毛蕊花苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型的作用及其机制研究

目的采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞的炎症模型,考察炎症相关指标,探讨毛蕊花苷的抗炎作用及其机制。方法用MTT比色法检测毛蕊花苷对RAW264.7细胞活性的影响;Griess法检测NO的含量;Westernblotting检测核转录因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达,ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的释放,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)、Ca~(2+)的释放情况。结果毛蕊花苷浓度为20、40、80μmol/L时对RAW264.7细胞没有毒性。不同浓度的毛蕊花苷对LPS诱导RAW264.7细胞导致的NO、TNF-α、IL-6的释放,细胞内ROS、NO、Ca~(2+)释放的增加均有很好的抑制效果,对诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2(COX-2)、p-IKKα/β、p-p65、p-IκBα蛋白的表达也有抑制作用。结论毛蕊花苷具有明显的抗炎作用,其作用机制是通过抑制NF-κB信号通路而发挥抗炎作用。     

芳香新塔花总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的:探讨芳香新塔花总黄酮(Ziziphora clinopodioides flavonoids,ZCF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤中氧自由基、一氧化氮(NO)和细胞凋亡的影响及其机制。方法:60只大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注模型组,复方丹参滴丸组(130 mg·kg-1),ZCF低、中、高剂量组(75,150,300 mg·kg-1)。通过结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支30 min,再灌注3 h建立缺血再灌注损伤模型,测定大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB),乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA),NO和一氧化氮合酶(NOS)等相关指标的变化。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评价心肌梗死程度,苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠心肌组织病理学改变,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清中CK-MB,LDH,MDA的含量显著升高,SOD,GSH-Px,NO和NOS的活性显著降低,心肌梗死程度严重,出现明显的细胞凋亡,显著下调Bcl-2 mRNA表达,上调Bax mRNA表达(P0.01)。与模型组比较,ZCF给药组能明显降低大鼠血清中CK-MB,LDH,MDA的含量,提高SOD,GSH-Px,NO和NOS的活性,同时可降低心肌梗死面积,改善缺血心肌的病理变化,抑制细胞凋亡,显著上调Bcl-2 mRNA表达,下调Bax mRNA表达,提高Bcl-2/Bax水平(P0.05,P0.01)。结论:ZCF可减轻大鼠缺血心肌的损伤作用,其机制可能与减少氧自由基的产生,促进NO合成,上调Bcl-2mRNA的表达,下调Bax mRNA的表达,抑制细胞凋亡有关。     

四逆散对脂多糖诱导的RAW264.7细胞极化的影响

目的:探讨四逆散(Sinisan,SNS)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264. 7巨噬细胞极化的调控作用。方法:RAW264. 7分为5组,分别为空白组,模型组,SNS低、中、高质量浓度组(10,20,40 mg·L~(-1));以LPS(100μg·L~(-1))刺激的RAW264. 7细胞为体外模型,使用不同质量浓度的SNS提前干预细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同质量浓度SNS对RAW264. 7细胞增殖的影响;光学显微镜下观察各组细胞分化程度;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养基上清中M1极化因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β)以及M2极化因子白细胞介素-10(IL-10)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测RAW264. 7细胞M1极化因子TNF-α,IL-6以及M2极化因子IL-10,精氨酸酶-1(Arg~(-1))的mRNA水平。结果:与空白组比较,模型组促进细胞增殖(P 0. 05),刺激M1极化因子TNF-α,IL-6,IL-1β的释放和上调TNF-α,IL-6的mRNA含量(P 0. 01),减少M2极化因子IL-10释放和IL-10,Arg~(-1)的mRNA水平(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,SNS对RAW264. 7细胞的活性没有影响。与模型组比较,SNS可抑制LPS诱导的细胞增殖(P 0. 05),减少LPS刺激的细胞分化,减少M1极化因子TNF-α,IL-6,IL-1β的释放和TNF-α,IL-6的mRNA含量(P 0. 05,P 0. 01),并增加M2极化因子IL-10释放和IL-10,Arg~(-1)的mRNA水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:SNS可抑制LPS诱导的RAW264. 7细胞炎症,其机制可能与调控巨噬细胞M1/M2表型极化平衡相关。     

