儿童慢性肉芽肿合并反复肺部感染1例报告

目的报道1例由CYBB基因突变所致常染色体隐性遗传慢性肉芽肿病患儿的临床表现及基因突变特点。方法回顾性分析空军军医大学第一附属医院儿科1例反复发热患儿入院的病史资料及基因检测情况。结果患儿入院后予以抗感染治疗效果不佳,且肺部CT存在多发炎症伴实变,腋窝可见肿大淋巴结;实验室检查免疫系列升高,考虑可能为免疫缺陷病,行基因检测证实由CYBB基因6号外显子上存在错义突变,进一步行家系基因分析证实该患儿为X-连锁慢性肉芽肿病;检索相关文献及基因组数据库,该患儿CYBB基因突变位点未被收录,行生物信息学预测分析可能为CYBB新的致病突变。结论对于无明显诱因出现反复肺部感染,可考虑免疫缺陷病,且CYBB基因分析有助于X-连锁慢性肉芽肿病患儿明确诊断,在检测携带者及产前诊断中起着重要作用,对于早期诊断有很好的指导作用,丰富了CYBB基因疾病谱。     

1例甲状腺激素抵抗综合征患者THRβ基因突变的研究

目的分析1例甲状腺激素抵抗综合征患者及家系的甲状腺激素受体β(thyroid hormone receptor-β,THRβ)基因的突变情况。方法收集患者及其父母和50名健康对照者的外周抗凝血标本,检测甲状腺功能并提取基因组DNA,PCR扩增THRβ基因的第1号~第10号外显子,PCR产物纯化后直接测序检测THRβ基因是否发生突变。结果患者THRβ基因的第4外显子107位核苷酸发生G转换为A的杂合错义突变(c.107 GA)。该突变致编码的THRβ第36位氨基酸由半胱氨酸变为酪氨酸(p.C36Y)。患者母亲具有相同的杂合点突变,患者父亲及50名健康对照者未发现THRβ基因突变。该突变为新发突变。结论新发现的THRβ基因第4外显子突变可能是该患者甲状腺激素抵抗综合征的致病原因。     

WASP基因新发突变致Wiskott-Aldrich综合征1例并文献复习

目的 分析Wiskott-Aldrich综合征(WAS) 临床特征、基因突变特点。方法 回顾分析1例WAS患儿的临床资料,提取患儿外周血基因组DNA,用PCR扩增WASP基因全部外显子并进行序列分析。结果 本例患儿因“便血”入院,伴血小板减少、血小板体积减小,临床评分1分;患儿WASP基因所在的EVHl区2号外显上存在错义突变:c.209G>A,p.G70E,导致WASP基因编码的蛋白70位氨基酸由甘氨酸突变为谷氨酸(p.Gly70Glu);其母亲为该变异携带者(杂合),父亲未见突变;该病例中的错义变异c.209G>A暂无文献报道。 结论 本例男性患儿符合WAS的X连锁血小板减少症临床特点,其发病是由1种新发现的WASP基因突变所致。对不明原因的出血,伴血小板减少、血小板体积(MPV)减小的患儿应及时行WASP基因序列分析做出诊断,对其亲属进行WASP基因检测也十分必要。     

两种错义突变p.Glu502Lys和p.Gly542Ser所致遗传性Ⅻ缺陷症家系的分析

目的对1个近亲结婚的遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行凝血指标检测和基因突变分析,探讨其分子发病机制。方法检测先证者及其家系成员血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、FⅫ活性(FⅫ:C)等凝血指标;对先证者FⅫ基因所有的外显子及其侧翼序列进行PCR扩增和DNA直接测序。针对先证者的突变位点,对该家系成员进行相应的基因突变检测。结果先证者和其妹妹APTT、FⅫ:C明显异常,分别为174.8 s、0.8%和109.5 s、1.9%。基因测序发现先证者和其妹妹FⅫ基因存在13号外显子c.1561G>A(p.Glu502Lys)及14号外显子c.1681 G>A(p.Gly542Ser)2种杂合错义突变。家系分析表明先证者父亲和儿子携带c.1561G>A杂合突变,母亲携带c.1681 G>A杂合突变。先证者及家系成员FⅫ基因第1外显子启动子区46位多态性均为46C>T型。结论 FⅫ基因p.Glu502Lys和p.Gly542Ser 2种杂合错义突变是导致先证者遗传性FⅫ缺陷症的分子发病机制。     

