AXL表达在前列腺癌细胞多西他赛耐药中的作用研究

目的:观察AXL表达在前列腺癌PC-3和DU145细胞多西他赛化疗耐药中的作用及可能机制。方法:应用Western印迹测定多西他赛刺激PC-3和DU145后AXL蛋白表达,通过多西他赛浓度递增间断刺激PC-3和DU145细胞,建立耐药细胞PC-3-DR和DU145-DR,应用Western印迹测定PC-3和DU145细胞耐药前后AXL,AXL磷酸化蛋白激酶(p-AXL)及配体蛋白生长阻滞特异性因子-6(Gas6)蛋白表达。用脂质体Lipofectamine 2000将经过筛选证实有效的AXL-shRNA序列和阴性NCshRNA序列转染PC-3和DU145细胞,应用CCK8和流式细胞仪检测转染前后加入多西他赛后的细胞增殖和凋亡情况。应用MTT和流式细胞仪检测加入AXL抑制剂MP470和多西他赛单独及联合应用的细胞增殖率、凋亡率和细胞周期分布。Western印迹检测AXL抑制剂R428,多西他赛单独或联合处理耐药细胞后ABCB1的表达情况。结果:多西他赛刺激PC-3和DU145细胞后,AXL表达上升(P0.05);与PC-3和DU145细胞相比,PC-3-DR和DU145-DR中AXL,p-AXL蛋白表达明显上升,Gas6蛋白表达明显下降(P均0.05)。AXL转染PC-3和DU145后的细胞经多西他赛处理48 h,细胞增殖率分别为(51.03±3.16)%和(57.39±2.37)%,明显高于未转染细胞(36.41±4.28)%和(45.5±3.93)%(P0.05),转染后细胞凋亡率分别为(42.37±3.43)%和(39.54±2.39)%,明显低于未转染细胞(65.48±3.16)%和(54.98±2.84)%(P0.05)。MP470可明显抑制细胞增殖和促进耐药细胞凋亡,MP470与多西他赛联合应用后的耐药细胞增殖抑制率和凋亡率明显高于单独应用,联合应用后G2/M期细胞百分数亦明显高于单独应用(P均0.05)。R428可明显降低耐药细胞的ABCB1表达,与多西他赛联用后,ABCB1的蛋白表达水平明显低于单独用药组(P均0.05)。结论:AXL表达上调可促进前列腺癌PC-3和DU145细胞耐药,AXL抑制可增加细胞对多西他赛的敏感性,这一作用可能与G2/M期细胞凋亡率升高和ABCB1表达降低有关。     

miR-21诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移

目的探讨miR-21诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移。方法人工合成miR-21 mimic/inhibitor及其对照组序列,分别转入前列腺癌细胞株C4-2、DU145中,收集细胞行RT-qPCR检测miR-21、FOXO1 mRNA表达,行Western blot检测FOXO1、E-cadherin和N-cadherin表达,行Transwell试验检测转染后前列腺癌细胞侵袭透膜能力变化。结果前列腺癌细胞株C4-2、DU145转染miR-21 mimic/inhibitor及对照序列后,RT-qPCR检测miR-21表达升高/降低明显(P0.05),RT-qPCR检测FOXO1 mRNA表达与miR-21一致。在Western blot结果中,转染miR-21 mimic前列腺癌细胞FOXO1、N-cadherin表达高于对照组,E-cadherin表达相反;转染miR-21 inhibitor前列腺癌细胞FOXO1、N-cadherin表达低于对照组,E-cadherin表达相反。Transwell试验显示,转染miR-21 mimic前列腺癌细胞侵袭透膜能力较对照组增强(P0.01),转染miR-21 inhibitor前列腺癌细胞侵袭能力较对照组减弱(P0.01)。结论 miR-21通过诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移。     