芳香新塔花总黄酮调控PI3K/Akt/mTOR通路改善动脉粥样硬化的作用机制研究

观察芳香新塔花总黄酮对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠自噬和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控,探讨芳香新塔花总黄酮抗动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的作用机制。ApoE^-/-小鼠喂食高脂饲料8周,建立体内AS实验模型,随机分为5组(模型组、阳性对照组及芳香新塔花总黄酮低、中、高剂量组),普通饲料喂食C57BL/6J小鼠设为空白组。灌胃给药12周后取出血清和主动脉,全自动生化分析仪检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠血清中细胞间黏附因子-1(ICAM-1)、血管间黏附因子-1(VCAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平;油红O染色法观察小鼠主动脉斑块面积;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠主动脉斑块及病理变化;免疫荧光法检测主动脉中P62、LC3的表达;蛋白免疫印迹法(Wes...     

白背叶根含药血清对脂多糖诱导下RAW264.7细胞分泌的影响

目的:观察不同浓度的白背叶根含药血清对脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)诱导下RAW264.7细胞分泌的影响。方法:制作高、中、低浓度白背叶根含药血清,以CCK-8法检测不同浓度白背叶根含药血清对RAW264.7细胞活力的影响。以脂多糖刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型,检测白背叶根含药血清对细胞上清液中炎症介质一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、白三烯B4(LTB4)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。结果:不同浓度的白背叶根含药血清均对RAW264.7细胞活力无影响;与模型组比较,10%、5%的白背叶根含药血清可显著抑制NO的释放(P<0.05或P<0.01),10%白背叶根含药血清可显著抑制LTB4的分泌(P<0.05),2.5%白背叶根含药血清可显著抑制IL-1β的分泌(P<0.05);但不同浓度的白背叶根含药血清对PGE2、TNF-α的分泌无显著影响。结论:白背叶根的抗炎机制可能是通过抑制炎症反应中NO,LTB4,IL-1β的释放而实现。     

芳香新塔花总黄酮对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用北大核心CSCD

目的:探讨芳香新塔花总黄酮(ZCF)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:采用体外培养HUVECs,分为正常组、模型组、芳香新塔花总黄酮(25、50、100μg/ml)组和阳性药维生素C组。采用CCK-8法检测HUVECs活力,用试剂盒检测各组细胞丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。采用流式细胞术检测活性氧(ROS)和Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡情况。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率、GSH含量和SOD活性明显降低,MDA、LDH和ROS含量明显增加,细胞凋亡率显著上升;与模型组比较,芳香新塔花总黄酮(25、50、100μg/ml)组和维生素C组可显著提高细胞存活率和SOD活性,明显增加GSH含量、减少MDA和LDH含量,抑制ROS的生成,显著降低细胞凋亡率。结论:芳香新塔花总黄酮对H2O2诱导的HUVECs损伤具有保护作用,机制可能与其增强抗氧化能力、降低ROS产生和抑制细胞凋亡有关。     

芳香新塔花中黄酮类成分的研究

目的研究新疆维吾尔传统药物芳香新塔花Ziziphora clinopodioides Lam.中的黄酮类化学成分。方法采用硅胶Sephadex LH-20柱色谱和制备高效液相等色谱方法分离纯化,依据理化性质和波谱数据分析进行结构鉴定。结果从芳香新塔花的甲醇提取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为金合欢素①,芹菜素②,柯伊利素③,山萘酚④,金丝桃苷⑤,槲皮素⑥共6个黄酮类成分。结论化合物1~5为首次从该属植物中分离得到。     

