TRPC1是人气道上皮细胞感受压力的受体

目的探讨机械敏感瞬时受体电位蛋白-1(TRPC1)在人气道上皮细胞感受压力过程中的作用。方法 1)收集人肺癌患者肺癌旁5 cm以外的无病变组织,根据临床表现分为正常组、慢性阻塞性肺病组(COPD)和哮喘组,通过细胞免疫组织化学、Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人气道上皮细胞内TRPC1表达水平。2)TRPC1 siRNA、NC siRNA转染16HBE细胞,细胞免疫荧光技术检测基因沉默效率。3)将16HBE细胞分为对照组、单纯刺激组、刺激+TRPC1 siRNA转染组,以细胞牵张刺激系统给予刺激,激光共聚焦观察细胞内钙离子浓度变化。结果 1)COPD组、哮喘组TRPC1蛋白表达及转录水平明显高于对照组(P0.05)。2)TRPC1 siRNA转染组细胞内TRPC1荧光强度明显低于对照组(P0.05),NC siRNA组较正常组无明显差别。3)单纯刺激组细胞内钙离子荧光强度显著高于对照组(P0.05),而刺激+TRPC1 siRNA转染组钙离子荧光强度与对照组无明显差异。结论 TRPC1是人气道上皮细胞内重要的压力敏感受体。     

下调动脉粥样硬化斑块中TRPC5 的表达对人巨噬细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨动脉粥样硬化病变时瞬时受体电位通道5(TRPC5)基因表达对人巨噬细胞凋亡的影响。方法:建 立小鼠动脉粥样硬化模型,通过RT-PCR 检测动脉粥样硬化斑块TRPC5 基因表达;将巨噬细胞分为对照组、NC 组、ox-LDL 组、 TRPC5-siRNA 组和TRPC5鄄siRNA+ox鄄LDL 组,细胞处理24 h 后Western blot 检测各组细胞中TRPC5 的蛋白表达;CCK8 法及流 式细胞术分别检测细胞的增殖及凋亡;Western blot 检测凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase3)及丝氨酸苏 氨酸激酶(AKT)信号通路AKT 及磷酸化的AKT 的蛋白表达。结果:成功建立动脉粥样硬化模型。TRPC5 基因在动脉粥样硬 化组中的表达显著高于对照组(P<0.05);与对照组比较,TRPC5鄄siRNA 组TRPC5、Caspase3 的表达及细胞凋亡率显著降低,细 胞增殖及p-AKT 表达显著升高,ox-LDL 组TRPC5、Caspase3 的表达及细胞凋亡率显著升高,细胞增殖及p鄄AKT 表达显著降低 (P<0.05);TRPC5-siRNA+ox-LDL 组TRPC5、Caspase3 的表达及细胞凋亡率显著低于ox鄄LDL 组,高于TRPC5鄄siRNA 组,细胞增 殖及p-AKT 表达显著高于ox-LDL 组,低于TRPC5-siRNA 组(P<0.05);AKT 在各组间表达差异无统计学意义(P>0.05)。结 论:TRPC5 基因在动脉粥样硬化斑块中表达升高,下调TRPC5 表达可减弱ox鄄LDL 对巨噬细胞增殖的抑制作用和凋亡的促进 作用,机制与AKT 信号通路有关。     

TRPC1在TGF-β1诱导支气管上皮细胞迁移中的作用

 目的: 探究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)迁移中的作用。方法: siRNA沉默TRPC1; CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡; 细胞划痕和Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭。Western blot检测E-钙黏蛋白和vimentin的蛋白表达。结果: TGF-β1刺激细胞后,TGF-β1组细胞的迁移距离大于对照组(P < 0.01)。TGF-β1组和TRPC1沉默组的细胞活力和凋亡与对照组相比差异不显著;与TGF-β1组细胞比较,siRNA和 TGF-β1 共同作用组迁移能力明显降低(P < 0.01)。与 TGF-β1 组相比,siRNA沉默TRPC1和 TGF-β1 共同作用组E-钙黏蛋白的蛋白表达明显降低(P < 0.05),而vimentin的蛋白表达明显增强(P < 0.05)。结论: TRPC1通过调节E-钙黏蛋白和vimentin 的蛋白表达参与了TGF-β1诱导人支气管上皮细胞迁移的过程。     

