淋巴细胞活化基因3促进大鼠颈动脉球囊损伤后再内皮化的研究

目的:探讨淋巴细胞活化基因3(LAG-3)促进大鼠颈动脉球囊损伤后再内皮化的研究。方法:构建大鼠颈动脉球囊损伤模型,造模成功后随机分为对照组(注射相同体积的PBS)、VEGF组(腹腔注射VEGF)和LAG-3组(腹腔注射LAG-3)。流式细胞术检测三组外周血CD34+VEGFR-2+内皮祖细胞(EPC)比例;HE染色和CD31免疫组化检测三组内皮化情况;分离培养大鼠外周血的EPC;ELISA检测EPC培养上清中VEGF和SDF-1的浓度;流式细胞术检测EPC分化为CD31+内皮细胞比例。结果:LAG-3组EPC比例显著高于对照组[(0.1417±0.02358)%vs.(0.06333±0.009898)%,t=3.063,P=0.0120],差异有统计学意义。HE染色和免疫组化结果显示LAG-3组50%的血管被内皮细胞覆盖。LAG-3组VEGF、SDF-1水平显著高于对照组[(44.67±6.037)vs.(18.17±3.936)μg/L、(5.100±0.8896)vs(0.6167±0.1493)μg/L,t=3.677,P=0.0043;t=4.970,P=0.0006],差异均具有显著的统计学意义。LAG-3组内皮细胞比例显著高于对照组[(69.08±6.393)vs.(43.03±4.326)%,t=3.375,P=0.0071],差异有统计学意义。结论:LAG-3通过促进EPC的动员、旁分泌和分化,诱导球囊损伤颈动脉的快速内皮化。     

转化生长因子α对人内皮祖细胞分化功能的影响

目的研究转化生长因子α(TGF-α)对人内皮祖细胞(EPC)分化功能的影响并初步揭示其作用机制。方法从健康人外周血中分离EPC,分别用含0、1、10μg/L浓度的TGF-α完全培养基诱导培养。观察各组中EPC分化的形态变化,并利用流式细胞术检测各组EPC培养分化过程中CD34+/CD133+和CD31+/v WF+阳性细胞率,Real-time PCR方法测定各组中EPC分化的内皮细胞特异性基因内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和Flk-1/KDR表达差异,并通过测定各组中一氧化氮(NO)含量变化比较EPC分化内皮细胞的功能,Western Blot检测各组EPC分化中TGF-α受体EGFR和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果用TGF-α诱导培养分离的人EPC,细胞形态能够更快地由干细胞球形分化成梭形;流式细胞仪检测发现与空白对照组相比,1、10μg/L TGF-α组中3天时EPC标记CD34+/CD133+阳性率和7天时分化的内皮细胞标记CD31+/v WF+阳性率均显著增高,差异有统计学意义(P0.05);Real-time PCR检测各TGF-α组EPC分化的内皮细胞特异性基因e NOS和Flk-1/KDR表达量也显著上升(P0.05);1、10μg/L TGF-α诱导培养组中EPC分化的内皮细胞分泌NO含量显著升高(P0.05);1、10μg/L TGF-α诱导培养能够显著促进EPC分化过程中EGFR和VEGF的表达(P0.05)。结论 TGF-α能够显著促进人EPC的增殖分化及分化内皮细胞的功能,并通过与受体EGFR结合刺激VEGF表达发挥作用。     

妊娠对类风湿关节炎患者内皮祖细胞的影响及机制研究

目的:探讨妊娠对RA患者内皮祖细胞(EPC)的影响及机制。方法:将2016年1月至2018年6月来本院就诊的RA初治患者纳入本项研究,按照有无妊娠,将患者分为单纯RA组和RA合并妊娠组,均为女性患者,每组各30例;免疫组织化学染色检测滑膜组织内淋巴细胞共同抗原(LCA)+淋巴细胞和CD68+巨噬细胞的数目;流式细胞术检测EPC和内皮细胞的比例;ELISA检测EPC上清中血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子(SDF)-1、IL-6和IL-10的浓度。2组之间比较采用t检验,多组间比较用单因素方差分析。结果:免疫组织化学结果显示RA合并妊娠组关节滑膜内CD68+巨噬细胞和LCA+淋巴细胞的数目低于单纯RA组;ELISA的结果显示单纯RA组外周血可溶性人HLA-G的浓度为(8.9±1.7)pg/ml,RA合并妊娠组的浓度为(396.7±89.6)pg/ml,2组差异有统计学意义(t=4.329,P<0.01);流式细胞学检测结果显示单纯RA组患者淋巴细胞中EPC的比例为(0.13±0.03)%,RA合并妊娠组的比例为(0.76±0.09)%,2组差异有统计学意义(t=6.671,P<0.01);相关性分析结果显示2组患者外周血中EPC比例与可溶性HLA-G浓度呈正相关(r=0.8861,P<0.01);体外的实验结果显示HLA-G能够促进单纯RA患者EPC旁分泌和分化功能的恢复。结论:妊娠能够提高RA患者体内EPC的数量和生物学功能,HLA-G在这个过程中可能发挥着重要作用。     