Sorafenib对前列腺癌DU145细胞的抑制作用的研究

目的 观察索拉非尼(Sorafenib)对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞的抑制作用.方法 用不同浓度Sorafenib处理前列腺癌DU145细胞24、48和72 h后,MTT法检测Sorafenib对DU145细胞的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,Western blot检测不同浓度Sorafenib处理72 h后DU145细胞内ERK和Bcl-2的表达.结果 Sorafenib能显著抑制DU145细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性.DU145细胞凋亡率随着Sorafenib剂量的增加而增大,具有良好的量效关系(P<0.01);Sorafenib处理DU145细胞72 h后,ERK和Bcl-2蛋白的表达明显下调(P<0.01).结论 Sorafenib抑制DU145细胞增殖、诱导细胞凋亡,可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长.     

核小体结合蛋白调控Survivin基因对前列腺癌DU145凋亡的作用

目的探讨抑制人核小体结合蛋白1（NSBP1）基因后促进非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145凋亡的作用机制。方法通过慢病毒lentivirus-NSBP1转染非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145后,MTT法观察细胞活性变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,应用Western-blot技术检测NSBP1、Survivin蛋白的变化情况。结果抑制NSBP1表达水平后非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145细胞活性降低,凋亡增加,同时Survivin蛋白的表达也随之降低。结论通过慢病毒转染抑制NSBP1的表达可以促进非激素依赖性前列腺癌细胞系DU145凋亡,NSBP1可能是通过调控Survivin基因的变化影响细胞的增值凋亡。     

长链非编码RNA Linc00662促进前列腺癌细胞生长的研究

目的:探讨Linc00662在前列腺癌的表达情况及对前列腺癌细胞生物学功能的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对60例前列腺癌患者的前列腺癌组织标本以及正常前列腺上皮细胞(WPMY-1细胞)和前列腺癌细胞系(DU145、PC-3、LNCaP和22RV1)检测Linc00662的表达,并分析前列腺癌组织中Linc00662表达与患者临床病理特征的相关性。应用RNA干扰(siRNA)转染PC-3和DU145细胞,qRT-PCR验证干扰效率。通过CCK-8、Caspase 3/9活性测定、划痕试验、Transwell侵袭试验分别检测干扰Linc00662的表达对前列腺癌PC-3和DU145细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果:与邻近及正常组织前列腺上皮细胞相比,Linc00662在前列腺癌组织和细胞系的表达呈显著上调(P0.01)。Linc00662的高表达与肿瘤分期(P=0.002)、原发灶大小(P=0.006)、淋巴结转移(P=0.001)及远处转移(P=0.001)呈正相关。si-Linc00662转染PC-3和DU145细胞后,Linc00662的表达明显下降(P0.01)。与对照组相比, Linc00662干扰组在PC-3和DU145细胞中的增殖、侵袭及迁移能力均明显下降(P0.01),而凋亡增加(P0.01)。结论:Linc00662在前列腺癌组织及细胞中呈相对高表达,敲低Linc00662的表达可抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进其凋亡,可作为前列腺癌新的标志物。     

前列腺癌DU145细胞增殖和克隆形成与延伸因子1α基因表达的关系

目的 探讨延伸因子1α(EF-1α)基因表达与前列腺癌细胞株DU145细胞增殖、克隆形成等功能的关系. 方法 DU145细胞株分3组:对照组(未转染siRNA),转染对照组(转染随机siRNA)和实验组(转染EF-1α-siRNA).应用RNA干扰技术特异性调低DU145细胞株EF-1α蛋白质水平,并通过蛋白质印迹法验证.应用体外细胞功能分析技术,比较EF-1α蛋白质水平调低后DU145细胞增殖、克隆形成能力的变化和差异. 结果 应用RNA干扰技术实现了特异性调低前列腺癌细胞株DU145中EF-1α的水平.转染随机siRNA不影响DU145细胞中EF-1α蛋白质水平.调低DU145细胞EF-1α蛋白质水平后,实验组DU145细胞第4～7天增殖率较对照组下降45.9%、53.5%、35.3%和38.1%(P<0.05).实验组DU145细胞形成克隆数较对照组减少67.0%(P<0.01). 结论 调低EF-1α表达水平对前列腺癌细胞增殖、克隆形成等肿瘤相关生物学行为产生负面影响.EF-1α基因在前列腺癌靶向治疗中可能成为适当的靶基因.     