SHBG基因在人滋养细胞凋亡中的作用

目的研究性激素结合球蛋白(SHBG)基因在人滋养细胞凋亡中的作用。方法用不同siRNA干扰沉默人滋养细胞SHBG基因的表达并分为6组,即正常对照组未经转染(Ⅰ组)、空白对照组仅转染脂质体(Ⅱ组)、阴性对照组转染Nonspecific siRNA(Ⅲ组)、转染组分别转染SHBGsiRNA-Ⅰ、SHBGsiRNA-Ⅱ、SHBGsiRNA-Ⅲ(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组),然后通过Hoechst 33258染色检测人滋养细胞凋亡情况,Real-time PCR和Western blot测定SHBG mRNA及蛋白和凋亡相关抗体Caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平。结果Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组SHBG和Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平组间比较差异无统计学意义(P0.05)。Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组SHBG和Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平组间比较差异无统计学意义(P0.05)。与Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组比较,Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组SHBG mRNA和蛋白表达量明显下调,Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平升高,滋养层细胞凋亡增加,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论采用siRNA干扰技术能够降低人滋养细胞中SHBG基因表达量,导致人滋养细胞凋亡。     

siRNA干扰caveolin-1表达对人结肠癌细胞系HT-29生物学行为的影响

目的探讨siRNA沉默caveolin-1基因对人结肠癌细胞系HT-29增殖、凋亡能力的影响。方法设计并合成caveolin-1基因特异性的siRNA序列,转染人结肠癌细胞系HT-29,48h后应用RT-PCR和Western Blot检测siRNA对caveolin-1表达的影响,MTT法检测HT-29细胞增殖能力,流式细胞术检测转染caveolin-1 siRNA后HT-29细胞凋亡率。结果与空转对照组、阴性对照组相比,caveolin-1 siRNA转染组HT-29细胞的caveolin-1基因和蛋白表达水平明显降低(0.05),细胞增殖率明显上升(0.01),细胞凋亡率低于其他各组(0.05)。结论 caveolin-1促进结肠癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

Ifi204基因表达对大鼠血管外膜成纤维细胞凋亡和迁移的影响

目的探讨ifi204基因过表达与沉默对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)凋亡和迁移的影响。方法原代培养大鼠VAF,利用携带ifi204基因的慢病毒颗粒或空载体慢病毒颗粒感染VAF,分别作为实验组(ifi204 lv组)和阴性对照组(blank lv组)。用ifi204基因小干扰RNA瞬时干预VAF使其沉默(ifi204 siRNA组)、空白小干扰RNA作为阴性对照组(control siRNA组),未经处理的VAF作为空白对照组(negative组)。流式细胞仪检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,用real-time PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。结果与blank lv组、control siRNA组、ifi204 siRNA组和negative组相比,ifi204 lv组的P204、P53 mRNA和蛋白表达及细胞凋亡率明显上调(P0.05),细胞迁移速度降低(P0.05)。转染ifi204 siRNA可抑制P204、P53的mRNA和蛋白表达(P0.05),提高细胞活力,抑制细胞凋亡(P0.05),加快细胞迁移速度(P0.05)。结论 ifi204基因表达对大鼠VAF细胞凋亡和迁移的影响可能与激活P53表达有关。     