PI3K/AKT信号转导通路在肝癌细胞生长和黏附中的作用

目的:探讨PI3K/AKT(磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B)信号转导通路在人肝癌细胞株SMMC-7221生长和黏附中的作用机制.方法:应用LY294002作用于SMMC-7221细胞,并设对照组和实验组(LY294002: 5、10、20、40 μmol/L),MTT法检测LY294002作用24、48、72、96 h后,对SMMC-7221细胞增殖的影响;采用肿瘤细胞-基质黏附实验检测对照组和干预组SMMC-7221黏附能力的变化;流式细胞仪检测肝癌细胞黏附分子CD44s表达情况;细胞免疫化学S-P法检测SMMC-7221细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和CD44V6蛋白表达.结果: LY294002对SMMC-7221细胞的增殖有抑制作用,呈剂量和时间依赖性;5、10 mol/L的LY294002作用于肝癌细胞后与对照组相比CD44s,VEGF,CD44V6蛋白表达下降(CD44s: 42.84%±6.35%,20.21%±4.5% vs 89.23%±3.91%,P<0.01;VEGF: 103.11±18.60,68.99±15.99 vs 137.84±22.50,P<0.01;CD44V6: 47.33±6.15,33.09±5.23 vs 61.36±7.39,P<0.01);5、10 μmol/L的LY294002干预后与对照组相比SMMC-7221黏附能力下降(0.498±0.024,0.407±0.029 vs 0.616±0.080,P<0.01).结论:阻断PI3K/AKT信号传导通路,肝癌细胞生长受到抑制、黏附能力下降.LY294002抑制肝癌细胞黏附力的作用机制与通过降低CD44V6、CD44s和VEGF水平有关.     

肺癌患者血清CEA、CA242、VEGF联合检测的临床意义

目的研究血清CEA、CA242、VEGF的检测在肺癌诊断中的临床意义。方法采用ELISA方法测定96例肺癌患者血清CEA、CA242、VEGF的水平。结果CEA、CA242和VEGF的联合检测的阳性率达到71.9%,明显高于各单项标记物的检测阳性率（分别为42.7%、46.9%、40.6%）,Ⅲ＋Ⅳ期患者CEA、CA242、VEGF阳性率明显高于Ⅰ＋Ⅱ期患者（分别为52.2%vs18.5%、53.6%vs29.6%、47.8%vs22.2%,P〈0.05）,其值大小明显高于Ⅰ＋Ⅱ期患者（分别为33.32±55.91vs5.52±4.96ng/ml、45.82±86.27vs14.6±39.78u/ml、293.15±135.75vs47.91±28.64pg/ml,P〈0.01）。结论CEA、CA242、VEGF可用于肺癌的诊断、预后判断,联合检测可提高诊断率。     

半枝莲黄酮类化合物对体外肿瘤血管生成的影响

目的:探讨中药半枝莲黄酮类化合物A06对体外肿瘤血管生成的影响.方法:分别采用小管形成实验、Transwell小室、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、硝酸还原酶法检测半枝莲黄酮类化合物A06对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成、迁移及人宫颈癌Hela细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)表达的影响.结果:与对照组相比,半枝莲黄酮类化合物A06(50和100 mg/L)都能有效抑制HUVEC细胞的迁移(37.7%±10.7%,13.7%±6.0%vs 68.0%±8.2%,均P<0.01),减少小管样结构形成(9.7%±4.5%,1.8%±1.2%vs 30.2%±5.4%,均P<0.05),以及降低24 h后Hela细胞VEGF和NO的表达(VEGF:135.6±14.6 ng/L,108.3±7.7 ng/L vs 231.1±6.4 ng/L,均P<0.01;NO:42.3±2.3μmol/L,25.9±5.2μmol/L vs 70.1±8.1μmol/L,均P<0.01).结论:半枝莲黄酮类化合物A06有抑制体外肿瘤血管生成的作用,可能与抑制肿瘤细胞血管生成相关因子的表达,抑制内皮细胞迁移、形成管样结构有关.     