Raptor调节前列腺癌上皮-间质转化机制研究

目的探讨Raptor调节前列腺癌上皮-间质转化(EMT)作用及机制研究。方法构建Raptor-shRNA慢病毒载体并筛选具有稳定转染Raptor-shRNA DU145细胞株,应用transwell观察沉默Raptor后DU145细胞株侵袭力的变化,Western Blot观察沉默Raptor后DU145细胞E-cadherin,β-catenin,N-cadherin和vimentin表达,以及RhoA活性表达。结果成功构建Raptor-shRNA DU145细胞株;transwell检测稳定转染Raptor-shRNA后DU145细胞侵袭力下降(P0.01);Western Blot检测显示该细胞株E-cadherin和β-catenin表达下降,N-cadherin和vimentin表达升高,RhoA活性表达下降。结论 Raptor与前列腺癌细胞EMT的发生有关,其作用可能是通过RhoA信号途径。     

Gli-1基因的RNAi对前列腺癌DU145细胞的影响

目的研究胶质瘤相关癌基因1(Gli-1)对前列腺癌DU145细胞的生物学影响。方法通过脂质体介导的方法将Gli-1 SiRNA转染前列腺癌DU145细胞,RT-PCR检测Gli-1 mRNA变化,Western Blot法检测其蛋白的表达,CCK-8法检测转染后细胞增殖,运用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果转染Gli-1SiRNA的细胞Gli-1的表达明显低于阴性对照组(NC)与空白组(P﹤0.05),Gli-1SiRNA抑制细胞增殖并降低细胞的侵袭能力。结论 Gli-1 SiRNA可抑制前列腺癌DU145细胞中Gli-1的表达,降低细胞增殖率和侵袭能力,提示Gli-1可能在前列腺癌的恶性进展中起着重要作用。     

MicroRNA-212在前列腺癌中的表达和功能研究

目的检测microRNA-212在前列腺癌组织和细胞株中的表达情况并研究其与前列腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的关系。方法检测前列腺癌标本及细胞系中microRNA-212的表达情况。在DU145和PC3转染microRNA-212 mimics、microRNA-212 inhibitor或者NC阴性对照物,通过MTT、Transwell、流式细胞仪检测其相关生物学情况。结果前列腺癌组织中的microRNA-212表达显著低于癌旁组织。前列腺癌细胞系中microRNA-212较正常前列腺上皮细胞系的表达低。microRNA-212的表达与Gleason评分、脉管侵犯和淋巴结转移密切相关。MTT实验和Transwell实验表明,转染了microRNA-212 mimics的DU145和PC3细胞,其增殖率降低,microRNA-212的上调抑制了DU145和PC3细胞的迁移和侵袭能力。转染了microRNA-212 inhibitor的DU145和PC3细胞则表现出较强的增殖、迁移和侵袭能力。流式细胞仪分析结果表明,转染了microRNA-212 mimics的DU145和PC3细胞的凋亡显著增加,转染了microRNA-212 inhibitor的DU145和PC3细胞凋亡受到抑制。结论前列腺癌组织中microRNA-212表达显著下降,microRNA-212的表达与Gleason评分、脉管侵犯和淋巴结转移密切相关,microRNA-212能够抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭并促进前列腺癌细胞凋亡。     

