辛伐他汀对巨噬细胞基质金属蛋白酶-2、9表达及分泌的影响

动脉粥样硬化斑块破裂的机制及影响其稳定的因素是目前心血管疾病研究的主要领域之一。公认动脉粥样硬化斑块破裂及继发血栓形成是临床急性冠状动脉综合征的主要原因。目前,临床上尚无药物专门用于防治动脉粥样硬化斑块破裂,所以对有     

香烟提取物对大鼠肺泡巨噬细胞活性及基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶组织抑制剂1平衡的影响

自1963年Laurell及Eriksson报道α1抗胰蛋白酶（α1-AT）与肺气肿的关系以来，蛋白酶/抗蛋白酶失衡在慢性阻塞性肺疾病（COPD）发病中的作用成为研究热点。近年研究表明，中性粒细胞弹性蛋白酶主要在α1-AT缺乏的COPD中起作用。而吸烟相关的COPD发病机制则有待于深入研究，因此本组研究主要探讨香烟提取物（CSM）对被动吸烟大鼠肺泡巨噬细胞（AM）活性胜基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）平衡的影响，为探讨COPD的防治奠定基础。     

白藜芦醇抑制可溶性CD40配体作用下巨噬细胞基质金属蛋白酶-9的表达

目的 探讨白藜芦醇抑制可溶性CD40配体(sCD40L)作用下对巨噬细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法 佛波酯诱导人单核细胞株(THP-1)细胞分化为巨噬细胞.依次给予白藜芦醇和可溶性sCD40L孵育细胞,利用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法、明胶酶谱法检测巨噬细胞内MMP-9和组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)基因的转录、蛋白表达和酶活性.结果 给予sCD40L刺激后巨噬细胞内MMP-9基因转录增多(1.53±0.04与0.75±0.01,P<0.05),蛋白分泌明显增加(244 930.8±31 268.6与192 976.8±20 223.1,P<0.05);白藜芦醇可抑制巨噬细胞MMP-9基因转录及蛋白分泌(P<0.01),降低MMP-9酶活性(P<0.05),升高巨噬细胞TIMP-1基因转录和蛋白分泌(P<0.05).结论 白藜芦醇可以抑制CD40途径活化的巨噬细胞内MMP-9的表达,调节MMP-9的活性,这可能是其抗动脉粥样硬化、稳定粥样斑块的作用机制之一.     

匹伐他汀对血管平滑肌细胞金属基质蛋白酶9表达的影响

目的 观察金属基质蛋白酶9(MMP-9)在动脉粥样硬化组织中的分布及匹伐他汀对TNF-α刺激血管平滑肌细胞MMP-9 蛋白和mRNA 表达的影响.方法 病理标本取自外科择期手术病例,行常规病理和免疫组织化学检查;对照组动脉标本取自非正常死亡健康成人尸体及非血管病变切除标本;血管平滑肌细胞取自开放手术切除的主动脉中膜.实验为5 组,对照组和4 个实验组.实验各组平滑肌细胞在给予TNF-α刺激前预先加入不同浓度的匹伐他汀(分别为1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml),测定其MMP-9 蛋白和mRNA 表达.结果 免疫组化检测显示,实验组动脉硬化组织TNF-α和MMP-9 蛋白分布明显增加,主要集中在炎性细胞聚集处,与对照组比较差异有统计学意义;MMP-9 的分布与TNF-α明显相关.匹伐他汀呈浓度依赖方式抑制TNF-α诱导平滑肌细胞MMP-9 蛋白和mRNA 表达;MMP-9 蛋白表达分别减少10.5%、24.1%、46.0%和61.0%,mRNA 表达分别减少9%、21%、35%和46%,差异有统计学意义.结论 动脉硬化组织中MMP-9 分布与TNF-α明显相关,提示动脉粥样硬化组织中MMP-9 增加与其他细胞因子相互影响有关.预先给予匹伐他汀可以呈现浓度依赖方式显示抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞MMP-9 蛋白和mRNA 表达,提示他汀类药物可以通过抑制MMP-9 表达,延缓、稳定动脉粥样硬化病变,早期干预效果更好.     