表儿茶素对脂多糖诱导RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

目的:观察表儿茶素对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分泌炎症因子的影响,并探讨其作用机制。方法:用脂多糖(1 mg·L-1)刺激生长良好的RAW264.7细胞24 h建立体外细胞炎症模型,以噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度表儿茶素对RAW 264.7细胞的毒性作用,Griess试剂法检测一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-6(IL-6)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞一氧化氮合酶(i NOS)及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)磷酸化表达。结果:表儿茶素在100μmol·L-1时对RAW 264.7细胞无毒性作用。与空白组比较,LPS可明显诱导RAW264.7细胞分泌炎症因子NO,TNF-α,IL-1和IL-6(P0.01);与LPS组比较,25~100μmol·L-1的表儿茶素可以明显降低LPS诱导的RAW 264.7细胞释放炎症因子NO,TNF-α,IL-1和IL-6(P0.05,P0.01),抑制i NOS蛋白及MAPKs亚族p38,细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinases,ERK)和c-jun氨基末端激酶(c-jun terminal kinase,JNK)蛋白磷酸化水平表达,并呈现浓度依赖关系。结论:表儿茶素可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用可能与减少炎症因子NO,TNF-α,IL-1和IL-6,抑制i NOS蛋白表达及p38MAPK,ERK1/2和JNK的磷酸化水平有关。     

紫金龙乙醇组分对脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

目的:研究紫金龙乙醇组分(AVEC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7分泌炎症因子的影响。方法:用脂多糖(10μg·L-1)刺激生长良好的RAW 264.7细胞24 h建立体外细胞炎症模型,以MTT法测定不同浓度AVEC对RAW 264.7细胞的毒性作用,Griess试剂法检测一氧化氮(NO)含量,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)含量。结果:AVEC在低于400 mg·L-1时对RAW 264.7细胞无毒性作用。与空白对照组相比,LPS可以明显诱导RAW 264.7细胞分泌炎症因子TNF-α,IL-6和NO(P<0.01);与模型组相比,100~400 mg·L-1的AVEC可明显下调LPS诱导的RAW 264.7细胞释放炎症因子TNF-α,IL-6和NO(P<0.05,P<0.01),并呈现良好的剂量依赖关系。结论:AVEC可以抑制脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,其抗炎作用可能与减少炎症因子TNF-α,IL-6和NO有关。     

粉防己碱对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的作用

目的观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型促炎细胞因子和抗炎细胞因子的影响。方法 LPS(1μg/mL)刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度Tet对RAW264.7细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察Tet对细胞核因子-κB(NF-κB)核转运的作用,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的变化。结果当Tet浓度<1μmol/L时,单独或与1μg/mL LPS共培养,均对RAW264.7细胞生长无影响;而当Tet浓度>10μmol/L时,单独或与LPS共培养均表现出明显的细胞生长抑制效应;Tet可使IL-6、TNF-α的释放受到抑制,相反可促进IL-10的表达。激光共聚焦显微镜观察Tet大剂量组细胞核红染的阳性细胞显著减少,以阴性细胞(红染p65亚基主要集中在胞浆部位,使胞浆染色较深,胞核染色较浅,整个细胞成空泡状)为主。结论 Tet可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与抑制NF-κB活化,进一步减少炎性细胞因子IL-6、TNF-α的产生,并促进抗炎细胞因子IL-10的表达等有关。     

桂枝汤对小鼠巨噬细胞株分泌炎症因子的影响

目的:研究桂枝汤对脂多糖刺激的小鼠巨噬细胞株RAW264.7分泌炎症因子的影响.方法:用脂多糖刺激RAW264.7细胞株,同时给予桂枝汤含药血清进行干预,24h后,取细胞培养上清液,ELISA法测定炎症因子NO、TNF-α和IFN-β的含量,分析评价桂枝汤含药血清对上述炎症因子含量的影响.结果:桂枝汤含药血清可剂量依赖性地降低NO、TNF-α和IFN-β的病理性增加.结论:桂枝汤可能通过降低NO、TNF-α和IFN-β炎症因子等环节达到其抗炎作用.     

