贵阳市无偿献血人群RhD变异体的基因型分析

目的研究分析RhD抗原变异体的血清学表型和基因型。方法收集贵阳市159名无偿献血者RhD盐水法初筛阴性的标本,采用间接抗球蛋白试验(IAT)筛出部分D型和弱D型抗原,用乙醚吸收放散试验检出Del型抗原,并对Rh表型(C、c、E、e抗原)进行血清学检测。同时运用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)对RhD变异型D抗原外显子进行扩增和选择性测序以判定其确切型别。结果 159例RhD初筛阴性标本中检出RhD变异型53例(33.3%),包括Del1227GA、3GA 46例(28.9%)、部分D DVI typeШRHD-CE(3-6)-D 3例、弱D15 845 GA 3例、弱D24 1013TC 1例。Rh表型结果显示,ccee 65例、Ccee 79例、CCee 11例、ccEe和CcEe各2例。结论贵阳市无偿献血人群中RhD变异体的基因型呈现多态性,其中主要为Del型。     

49例初筛RhD阴性汉族个体中D基因多态性的分析

目的探讨鉴定RhD传统血清学方法和PCR-SSP基因检测方法在中国汉族个体中的应用价值。方法收集49例用传统血清学试验初筛确认的RhD阴性汉族人群标本,用PCR-SSP的方法对RhD阴性表型中个体基因进行分析,检测RhD阴性等位基因的构成。结果 49例标本中,RhD阴性(RHD外显子全缺失型)29例,占总数比例59.2%;部分D型[RHD-CE(2-9)-D型]10例,占总数比例20.4%;弱D型(弱D15型)2例,占总数比例4.1%;D~(el)型(RHD1227A纯合型)8例,占总数比例16.3%。49例标本中,经血清学吸收放散试验鉴定6例为D~(el)型,经基因检测确定8例为D~(el)(RHD1227A型);经血清学鉴定共12例标本为D变异型,经基因检测10例为部分D型[RHD-CE(2-9)-D2型],2例为弱D型(弱D15型)。结论 RHD基因分型比血清学方法更加精准,血清学方法联合基因分型技术对于保障临床输血安全意义深远。     

合肥地区献血者RhD阴性表型分布频率及分子机制浅析

目的了解安徽省合肥地区无偿献血者中Rh血型D抗原血清学阴性表型分布频率并对其分子机制进行初步分析。方法使用血清学常规方法筛查阴性献血者,对D抗原同时采用吸收放散试验和序列特异性引物PCR(PCR-SSP)2种方法对其血清学及分子背景进行分析,RhC、c、E、e抗原使用血清学方法进行检测。结果在244例RhD阴性标本中吸收放散阳性(Del型)且PCR扩增存在RhD基因全部10个外显子的共51例(21%),其血清学分别为Ccee 37例、CCee 6例、ccEe 5例、CcEe3例;吸收放散阴性标本共193例,其中存在RhD基因全部外显子1例、存在部分外显子22例,均为Ccee表型,其余则缺失全部外显子。结论合肥地区RhD血清学阴性献血者中存在相当比例的人群其携带弱表达D抗原或存在RhD基因,RhD阴性的分子机制较为复杂。     

儿童患者RhD弱阳性变异体的初步分析

目的对RhD弱阳性儿童患者进行RhD变异体检测分析。方法用微柱凝胶血型鉴定卡及盐水试管法进行RhD血型初筛;微柱凝胶抗球法进行弱D确认试验;确认试验RhD弱阳性者进行PCR-SSP及RHD外显子测序分析。结果 RhD初筛阴性46例(0.38%),确认实验检出弱阳性4例(8.7%);4例RhD弱阳性标本经基因检测,1例1227A杂合子(Del型),1例DⅢa型,2例弱D15型。结论 Del型也可能被血清学方法检出;RhD弱阳性患者中抗原数量减少者较多;针对RhD阳性红细胞是否产生需进一步研究。     