通心络对同型半胱氨酸诱导大鼠心肌微血管内皮细胞损伤的干预作用及氧化应激机制研究

目的:探讨通心络对同型半胱氨酸诱导大鼠心肌微血管内皮细胞损伤的干预作用及氧化应激机制。方法:采用植块法原代培养大鼠心肌微血管内皮细胞,倒置显微镜观察细胞形态并通过CD31免疫荧光法对培养的大鼠心肌微血管内皮细胞进行辨别、鉴定。用同型半胱氨酸(Hcy)建立细胞损伤模型,实验分为对照组、同型半胱氨酸组、通心络低浓度组、通心络中浓度组、通心络高浓度组。分别检测各组细胞的存活率、细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量、细胞内活性氧(ROS)水平、内皮素-1(ET-1)和内皮型一氧化氮合酶(e NOS)表达水平的变化。结果:与对照组相比,同型半胱氨酸组细胞存活率降低[(74.61±2.88)%vs(100.00±2.07)%],细胞上清液中MDA含量升高[(4.10±0.18)nmol/ml vs(1.92±0.10)nmol/ml],SOD活性降低[(7.55±0.71)U/ml vs(20.77±0.68)U/ml],细胞内ROS水平升高[(38.17±10.28)%vs(19.83±2.97)%],ET-1 m RNA表达上调,e NOS蛋白表达下调;与同型半胱氨酸组相比,通心络各剂量组均能不同程度的改善上述指标变化。结论:通心络能够改善同型半胱氨酸诱导的大鼠心肌微血管内皮细胞的功能损伤,并通过减轻氧化应激损伤发挥细胞保护作用。     

血清血管内皮生长因子及白介素8在2型糖尿病视网膜病变患者中的水平及其临床意义

目的探讨白介素-8(IL-8)能否作为T2DM视网膜病抗血管内皮生长因子(VEGF)治疗的联合治疗靶点。方法 T2DM患者112例,按有无并发症分为单纯T2DM组和糖尿病视网膜病变(DR)组。同时收集健康体检者36名为健康对照组(NC组)。放射免疫法(RIA)测定受试者血清VEGF和IL-8含量。结果 T2DM组与DR组VEGF含量较NC组分别升高1.73倍[(5.26±3.54)vs(9.10±4.85)ng/ml,P0.05)和4.53倍[(5.26±3.54)vs(23.86±16.16)ng/ml,P0.05)],DR组较T2DM组升高2.62倍[(9.10±4.85)vs(23.86±16.16)ng/ml,P0.05)];T2DM组与DR组IL-8含量与NC组比较分别升高7.42倍[(25.69±2.47)vs(190.50±27.17)ng/ml,P0.05)]和69.72倍[(25.69±2.47)vs(1791.00±297.30)ng/ml,P0.05)],DR组较T2DM组升高9.4倍[(190.50±27.17)vs(1791.00±297.30)ng/ml,P0.05)]。VEGF曲线下面积(AUC)为0.89,95%CI为0.84~0.94(P0.001);IL-8的AUC为0.82,95%CI为0.75~0.89(P0.001)。在NC组中,血清IL-8与VEGF含量无相关性(r=0.1232,P0.05),但在T2DM组和DR组中,IL-8与VEGF呈正相关(r=0.6128、0.8671,P0.05)。结论 IL-8可作为DR抗VEGF治疗的联合治疗靶点和危险评估因素。     

细胞外信号调节激酶1/2通路抑制剂PD98059对体外培养γδT细胞增殖和杀伤功能的影响

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路抑制剂PD98059对体外培养人γδT细胞增殖和杀伤功能的影响。方法从健康人外周血中分离单个核细胞,加入到含有唑来膦酸和白细胞介素2的RPMI 1640完全培养基中诱导培养获得γδT细胞。用ERK1/2特异性抑制剂PD98059阻断γδT细胞ERK1/2信号通路后,用细胞计数仪测定γδT细胞增殖和细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定杀伤能力;采用流式细胞术检测γδT细胞颗粒酶B和穿孔素的表达。计量资料组间比较采用t检验。结果培养10 d后的γδT细胞纯度达到(87.94±2.36)%。PD98059作用后的γδT细胞数低于对照组[(6.74±0.36)×105/ml vs(9.42±0.31)×105/ml],而PD98059作用后γδT细胞颗粒酶B阳性表达率[(48.89±1.31)%vs(41.58±1.58)%]、穿孔素阳性表达率[(65.92±3.29)%vs(33.49±2.83)%]、对肝癌Hep G2细胞的杀伤率[(69.28±4.96)%vs(48.34±3.01)%]均高于对照组,差异均有统计学意义(t值分别为-12.708、7.582、15.478、11.201,P值均0.001)。结论 ERK1/2特异性抑制剂PD98059阻断ERK1/2信号通路能抑制γδT细胞的增殖,但能增强γδT细胞的体外杀伤功能。     

