猪囊尾蚴特异性抗原的筛选、鉴定和生物信息学分析

目的 对猪囊尾蚴的特异性抗原进行筛选、鉴定和生物信息学分析。 方法 四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者,口服槟榔-南瓜子驱虫,收集、制备虫卵悬液（8万个/ml）。将6头20 d龄三元杂交乳猪均分实验组和空白对照组,实验组每猪灌胃虫卵悬液1 ml。40 d后,分别制备实验组心脏血混合血清及对照组心脏血混合血清;收集、制备实验组猪囊尾蚴蛋白,进行双向电泳（2-DE）分析。将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜（PVDF膜）,用实验组混合血清及对照组混合血清（均为1 ∶ 10）为一抗,羊抗猪HRP-IgG（1 ∶ 200）为二抗,进行蛋白质印迹（Western blot-ting）分析,比较两组杂交蛋白点的差异,确定猪囊尾蚴抗原抗体阳性杂交斑点,据此挖取双向电泳与之对应的蛋白点,用电喷雾离子阱型质谱仪（ESI-Trap MS）进行质谱鉴定。搜索美国国家生物技术信息中心（NCBI）网站信息进行生物信息学分析。 结果 双向电泳凝胶共检测到207±9个蛋白质斑点,相对分子质量为Mr 14 400～94 000,等电点（pI）为3.0～10.0。筛选出7个特异性抗原,其中的4个分别为AF239799-1膜联蛋白（AF239799-1 annexin）、细胞支架肌动蛋白-2（cytoskeletal actin-2）、原肌球蛋白（tropomyosin）和肌动蛋白-1（actin-1）。前1个蛋白已被鉴定为猪带绦虫特异性抗原,后3个蛋白抗原与NCBI网上登录的亚洲带绦虫成虫蛋白一致,为猪囊尾蚴特异性抗原。 结论 共获得3个猪囊尾蚴特异性抗原,即细胞支架肌动蛋白-2、原肌球蛋白和肌动蛋白-1。     

猪囊尾蚴特异性抗原编码cDNA阶段特异性表达

分析猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ的阶段特异性表达机制。     

猪囊尾蚴特异性抗原编码cDNA的阶段特异性表达

目的：分析猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ的阶段特异性表达机制。方法：用猪囊尾蚴特异性抗原编码ｃＤＮＡ（λｃＣ２８）及抗λｃＣ２８单表位抗体作探针，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分子杂交技术分析了λｃＣ２８编码ｃＤＮＡ在猪带绦虫各发育阶段的特异性表达。结果：猪囊尾蚴和成虫不同节片抗原蛋白具有阶段特异性，λｃＣ２８ｃＤＮＡ编码的２８ｋＤａ抗原蛋白只在囊尾蚴阶段表达，成虫幼节、成节、孕节都不表达。结论：猪囊尾蚴阶段特异性抗原的编码基因存在于囊尾蚴阶段和成虫的幼节中，但仅有囊尾蚴阶段的ｍＲＮＡ表达２８ｋＤａ抗原蛋白。     

免疫金银法标记抗猪囊尾蚴囊液抗原McAb与猪囊尾蚴特异性结合的定位研究

McAb F_3在猪囊尾蚴上的结合部位经免疫金银法标记定位,冰冻及石腊切片均显示出清晰的结合位点。囊壁部位颗粒均匀呈双层分布,头节折叠部位皱襞的凹陷处黑色颗粒呈密集的小片状。免疫金银法所标记的抗猪囊尾蚴囊液与其相应抗原的结合部位与囊尾蚴细胞层的分布相一致。     