广州地区人群中RHD* 960A突变型等位基因的鉴定及血型血清学与分子生物学特征分析

目的分析广州地区人群中RHD*960A突变型等位基因个体的血型血清学与分子生物学特征。方法收集RhD变异型标本,采用2种不同的单克隆抗-D试剂鉴定RhD血型,抗球蛋白凝胶卡法进行直接抗球蛋白试验,并用RhD抗原表位检测试剂盒(D-Screen)检测RhD抗原表位;此外,采用Rh血型分型卡检测Rh CE抗原;采用多重连接酶依赖的探针扩增(MLPA)方法检测RHD及RHCE基因型;对MLPA方法无法给出检测结论的标本,进行RHD基因全部10个外显子的PCR扩增及产物直接测序。结果发现3例RhD变异型标本,直抗阴性,初步血清学结果显示RhD抗原弱阳性表达,RhD抗原表位检测结果显示其红细胞与RhD抗原epD6.6、epD8.2和epD9.1表位特异性单克隆抗体无凝集反应,与其余表位抗体呈弱阳性凝集反应;RHCE抗原分型1例为CCee,其余2例为Ccee;RHD基因的MLPA基因分型显示其基因型为正常的RHD/d(即未鉴定出其携带的突变型RHD等位基因),后续RHD基因外显子直接测序发现其第7外显子携带c.960GA(p.Leu302Leu)同义突变,RHCE基因MLPA基因分型结果与血清学表型一致。结论首次在广州地区人群中发现了RHD*960A突变型等位基因个体,并进行血清学抗原表位和基因型检测,其血清学表现为部分D。     

1252T>G致新的弱D型血清学和分子生物学研究

目的分析研究1例新的弱D型个体的血清学和分子生物学特点。方法采用盐水法鉴定Rh D/C/c/E/e抗原,并采用间接抗球蛋白法(IAT)进一步鉴定Rh D抗原,采用盐水法和抗人球蛋白法进行抗体筛查;采用商用基因检测试剂盒对标本进行CDE基因检测;对其RHD基因10个外显子序列进行测序分析比对。结果血清学检测显示该标本为D变异型,RHCE血型为C+c+E-e+,抗体筛查为阴性。CDE基因试剂盒检测为DCcee,RHD外显子序列测序分析发现第10外显子存在1 252 TG碱基突变,其余外显子序列则与正常RHD基因一致。结论该标本存在RHD1 252 TG碱基突变,为新的弱D型。     

多重连接探针扩增技术在2例罕见Rh部分D表型等位基因检测中的应用

目的 探讨多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术在2例罕见Rh部分D表型等位基因检测中的应用.方法 选择2012年4月和9月外院送广州血液中心进行RhD血型鉴定的2例受检者全血样本作为研究对象.对其进行常规血清学方法鉴定RhD血型后,提取全血标本的DNA.采用MLPA技术对上述2例受检者的RHD和RHCE基因进行检测,分析RHD和RHCE基因的外显子拷贝数、点突变、基因缺失及杂交融合情况,并将MLPA技术检测结果与常规血清学及序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)检测结果进行对比.结果 受检者全血标本MLPA结果显示其RHD、RHC、RHc基因拷贝数均为1.0,RHE基因拷贝数为0,RHe基因拷贝数为3.0,D03-380T、D03-455A、D04-602C、D05-667T、D04-514A、D05 787G基因外显子拷贝数均为0,即RHD基因外显子3～5完全缺失.PCR SSP结果亦显示受检者RHD基因外显子3～5缺失,检出C、c、e基因;血清学结果显示受检者红细胞与2种单克隆抗D在试管中均有2+的凝集,Rh血型其他抗原分型为C+ c+E e+.2例受检者全血标本MLPA技术,常规血清学及PCR-SSP检测结果基本一致.结论 2例受检者属中国人群中首次发现的Rh部分DⅥtype 4型血型;MLPA技术作为检测基因点突变、基因缺失、等位基因杂交融合和基因拷贝数的新技术,可用于Rh血型D抗原变异型的等位基因检测.     

番禺地区RHD变异体基因分型研究

目的研究分析番禺地区RHD变异体基因分型特征。方法采用微量板法对2010年11月～2011年8月到本站参加献血的26 172名次献血者进行RhD阴性筛查;采用抗球蛋白法对初筛RhD阴性的标本进行确认,采用吸收放散试验对经抗球蛋白法确认为RhD阴性的标本进行Del表型筛选;采用RH基因变异体基因分型检测试剂盒(PCR-SSP法)对献血者模板DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据电泳图谱判断RHD基因分型。对血清学与基因分型结果不符的标本进行测序分析。结果初筛检出60名RhD阴性,经抗球蛋白法确认59例为RhD阴性,阴性频率为0.23%;吸收放散试验检出10例Del表型。60例初筛阴性的基因分型检测发现40例RHDEXON1～10全缺失基因型,发生频率约为67.8%;10例RHD 1227A DEL基因型,发生频率约为16.9%;7例部分D,发生频率约为11.9%;1例RHD弱D15基因型,发生频率约为1.2%;2例RHD基因分型阳性需作进一步碱基测序分析。结论本地区血清学RhD阴性献血者中,存在RHD 1227A DEL、RHD-CE(2-9)-D,RHD-CE(5)-D、RHD-CE(6-9)-D和RHD弱D15等基因型,血清学结合基因分型能更准确鉴定RhD血型。     