NPHP1基因复合杂合变异所致肾消耗病临床分析

目的探讨少年型肾消耗病(NPHP)的表型特征及其分子致病机制。 方法选择2020年3月和8月，分别在西安市儿童医院被确诊为NPHP的2例患儿[患儿1(13岁女童)、患儿2(10岁男童)]为研究对象。采用回顾性分析法，对这2例患儿的NPHP表型、实验室检查结果进行分析，并应用全外显子组测序(WES)及Sanger测序与多重连接探针扩增(MLPA)技术，进行NPHP致病突变基因位点分析和家系验证。本研究遵循的程序符合西安市儿童医院伦理委员会规定，并通过该伦理委员会审查及批准(审批文号：伦20210023)，并且征得受试儿家属知情同意。 结果①2例患儿临床表现均为多饮、多尿、生长发育迟缓伴肾功能异常。②2个非血亲家系的2例患儿中，检测到相同的NPHP1基因"纯合"突变(c.1756C>T)，并且只在各自系谱的母亲NPHP1基因中检测到其中一个点突变。③对2例患儿及其各自父亲的NPHP1基因进行拷贝数变异(CNV)分析结果显示，2例患儿在2号染色体2q13存在覆盖NPHP1基因1~20号外显子的杂合缺失，均遗传自各自系谱父亲的NPHP1基因突变。 结论NPHP患儿的临床表现不典型，基因检测有助于明确NPHP患儿的复杂突变，为临床对该病患儿的诊断及预后判断提供分子致病依据，并为家系提供遗传咨询。     

糖原累积病Ⅳ型1例及其家系的临床和分子遗传分析

目的 研究1例糖原累积病Ⅳ型(GSD Ⅳ)患者及其家系的基因突变情况。方法 患儿,女,1岁5个月,因轻度黄疸,肝脾肿大2月,生长迟缓1年就诊。采集该家系先证者及其父母,两个哥哥的外周血,采用二代测序方法查找先证者致病基因及突变位点,Sanger测序进行突变验证。结果 该家系先证者为GBE1基因c.1571G>A纯合错义突变,双亲及一个哥哥为GBE1基因c.1571G>A杂合错义突变,另一个哥哥基因检测未见该突变,确诊为GSD Ⅳ型,建议行肝移植治疗,因家属拒绝,患儿于生后22个月死亡。结论 首次在国内报道了GSD Ⅳ型的家系及其分子遗传情况以及GBE1基因c.1571G>A纯合突变,丰富了GSD Ⅳ型在中国人群的突变谱。     

靶向捕获-高通量测序法对一个先天性白内障家系致病基因的研究

目的:应用靶向高通量测序技术鉴定一个常染色体显性遗传先天性白内障家系的致病基因。方法:采用靶向捕获已知白内障致病基因并行高通量测序,筛选出候选基因,并对其进行家系内外的共分离检验。结果:该家系符合常染色体显性遗传规律,所有患者均为核性白内障。靶向基因测序发现,位于主要内源性蛋白MIP基因的一个杂合突变c.97CT(p.R33C)可能是该家系的致病突变,该变异造成MIP基因编码的水通道蛋白氨基酸序列错义改变,并引起蛋白质结构异常,从而影响其功能。通过一代测序验证并确定该杂合突变为该家系的致病突变。结论:MIP基因c.97CT(p.R33C)突变是造成该先天性白内障家系致病的分子机制。     