麻黄-甘草药对对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的体外抗炎作用分析

目的:观察麻黄-甘草药对对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞的增殖以及对脂多糖(LPS)刺激条件下对细胞分泌一氧化氮(NO),肿瘤坏死因子(TNF)-α和经典活化(M1)/替代活化(M2)炎症表型转化的影响。方法:利用噻唑蓝(MTT)比色法考察不同剂量的药对对RAW264.7细胞增殖的影响;药对干预脂多糖(LPS,1 mg·L-1)建立的细胞炎症模型,格里斯试剂法(Griess)法检测NO释放量,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测上清中TNF-α的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测药对对LPS刺激条件下RAW264.7细胞M1型巨噬细胞常见标志物一氧化氮合酶(iNOS),白细胞介素-6(IL-6),IL-1β及M2型巨噬细胞常见标志物IL-10,精氨酸酶1(ARG1)及甘露糖受体1(MRC1)基因的表达。结果:麻黄-甘草药对的剂量在100 mg·L-1及以下时对RAW264.7细胞增殖没有影响;与LPS组比较,剂量在25~100 mg·L-1的药对可以显著降低NO的含量(P0.05,P0.01),10~100 mg·L-1剂量下对TNF-α表达的抑制显著(P0.05,P0.01);50 mg·L-1的药对还可以显著降低M1型巨噬细胞标志基因iNOS,IL-6及IL-1β的表达(P0.05,P0.01),而对M2型巨噬细胞标志基因IL-10,ARG1,MRC1没有影响。结论:麻黄-甘草药对能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症,其机制可能与抑制巨噬细胞向M1型方向的偏移,减少NO及TNF-α等炎症因子的分泌相关。     

Inhibitory effect of sulphated polysaccharide porphyran (isolated from Porphyra yezoensis) on RANKL‐induced differentiation of RAW264.7 cells into osteoclasts

Safe and efficient therapeutic agents for bone diseases are required in natural sources. We previously found that edible seaweed‐derived polysaccharide porphyran exhibited anti‐inflammatory effects through the down regulation of nuclear factor‐κB. The aim of this study was to investigate the availability of porphyran as a therapeutic agent for bone diseases. The effects of porphyran on receptor activator of nuclear factor κB ligand (RANKL)‐induced osteoclastogenesis in RAW264.7 cells were examined. Porphyran suppressed RANKL‐induced osteoclast formation in a concentration‐dependent manner (6.25–50 μg/ml) without any cytotoxic effects. Furthermore, real‐time polymerase chain reaction analyses indicated that porphyran at 50 μg/ml significantly attenuated the RANKL‐induced increase in the mRNA levels of osteoclastogenesis‐related marker genes such as nuclear factor of activated T cells, tartrate‐resistant acid phosphatase, cathepsin K, and matrix metalloproteinase‐9 in RAW264.7 cells. To our knowledge, this is the first report showing that edible‐seaweed‐derived polysaccharide porphyran can suppress RANKL‐induced osteoclastogenesis. Our results suggest that porphyran can be used as a safe therapeutic agent to improve osteoclast‐related pathological conditions.     

淫羊藿黄酮的分离鉴定及其对前破骨细胞株增殖的影响

目的观察淫羊藿中单体黄酮的抗骨质疏松作用。方法利用硅胶和凝胶柱色谱分离淫羊藿中单体黄酮成分,根据化合物光谱数据(ESI-MS、1H-NMR和13C-NMR)鉴定其结构,通过MTT法观察其对体外培养的前破骨细胞株RAW264.7增殖的影响。结果从淫羊藿地上部分的醋酸乙酯萃取物中分离得到5个化合物,分别为淫羊藿苷()、宝藿苷()、朝藿素B()、宝藿苷()及金丝桃苷()。活性结果表明,0.1~100μmol/L化合物对前破骨细胞RAW264.7的生长有一定程度的促进作用;浓度为0.1~100μmol/L的化合物对前破骨细胞RAW264.7的生长有一定的抑制作用,但随着浓度的升高,转而表现为轻微的促进作用;浓度为1.0和10μmol/L的化合物对该细胞的增殖基本上没有什么影响,而其他浓度下,则对前破骨细胞RAW264.7的增殖表现出明显的抑制作用;除个别浓度外,化合物和均对前破骨细胞RAW264.7的生长表现出相当程度的抑制作用。结论黄酮类化合物对RAW264.7的生长是促进还是抑制依赖于其自身的化学结构以及作用浓度,淫羊藿可能是通过黄酮类化合物抑制前体破骨细胞的增殖,进而抑制前体破骨细胞分化形成破骨细胞而发挥抗骨质疏松作用的。     