外周血sTREM-1、CD64、HBP检测对支气管哮喘合并呼吸道细菌感染的诊断价值

目的检测支气管哮喘急性发作患者外周血可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)、簇分化抗原64(CD64)、肝素结合蛋白(HBP)表达水平,探讨sTREM-1、CD64、HBP对支气管哮喘合并呼吸道细菌感染的诊断价值。方法选择2019年6月-2021年3月在本院呼吸科住院的支气管哮喘患者122例,经痰液培养检查确诊为合并细菌感染53例(称合并细菌感染组),合并病毒感染37例(称合并病毒感染组),单纯哮喘32例(称单纯哮喘组)。采用ELISA法检测患者血清sTREM-1、HBP水平,采用流式细胞仪检测CD64指数,采用Pearson法分析外周血sTREM-1、CD64、HBP表达水平与血清指标的相关性,采用ROC曲线分析sTREM-1、CD64、HBP对支气管哮喘合并呼吸道细菌感染的诊断价值。结果 3组患者性别、年龄构成,过敏性鼻炎以及支气管哮喘家族史比较差异无统计学意义(均P0.05)。与合并病毒感染组和单纯哮喘组比较,合并细菌感染组患者血清白细胞计数(WBC)[(11.54±1.23)×10~9/L vs(5.71±1.78)×10~9/L(5.24±1.25)×10~9/L]、C反应蛋白(CRP)[(38.54±8.11)mg/L vs(7.38±2.78)mg/L(6.97±2.32)mg/L]、降钙素原(PCT)[(7.01±1.54)ng/ml vs(0.78±0.23)ng/ml(0.71±0.21)ng/ml]及sTREM-1[(43.21±8.35)pg/ml vs(30.42±7.64)pg/ml(28.25±6.68)pg/ml]、CD64[(5.34±1.74)vs(2.96±0.85)(2.83±0.82)]、HBP表达水平[(74.34±26.47)ng/ml vs(38.21±14.53)ng/ml(37.54±13.42)ng/ml]均显著升高(均P0.05);合并病毒感染组患者血清WBC、PCT、CRP及sTREM-1、CD64、HBP表达水平与单纯哮喘组比较差异均无统计学意义(均P0.05)。相关性分析显示,患者外周血sTREM-1、CD64、HBP表达水平与PCT、CRP、WBC水平呈正相关(均P0.05)。ROC曲线分析显示,sTREM-1、CD64、HBP联合预测支气管哮喘患者合并呼吸道细菌感染的敏感度为92.45%,特异度为89.19%,曲线下面积为0.965。结论支气管哮喘合并细菌感染患者外周血sTREM-1、CD64、HBP水平升高,三者对支气管哮喘患者合并呼吸道细菌感染具有一定诊断价值。     

血浆二胺氧化酶联合iMELD评分对乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭患者近期预后的预测价值