一例Gitelman综合征家系的临床特征及基因突变分析

目的 分析Gitelman综合征患者的临床特征及基因突变类型。方法 收集先证者及家系成员临床资料及实验室检查结果，采集其外周静脉血，经测序分析寻找相关突变位点，结合临床特征对其突变基因进行分析。结果 先证者的临床特征和实验室检查基本符合Gitelman综合征诊断。基因突变分析显示，先证者及其弟弟的SLC12A3基因第1号外显子存在c.248G>A(p.Arg83Gln)杂合错义的致病突变；先证者、先证者弟弟和先证者女儿的SLC12A3基因第7号内含子与第8号外显子之间存在c.965-1＿976delins-ACCGAAAATTTT缺失插入突变，该突变可导致NCCT蛋白在第7内含子和第8外显子之间的剪接位点异常，最终导致蛋白活性和功能受损。结论 Gitelman综合征患者起病隐匿，临床医师需详细问诊与完善实验室检验；SLC12A3基因c.248G>A(p.Arg83Gln)和c.965-1＿976delins-ACCG A A AATTTT突变是该Gitelman综合征家系的可能致病变异。     

迟发型丙酸血症的基因诊断及新突变位点的研究

目的探讨迟发型丙酸血症(PA)患儿的临床特点和基因突变特点。 方法选择2016年8月31日在南京医科大学附属妇产医院经剖宫产分娩娩出的1例男性迟发型PA患儿为研究对象。收集本例患儿的干血斑串联质谱(MS/MS)、尿滤纸片气相色谱质谱(GC/MS)及家系基因检测结果等临床资料,回顾性分析患儿的病史、串联质谱检测结果、遗传代谢病Panel高通量测序结果及随访结果。本研究遵循的程序符合南京市妇幼保健院人体试验委员会制定的伦理学标准,并得到该伦理委员会批准。 结果①本例PA患儿无特殊临床症状,干血斑MS/MS检测结果提示丙酰肉碱(C3)水平为2.79～7.03 μmol/L,GC/MS检测结果提示尿液3-羟基丙酸水平为0～129.48 μmol/L。②基于高通量测序技术的基因Panel结果显示,PCCA基因检测到2个致病突变(c.802C>T、c.827delG)。其中c.802C>T点突变导致氨基酸序列发生p.Arg268Cys突变,该突变位点遗传自患儿母亲;此外c.827delG为移码突变,该突变位点遗传自患儿父亲,该突变导致氨基酸序列发生p.Gly276ValfsX46突变,为未报道的新突变。③随访结果显示,患儿肝、肾功能正常。④本例患儿最终诊断为迟发型PA。 结论移码突变c.827delG是PCCA基因未报道的新突变,新生儿MS/MS、GC/MS检测结合Panel高通量测序技术,在迟发型PA的诊断中具有重要的应用价值。     

家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因新突变

目的 分析一家族性高胆固醇血症(FH)家系低密度脂蛋白受体(LDLR)基因突变类型,明确其突变位点,探讨LDLR基因突变类型与其临床表型的关系以及FH发病的分子病理学机制.方法 先证者及家系成员进行血脂测定,并行心电图、心脏和全身大血管彩色多普勒超声等检查,之后采用聚合酶链反应(PCR)联合变性高效液相色谱(DHPLG)技术结合扩增产物直接序列分析,检测LDLR基因启动子和全部18个外显子片段,结果与GenBank公布的该基因正常序列比对,找出突变,并检索FH突变数据库(www.ucl.ac.uk/fh).采用PCR结合限制性内切酶技术,检测载脂蛋白B100(ApoB100)基因Q3500R位点突变,以排除家族性ApoB100缺陷症(FDB).结果 先证者LDLR基因第13外显子存在c.1864 G→A错义突变,使得所表达的氨基酸由天冬氨酸→天冬酰胺(Asp622Asn);该外显子同时发现c.1959 C→T(Val 653Val)同义突变.在其母亲及外祖母LDLR基因中均发现上述两种突变,其父亲及外祖父也发现Val653Val的同义突变.克隆测序验证上述两种突变.结论 国内首次发现Asp622Asn突变;该突变可能是FH发病的分子病理学基础,并导致其严重的临床表型.PCR联合DHPLC技术可用于FH可疑人群的确诊.     