重楼皂苷Ⅰ对去势抵抗性前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞株DU145细胞增殖的影响及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法采用MTT法检测PPⅠ对CRPC细胞株DU145细胞增殖能力的影响,使用流式细胞仪检测DU145细胞的凋亡率,同时应用Western blot检测PPⅠ对DU145细胞p-ERK1/2、ERK1/2、特异性蛋白1(SP1)及Zeste基因增强子同源物2(EZH2)蛋白表达的影响;通过加入ERK1/2抑制剂(PD98059)检测PPⅠ对SP1表达的影响,通过转染SP1、EZH2过表达质粒分别检测PPⅠ对SP1、EZH2表达的影响;采用双荧光素酶报告基因检测EZH2启动子活性,并探讨ERK1/2、SP1和EZH2之间的关系。设未加药组为空白组。结果MTT法检测结果显示,PPⅠ能抑制DU145细胞体外生长,与空白组相比,细胞存活率从给药浓度0.4μmol·L-1开始明显下降,且呈时间和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,PPⅠ能诱导DU145细胞早期凋亡,与空白组相比,细胞早期凋亡率从给药浓度0.4μmol·L-1开始明显增加,差...     

隐丹参酮对前列腺癌DU145细胞中异黏蛋白表达的影响

目的:探讨隐丹参酮对前列腺癌DU145细胞增殖及细胞凋亡的作用,并初步探讨隐丹参酮对DU145细胞中异黏蛋白(MTDH)表达及下游PI3K/AKT信号通路的影响。方法:四氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度隐丹参酮分别作用DU145细胞24、48、72 h后对细胞的生长抑制作用;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况;Western印迹检测不同浓度隐丹参酮及作用不同时间对DU145细胞中MTDH蛋白的表达影响;RT-PCR技术检测隐丹参酮分别作用DU145细胞12、24、48 h后细胞中MTDH mRNA的表达情况;Western印迹检测隐丹参酮作用DU145细胞48 h后细胞中MTDH、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达情况。结果:隐丹参酮能够明显抑制DU145细胞增殖,且抑制效应呈剂量和时间依赖性(P0.05);以10μmol/L隐丹参酮作用DU145细胞24、48、72 h后细胞凋亡率分别为(29.42±4.51)%、(55.07±5.67)%和(70.84±4.66)%,明显高于对照组(3.1±2.48)%(P0.05)。Western印迹和RT-PCR结果显示,隐丹参酮可在转录和翻译水平下调MTDH的表达(P0.05),抑制AKT信号通路和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P0.05)。结论:隐丹参酮可抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能是通过下调MTDH表达,抑制其下游PI3K/AKT信号通路。     

Smac基因诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察Smac基因对前列腺癌细胞凋亡的影响。方法：前列腺癌细胞株（PC-3）在含小牛血清的DMEM-F12培养基中培养、传代。通过脂质体介导将Smac基因导入前列腺癌细胞株，通过RT-PCR法检测SmacmRNA的表达，同时用SABC免疫组化法分析Smac的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率，流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果：转染Smac基因后，RT-PCR可检测出Smac的特异条带，SABC结果转染组Smae蛋白表达显著性增强，前列腺癌细胞的生长明显受抑制（P〈0．05）。细胞周期分析可见凋亡峰，凋亡率35．2％。结论：转入Smac基因可显著促进前列腺癌细胞细胞的凋亡。     