糖基化终产物对小鼠巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物表达、分泌及基质金属蛋白酶9活性的影响

目的 探讨糖基化终产物对小鼠巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物表达、分泌及基质金属蛋白酶9活性的影响.方法在培养的小鼠巨噬细胞株(J774A.1)中分别加入不同浓度(50、100、200及400 mg/L)的糖基化终产物干预24 h和同一浓度(200 mg/L)的糖基化终产物干预12、24及48 h,以无血清培养基和相应浓度的牛血清白蛋白为对照.用逆转录聚合酶链方法检测基质金属蛋白酶诱导物mRNA的表达,用酶联免疫吸附法检测上清中基质金属蛋白酶诱导物蛋白水平,用酶谱法检测上清中基质金属蛋白酶9的活性.结果 糖基化终产物干预组的基质金属蛋白酶诱导物mRNA表达水平和上清中蛋白水平与对照组比较差异有显著性,且随时间和浓度增加而增加(P<0.05).糖基化终产物干预组的上清中基质金属蛋白酶9的活性与对照组比较差异有显著性,且随时间和浓度增加而增加(P<0.05).结论 糖基化终产物促进小鼠巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物mRNA表达、蛋白分泌及基质金属蛋白酶9的活性;提示糖基化终产物可能通过调节巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导物表达、分泌及基质金属蛋白酶9的活性而影响糖尿病动脉粥样硬化斑块的稳定性.     

脂多糖对胎儿主动脉平滑肌细胞合成基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶抑制物1的影响

为探讨脂多糖是否通过影响基质金属蛋白酶 1和基质金属蛋白酶抑制物 1的平衡对动脉粥样硬化的进程起作用 ,应用体外培养的胎儿主动脉平滑肌细胞 ,加入不同浓度的脂多糖孵育 72h ,收集细胞上清液 ,用蛋白质印迹分析方法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶 1和基质金属蛋白酶抑制物 1的含量。结果发现 ,脂多糖组与对照组相比 ,基质金属蛋白酶 1的含量明显减少 (P <0 .0 5 ) ,基质金属蛋白酶抑制物 1的含量没有显著差别。以上提示 ,脂多糖能抑制胎儿主动脉平滑肌细胞合成基质金属蛋白酶 1 ,但对基质金属蛋白酶抑制物 1的合成没有影响     

转化生长因子-β_1对大鼠血管平滑肌细胞产生基质金属蛋白酶9作用的实验研究

目的:研究转化生长因子(TGF)-β1对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)产生基质金属蛋白酶(MMP)的调控作用。方法:原代培养大鼠动脉血管平滑肌细胞,用不同浓度(0、1、5、10 ng/m L)的TGF-β1干预血管平滑肌细胞,分别在干预后0、2、4、6、16、24 h裂解细胞提取蛋白和培养基上清,Western Blot检测其中MMP2和MMP9蛋白质的表达。结果:MMP9蛋白质表达随TGF-β1浓度增加而增加,并且随着干预时间的延长也增加,其中10 ng/m L TGF-β1刺激24 h后升高最明显(P0.05),MMP2蛋白质表达却无明显改变。结论:10 ng/m L的TGF-β1刺激血管平滑肌细胞24 h后能产生大量的MMP9。     

普伐他汀对培养巨噬细胞表达基质金属蛋白酶活性的影响

目的　探讨普伐他汀对基质金属蛋白酶 (matrixmetalloproteinases ,MMPs)活性的影响及其与粥样斑块稳定性的关系。方法　从SD大鼠腹腔取巨噬细胞体外培养 ,接种于 2 4孔板中 ,逐孔加入普伐他汀 ,终浓度分别为 10 - 3、10 - 4及 10 - 5mol L ,每种浓度 3孔 ,分别在 2 4、4 8及 72h收集上清液 ,未加药孔为空白对照 ,采用酶谱分析法测量上清液中MMPs的活性。结果　巨噬细胞上清液中有MMP 2及MMP 9的活性表达 ,以 2 4h时活性最强。普伐他汀可以降低其活性 ,随着浓度的增加 ,抑制作用越明显。结论　普伐他汀可以使巨噬细胞产生的MMPs活性降低 ,可能使纤维帽中胶原的降解减少 ,从而增加粥样斑块的稳定性     

基质金属蛋白酶与血管平滑肌细胞的增殖和迁移

基质金属蛋白酶是一种Zn^2 依赖性的内肽酶所组成的酶家族，通过调节细胞外基质的降解影响血管平滑肌细胞的增殖和迁移。其激活，活性调节机制十分复杂，本文对近年来相关研究作一综述。     

基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9与急性肺损伤关系的研究进展

急性肺损伤是由多种肺内外因素如严重创伤、感染、休克、脓毒症和大量输血等原因引起的弥漫性肺实质损伤.各种原因引起一系列炎症细胞在肺内聚集和活化,释放细胞因子、生长因子及其他炎症介质,引起基质金属蛋白酶(MMP)的合成和活化.MMP-2、MMP-9通过破坏基底膜、促进炎症过程中有关细胞的迁移以及细胞外基质重建,在急性肺损伤...     