UVRAG 调控金黄色葡萄球菌诱导的细胞自噬及其细菌的胞内存活

目的:探究紫外线抵抗相关基因(UVRAG)对金黄色葡萄球菌(SA)诱导HeLa细胞自噬及胞内菌存活的影响。方法:通过SA刺激HeLa细胞建立体外感染模型,分别用UVRAG小干扰RNA(siRNA)及pCI-neo-HA-hUVRAG质粒转染HeLa细胞。Western blot法检测自噬相关蛋白LC3B、p62及UVRAG的表达水平。用EGFP-LC3质粒及pCI-neo-HA-hUVRAG质粒共转染HeLa细胞后SA感染细胞,激光共聚焦显微镜观察EGFP-LC3的点状聚集。分别用UVRAG siRNA及pCI-neo-HA-hUVRAG质粒转染HeLa细胞后SA感染细胞,平板计数法计算胞内SA数量。结果:SA感染HeLa细胞能够引起自噬水平升高以及UVRAG的表达升高,UVRAG siRNA能够抑制LC3Ⅱ的表达,促进p62的表达。过表达UVRAG能够促进LC3Ⅱ的表达,抑制p62的表达。过表达UVRAG使EGFP-LC3的点状聚集增多,并且抑制胞内菌的存活,UVRAG siRNA促进胞内菌的复制。结论:SA感染宿主细胞诱导UVRAG表达的增加可以增强自噬水平并且抑制胞内菌的存活。     

siRNA沉默ADAM10基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默解整合素金属蛋白酶(ADAM10)基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响。方法将ADAM10特异性siRNA转染人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A细胞,实验分为3组,ADAM10-siRNA组转染ADAM10特异性siRNA,NC-siRNA组转染ADAM10非特异性siRNA,对照组为未经转染处理的MH7A细胞。转染48 h后采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中ADAM10表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,ELISA测定细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果 ADAM10-siRNA组细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平较NC-siRNA组和对照组低(P 0.05)。沉默ADAM10基因后,ADAM10-siRNA组细胞凋亡率显著高于NC-siRNA组和对照组(P 0.05)。ADAM10-siRNA组细胞中Bax基因表达水平明显高于NC-siRNA组和对照组(P 0.05),Bcl-2基因表达水平明显低于NC-siRNA组和对照组(P 0.05)。ADAM10-siRNA组细胞分泌的TNF-α、IL-6和IL-8显著低于NC-siRNA组和对照组(P0.05)。而NC-siRNA组和对照组以上各指标相比较,差异不明显(P 0.05)。结论沉默ADAM10基因可明显促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡,并进一步减少TNF-α、IL-6和IL-8等炎症因子的分泌,提示通过沉默ADAM10基因使减轻/控制类风湿关节炎炎症成为可能。     

Mas基因沉默对血管紧张素-(1-7)拮抗血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化的影响

 目的： 探讨Mas基因沉默后对血管紧张素-(1-7) ［Ang-(1-7)］拮抗血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化的影响。方法：（1）有效Mas siRNA的筛选：设计合成3对不同序列针对Mas基因的siRNA,瞬时转染大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）,实验分5组：Mas siRNA序列1、Mas siRNA序列2、Mas siRNA序列3、阴性siRNA序列及正常对照组。转染后48 h,分别用半定量RT-PCR及Western blotting检测Mas mRNA和蛋白的表达水平。（2）研究有效Mas siRNA对Ang-(1-7)拮抗AngⅡ的影响：实验分6组：正常对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)组、阴性siRNA对照组和Mas siRNA转染组。分别培养72 h后,细胞免疫化学法检测细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,ELISA法检测上清液中细胞外基质成分Ⅰ型胶原（ColⅠ）的含量。结果：（1）与组相比,Mas siRNA各组Mas基因的表达均下降,其中以Mas siRNA序列2最明显（P<0.05）。 （2）有效Mas siRNA转染组在加AngⅡ+Ang-(1-7)干预72 h后,较非转染组和阴性siRNA转染组α-SMA及ColⅠ表达均增加,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Mas siRNA能有效抑制Mas的表达,使Ang-(1-7)拮抗AngⅡ诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化作用明显减弱。     

MTT与HOECHST染色法检测膜联蛋白A7基因沉默对Hela细胞的影响

目的　探讨膜联蛋白A7（ANXA7）低表达对人宫颈癌细胞系Hela细胞增殖和凋亡的影响。 方法 　(1)体外培养Hela细胞,应用免疫组化和Western blot鉴定细胞膜联蛋白A7的表达,Western blot鉴定siRNA干扰对膜联蛋白A7表达的抑制效果;(2) MTT实验检测siRNA抑制膜联蛋白A7的表达后对Hela细胞增殖情况的影响;(3)激光共聚焦检测siRNA抑制膜联蛋白A7的表达后对Hela细胞凋亡情况的影响。 结果　(1)免疫组化和Western blot结果均显示Hela细胞内有膜联蛋白A7的表达。siRNA干扰效率的检测显示：siRNA干扰组与阴性对照组、空白对照组比较膜联蛋白A7的表达明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;(2) MTT实验显示：siRNA干扰组与阴性对照组、空白对照组比较细胞增殖速度无显著性差异（P>0.05）;(3)激光共聚焦检测结果显示：与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA干扰组细胞凋亡率显著增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论　膜联蛋白A7的低表达可促进人宫颈癌细胞系HeLa细胞的凋亡。     

