潜在细胞因子标志物.方法 收集贵州省本地并殖吸虫病患者成年组(年龄＞18周岁)及未成年组患者(年龄≤18周岁)的血清样本各12例,以健康人血清4例为对照,ELISA检测血清中的IL-5、IL-4、IL-13、TSLP等4种细胞因子的浓度,各病例组及对照组间采用独立样本t检验分析,同时收集患者的流行病学信息.结果 成年组IL-5、IL-4、IL-13、TSLP分泌浓度分别为(19.50±5.57)pg/ml、(0.95±0.19)pg/ml、(475.30±629.81) pg/ml、(16 676.67±7 169.29) pg/ml;未成年组分别为(23.04±3.37)pg/ml、(1.05 ±0.19) pg/ml、(422.84±539.48) pg/ml、(16 242.50±6 230.81) pg/ml;对照组分别为(4.45±0.84) pg/ml、(0.32±0.12) pg/ml、(41.15±11.72) pg/ml、(490.00±123.36) pg/ml.IL-13、TSLP在成年组、未成年组患者中升高,具有统计学意义(t=1.27,P＜0.05;t=3.11,P＜0.05).在有典型并殖吸虫病流行病学特征的未成年组中,IL-5升高(t=3.11,P＜0.01),具有统计学意义;而在无典型症状的成年组中的变化无统计学意义(t=1.52,P＞0.05).IL-4在成年组、未成年组患者中均无统计学意义变化(t=1.08,P＞0.05;t=2.1,P＞0.05).结论 并殖吸虫病患者Th2免疫反应活化,IL-5、IL-13、TSLP显著上调,可以作为潜在的诊断标志物进行下一步的研究筛选.     

沙利度胺对大鼠急性坏死性胰腺炎保护作用的实验研究

目的 探讨沙利度胺对大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)的保护作用及机制.方法 54只SD大鼠按数字表法随机分成ANP组、沙利度胺组和对照组,每组18只.采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立ANP模型.沙利度胺组于建模后1 h予沙利度胺200 mS/kg体重灌胃.术后3、6、12 h分批处死大鼠,观察腹水量;ELISA法检测血清TNF-α、IL-6、IL-18水平;流式细胞术检测外周血CD4+、CD8+T细胞比例;RT-PCR法检测胰腺组织TNF-α mRNA表达;免疫组化法检测胰腺组织细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白表达;行胰腺常规病理检查.结果 术后6 h,对照组的腹水量,血清TNF-α、IL-6、IL-18水平和CD4+、CD8+T 细胞比例,胰腺组织TNF-α mRNA及CAM-1蛋白表达,病理评分分别为(1.03±0.31)ml、(57.17±11.29)pg/ml、(24.45 ±4.14)pg/ml、(64.23 ±21.85)pg/ml、(47.58±9.21)%、(40.88±2.96)%、0.07±0.02、0.57±0.30、0.67±0.81;ANP组分别为(3.63±0.38)ml、(107.54±33.05)pg/ml、(47.30±11.40)pg/ml、(367.76±108.43)pg/ml、(54.90±7.15)%、(17.17±3.12)%、0.65±0.26、3.20±0.57、11.50±1.87;沙利度胺组分别为(1.45±0.53)ml、(80.60±20.48)pg/ml、(26.61±10.85)pg/ml、(321.82±85.20)pg/ml、(29.80±2.19)%、(15.52±1.96)%、0.35±0.23、2.37±0.67、8.00±3.03.ANP组除CD8+T细胞比例显著降低外,其余指标均较对照组显著增加(P值均<0.05).沙利度胺组指标均显著低于ANP组(P值均<0.05).结论 沙利度胺能通过抑制TNF-α表达,减少炎症递质的释放,从而减轻ANP大鼠的胰腺病理损害.     

环境内分泌干扰物双酚A对非酒精性脂肪性肝病大鼠模型肠道黏膜屏障的影响

目的研究环境内分泌干扰物双酚A(BPA)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠炎症反应的影响,以及对肠道黏膜屏障的损害作用。方法将18只成熟雄性SD大鼠随机分为3组:正常组、NAFLD组和NAFLD+BPA组,每组6只。光镜下观察肝脏病理改变,ELISA检测血清TNFα、IL-1β、IL-6和IL-8等炎症因子,鲎试剂终点比色法检测内毒素水平,免疫荧光法观察肠道黏膜Occludin蛋白的表达情况,及实时聚合酶链式反应测定肠道黏膜外周蛋白ZO-1 mRNA的改变。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较用SNK-q检验。结果肝脏病理学证实NAFLD模型建模成功。100 nmol/L BPA摄入8周后,TNFα、IL-6、IL-8炎症因子表达上调[分别为(127.65±22.40)pg/ml、(199.34±17.46)pg/ml和(258.79±12.82)pg/ml]伴内毒素水平增高[(0.88±0.26)EU/ml],与正常组[分别为(64.87±10.83)pg/ml、(91.27±9.82)pg/ml、(123.76±19.68)pg/ml和(0.27±0.09)EU/ml]及NAFLD组[分别为(92.34±10.68)pg/ml、(181.93±20.11)pg/ml、(201.64±22.34)pg/ml和(0.63±0.15)EU/ml]相比,差异均有统计学意义(P值均0.05)。NAFLD组和NAFLD+BPA组中的IL-1β水平明显高于正常组[(186.31±20.06)pg/ml、(208.78±13.77)pg/ml)vs(112.84±23.12)pg/ml,P值均0.05],但NAFLD组和NAFLD+BPA组间差异无统计学意义。此外,与正常组比较,NAFLD组和NAFLD+BPA组中肠道紧密连接蛋白Occludin水平下降,肠道黏膜外周蛋白ZO-1 mRNA表达水平呈显著降低,BPA干预促进ZO-1 mRNA进一步下调(68.03±11.73、45.24±6.98、33.25±11.04,两两组间比较,P值均0.05)。结论在NAFLD背景下,长期低剂量BPA的暴露能加重炎症因子释放,促进内毒素血症,进而损伤肠道黏膜屏障。