X-连锁慢性肉芽肿病的植入前遗传学诊断方法学研究

目的:采用多重置换扩增(MDA)建立一种可靠、准确的植入前遗传学诊断(PGD)方法,可应用于X-连锁慢性肉芽肿病的PGD。方法:采用16个位于CYBB基因两侧的短串联重复序列(STR)位点对X-连锁慢性肉芽肿病家系进行单体型分析,采用MDA对单细胞进行全基因组扩增,对其产物采用在家系分析中具有多态性的STR位点及特异性扩增CYBB基因进行分析,同时采用位点Amel进行性别诊断。结果:家系分析结果显示共有7个STR位点具有多态性。共进行了10个单淋巴细胞及10个单卵裂球的MDA,全部扩增成功。对致病基因CYBB外显子8的聚合酶链反应(PCR)扩增效率为100%,其中1个单淋巴细胞发生致病位点的等位基因脱扣(ADO),10个单卵裂球诊断结果均为215 bp,未检测出异常的204 bp条带,ADO率为10%(1/10);对于7个有多态性的STR位点和位点Amel,PCR扩增效率为96.9%(155/160),ADO率为11.3%(13/115)。结论:采用MDA结合致病基因特异性扩增及单体型分析在单细胞水平对X-连锁慢性肉芽肿病进行检测,两者相结合可避免污染、ADO等导致的误诊,可提高PGD的诊断效率,为进一步的临床应用奠定了基础。     

X-连锁严重联合免疫缺陷综合征家系IL2RG基因突变研究

目的 对3个临床拟诊X-连锁严重联合免疫缺陷综合征(X-SCID)患儿及父母进行基因突变分析,为遗传咨询及产前诊断提供依据。方法 应用高通量测序和直接测序的方法对患儿及家系成员进行白细胞介素-2受体基因(IL2RG)突变检测,分析IL2RG基因外显子区及与外显子交界的部分内含子区域DNA序列改变情况,寻找可能的致病突变位点,并对其中一个家系进行羊水细胞产前诊断。结果 家系1、家系2患儿IL2RG基因检测到c.202G>A(p.Glu68Lys)突变,家系3患儿IL2RG基因检测到c.676C>T(p.Arg226Cys)突变,患儿母亲均为相应突变携带者。家系3先证者母亲进行产前诊断胎儿为女性,携带与先证者相同的致病基因,夫妇双方选择继续妊娠。结论 通过IL2RG基因检测明确诊断3例X-SCID患儿,并成功对1个X-SCID家系进行产前诊断,指导家系3夫妇选择妊娠。     

Gp91phox NADPH oxidase modulates litter size by regulating mucin1 in the uterus of mice

Active oxygen derived from gp91phox is critical for gestation. However, no reports have evaluated the relationship between reactive oxygen species (ROS) and the number of births in a given pregnancy. In this study, we examined the influence of ROS produced by gp91phox activity on the number of births using C57BL/6j (control) and gp91phox-knockout (gp91phox^?/-) mice. The number of births in gp91phox^?/- mice was found to be lower than that in control mice. We observed sequential increases in gp91phox, ROS, nucleotide-binding domain, leucine-rich-containing family, pyrin domain-containing-3 (NLRP3), caspase-1, and interleukin-18 (IL-18), followed by increased expression of mucin1 (MUC1), in control mice. However, none of these markers were upregulated in gp91phox^?/- mice. In addition, in control mice administered IL-18 or MUC1 inhibitors, the number of births decreased to a number similar to that of gp91phox^?/- mice. These results suggest that ROS derived from gp91phox activity altered the inflammatory system and produced IL-18, which subsequently increased the expression of MUC1, thereby modulating fetal development.