CD137信号通过外泌体传递活化T细胞核因子c1介导小鼠血管平滑肌细胞钙化

目的探讨外泌体在CD137信号诱导的小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化中的作用。方法组织贴壁法提取小鼠胸主动脉VSMC,将细胞分为2组,即对照组和CD137激动组,用试剂盒提取外泌体,并用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析法及Western blot鉴定和分析,荧光显微镜观察VSMC摄取外泌体。构建活化T细胞核因子c1(sh-NFATc1)慢病毒载体并感染VSMC。实验分为3组:对照组外泌体处理组、CD137激动组外泌体处理组、沉默NFATc1+CD137激动组外泌体处理组。采用Western blot检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨形成蛋白2(BMP-2)、Runt相关转录因子2(Runx-2)蛋白表达量。Von Kossa染色检测VSMC内钙盐沉积情况。结果 Western blot结果显示,2组微囊泡均表达外泌体表面标记蛋白CD9、CD81;电镜下外泌体成圆形和杯托状,直径在30～100 nm;CD137激动组外泌体中NFATc1蛋白表达显著增多。与对照组外泌体处理组比较,CD137激动组外泌体处理组钙化相关指标BMP-2、Runx-2蛋白表达显著增高,同时α-SMA表达显著下降;与CD137激动组外泌体处理组比较,沉默NFATc1+CD137激动组外泌体处理组BMP-2、Runx-2蛋白表达显著减少,α-SMA表达显著增高。Von Kossa染色结果显示,CD137激动组外泌体处理组VSMC钙盐沉积多于对照组外泌体处理组,而沉默NFATc1+CD137激动组外泌体处理组钙盐沉积比CD137激动组外泌体处理组显著降低。结论 CD137信号通路通过外泌体转运NFATc1介导VSMC钙化。     

CD137-CD137L信号通过TRAF6/JNK/AP-1通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1表达

目的探讨CD137-CD137L信号是否通过肿瘤坏死因子受体相关因子6/c-Jun氨基末端激酶/活化蛋白1(TRAF6/JNK/AP-1)途径调控小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)活化T细胞核因子c1(NFATc1)的表达。方法采用组织块原代培养小鼠VSMC,第3~5代细胞用于实验。VSMC分为6组:对照组、CD137刺激组、CD137抑制组、siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组。Western blot检测各组TRAF6、磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化AP-1(p-AP-1)、NFATc1蛋白表达水平。免疫荧光法检测各组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达。结果 (1)与对照组相比,CD137刺激组(CD137-CD137L信号激活)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达水平明显升高(P0.05);与CD137刺激组相比,CD137抑制组(CD137-CD137L信号抑制)TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1蛋白表达水平明显降低(P0.05)。(2)采用siRNA技术分别沉默TRAF6、JNK、AP-1后,与CD137刺激组相比,siTRAF6干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P0.05);siJNK干预组TRAF6表达无改变,而p-JNK、p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P0.05);siAP-1干预组TRAF6、p-JNK表达无明显改变,而p-AP-1、NFATc1表达明显减少(P0.05)。(3)免疫荧光检测显示:CD137刺激组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量升高(P0.05);CD137抑制组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量明显降低(P0.05);siTRAF6干预组、siJNK干预组、siAP-1干预组TRAF6、p-JNK、p-AP-1、NFATc1荧光表达量与上述蛋白表达结果一致。结论 CD137-CD137L信号可通过TRAF6/JNK/AP-1通路影响NFATc1的表达。     

血管平滑肌细胞表型的成骨转换与血管钙化

血管钙化是血管壁中钙盐沉积的过程,导致血管硬化和失去弹性。它通常发生在中老年人,尤其是患有动脉粥样硬化、高血压、糖尿病和慢性肾脏疾病等疾病患者。血管钙化是一个主动的过程,其中平滑肌细胞的成骨转换是重要事件之一。这些细胞在钙化过程中释放钙离子,导致钙盐的沉积,形成钙化斑块。血管钙化受多种因素调节,包括高磷、高钙水平及氧化应激、机械应力等。此外,中医药研究在减轻血管钙化方面显示出潜力,例如灵芝孢子粉和其衍生物,三七、黄芩素、根皮素、雷公藤甲素等。这些研究为进一步理解和干预血管钙化提供了重要的证据,并揭示了一些潜在的抑制因子,可以作为未来治疗血管钙化的研究方向。     

血管平滑肌细胞自噬与血管钙化关系的研究进展

细胞自噬是细胞利用溶酶体进行自身降解的生物学过程,是一种进化上高度保守的分解代谢过程,对于维持细胞稳态起着重要作用。血管钙化是广泛存在于动脉粥样硬化、糖尿病、终末期肾病等多种疾病中的共同病理表现,是影响心血管疾病死亡率的独立危险因素,目前尚缺乏有效的治疗手段。近年来发现血管平滑肌细胞(VSMCs)自噬可通过调节其降解活动及平滑肌细胞的成骨样分化,从而在调控血管钙化中发挥重要作用。本文就VSMCs自噬与血管钙化的最新研究进展做一综述。     