RNA interference of BAX gene inhibits apoptosis of rat chondrocytes and its possible mechanism

目的 研究RNA干扰沉默BAX基因表达对经线粒体途径大鼠软骨细胞凋亡的影响.方法 体外分离培养SD大鼠软骨细胞;BAX siRNA干扰沉默BAX基因表达.RT-PCR检测BAX mRNA;MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot检测BAX、BCL-2、细胞色素C蛋白的表达.结果BAX siRNA干扰24h后,BAXmRNA表达为1.030±0.153,对照组为1.836±0.164;蛋白质的表达为0.359±0.089,对照组为0.766±0.082,实验组较对照组明显下调(P＜0.01).细胞凋亡受到明显抑制,对照组、model组、model+ BAXgiRNA组和model+ control siRNA组细胞凋亡率分别为2.87％、20.07％、9.21％和21.19％,并且在BAX基因沉默的细胞中,细胞色素C蛋白表达水平降低,同时BCL-2蛋白表达水平升高.结论RNA干扰沉默BAX基因可抑制大鼠软骨细胞凋亡并且促进其存活,其机制可能与线粒体途径相关.     

雷帕霉素激活自噬改善嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞损伤

目的:通过观察雷帕霉素对PAN 诱导的足细胞损伤及自噬相关蛋白表达的影响,探讨自噬在雷帕霉素保护PAN 诱导的足细胞损伤中的作用及可能机制。方法:构建PAN 诱导的足细胞损伤模型,将足细胞分成对照组(Control 组),PAN 组(加入50 μg/ ml PAN),雷帕霉素组(RAP 组:分别加入100、200、300 ng/ ml 雷帕霉素),PAN+雷帕霉素组(PAN+RAP组:细胞在用含PAN 的培养液培养前1 h,分别用100、200、300 ng/ ml 雷帕霉素进行预处理1 h)。采用Annexin V/ PI 双染法检测细胞凋亡,透射电镜观察自噬小体,Western blot 检测LC3、p62、4EBP1、P70S6K、mTOR 蛋白表达。结果:与对照组比较,PAN组足细胞凋亡增加,自噬体减少,LC3域蛋白表达下调,p62 上调,mTOR、4EBP1、P70S6K 磷酸化水平上调;与PAN 组比较,PAN+RAP 组足细胞凋亡率下降,自噬体增加,LC3域蛋白表达上调,p62 下调,mTOR、4EBP1、P70S6K 磷酸化水平下调。结论:PAN 可以抑制足细胞自噬,促进足细胞凋亡;雷帕霉素可通过激活自噬改善PAN 诱导的足细胞损伤,这种作用可能与雷帕霉素抑制mTOR/4EBP1、P70S6K 信号通路有关。     

沉默HDAC6对嗜肺军团菌干扰RAW264.7自噬作用的影响

目的 以嗜肺军团菌感染HDAC6基因沉默的RAW264.7细胞为研究对象,检测自噬流及自噬相关因子表达水平的变化,探究HDAC6在嗜肺军团菌干扰巨噬细胞自噬中的作用机制。方法 利用RNAi技术介导基因沉默,构建shRNAHDAC6细胞,Western blot验证沉默效果。用嗜肺军团菌活菌和灭活菌[感染复数(MOI)=50]分别感染RAW264.7、sh-NC、shRNA-HDAC6细胞6、12、24 h。应用自噬双标质粒pmCherry-C1-EGFP-LC3B检测巨噬细胞自噬流的变化;透射电镜观察嗜肺军团菌感染24 h后各组细胞内的自噬小体和自噬溶酶体;实时荧光定量PCR及Western blot法检测AMBRA1、ATG9B、P62、Beclin1、α-tubulin、LC3B的表达水平。结果 与RAW264.7对照组相比,shRNA-HDAC6细胞的HDAC6蛋白表达水平显著降低(P<0.05);自噬双标质粒检测自噬流结果显示,嗜肺军团菌活菌及灭活菌感染RAW264.7细胞,自噬流均减弱,沉默HDAC6后嗜肺军团菌感染巨噬细胞自噬流增加。透射电镜可观察到嗜肺军团菌感染巨噬...     