猪囊尾蚴cDNA表达文库构建及抗原基因筛选

采用Ｑｕｉｃｋ Ｐｒｅｐ ｍ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ 试剂盒提取猪囊尾蚴ｍ ＲＮＡ;Ｔｉｍ ｅ－ Ｓａｖｅｒ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ试剂盒反转录合成双链ｃＤＮＡ,并在末端加上ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩａｄａｐｔｏｒ,修饰后的ｃＤＮＡ 与λｇｔｌｌＥｃｏＲＩ臂连接,体外包装为λ噬菌体颗粒;感染Ｅ．ｃｏｌｉＹ１０９０ 构建成功库容量为２×１０６、重组率为８０％ 的ｃＤＮＡ表达文库。利用兔抗猪囊尾蚴虫体抗原和囊液抗原血清分别对一部分文库进行免疫印迹筛选,分别获得８ 个阳性克隆。提取阳性克隆ＤＮＡ,利用ＰＣＲ法从重组噬菌体ＤＮＡ中扩增出ｃＤＮＡ片段,长度自４００—９００ｂｐ。本文工作为研制猪囊尾蚴核酸疫苗打下了基础。     

应用胶体金探针技术IGSS进行猪囊尾蚴与抗猪囊尾蚴囊液抗原McAb特异性结合的定位研究

本文报道将IGSS应用于抗猪囊尾蚴囊液抗原的McAb与猪囊尾蚴特异性结合的定位研究。用猪囊尾蚴囊液抗原免疫BALB/C小鼠的脾细胞与胃髓瘤细胞系NS-D融合,经克隆化获得三株分泌抗猪囊尾蚴囊液抗原的McAb杂交瘤细胞A_(91)、G_(11)、F_(3),用ELISA检测证实杂交瘤细胞分泌特异性抗体。对其诱生腹水经ELISA、IHA检测显示腹水中高效价特异性的McAb,     

循环抗原和特异性IgG4对脑囊尾蚴病诊断和疗效评估价值比较

目的比较循环抗原（circulating antigen, CAg ）和特异性IgG4在脑囊尾蚴病诊断和生存状态、 疗效评估中的价值。方法依据CT和MRI的影像表现将68例脑囊尾蚴病患者分为活虫期、变性死亡早期、变 性死亡后期及钙化期四个病期组,检测各病期患者血清中囊虫CAg和IgG4;分别对38例活虫期患者治疗前 ,治疗中,治疗后血清中CAg和特异性IgG4进行检测和比较分析。结果不同病期患者血清CAg阳性率、IgG4 阳性率差异均有显著意义。38例活虫期患者血清CAg、IgG4阳性率分别为100%和98%,随疗程进展,CAg、 IgG4阳性率逐渐降低,不同疗程间CAg阳性率差别有显著性意义,而IgG4阳性率差异无统计学意义。结论 CAg和特异性IgG4能较客观地反映人体内脑囊尾蚴的生存状态,可作为早期诊断指标,两者的特异性及敏 感性无显著差异;对远期疗效评估可以优先选用CAg。     

猪囊尾蚴抗原的研究

应用高效液相色谱仪对猪囊尾蚴囊液抗原(CFAg)、全囊虫抗原(CWAg)、头节抗原(CSAg)进行了分析,分别分离出12、12、14个峰,主峰的数目分别是4、3、3个。CFAg与CWAg有7个相同的峰,第一峰的蛋白质分子量均为669kD。CFAg与CSAg有5个相同的峰,除其中一个峰的蛋白质分子量在29～66kD之间外,其余均在29kD以下。CWAg与CSAg有6个相同的峰。     

猪囊尾蚴抗原的免疫化学研究

本文应用琼脂双向扩散(DID)、免疫电泳(IEP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对猪囊尾蚴的各部分抗原,即完整幼虫、囊液、头节和囊壁抗原进行分析。实验结果表明,四种抗原间存在相同的抗原成分。囊液中含有糖蛋白和脂蛋白。囊液、头节和囊壁蛋白质的主要分子量均在100KD以下。囊液与头节有     

单克隆抗体检测猪肉组织液中猪囊尾蚴特异性抗原的实验研究

应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，对猪肉组织液中的猪囊尾蚴循环抗原进行检测，实验结果表明，猪体一旦感染猪囊尾蚴，无论距囊结远近，其组织液中均可检测到特异性循环抗原，其检出的蛋白含量与虫体感染密度的高低成正比，与虫体发育的程度成反比。该检测方法对旋毛虫病猪、肉孢子虫病猪和健康猪的检测结果均为阴性。提示用单克隆抗体不仅能检测到猪体组织液中特异性循环抗原，而且具有较高的敏感性和特异性，建立了一种通过检测组织液来判定肉类是否感染猪囊尾蚴的免疫学方法。     