RhCE抗原基因分型和表型不一致与等位基因变异的相关性研究

目的 探讨变异RhCE抗原的分子背景及RHCE基因的遗传学特征与基因多态性.方法 采用单克隆抗-C、-c、-E和-e试剂检测10373例RhD阳性和635例RhD阴性献血者的RhCE表型;选择942例标本PCR-SSP技术做RHCE基因分型,对基因分型与血清学分型不一致标本采用PCR-SSP检测22个主要RHCE变异等位基因,部分RHCE等位基因采用测序技术鉴定.结果 共有54例标本(占94.27％)基因分型结果与血清学表型结果不一致,经PCR-SSP检测出22种与弱表达抗原相关的RHCE等位基因变异体,经血清学复检有36例标本RhCE抗原存在弱反应或极弱反应.结论 在血清学检测时表达弱反应的RhCcEe抗原标本中检出多种RHCE等位基因类型,变异的等位基因可以影响基因分型预测血型抗原的准确性:RhCE表型和基因型不一致的原因可能由变异的等位基因或未发现的等位基因引起.     

番禺地区RhD阴性献血者部分D频率调查发简

目的 分析番禺地区RhD阴性献血者部分D（partial D）基因分型特征.方法 采用微量板法对献血者进行RhD阴性筛查;采用抗人球蛋白法对初筛RhD阴性的样本进行确认;采用PCR-SSP法（RH基因变异体分型检测试剂盒）对献血者基因组DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据电泳图谱判断部分D基因分型.结果 初筛检出60例RhD阴性,经抗人球蛋白法确认59例为RhD阴性,阴性频率约为0.23％.59例RhD血清学筛选阴性的基因分型检测发现2例部分D,血清学筛选RhD阴性中出现部分D的频率约为3.4％.结论 本地区血清学RhD阴性献血者中,存在RHD-CE （5）-D、RHD-CE（6-9）-D等位基因型,采用PCR-SSP法对RhD阴性表型献血者进行基因分型,可以准确鉴定RHD基因型.     

154例RhD阴性表型个体的D基因多态性分析

目的 研究RhD阴性个体基因多态性.方法 采用抗人球蛋白试验(IAT)确认RhD阴性个体;对RhD阴性个体再运用PCR-SSP方法分析其基因分布情况.结果 154例IAT确定为RhD阴性的个体中,86例所检测的外显子完全缺全(55.84％)、36例完整(23.38％)、32例部分缺失(20.78％);其检出DelRhD1227A、弱D15型、RHD-CE(2～9)-D、DVa(Has)、DVIⅢ等多种RhD阴性等位基因.结论 江西地区血清学RhD阴性人群中存在RHD基因且呈现多态性,提示可联合应用血清学和基因分型两种方法来检测D抗原.     

临床稀有血型孕妇RHD基因分型研究

目的研究广州番禺城区血清学检测RhD(–)孕妇的RHD基因分型及多态性,补充数据库,为番禺地区RhD(–)孕妇的产前血清学筛查及预防新生儿溶血病发生给予更为有效的指导。方法收集2015年1月～2017年12月广州市番禺区市桥医院和广州市番禺区中心血站孕妇初筛RhD(–)标本18例,采用间接抗人球蛋白法进行RhD(–)确认实验,对确认RhD(–)的标本进行吸收放散试验确认DeL表型;采用PCR-SSP技术对所有标本进行RHD基因分型检测。结果血清学检测结果:18例初筛阴性标本均确定为RhD(–),吸收放散试验中确定4例DeL表现型(占22.2%)。基因分型检测结果:18例标本中,检出10例发生1～10外显子全缺失(占55.6%),4例RHD1227ADEL型(占22.2%),3例部分D为RHD-CE(2-9)-D型(占16.7%),1例RHD阳性。结论本地区RHD基因变异型以RHD1227A DEL为主。建议有条件的医院可对临床RhD(–)孕妇进行RHD基因型检测结合抗-D血清抗体滴度检测,指导RhD(–)孕妇预防性注射Rh免疫球蛋白,预防新生儿溶血病的发生。     