Suppressive effect of inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression by the methanol extract of Actinodaphne lancifolia

Nitric oxide (NO) produced by inducible nitric oxide synthase (iNOS) has played a crucial role in various pathophysiological processes including inflammation and carcinogenesis. Therefore, the inhibitors of NO synthesis or iNOS gene expression have been considered as potential anti-inflammatory and cancer chemopreventive agents. In our continuous search for iNOS inhibitors from natural products we have evaluated indigenous Korean plant extracts using an assay for inhibition of nitric oxide formation on lipopolysaccharide (LPS)-activated mouse macrophage RAW 264.7 cells. As a result, the methanolic stem extract of Actinodaphne lancifolia showed an inhibitory activity of NO production in a dose-dependent manner (IC50 = 2.5 microg/ml). Additional study demonstrated that the extract of Actinodaphne lancifolia significantly suppressed the iNOS protein and gene expression in a dose-dependent manner. These results suggest that Actinodaphne lancifolia could be a potential candidate for developing an iNOS inhibitor from natural products. Further elucidation of active principles for development of new cancer chemopreventive and/or anti-inflammatory agents could be warranted.     

Anti‐inflammatory effects of chemical components from Ginkgo biloba L. male flowers on lipopolysaccharide‐stimulated RAW264.7 macrophages

Ginkgo biloba L., well known as living fossil, have various pharmacological activities. Eighteen compounds were isolated from Ginkgo male flowers including a novel matsutake alcohol glycoside, Ginkgoside A ( 1 ), and 17 known compounds—calaliukiuenoside ( 2 ), benzylalcohol O‐α‐l ‐arabinopyranosyl‐(1 → 6)‐β‐d ‐glucopyranoside ( 3 ), amentoflavone ( 4 ), sciadopitysin ( 5 ), bilobetin ( 6 ), isoginkgetin ( 7 ), olivil 4‐O‐β‐d ‐glucopyranoside ( 8 ), dihydrodehydrodiconiferyl alcohol‐4‐O‐β‐d ‐glucoside ( 9 ), (+)‐cyclo‐olivil‐6‐O‐β‐d ‐glucopyranoside ( 10 ), (?)‐isolariciresinol 4‐O‐β‐d ‐glucopyranoside ( 11 ), coniferin ( 12 ), trans‐cinnamic acid‐4‐O‐β‐d ‐glucopyranoside ( 13 ), p‐coumaryl alchol glucoside ( 14 ), stroside B ( 15 ), methylconiferin ( 16 ), cis‐p‐coumaric acid 4‐O‐β‐d ‐glucopyranoside ( 17 ), and cis‐coniferin ( 18 ). Thirteen of these compounds had not previously found in Ginkgo. All extractive fractions and isolated compounds were evaluated for their anti‐inflammatory ability in the lipopolysaccharide‐induced RAW264.7 macrophages. The ethanol extract of Ginkgo flowers and the chloroform and ethyl acetate fractions can significantly decrease nitric oxide (NO), interleukin‐6 (IL‐6), and prostaglandin E₂ (PGE₂) production at 100 μg/ml. The most effective compounds, bilobetin ( 6 ) and isoginkgetin ( 7 ), elevated the NO inhibition ratios to 80.19% and 82.37% at 50 μM, respectively. They also exhibited significant dose‐dependent inhibitory effects on tumor necrosis factor‐α, IL‐6, PGE₂, inducible NO synthase mRNA, and cyclooxygenase‐2 mRNA levels. So they can be promising candidates for the development of new anti‐inflammatory agents.     