单克隆抗体检测猪肉组织液中猪囊尾蚴特异性抗原的实验…

应用抗猪囊尾蚴单克隆抗体，对猪肉组织液中的猪囊尾蚴循环抗原进行检测，实验结果表明，猪体一旦感染猪囊尾蚴，无论距结远近，其组织液中均可检测到特异性循环抗原，其检出的蛋白含量与虫体感染密度的高低成正比，与虫体发育的程度成反比。该检测方法对旋行虫病猪，肉孢子虫病猪和健康猪的检测结果均为阴性。     

4种抗原检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG4 …

探讨ＳｉＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２检测日本血吸虫病的特异性和敏感性及疗效考核价值。方法采用ＥＬＩＳＡ法,用ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２及ＳＥＡ检测治疗前及治疗后不同时期血吸虫病人血清中的特异性ＩｇＧ、ＩｇＧ４及正常和肺吸虫、肝吸虫、囊虫病人血清中的非特异抗体。结果ＳｉＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳＪ３２的敏感性和特异性与ＳＥＡ比较差异均无显著性（均Ｐ〉０．０５）     

血吸虫病患者治疗前后特异性IgG4抗体的观察

[目的 ]观察血吸虫病患者治疗前后特异性IgG4抗体的变化。[方法 ]ELISA法。 [结果 ]2 7例血吸虫病患者治疗前SEA IgG4和AWA IgG4阳性率分别为 96 3%和 10 0 % ,平均OD值分别为 1 6 2和 0 72。治疗后 6月复查 18例 ,阳性率分别为 94 4%和 10 0 % ,平均OD值分别为 1 0 6和 0 5 6。治疗后 12月复查 2 7例 ,阳性率分别为 96 3%和 92 6 % ,平均OD值分别为 0 99和 0 5 8。 [结论 ]2 7例血吸虫病患者SEA IgG4和AWA IgG4治疗前后阳性率无明显变化 ,但抗体水平有所下降。     

绵羊抗布鲁氏菌特异性IgG,IgA和IgM抗体的观察

<正> 测定特异性IgG、IgA和IgM抗体,对于反映布病机体状态是有意义的。直接提取Ig测定,既费时,Ig又不纯;吸收法费血清,价高,难推广;2ME试验不能确切反映lg之间量的关系。本文以绵羊为实验对象,用ELISA方法测定特异性IgG,IgA和IBM抗体,观察了不同毒力、不同菌量和不同途径下的特异性Ig消长规律及其诊断意义。 材料和方法:兔抗羊IgG,IgA和IgM及羊抗兔IgG是以亲合层析提纯。结合物以戊二醛二步法标记,间接法测抗体,结果以酶标定量仪测定。 动物分组:以血清莱特氏凝集反应低于1:10的     

用Sepharose 4B提纯猪囊尾蚴尿素溶性抗原和水溶性抗原的应用

本实验用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ分别提纯猪囊尾蚴尿素溶性抗原和水溶性抗原，各自分别分离出两组蛋白质：Ｓ１Ａｇ－ｕ，Ｓ２Ａｇ－ｕ和Ｓ１Ａｇ－Ｗ，Ｓ２Ａｇ－ｗ，用ＥＬＩＳＡ方法检测囊尾蚴病人，包虫病人和肝吸虫病人血清。显示：血清１：４００稀释时，囊尾蚴病人血清（６０例），Ｓ１Ａｇ－ｕ，Ｓ２Ａｇ－ｕ和Ｓ１Ａｇ－ｗ，Ｓ２Ａｇ－ｗ的阳性率分别为９８．３％，８８．３％和８１．６％，７６．７％，包虫病人血清（３     