Abbreviations: IL-1 β: interleukin-1β; IL-18: interleukin-18; NLRP3: nucleotide-binding domain, leucine-rich-containing family, pyrin domain-containing-3; IgA: immunoglobulin A; MUC1: mucin1     

Citrin 缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症患儿SLC25A13基因突变分析

目的 分析citrin 缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿SLC25A13基因突变特点。方法 抽取42例胆汁淤积性肝病患儿血液DNA,应用PCR 扩增和测序进行SLC25A13 基因突变分析。结果 7例患儿诊断为NICCD,其中2例患儿为纯合突变,均为c.851_854delGTAT(p.Met284fs)/c.851_854delGTAT(p.Met284fs);其它5 例患儿为复合杂合突变,分别为c.851_854delGTAT(p.Met284fs)/c.754G>A(p.Glu252Lys);g.IVS11+1G>A /g.IVS16ins3kb; c.851_854delGTAT(p.Met284fs)/g.IVS6+5G>A;c.G1064G>A(p.Arg355Gln)/c.G1157G>T (p.Gly386Val);c.1078C>T(p.Arg360Term)/c.IVS4+6A>G。结论 7例患儿的14个突变单链中,6个单链发生c.851_854delGTAT(p.Met284fs)突变,其在14个突变单链中的比率为42.8%(6/14),c.851_854delGTAT(p.Met284fs)为本组SLC25A13 基因主要突变(42.8%)类型,基因检测分析有助于NICCD 的诊断。     

高通量测序技术在先天性脑积水基因诊断中的应用

目的：探讨二代测序法（NGS）在先天性脑积水基因诊断中的应用。方法：收集一个脑积水家系，根据其临床特点和遗传规律，自主设计候选基因面板，用NGS对该家系进行基因突变检测。结果：先证者（Ⅲ5）检测出L1CAM基因6号外显子突变c.551G＞A（p.Arg184Gln），未检测到AP1S2基因突变，其母亲（Ⅱ2）和2位姨妈（Ⅱ4和Ⅱ8）均为此突变携带者。结论：对于先天性脑积水胎儿，根据疾病的临床表型、遗传规律筛选可疑基因，进而设计基因面板，使用高通量测序进行快速检测，是明确病因、提高遗传病诊断效率的主要手段，有可能为这些家庭提供产前诊断和有效遗传咨询。     

PCR-SSCP技术检测矽肺合并肺癌癌组织p53基因突变的研究

用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法对３６例矽肺患者的石蜡包埋的原发性肺癌组织ｐ５３基因第５、７、８外显子进行了检测，检出突变１５例。突变在第５、７、８外显子上都有发生，但以第８外显子上发现的阳性突变最多。对肿瘤类型和ｐ５３基因突变的关系进行了分析，发现矽肺病例肺腺癌ｐ５３基因阳性突变率最高，为５３．９％，高于普通型肺癌（３３．０％）。进一步对其中１例样本进行核苷酸序列直接测定，结果显示第５外显子非突变热点区的第１４４位密码子核苷酸由ＣＡＧ突变为ＡＡＧ，氨基酸由谷氨酰胺突变为赖氨酸，以上结果与非职业肺癌明显不同，提示ｐ５３基因突变在矽肺病例肺癌发生中起着重要作用，可能与矽尘作业环境中含有的某些化学致癌物有关。     

ABO变异型基因c.425 T>C突变致B抗原弱表达的鉴定分析

目的探讨1例ABO变异型基因c.425 T>C突变对B抗原弱表达的鉴定分析。方法采用凝集法鉴定ABO血型,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)、ABO亚型基因分型等技术进行基因鉴定和序列分析。结果先证者红细胞上含弱B抗原,血清中含抗-A抗体;血型基因型为B01,克隆测序等位基因为B305和O01;B305等位基因序列与标准序列相比发现c.425 T>C突变,引起多肽链P.Met 142Thr替换。结论ABO变异型基因c.425 T>C突变产生B305等位基因,引起B抗原弱表达。