慢病毒介导的RNA干扰沉默Slug基因对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默Slug基因,观察对结肠癌HCT116细胞增殖和周期的影响。方法:构建Slug基因特异性siRNA慢病毒载体,感染结肠癌HCT116细胞,设立空白对照组、阴性对照组及SlugsiRNA三组,应用Real-time PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白质水平检测各组干扰质粒对Slug基因的干扰效果,MTT法检测Slug基因在siRNA作用下的细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡周期变化情况。结果:转染Slug siRNA后,结肠癌HCT116细胞中Slug基因mRNA和蛋白表达明显受到抑制(P<0.05);MTT检测,干扰组细胞增殖水平明显低于阴性对照组;流式细胞仪检测细胞G1期细胞百分比(52.3±0.6)高于阴性对照组(45.1±0.3,P<0.05)。结论:Slug siRNA能明显下调靶基因Slug的表达,在体外可抑制结肠癌HCT116细胞的生长并促进其凋亡。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响

目的:运用RNA干扰(RNAi)技术沉默人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549的B细胞淋巴瘤-2相关基因(Bax),探讨Bax在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导A549细胞凋亡中的作用。方法:体外培养A549细胞,利用脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的Bax小干扰RNA(siRNA)转染入A549细胞,给予10μg/LTNF-α刺激24h,RT-PCR检测bax mRNA的表达,Western blotting和免疫组化检测Bax蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果:化学合成的Bax siRNA抑制了A549细胞Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),流式细胞术显示BaxsiRNA组的细胞凋亡率明显低于TNF-α组和阴性对照siRNA组(P0.05)。结论:体外实验证明Bax的高表达在TNF-α诱导A549细胞凋亡中发挥了重要的促凋亡作用,利用RNAi技术沉默Bax基因可以有效抑制由TNF-α介导的A549细胞凋亡。     

沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1基因抑制SHG44人胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡

目的采用RNA干扰技术(RNAi)沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)基因的表达,观察沉默效果及沉默CEACAM1表达后对SHG44人胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并化学合成针对CEACAM1的3对小干扰RNA(siRNA),脂质体法瞬时转染SHG44细胞。流式细胞术(FCM)检测转染效率,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测siRNA转染前后SHG44细胞中CEACAM1 mRNA的表达,Western blot法检测CEACAM1蛋白的表达。CCK-8法检测SHG44细胞细胞增殖活性,annexin V-FITC/PI染色结合FCM检测SHG44细胞凋亡,Western blot法检测cleaved caspase-3和裂解型多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)的变化。结果 CEACAM1 siRNA转染效率达85%。与空白对照组和阴性对照组比较,qRT-PCR及Western blot结果显示,3组特异性siRNA转染48 h后,在mRNA和蛋白水平上CEACAM1的表达均降低,以CEACAM1-siRNA3效果最明显。siRNA组SHG44细胞的增殖能力较正常对照组明显下降,凋亡细胞比例增加。沉默CEACAM1表达可以上调cleaved caspase-3和cleaved PARP的表达。结论沉默CEACAM1基因表达可有效抑制SHG44胶质瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

沉默c-myc基因对Raji细胞自噬活性的影响

为了研究沉默c-myc基因后Raji细胞自噬活性的变化及其机制,采用脂质体转染SiRNA法沉默c-myc基因,在透射电镜下观察细胞自噬体的形成情况,采用western blot法测定LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1、磷酸化P70、磷酸化AKT蛋白的表达。研究发现沉默c-myc基因后,电镜下观察到Raji细胞自噬活性随时间而增强,LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值随时间而增高;Beclin-1表达增高,磷酸化P70表达降低,磷酸化AKT表达无明显变化。结果提示沉默c-myc基因使Raji细胞自噬活性明显增强,其机制是通过上调Beclin-1表达和抑制mTOR的活性来实现的。     