CD137-CD137L interaction induced the calcification of mouse smooth muscle cells via P38 MAPK signaling

<正>Objective To explore whether CD137-CD137L interaction could induce mouse vascular smooth muscle cells (VSMCs) calcification via P38 MAPK signaling.Methods (1) Mouse VSMCs obtained from 8-week old male C57 mice were cultured by using method of tissue piece inoculation. The cells from 3 to 8 passage were     

β-磷酸甘油诱导体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞的钙化

目的:研究β磷酸甘油对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞的钙化作用。方法:采用组织块培养法体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞。细胞分为钙化组和正常组。钙化组加入10mmol/Lβ磷酸甘油,0.1μmol/L胰岛素及50μg/L维生素C（钙化培养基）诱导细胞钙化,继续培养14d。茜素红S染色观察钙结节计数并测定细胞钙沉积含量。采用四唑盐比色法（MTT）测量细胞增殖。结果:钙化组钙结节计数为（7.4±3.8）%,较正常组（4.3±1.9）%显著增加（P<0.05）;细胞钙沉积含量为（5.4±0.4）mmol/g蛋白,较正常组（1.2±0.5）mmol/g蛋白显著增加（P<0.05）。MTT检测细胞增殖,钙化组细胞增殖为0.071±0.011,较正常组0.040±0.009明显增加（P<0.01）。结论:β磷酸甘油能诱导体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞的钙化,钙化能促进平滑肌细胞的增殖。     

同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞的增殖作用

目的 :探讨同型半胱氨酸 (Hcy)对血管平滑肌细胞 (VSMC)生长的影响。方法 :采用MTT法检测细胞数量及流式细胞术测定细胞周期。结果 :5× 10 -4mol/LHcy干预处于生长静止期的细胞 4 8、72h细胞数量较对照组明显增加 (P <0 .0 1) ,分别增加了 5 0 .75 %和 84 .83%。当采用 1× 10 -4,2 .5× 10 -4,5× 10 -4,1× 10 -3mol/L的Hcy干预细胞 72h后 ,其细胞数量分别较对照组增加了4 1.5 6 % ,5 8.4 4 % ,6 6 .2 3% ,74 .0 2 %。并且当 5× 10 -4mol/LHcy干预细胞 2 4、36、4 8h后 ,其S期、G2 /M期在细胞周期的比例也明显增加 (P <0 .0 1)。结论 :Hcy能明显诱导VSMC增殖 ,并呈现时间和剂量依赖关系 ,提示Hcy通过诱导VSMC的增殖可导致动脉粥样硬化的发生。     

CD137／CD137L、白细胞介素-2在大肠癌中的表达及其临床意义

目的：检测大肠癌组织中 CD137、CD137L 和白细胞介素（IL）-2的表达,并探讨其对大肠癌发生和发展的作用。方法收集肠镜切除并经病理检查确诊的30例首发原发结直肠癌患者的癌组织、癌旁组织、远离癌肿的正常组织,采用免疫组织化学法检测其 CD137、CD137L 和 IL-2的表达。结果CD137在3种组织中均呈阴性表达。CD137L 在3种组织中的阳性表达率呈下降趋势（分别为80．0％、16．7％和0）,差异有统计学意义（P ＜0．05）,但不同年龄、性别、肿瘤大小、分化程度及肿瘤位置比较,CD137L 的表达差异无统计学意义（P ＞0．05）。CD137L 与 IL-2间无相关性。结论CD137L 在大肠癌组织及癌旁组织中的阳性表达率较高,CD137L 可能与大肠癌发生有关,对大肠癌早期诊断有一定的指导意义。     

CD40-CD40配体对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及迁移影响

目的:观察CD40-CD40配体(CD40-CD40L)相互作用对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖及迁移的影响。方法:应用组织贴块法进行SD大鼠主动脉VSMC原代培养,以3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法分别测定VSMC增殖,VSMC的迁移采用琼脂糖凝胶刮取法,用倒置显微镜观察。结果:CD40-CD40L相互作用能明显促进VSMC3H-TdR、3H-Leu向细胞的掺入率,两者具有时间、剂量依赖性,CD40-CD40L相互作用随CD40L浓度的增加及刺激时间延长(30h内),能明显增加VSMC迁移率,抗-CD40单克隆抗体能明显抑制上述效应。结论:CD40-CD40L相互作用能明显促进主动脉VSMC增殖和迁移。