长链非编码RNA H19在前列腺癌中的表达及对前列腺癌细胞糖代谢与生长的影响

目的:探讨长链非编码RNA H19在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞DU145和PC-3糖代谢和生长的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测20例前列腺癌组织(高分化和低分化各10例)和5例良性前例腺增生组织中H19的表达水平。H19小干扰RNA(siRNA)转染前例腺癌细胞DU145和PC-3,以不转染载体和转染阴性载体作为空白对照组和阴性对照组,MTT法检测转染后DU145和PC-3细胞的生长情况,q PCR检测转染细胞中H19的表达水平,通过测定培养液中葡萄糖和乳酸的含量分析前例腺癌细胞糖代谢的变化。结果:高分化和低分化前例腺癌组织中H19的相对表达量(0.725±0.385、2.086±0.542)均显著高于BPH组织(0.210±0.068),P均0.01,且低分化前例腺癌组织显著高于高分化前列腺癌组织(P0.01)。转染H19 siRNA后,H19在DU145和PC-3细胞中的表达均显著低于空白对照组和阴性对照组(P均0.01);转染H19 siRNA后的DU145和PC-3细胞,生长能力、葡萄糖消耗量和乳酸生成量均较空白对照组和阴性对照组显著下降(P均0.01)。结论:H19在前列腺癌中呈现高表达,抑制其表达可有效抑制前列腺癌细胞的糖代谢和生长。     

前列腺癌恩杂鲁胺耐药细胞株的建立及相关lncRNA和mRNA的筛选

目的:构建人前列腺癌恩杂鲁胺耐药细胞株并筛选恩杂鲁胺耐药对lncRNA和mRNA表达谱的影响。方法:体外以恩杂鲁胺10μmol/L浓度诱导培养人前列腺癌LNCa P及C4-2B细胞株6个月,建立耐药细胞株LNCa P-ENZA及C4-2B-ENZA。MTT法检测各细胞株IC50值和耐药指数,Western印迹检测前列腺癌恩杂鲁胺耐药相关基因FL-AR、AR-V7、HnRNPA1在各细胞株中的表达。应用高通量芯片技术筛选C4-2B和C4-2B-ENZA细胞中差异表达的lncRNA与mRNA。结果:恩杂鲁胺耐药细胞株LNCa P-ENZA和C4-2B-ENZA的IC50值分别为60.83、88.32μmol/L,与亲本细胞(分别为12.31、18.96μmol/L)相比显著增高(P0.05),其耐药指数分别为4.94和4.67。Western印迹结果表明LNCa P-ENZA和C4-2B-ENZA中恩杂鲁胺耐药相关基因AR-V7、HnRNPA1的蛋白表达量相较与LNCa P和C4-2B细胞显著升高,而FL-AR的表达量未见显著改变。通过lncRNA芯片技术筛选后发现与C4-2B相比,在C4-2B-ENZA细胞中显著差异表达的lncRNA有1 440个,其中上调倍数最大者为DPP10-AS1(fold change=33.6),下调最大倍数为G090385(fold change=186.41);mRNA有1 236个,其中上调倍数最大者为BCHE(fold change=193.70),下调倍数最大者为ANKRD1(fold change=182.90)。结论:成功建立了人前列腺癌恩杂鲁胺耐药细胞,并且筛选出了与耐药相关的lncRNA与mRNA,为前列腺癌恩杂鲁胺耐药的治疗提供分子依据。     

熊果酸对前列腺癌细胞雄激素非依赖性的逆转作用

目的 探讨中药成分熊果酸对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)的治疗作用及其机制.方法 应用熊果酸处理体外培养的人雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)细胞株LNCaP和AIPC细胞株DU145,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性及对人工合成雄激素R1881的反应性,免疫细胞化学检测熊果酸对雄激素受体(AR)、糖皮质激素受体(GR)、前列腺特异性抗原(PSA)及成活因子HSP90和白细胞介素(IL)-6表达的影响,逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测熊果酸对DU145细胞AR mRNA表达的影响.结果 熊果酸对不同浓度雄激素下的LNCaP细胞均呈浓度和时间依赖性生长抑制,20 mg/L的熊果酸作用96 h对LNCaP细胞的抑制率近50%.0.1 nmoL/L的R1881为最适生长浓度,熊果酸作用后,LNCaP细胞生长的最适雄激素浓度上升了10倍;熊果酸对DU145细胞的生长有浓度和时间依赖性抑制效应,DU145细胞对AR阻断剂羟氟他胺缺乏反应,熊果酸作用同时再应用氟他胺比单纯熊果酸的作用更明显,对细胞抑制率明显上升.熊果酸作用后,LNCaP和DUl45细胞IL-6、HSF90表达均明显下降(P＜0.05),DU145细胞GR表达明显降低(P＜0.01),AR和PSA蛋白及AR mRNA出现再表达.结论 熊果酸能改善前列腺癌细胞对雄激素的反应性,使LNCaP细胞对雄激素的依赖性加强,并诱发了DU145细胞对雄激素的反应性,其部分机制是降低了GR、HSP90、IL-6的表达并促进AR再表达.     