目的探讨血浆二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)浓度联合i MELD评分对乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)近期预后的病毒预测价值。方法选取2015年8月至2018年12月上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院收治的98例HBV-ACLF患者为HBV-ACLF组,选取54例同期健康体检者为对照组。根据随访1个月后HBV-ACLF患者的预后分为生存组(66例)和病死组(32例)。检测各组血浆DAO、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、白蛋白(albumin,ALB)、总胆红素(total bilirubin,TBil)、肌酐(serum creatinine,SCr)、血清钠、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)及凝血酶原活动度(prothrombin activity,PTA)水平,计算MELD评分。DAO、i MELD评分与各指标的相关性采用Pearson相关性分析,HBV-ACLF患者病死的危险因素采用多因素Logistic回归分析,采用受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析DAO和i MELD评分预测HBV-ACLF患者预后的价值。结果 HBV-ACLF组患者DAO水平[(105.87±44.76)ng/ml vs(8.65±3.56)ng/ml]和i MELD评分[(44.63±26.63)分vs(4.54±2.23)分]显著高于对照组,差异有统计学意义(t=21.376、14.809,P 0.001)。病死组DAO水平[(116.63±33.54)ng/ml vs(79.65±18.52)ng/ml]和i MELD评分[(56.36±16.63)分vs(28.65±13.24)分]显著高于存活组,差异有统计学意义(t=23.654、18.654,P 0.001)。DAO、i MELD评分与AST、ALT、TBil、HBV DNA、TC、TG呈正相关(r 0.4,P 0.05),与ALB、PTA、TC、TG呈负相关(r -0.4,P 0.05)。DAO≥105.87 ng/ml,i MELD≥44.63分的HBV-ACLF患者,其腹水发生率(53.8%vs 15.0%,47.2%vs 7.2)、肝肾综合征发生率(55.2%vs 15.0%,57.1%vs 21.4%)、肝硬化发生率(38.7%vs 10.0%,44.2%vs 5.6%)、肝性脑病发生率(43.6%vs 10.0%,42.9%vs 21.4%)及病死率(40.0%vs 5.0%,42.9%vs 7.2%)分别显著高于DAO 105.87 ng/ml,i MELD 44.63分的患者(P 0.05)。病死组患者ALT [(390.21±10.23)U/L vs(372.32±10.54)U/L]、AST[(452.32±11.25)U/L vs(441.32±9.65)U/L]、HBV DNA [(9.63±2.45)拷贝/ml vs(5.96±2.85)拷贝/ml]、TBil [(13654.36±121.36)μmol/L vs(12065.36±365.21)μmol/L]、PT [(36.96±5.54)s vs(25.63±8.65)s]、PTA [(37.69±5.48)%vs(57.65±5.24)%]、MELD评分[(30.36±5.45)分vs(24.63±5.63)分]、SCr [(149.32±3.25)μmmol/L vs(142.32±2.32)μmmol/L]、DAO [(116.63±33.54)ng/mlvs(79.65±18.52)ng/ml]及i MELD评分[(56.36±16.63)分vs(28.65±13.24)分]显著高于生存组,ALB [(18.32±3.52)g/L vs(26.54±3.45)g/L]显著低于生存组,差异有统计学意义(P 0.05)。多因素Logistic回归分析表明,DAO≥105.87 ng/ml、i MELD评分≥44.63分、HBV DNA7.69拷贝/ml为HBV-ACLF患者病死的危险因素(OR=2.36、2.48、3.16,P 0.05)。DAO+i MELD评分、DAO及i MELD评分的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.834、0.814、0.798,差异有统计学意义(z=7.654,P 0.001);DAO与i MELD评分的AUC差异无统计学意义(z=1.654,P=0.074),均显著小于DAO+i MELD评分(z=11.654、10.905,P0.001)。DAO和i MELD评分预测HBV-ACLF患者预后的敏感性和特异度差异无统计学意义(P 0.05),均显著低于DAO+i MELD评分(P 0.05)。结论高水平DAO和i MELD评分是HBV-ACLF患者病死的独立危险因素;DAO联合i MELD评分预测HBV-ACLF患者预后的特异度和敏感性较高,值得在临床中推广应用。     

重组人生长激素对急性心肌梗死大鼠心肌血管生成的影响

目的探讨肌肉注射重组人生长激素(rhGH)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌血管生成及相关生长因子———血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法50只Wistar大鼠经10%戊巴比妥钠麻醉后开胸,剪开心包腔,做左冠状动脉前降支结扎术致其发生AMI,术后24h存活者37只被随机分为rhGH治疗组(19只)和对照组(18只)。治疗组以rhGH0.25U(kg·d)×3周肌注,对照组予同等容积的生理盐水肌注,3周后处死大鼠,开胸经升主动脉向冠状动脉内灌注10%甲醛20～30min固定心脏,心脏标本经切片处理。分别测定血浆和心肌的VEGF、bFGF的量及左心室梗死区周围毛细血管密度。结果(1)治疗组与对照组在AMI后3周其血浆bFGF、VEGF浓度均较实验开始时明显增加。治疗组较对照组升高更加显著,分别为69±5vs36±4(P<0.05)和47±5vs32±6(P<0.05)。(2)大鼠心肌内bFGF及VEGF治疗组均较对照组高,分别为79±7vs31±3(P<0.01)和72±7vs39±7(P<0.01)。(3)血浆bFGF、VEGF的浓度与梗死区周围心肌内毛细血管密度呈正相关(r分别为0.91和0.86,P<0.001),其回归方程分别为:毛细血管数=1.85bFGF-18.526;毛细血管数=1.249VEGF 6.127。结论rhGH促进AMI大鼠心肌细胞生长因子bFGF和VEGF的表达和分泌,提高缺血心肌局部及血液中bFGF和VEGF的浓度,促进梗死区周围毛细血管的生成。     