抗人IgG单克隆抗体用于ELISA法检测血吸虫病人血清特异性IgG抗体的观察

文献报道^{［１，２］}血吸虫病患者重复感染与特异性ＩｇＧ４抗体水平有关，患者经有效治疗后，特异性ＩｇＧ４抗体维持在高水平，其重复感染率较特异性ＩｇＧ４抗体正常组为高。国内有关这方面的观察报道不多，为了对日本血吸虫病患者的特异性ＩｇＧ４抗体水平有一初步了解, 我们将自制的抗人IgG4 单抗用辣根过氧化物酶标记后作为第二抗体对血吸虫病患者血清进行了检测。     

前列腺特异性抗体筛选前列腺癌

【《医学世界报导》1991年7月】根据一项迄今为最大规模的前列腺癌筛选计划,在美国46个州765个点进行了15万名男子以上的检查,认为检查血中前列腺特异性抗原(prostate-specific anti-gen,PSA)的方法用于筛选前列腺癌的准确性,为直肠指检法(digital rectal exam,DRE)的二倍.下表为对其中196例经活检证实为前列腺癌的病人,进行两种方法检查的比较结果。     

猪囊尾蚴特异抗原的基因克隆和表达

目的 寻找可用于诊断猪囊尾蚴病或可诱发宿主保护性免疫力的特异抗原。方法 用免疫血清筛选猪囊尾蚴头节λＺＡＰⅡｃＤＮＡ文库，阳性克隆基因测序，并亚克隆人表达载体ｐＥＴ２８ｂ。对重组体进行诱导表达并对表达产物进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 从ｃＤＮＡ文库中筛到２个阳性克隆Ｃｙ１和Ｃｙ４。Ｃｙ４片段在原核体系（ｐＥＴ２８ｂ）中表达，获得高产量的融合蛋白Ｃｙ４。结论 Ｃｙ１为编码     

免疫复合物对猪囊尾蚴抗原,抗体定性定量检测的影响探讨

本文应用抗猪囊尾蚴囊糊单克隆抗体和猪运尾蚴液抗原按不同比例混合孵育，实验观察了抗原、抗体和免疫复合物三者的关系。结果表明：免疫复合物可结合消耗一定量的抗原和抗体。依抗体与抗原蛋白浓度比值不同，免疫复合物可结合消耗75％～100％的抗原和35．7％～94.3％的抗体，致使游离抗原和抗体检出率降低。因此免疫复合物对抗原、抗体检测的影响作用不容忽视。     

猪囊尾蚴特异性抗原cC1重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建与鉴定

目的 目的 构建表达猪囊尾蚴cC1抗原的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法 方法 提取pET28a?cC1质粒DNA, 用xho I和 BamH I双酶切, 用Klenow酶补平xho I酶切末端, 同时提取pMV261穿梭质粒载体, 用Hind III和BamH I双酶切, 用Klenow 酶补平Hind III酶切末端, 纯化后的酶切产物通过T4连接酶连接, 构建pMV261?cC1穿梭质粒, 测序验证正确后, 将 pMV261cC1穿梭质粒经电穿孔法转化耻垢分枝杆菌, 构建重组耻垢分枝杆菌, 经热诱导后, 以猪囊尾蚴病患者血清为一抗 进行Western?blotting鉴定。此外, 比较正常耻垢分枝杆菌和重组cC1耻垢分枝杆菌生长状态并绘制生长曲线。结果 结果 构 建的重组穿梭载体经酶切、 测序验证正确。构建的重组耻垢分枝杆菌经热诱导后, SDS?PAGE电泳分析显示, 在40 kDa处 有外源性蛋白表达, 与预期值相符。Western?blotting显示其可被猪囊尾蚴病患者血清识别, 表明cC1抗原基因在耻垢分枝 杆菌中表达成功。重组耻垢分枝杆菌与正常耻垢分枝杆菌的增殖特性无明显差异。结论 结论 成功构建了表达猪囊尾蚴特 异性抗原cC1的重组耻垢分枝杆菌疫苗。