薄荷醇抑制前列腺癌DU145细胞的增殖和迁移

目的探讨薄荷醇对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖和迁移能力的影响。方法通过RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法检测TRPM8和TRPA1的表达;MTT和划痕试验检测薄荷醇对DU145细胞的增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测TRPM8对DU145细胞周期和凋亡的影响。结果 RT-PCR、免疫组织化学和Western blot提示TRPM8在DU145细胞中高表达而TRPA1在DU145细胞中不表达;薄荷醇能诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,与未经薄荷醇处理的细胞相比,经100μmol/L薄荷醇处理的细胞培养24、48和72h后,G0/G1期细胞显著增加(49.12%±1.92%vs61.71%±2.70%、77.65%±1.63%、71.81%±2.46%,P<0.05,P<0.01),进而抑制细胞增殖(P<0.05),并抑制细胞迁移(P<0.05),流式细胞术检测显示薄荷醇并不引起细胞凋亡。结论 TRPM8可能成为前列腺癌治疗的一个新靶点,对于高表达TRPM8的雄激素非依赖性前列腺癌针对TRPM8通道的药物治疗可能比TRPM8基因治疗更为实用,因此,薄荷醇作为一个潜在的抗肿瘤药物也拥有很大的发展前景。     

单羧酸盐转运蛋白4对前列腺癌细胞糖代谢及凋亡的影响

目的:探讨单羧酸盐转运蛋白4(MCT4)对前列腺癌细胞凋亡及糖代谢的影响。方法:构建包含shRNA-MCT4的腺病毒载体,转染前列腺癌细胞株DU145及PC-3,不转染载体为空白对照组,阴性载体作为阴性对照组,检测各组细胞MCT4表达、乳酸分泌量、葡萄糖消耗量及细胞凋亡率,比较组间的结果差异。结果:转染shRNA-MCT4腺病毒后,MCT4在DU145及PC-3细胞中的表达均显著低于空白对照组(P分别为0. 008、0. 008)和阴性对照组(P分别为0. 007、0. 009); DU145及PC-3细胞的乳酸分泌较空白对照组(P分别为0. 009、0. 009)和阴性对照组亦明显下降(P分别为0. 009、0. 008),同时单细胞葡萄糖消耗量明显低于空白对照组(P分别为0. 007、0. 007)和阴性对照组(P分别为0. 009、0. 007); DU145细胞中空白对照组、阴性对照组、shRNA-MCT4组细胞凋亡率为(9. 81±1. 24)%、(10. 01±1. 46)%、(22. 11±2. 68)%,shRNA-MCT4组与另两组比较差异有统计学意义(P分别为0. 003、0. 003); PC-3细胞中3组凋亡率分别为(10. 21±1. 58)%、(10. 91±1. 63)%、(23. 38±3. 08)%,shRNA-MCT4组与另两组比较差异有统计学意义(P分别为0. 004、0. 004)。结论:抑制MCT4表达可干扰前列腺癌细胞的糖代谢,促进凋亡; MCT4基因可作为前列腺癌治疗的潜在靶点。     