TGF-β1对大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期和胶原分泌的影响

目的观察TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响。方法采用MTT法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期;采用荧光定量RT-PCR法检测SMAD3、c-myc、cdk-2、cyclinE、EGF、HGF、Bcl-2、NF-κB、MMP1、MMP9、MMP14、TIMP-1、PAI-1、α-SMA、COLⅠ及COLⅢ等基因mRNA水平;采用ELISA法检测细胞培养液COLⅠ、COLⅢ和α-SMA含量。结果与对照组比,TGF-β1处理24h及36h时,细胞形态及生长状况均无明显变化;在24h和36h时,TGF-β1处理组细胞G0/G1期细胞比率均减少(24h:57.3±8.5%vs 60.6±9.7%;36h:53.0±2.2%vs 56.6±5.0%),S期细胞比例略高(24h:30.6±7.2%vs26.4±10.1%;36h:35.2±3.7%vs 30.8±2.5%),但差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β1处理组SMAD3、c-myc、cdk2、cyclin E、EGF、Bcl-2、NF-κB、TIMP1、PAI-1、α-SMA及COLⅠmRNA在24h和36h表达均上调,HGF、MMP1、MMP9、MMP14及COLⅢmRNA在24h时表达下调,36h时表达上调;TGF-β1处理组HSC-T6细胞分泌COLⅠ[24h:(63.0±7.4ng/ml vs 33.2±10.8 ng/ml,P<0.05;36h:58.5±6.0ng/ml vs 42.2±6.3ng/ml,P<0.05];α-SMA[24h:20.6±2.6ng/ml vs 4.2±0.7ng/ml,P<0.05;36h:59.7±14.6ng/ml vs 36.8±5.6ng/ml,P<0.05)均显著增加。结论 TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6显示了促增殖作用,并能促进肝纤维化相关胶原的分泌。     

不同诱导因子下内皮祖细胞具有双向分化的潜能

目的探讨内皮祖细胞(EPCs)在不同诱导因子作用下的体外分化潜能。方法人脐血单个核细胞分别予50ng/ml血管内皮生长因子(VEGF组)或50ng/ml血小板源生长因子(PDGF组)诱导分化。光镜形态观察,免疫荧光鉴定。流式细胞分析CD133+EPCs分化特征。结果新鲜脐血分离单个核细胞培养1周后贴壁细胞的EPCs特异的DiI标记乙酰化低密度脂蛋白鉴定为80%阳性。在VEGF或PDGF诱导下1周,单个核细胞大量贴壁生长多呈圆形,少量梭形生长。2周时,被诱导细胞有近50%贴壁呈梭形生长,VEGF组和PDGF组无明显差异。至4周时两组出现明显的分化差异,其中VEGF组呈"铺路石"样细胞融合,血管性假血友病因子免疫荧光呈阳性;而PDGF组呈梭形或长多角形融合,予α-平滑肌肌动蛋白标记部分呈阳性。单个核细胞磁珠分选后得到CD133+较CD133-更多分化为内皮样细胞(P<0.05);而在PDGF的诱导下CD133-较CD133+更多分化为平滑肌样细胞(P<0.05)。结论单个核细胞在体外不同的诱导因子诱导下可以双向分化,CD133+EPCs具有更强的内皮细胞分化潜能。     

骨髓间质干细胞对系统性红斑狼疮患者血管内皮细胞损伤模型修复作用的观察

目的 观察骨髓间质干细胞(MSCs)对系统性红斑狼疮(SLE)患者血清刺激后血管内皮细胞中血管假性血友病因子(vWF)和可溶性血栓调理蛋白(sTM)表达的影响,探讨MSCs对SLE血管内皮损伤后修复的可能作用.方法 人脐静脉内皮细胞株ECV-304和活动期SLE患者血清体外共培养12 h,诱导血管内皮细胞损伤,加入MSCs继续共培养3 d.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液中vWF和sTM的表达.结果 SLE血清刺激ECV-304细胞后,上清液中vWF和sTM的表达显著高于未刺激组(P＜0.05)[(30.1±6.1)ng/ml vs(10.2±3.1)ng/ml;(2.41±0.16)vs(1.19±0.14)];加入MSCs后,能显著降低vWF的表达(P＜0.05)[(2.41±0.16)vs(2.19±0.14)],但是对sTM值无明显影响(P＞0.05)[(30.1±6.1)ng/ml vs(26.2±6.0)ng/ml].结论 活动期SLE患者血清可损伤血管内皮细胞,MSCs能降低血管内皮细胞中vWF表达,提示可能对SLE血管内皮损伤有一定的修复作用.     

人骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞的诱导分化

目的观察人骨髓间充质干细胞（HBMCs）的体外培养及向血管内皮细胞的诱导分化结果。方法利用密度梯度离心法将HBMCs从人骨髓中分离出来,体外扩增。将培养至第3代的HBMCs加入含血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（bFGF）的培养基定向诱导,使其向血管内皮细胞分化。用免疫细胞化学和流式细胞学方法检测诱导后的细胞表型。结果原代HBMCs培养3周后细胞呈梭形,诱导后第7天的细胞呈椭圆形或不规则形,第14天细胞大致呈＂铺路石＂样改变,细胞化学方法检测发现其CD31、CD34、vWF因子呈阳性,流式细胞仪测定CD31、vWF因子阳性细胞分别占87.5%、82.6%,CD31、vWF因子均阳性的细胞占71.2%。结论 HBMCs在VEGF、bFGF的诱导下向血管内皮细胞方向分化。     

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)调节性T淋巴细胞功能的影响

目的观察胸腺肽α1对慢性乙型肝炎CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)调节性T淋巴细胞(Treg)功能的影响。方法选取2016年12月-2017年7月陕西省人民医院感染性疾病科收治的慢性乙型肝炎患者67例,其中38例接受恩替卡韦抗病毒治疗(对照组),29例接受恩替卡韦联合注射用胸腺肽α1治疗(治疗组),分别于治疗前后分离外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg水平,纯化CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg,与自体CD4+CD25-T淋巴细胞共培养,CCK-8法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞因子分泌水平。计量资料2组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ2检验。结果对照组、治疗组患者经治12周CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg均较基线水平明显下降,差异均有统计学意义(8.85±2.18)%vs(12.32±1.22)%、(9.26±2.30)%vs(13.71±2.32)%,t值分别为4.579、4.803,P值分别为0.0005、0.0003]。选取17例对照组患者和21例治疗组患者检测细胞因子分泌水平。经治12周对照组患者治疗12周后Treg与CD4+CD25-T淋巴细胞共培养系统中细胞增殖和分泌细胞因子水平均无明显变化;治疗组共培养系统中细胞计数较基线水平明显升高,差异有统计学意义[(3.66±0.95)×106个vs(2.07±0.51)×106个,t=5.709,P0.0001];治疗组共培养细胞分泌抑制性细胞因子IL-10、IL-35水平明显降低,差异均有统计学意义[(41.40±11.89)pg/ml vs(56.53±27.85)pg/ml、(122.9±9.98)pg/ml vs(130.0±15.98)pg/ml,t值分别为2.639、2.459,P值分别为0.019、0.028)],分泌抗病毒细胞因子IFNα、IFNγ水平明显升高,差异均有统计学意义[(297.5±83.56)pg/ml vs(235.6±67.72)pg/ml、(5.83±0.85)pg/ml vs(4.39±0.95)pg/ml,t值分别为2.603、4.659,P值分别0.017、0.0004]。结论胸腺肽α1能够抑制慢性乙型肝炎CD4~+CD25~+CD127~(dim/-)Treg水平及免疫抑制功能,提高患者免疫功能。     