血型血清学ABO亚型95例的分子机制研究

目的研究95例中国人群血型血清学ABO亚型个体的分子机制。方法 2013年11月—2017年10月采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行检测;采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)及第6、7外显子基因测序方法进行基因分型,其中部分标本采用了第1—7外显子的测序。结果对血型血清学方法确认的95例(73例先证者,22例家系成员)ABO亚型标本。经PCR-SSP和基因测序检测,73例ABO亚型先证者中检出A亚型基因的个体13例(17.8%),检出B亚型基因的个体17例(23.3%),检出B(A)型基因的个体22例(30.1%),共52例(71.2%,52/73);22例家系成员中检出ABO亚型基因者18例。先证者中未检出ABO亚型基因者21例(28.8%,21/73),且21例中5例(6.8%,5/73)检出O基因但表达弱A或弱B抗原;22例家系成员中4例未检出ABO亚型基因,共25例(25/95)。结论 ABO亚型的基因型与表型不完全符合,且同1个血型血清学表型对应不同的基因型,同1个基因型又表现为不同的血型血清学结果。     

中国人群中发现的主要弱D型——弱D15个体的分子背景研究

为了探讨中国汉族人群弱D15型个体的Rh血型系统血型血清学表型及分子背景，采用常规血型血清学技术检测RhD抗原弱阳性个体RhD、C、c、E、e抗原表型；采用序列特异性引物-聚合酶链反应（SSP—PCR）方法同时检测RHD基因和RHCE基因；标本测序分析RHD基因全长编码区序列；同时通过特异性PCR技术测定RHD合子型或RHD基因数目。结果表明，血型血清学试验证实为D抗原弱阳性表型的人群中，有18例为弱D15型（占D抗原弱阳性表型56％），RHD基因全长编码区序列分析发现其第6外显子有一处碱基突变：845G〉A，编码区序列其它部分与正常RHD序列相同；检测Rh小因子有3种表型CcEe（2例）、CcEe（2例）、ccEe（14例），分别占弱D15型的11％、11％、78％，血清学检测结果与分子生物学检测结果一致。RHD杂合性试验鉴定显示仅表型为CcEe的2例标本为纯合型RHD^＋／RHD^＋，提示基因型为DCe／DcE；其余为杂合型RHD^＋／RHD^-，提示基因型分别是DCe／dce和DcE／dce。结论：弱D15型是中国人群中最主要的弱D型，其中大部分为杂合型。     

D—变异体的分析——附1例报告

目的分析1例D—变异体的分子背景。方法分别采用血清学方法和序列特异性引物PCR(PCR-SSP)方法检测标本RhD、C、c、E、e抗原和RHCE基因,同时序列分析RHAG、RHCE基因全长编码区序列,最后进行RHD合子型分析和家系分析。结果先证者血清学测定Rh表型为D—,PCR-SSP结果为DC-;RHAG第1-10外显子测序显示,编码区与Gen Bank NC-000006标准序列一致,未观察到形成Oldeide和Duclos-Like抗原的碱基变异,亦未见形成高频抗原Duclos(RHAG1)的RHAG316CG突变,所有序列均未见杂合峰;RHCE基因第1-10外显子扩增显示,缺失第3-5外显子,其余外显子序列与标准序列一致,分析第1、2外显子序列为RHC,提示该等位基因为RHCE(e)-D(3-5)-CE(e);家系分析其父母、弟弟的RHAG序列与先证者完全一致,父母Rh血清学表型分别为DCCee和Dcc EE,其父亲的PCR-SSP和测序结果一致,其母亲PCR-SSP结果 DCc EE与测序结果一致,而与血清学结果不符(Dcc EE),其弟血清学表型、PCR-SSP和测序结果,均与先证者一致,结合RHD合子型分析结果,该家系父母分别为DCe/DC-和Dc E/DC-基因型,先证者和弟弟为DC-/DC-。结论 RHCE-D(3-5)-CE等位基因形成D—表型并稳定遗传。     

湖北汉族RhD阴性个体Rh表型及RHD基因多态性研究

目的研究湖北人群Rh阴性个体RHD基因多态性的分布及血清学表型与RH基因型之间的关系。方法应用PCR-SSP技术检测湖北地区172名Rh阴性献血者的RHD基因外显子和RHCE基因。结果172例Rh阴性个体中,ccee表型98例、Ccee 53例、CCee 13例、CcEe 6例、ccEe 2例;172例Rh阴性个体中103例RHD基因外显子完全缺失、42例完整、27例为部分缺失者。吸收放散试验检测出39例RhD放散型。结论湖北汉族Rh阴性人群的RHD基因结构呈现多态性,携带D基因的吸收放散试验阴性个体中具有C抗原者比例较高,但亦有cc表型存在。     