原癌基因N-MYC下游调节基因-2对前列腺癌细胞株PC3的体外增殖抑制作用

目的 观察原癌基因N-MYC下游调节基因-2(NDRG2)在不同前列腺癌细胞株中的表达水平和对PC3细胞的体外增殖抑制作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测不同前列腺癌细胞株(PC3、LNCaP、DU145)的NDRG2表达水平,使用pAD_CMV腺病毒感染的方法 观察NDRG2对PC3细胞的作用,乳糖操纵子z(Lacz)为阳性对照,并设空白对照,噻唑蓝比色法(MTT法)绘制细胞生长曲线、流式细胞仪(FCM)检测感染48、72 h的细胞周期及凋亡.结果 3个前列腺癌细胞株的NDRG2表达水平相对较低,其中PC3细胞表达水平最低,细胞生长曲线显示NDRG2基因自感染36h开始能够抑制PC3细胞增殖(F≥12.43,P＜0.01),FCM检测发现,感染72 h时,包装有NDRG2基因腺病毒感染组同空白及阳性对照组比较,细胞G1期阻滞(3组分别为68.06%、50.33%和50.33%),细胞凋亡增加(3组分别为12.33%、3.21%和3.87%).结论 NDRG2基因可能参与了前列腺癌的发病,腺病毒介导的人NDRG2基因可明显抑制PC3细胞的增殖.     

靶向TRPV6的siRNA对前列腺癌LNCaP细胞抑制作用的体外研究

目的:运用RNA干扰(RNAi)技术阻断前列腺癌LNCaP细胞中瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚家族6(TRPV6)基因的表达,探讨TRPV6基因沉默对LNCaP细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:针对TR-PV6基因,构建2条小干扰RNA(siRNA)序列;在脂质体介导下转染前列腺癌LNCaP细胞,用RT-PCR测定TRPV6mRNA的表达;MTT法和流式细胞技术测定siRNA对LNCaP细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果:两条siRNA序列均能有效地阻断LNCaP细胞中TRPV6基因在mRNA水平上的表达(P<0.01),且mRNA表达随着转染时间的延长而减少,转染72h后TRPV6mRNA的表达减少至对照组的27%和23%;siRNA转染能显著抑制LNCaP细胞增殖,转染48h细胞增殖抑制率最高,分别为34.53%和29.32%,与转染24h和72h比较有统计学意义(P<0.05);转染48h后,siRNA转染组G0～G1期细胞增多,S期细胞数量明显减少,与空白对照组及阴性对照组相比有统计学差异(P<0.01);siRNA转染组细胞的凋亡率分别为14.45%和12.73%,显著高于空白对照组及阴性对照组3.78%和5.22%(P<0.05)。结论:针对TRPV6的siRNA在体外能有效地抑制LNCaP细胞TRPV6mRNA的转录,同时能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,使细胞周期出现G0/G1期阻滞,细胞凋亡率显著增加。     

SPAG9调控前列腺癌迁移侵袭能力的研究

目的探讨SPAG9对前列腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其分子机制。方法应用RNA干扰技术下调SPAG9在前列腺癌细胞中的表达,采用Western blot方法评估SPAG9基因干扰效果。采用Transwell实验比较SPAG9干扰前后前列腺癌细胞DU145、PC3的迁移与侵袭能力的改变。用CCK8细胞增殖实验分析SPAG9基因沉默对前列腺癌细胞DU145、PC3增殖能力的影响。用Western blot实验研究SPAG9基因沉默对前列腺癌细胞中MMP-2及TIMP-2蛋白表达的影响。结果特异性SPAG9基因的干扰RNA(siRNA)能够有效沉默DU145、PC3前列腺癌细胞株中SPAG9蛋白的表达。SPAG9敲低后的前列腺癌细胞株迁移与侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。siSPAG9组DU145和PC3细胞中MMP-2的蛋白表达水平比siCtrl组显著降低,两组比较差异有统计学意义(P0.05),而TIMP-2的表达量显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。SPAG9基因沉默后并不影响DU145及PC3细胞的增殖,组间差异无统计学意义(P0.05)。结论SPAG9基因通过激活MMP-2信号通路增强前列腺癌细胞的迁移与侵袭能力。