生物钟蛋白CRY1抑制Ang Ⅱ诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞表型蛋白标志物变化

目的 探讨生物钟(circadian clock)相关蛋白隐花色素1(CRY1)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化中的作用。方法 将VSMCs分为对照(control)组和实验组,用不同浓度AngⅡ处理VSMCs不同时间,RT-PCR和Western blot检测收缩型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、合成型标志物骨桥蛋白(OPN)及CRY1 mRNA和蛋白的表达;分别构建CRY1的干扰RNA(siCRY1)、YAP1的干扰RNA(siYAP1)进行基因沉默,构建CRY1的过表达质粒(pcDNA-CRY1)进行过表达,RT-PCR、Western blot双重验证各基因组mRNA和蛋白的表达;将VSMCs分为4组,对照组、AngⅡ组、AngⅡ+siCRY1组、AngⅡ+pcDNA-CRY1组,将siCRY1、siYAP1、pcDNA-CRY1转染至经AngⅡ处理VSMCs中,RT-PCR和Western blot检测α-SMA、OPN、CRY1、YAP1 mRNA和蛋白的表达及CCK-8法检测细胞增殖情况。结果 不同浓度AngⅡ刺激VS...     

TRPC6特异性抑制剂SAR7334对宫颈癌细胞生物学行为影响的研究

目的　探讨TRPC6在宫颈癌组织中的表达及其抑制剂SAR7334对Siha（人宫颈鳞癌细胞）增殖和迁移的影响。 方法　选取2017年9月至2019年9月在十堰市人民医院确诊为宫颈鳞癌的11例病例作为实验组,对照组取同一患者正常宫颈组织,免疫印迹法和免疫荧光法等检测宫颈组织中TRPC6蛋白表达;使用20、100、1000 nmol/L SAR7334处理Siha细胞,CCK8法和Hoechst染色检测细胞增殖与凋亡;划痕实验和Transwell法验检测细胞迁移。免疫印迹法检测TRPC6通道阻断后Siha细胞自噬程度的改变。 结果　宫颈癌组织中TRPC6表达上调;与对照组相比,用100 nmol/L SAR7334阻断TRPC6后,Siha细胞的增殖和迁移减少,划痕愈合率降低,凋亡率增加（P<0.05）。TRPC6通道阻断后,Siha细胞自噬减弱。 结论　TRPC6在宫颈癌中表达上调,其抑制剂SAR7334可能通过影响细胞自噬抑制宫颈癌Siha细胞的增殖与迁移。     

TRPC6特异性抑制剂SAR7334对宫颈癌细胞生物学行为影响的研究

目的　探讨TRPC6在宫颈癌组织中的表达及其抑制剂SAR7334对Siha（人宫颈鳞癌细胞）增殖和迁移的影响。 方法　选取2017年9月至2019年9月在十堰市人民医院确诊为宫颈鳞癌的11例病例作为实验组，对照组取同一患者正常宫颈组织，免疫印迹法和免疫荧光法等检测宫颈组织中TRPC6蛋白表达；使用20、100、1000 nmol/L SAR7334处理Siha细胞，CCK8法和Hoechst染色检测细胞增殖与凋亡；划痕实验和Transwell法验检测细胞迁移。免疫印迹法检测TRPC6通道阻断后Siha细胞自噬程度的改变。 结果　宫颈癌组织中TRPC6表达上调；与对照组相比，用100 nmol/L SAR7334阻断TRPC6后，Siha细胞的增殖和迁移减少，划痕愈合率降低，凋亡率增加（P<0.05）。TRPC6通道阻断后，Siha细胞自噬减弱。 结论　TRPC6在宫颈癌中表达上调，其抑制剂SAR7334可能通过影响细胞自噬抑制宫颈癌Siha细胞的增殖与迁移。