不同基原秦皮、香豆素单体以及不同指纹区样品对内毒素刺激单核-巨噬细胞株分泌炎症因子的影响

目的 :研究4种秦皮提取物、5种香豆素单体、5种单体混合物、苦枥白蜡树已知香豆素指纹区样品和未知成分指纹区样品对内毒素(LPS)刺激小鼠单核-巨噬细胞株RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响。 方法 :以 LPS 10 mg·L^-1刺激RAW264.7细胞, 加入不同浓度的待测样品,24h后,取培养液上清测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1α(IL-1α)含量。 结果 :①4种基原秦皮提取物能显著抑制由LPS诱导巨噬细胞分泌TNF-α(P<0.05)。②5种香豆素单体均能显著抑制由LPS诱导巨噬细胞分泌IL-1α;除秦皮苷外其余4种单体,能显著抑制由LPS诱导巨噬细胞分泌TNF-α,其中秦皮甲素、秦皮素具有量效关系。③苦枥白蜡树提取物,5种香豆素单体混合物,苦枥白蜡树已知香豆素指纹区样品和未知成分指纹区样品能显著抑制由LPS诱导巨噬细胞分泌TNF-α(P<0.05),5种香豆素单体混合物能显著抑制LPS诱导巨噬细胞产生IL-1α,其他样品的作用没有显著性。 结论 :在该测试系统中4种基原秦皮中尖叶白蜡树抗炎活性最强,其他3个品种抗炎活性相近,抗炎作用与素皮已知香豆素含量没有直接的量效关系,说明素皮除已知香豆素外,未知成分对炎症因子也有一定抑制作用;5种香豆素单体中秦皮乙素,6,7-二甲氧基-8-羟基香豆素抗炎活性最强。     

益气养阴逐瘀方对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型体外抗炎活性的影响

目的:研究益气养阴逐瘀方对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞系RAW 264. 7细胞炎症模型相关细胞因子表达及经典活化(M1)/选择性活化(M2)炎症表型转化的影响。方法:运用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同给药浓度的益气养阴逐瘀方对RAW 264. 7细胞增殖情况的影响;利用LPS诱导RAW 264. 7细胞,构建体外炎症模型,采用格里斯试剂法(Griess)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的分泌量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清中M1/M2型相关炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL~(-1)β),一氧化氮合酶(i NOS),白细胞介素-10(IL~(-1)0),转化生长因子-β(TGF-β),精氨酸-1(Arg-1)的表达量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测M1型巨噬细胞标志基因TNF-α,IL-6,IL~(-1)β,i NOS和M2型巨噬细胞标志基因IL~(-1)0,TGF-β,Arg-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内相关蛋白TNF-α,IL-6,IL~(-1)β,i NOS的表达。结果:MTT比色法显示,与空白组比较,益气养阴逐瘀方2. 0 g·L~(-1)及以下时对细胞增殖无明显影响。Griess法显示,与空白组相比,LPS组NO释放量显著上调(P 0. 01);与LPS组相比,各给药组NO释放量均显著下调(P 0. 01)。ELISA显示,与空白组相比,LPS组M1/M2型巨噬细胞相关炎症因子表达均显著上调(P 0. 01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组可明显下调M1型巨噬细胞促炎症因子表达(P 0. 01),对M2型巨噬细胞抗炎症因子无影响。Real-time PCR显示,与空白组相比,LPS组M1/M2型巨噬细胞相关mRNA表达显著上调(P 0. 01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组可明显下调M1型巨噬细胞促炎症因子基因表达(P 0. 05,P 0. 01),对M2型mRNA表达无影响。Western blot显示,与空白组比较,LPS组TNF-α,IL-6,IL~(-1)β,i NOS蛋白的表达显著上调(P 0. 01);与LPS组相比,益气养阴逐瘀方各给药组TNF-α,IL-6,IL~(-1)β,i NOS蛋白的表达均下调,且于2. 0 g·L~(-1)下调最显著(P 0. 01)。结论:益气养阴逐瘀方可以有效抑制LPS诱导的RAW 264. 7细胞炎症。其诱导已经分化的促炎亚型M1型巨噬细胞向抗炎亚型M2型巨噬细胞转化不明显,其抗炎机制可能与通过抑制巨噬细胞向M1亚型方向极化从而发挥免疫调节作用,以减少NO,TNF-α,IL-6等相关炎症因子分泌相关。