妊娠期糖尿病患者肠道菌群改变及与炎症因子、免疫功能的相关性分析

目的探讨GDM患者肠道菌群改变及与炎症因子、免疫功能的关系。方法选取2014年10月至2015年10月于唐山妇幼保健院诊治的GDM患者111例(GDM组),同期健康孕妇111名为对照(NC)组,两组均行肠道菌群、炎症因子、免疫功能检测,分析GDM与肠道菌群、炎症因子、免疫功能的关系。结果 GDM组FPG[(6.7±0.6)vs(5.1±0.4)mmol/L]、2hPG[(8.9±1.0)vs(7.2±0.5)mmol/L]、HbA1c[(7.1±0.4)%vs(5.3±0.2)%]、大肠杆菌[(8.9±1.1)vs(7.0±0.9)lgCFU/g]、C-RP[(7.6±1.2)vs(2.4±0.3)mg/L]、肿瘤坏死因子α(TNF-α)[(289.6±14.3)vs(115.8±12.7)ng/L]、白介素6(IL-6)[(152.7±11.6)vs(73.4±5.9)ng/L]高于NC组(P0.01)。GDM组双歧杆菌[(6.3±0.7)vs(10.4±0.8)lgCFU/g]、双歧杆菌与大肠杆菌比值(B/E)[(0.7±0.2)vs(1.5±0.3)]、乳酸杆菌[(5.2±0.6)vs(6.7±0.8)lgCFU/g]、CD4+[(23.2±0.9)%vs(31.8±1.5)%]、CD8+[(22.9±0.7)%vs(25.3±1.0)%]、CD4+/CD8+[(1.0±0.1)vs(1.3±0.2)]低于NC组(P0.01)。GDM与大肠杆菌(r=0.501,P0.01)、C-RP(r=0.426,P0.01)、TNF-α(r=0.398,P0.01)、IL-6(r=0.471,P0.01)呈正相关;与双歧杆菌(r=-0.483,P0.01)、乳酸杆菌(r=-0.354,P0.01)、CD4+(r=-0.362,P0.01)、CD8+(r=-0.380,P0.01)呈负相关。结论 GDM患者肠道菌群发生改变,可能与炎症反应、免疫功能降低有关。     

CoCl2缺氧处理对脐带间充质干细胞促血管生长因子表达的影响

目的: 探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧预处理对人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)中碱性成纤维生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及蛋白分泌的影响。方法: 分离、培养UC-MSCs。取第3代的UC-MSCs,运用含150 μmol/L的CoCl2培养液培养细胞72 h,用流式细胞仪检测缺氧对UC-MSCs表面标志物(CD34、CD45、CD90、CD105、CD29及CD49)的影响。依据CoCl2的浓度(0、50、100 μmol/L及150 μmol/L)将UC-MSCs分为4个组,即对照组、低、中、高CoCl2组,每个组处理24 h、48 h和72 h。用SYBRGREN荧光定量RT-PCR检测bFGF、VEGF mRNA的表达,用ELISA法检测bFGF和VEGF蛋白的表达。结果: 经含150 μmol/L CoCl2的培养液缺氧处理,没有改变细胞的形态和表面标记物。在缺氧培养时间相同的情况下,bFGF、VEGF基因的表达均随着CoCl2浓度的增加而增加,CoCl2为150μmol/L时达到峰值（P<0.05）。当CoCl2浓度为150μmol/L培养不同时间(24h、48 h及72 h)时,随着缺氧预处理时间的延长,bFGF、VEGF基因的表达随之增加,于48 h时达到峰值（P<0.05）,bFGF、VEGF基因的表达分别为8.15±0.10和16.67±0.17,延长缺氧培养的时间基因的表达减小（P<0.05）;蛋白与基因表达的变化基本一致。在含150 μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,bFGF和VEGF的表达达到顶峰（P<0.05）,分别为(69.63±7.90) ng/L和(89.55±5.45) ng/L。结论: 适当浓度的CoCl2(<150 μmol/L)对UC-MSCs的生物学功能影响轻微。CoCl2可用于细胞的模拟缺氧,缺氧对UC-MSCs bFGF、VEGF的分泌具有时间和剂量依赖性,以含150 μmol/L CoCl2的培养液培养48 h,为促进bFGF、VEGF基因和其蛋白表达的最适条件。     

慢性乙型肝炎患者外周血调节性T细胞及其相关细胞因子水平检测及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎病毒感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、IL-18、IFN-γ、TGF-β水平变化及临床意义。方法选择乙型肝炎病毒携带者(ASC)112例、慢性乙型肝炎患者(CHB)63例和健康对照者50例,采用流式细胞术和ELISA法分别检测CD4+CD25+细胞和IL-18、IFN-γ、TGF-β水平;采用荧光定量聚合酶链反应法检测HBV DNA载量。结果CHB患者外周血CD4+CD25+Treg细胞数、IL-18、IFN-γ、TGF-β水平分别为(30.97±18.78)%、(448.51±75.75)ng/ml、(190.93±38.52)ng/ml和(331.22±71.67)ng/ml,ASC组分别为(28.17±18.52)%、(524.52±81.42)ng/ml、(204.93±47.77)ng/ml和(336.01±82.61)ng/ml,均显著高于健康人[分别为(27.30±17.59)%、(49.79±25.68)ng/ml、(14.41±11.75)ng/ml和(42.28±17.50)ng/ml,P0.05]。结论乙型肝炎病毒感染者存在CD4+CD25+Treg细胞数的变化,IL-18、IFN-γ和TGF-β可能参与了乙型肝炎患者肝损伤过程。