中国人中发现2种新的弱D型

目的 鉴定并确认在中国人中发现的2种新的弱D型.方法 对2份从上海市血液中心无偿献血者血样中筛查出的RhD抗原减弱的标本,采用常规Rh分型试剂对其作血清学分型,使用D-screen试剂盒分析其RhD抗原表位;对RHD基因全部外显子测序并分析杂合性,使用PCR-SSP方法对新的弱D型作基因分型.结果 在2名弱D型献血者中分别发现2种新RHD等位基因:RHD(R10P)和RHD(A414V);D抗原表位分析结果与弱D表型相一致.建立了测定新等位基因的PCR-SSP检测方法.结论 在中国人群中发现了2种新的弱D型,初步阐明了这2种弱D表型的分子机制.     

血清学Rh（D）阴性个体分子机制的研究

目的探讨江苏地区无偿献血者中血清学Rh（D）阴性表型汉族人群的分子背景。方法 37份常规血清学试验检测出的Rh（D）阴性江苏汉族人,采用PCR-SSP检测RHCE基因和RH（D）基因;并对存在RH（D）基因的个体进行10个外显子及邻近内含子的测序。结果 37例血清学Rh（D）阴性献血者中,分子生物学方法确认26例无RH（D）基因。存在RH（D）基因的11例中,3例为RH（D）和RHCE基因发生互换,6例为RH D（K409k）（第9外显子1 227G〉A）,1例为弱D15型（第6外显子845G〉A）,1例为RH（D）＊711delC（第5外显子711位碱基缺失）。结论一定比例的血清学阴性Rh（D）人群并非真正的Rh（D）阴性,即表达弱D抗原。提示对血清学Rh（D）阴性个体进行分子生物学分析,有利于安全输血。     

广东省中山地区临床初检RhD阴性人群中D变异体分布及特征分析

目的　研究分析中山地区初检 RhD阴性人群中 D变异体血清学和基因分型特征。方法　研究共收集 2017年 12月～ 2019年 2月中山市人民医院门诊及住院病人的血液样本 24 286例,采用微柱凝胶卡法对其中 RhD阴性样本进行初筛;再经间接抗人球蛋白试验（ indirect antiglobulin test, IAT）确认弱 D或部分 D变异型;然后用吸收放散试验对剩余样本进行 Del表型筛选。同时,通过聚合酶链反应 -序列特异性引物（ polymerase chain reaction-sequence speci.c primmer, PCR-SSP）技术对初筛 RhD阴性的样本进行 RHD等位基因分型以及血清学方法对初筛阴性样本进行 C, c, E和 e抗原表型的检测。结果　在 24 286例血液样本中初筛共检出 102例阴性样本,中山地区初检阴性比例约为 0.42%。经 IAT确认试验共鉴定出 7例弱 D或部分 D血液样本（ 6.86%）,且基因型表现多样,但未见亚洲地区常见的弱 D15和弱 D12表型。接下来的放散试验检测出 25例 Del型,通过 PCR-SSP基因分型技术又检出 3例漏检的 Del型,Del型在初检阴性样本中占比 27.45%,PCR-SSP结果显示该研究中所有 Del型血液样本等位基因均为 RHD1227A。该研究纳入的 102例初检阴性血液样本的 RhCcEe表型分布符合 Hardy-Weinberg遗传平衡 (χ2=2.625,P>0.05),表示相应等位基因所占比例在遗传中保持不变。在 Del型变异体中,除 Ccee和 CCee表型外,未见其他表型。结论　中山地区人群 RhD变异体有丰富的类型和不同分子机制,其中 Del型占比较高,血清学与基因分型结合可提高 D变异体的鉴定能力,防止漏检情况的发生。     

湖北荆门地区RhD阴性无偿献血者表型分布调查

目的 了解湖北荆门地区无偿献血者中RhD阴性表型分布情况.方法 常规血清学方法初筛RhD阴性标本,用间接抗球蛋白试验确认弱D,用吸收放散试验检测Del,RhC,c,E和e抗原使用血清学方法进行检测.结果 38 921名无偿献血者中初筛为RhD阴性124例;用抗人球蛋白试验确认弱D 11例;除11例弱D和10例假阴性后,103例确认为Rh阴性标本中共检出Del型25例;103例确认为Rh阴性的标本,血清学表型分布为dccee 63例,dCcee 28例,dCCee 6例,dccEe 4例,dccEE 1例,dCcEe 1例.结论 湖北荆门地区RhD阴性献血者中存在相当比例人群携带弱D表达抗原,为确保临床用血的安全,应加强弱D或Del型的确认.