微小RNA-206减轻结肠上皮NCM-460细胞炎症反应的机制研究

目的 探究微小RNA(miR)-206对人结肠上皮NCM-460细胞炎症反应及核转录因子(NF)-κB信号通路的调控作用。方法 体外培养人结肠上皮NCM-460细胞,根据不同干预手段将其分为Con组、脂多糖(LPS)组、Inhibitor NC+LPS组和miR-206 inhibitor+LPS组,每组3次重复。分别采用实时荧光定量PCR、倒置显微镜、细胞计数试剂盒(CCK)-8、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Hoechst 33258染色、酶联免疫吸附测定(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blot)对miR-206表达水平、细胞形态、细胞活力、增殖率、凋亡率、炎性细胞因子及相关蛋白表达水平进行分析。结果 与Con组比较,LPS组细胞生长受到抑制,细胞活力及增殖率、IL-10、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达水平均显著降低,而miR-206表达水平、细胞凋亡率、肿瘤坏死因子(TNF)-α、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65均显著增加;与Inhibitor NC+LPS组相比,miR-206 i...     

微小RNA-375调控NIT-1胰岛细胞脂性凋亡

目的 探讨提高或降低内源性微小RNA-375(miRNA-375)的水平是否影响小鼠胰岛β细胞NIT-1的脂性凋亡.方法 以500μmol/L长链不饱和游离脂肪酸棕榈酸孵育NIT-1 48 h,建立脂性凋亡模型,并以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测重组胰岛素样生长因子1(V1)表达水平.将NIT-1分为:空白组(正常培养细胞),空转组(等量lipo 2000),阴性对照miRNA组(等量lipo 2000+阴性对照miRNA),miRNA-375组(等量lipo 2000+miRNA-375)(提高内源性miRNA-375水平),2'-O-me-375组(等量lipo 2000+2'-O-me-375)(降低内源性miRNA-375水平).在2 ml转染体系,通过转染脂质体lipo 2000 5 μl(空白组不加),以80 nmol/L miRNA或对照物(空转组不加)转染NIT-1,72 h后各组分别予500μmoL/L棕榈酸孵育48 h.72 h后各组分别予500μmol/L棕榈酸孵育48 h.以Hochest 33342染色和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测并计算凋亡率,以Western blot检测V1表达水平.结果 棕榈酸组凋亡细胞数明显比对照组增多,而V1表达水平比对照组下降约66.8%(t=5.051,P＜0.0001).与其他三组比较,miRNA-375组脂性凋亡率最高,比空白组升高73.7%(Hochest:P＜0.0001;TUNEL:P＜0.0001),比阴性对照miRNA组升高1.47倍(Hochest:P＜0.0001;TUNEL:P＜0.0001).miRNA-375组V1表达水平降低,比阴性对照miRNA组降低56.06%(P＜0.05).而另一方面,与其他三组比较,2'-O-me-375组脂性凋亡率最低,比空白组降低64.7%(Hochest:P＜0.0001;TUNEL:P＜0.0001),比阴性对照miRNA组下降49.6%(Hochest:P＜0.0001;TUNEL:P=0.001).2'-O-me-375组V1表达水平最高,比空白组升高5.33倍(P＜0.0001),比阴性对照miRNA组升高75.9%(P=0.021).结论 棕榈酸诱导小鼠胰岛细胞凋亡伴有V1表达水平下降;miRNA-375参与调节小鼠胰岛β细胞的脂性凋亡.     

阿尔茨海默病小胶质细胞神经毒性研究进展

阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病。小胶质细胞（microglia，MG）是中枢神经系统的免疫细胞，在致炎因素作用下小胶质细胞被激活成反应性小胶质细胞，反应性小胶质细胞既具有保护神经元的作用，也能分泌细胞毒因子、补体蛋白而损害神经元。尽管目前其发病机理还不清楚，     

微小RNA-30a对缺氧条件下心肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨微小RNA-30a(miR-30a)对缺氧条件下心肌细胞凋亡的影响及机制。方法将H9C2细胞随机分为对照组(未做处理)、缺氧组(缺氧处理24 h)、缺氧+阴性对照(NC)组(转染miR-30a阴性对照后,缺氧处理24 h)和缺氧+miR-30a组(转染miR-30a mimics后,缺氧处理24 h)。采用实时定量PCR检测各组细胞中miR-30a的表达水平,比色法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western blot检测STAT3信号通路相关蛋白信号转导与转录因子3(STAT3)、p-STAT3和切割型活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)的表达。结果缺氧处理后H9C2细胞中miR-30a、cleaved caspase-3和p-STAT3表达明显升高,细胞上清液中SOD含量降低,MDA和LDH含量升高,细胞存活率降低,凋亡率升高,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。转染miR-30a mimics上调miR-30a表达后,能够明显增强缺氧处理下的上述作用。结论 MiR-30a可通过激活STAT3信号通路增强氧化应激损伤,促进缺氧诱导的细胞凋亡。     

微小RNA-27与心血管疾病

微小RNA(miRNA)对心血管疾病的发生发展起重要的调控作用。miR-27可以通过调节多种靶基因的表达直接或间接作用于心血管疾病的发生发展过程,该文就miR-27在心血管疾病中的调控作用机制作一综述。     

微RNA-29家族降解PTEN mRNA促进非小细胞肺癌细胞存活与淋巴结侵袭

目的:探索微RNA(microRNA,miRNA/miR)-29家族对淋巴结侵袭性非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、侵袭的影响及潜在的分子机制.方法:TCGA数据库分析磷酸酶和张力蛋白同源基因(phosphatase and tension homology de...     

微小RNA-144表达对大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-144(miR-144)对心肌细胞凋亡的影响.方法运用转染的方法,使大鼠H9C2胚胎心肌细胞中高表达miR-144(miR-144组),实时定量PCR确定miR-144表达上调后,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、半胱天冬酶(Caspase)-3、流式细胞术等方法测定细胞凋亡水平,观察miR-144对细胞凋亡的影响.空白脂质体及随机微小RNA片段作为空白对照及阴性对照.结果实时定量PCR结果显示,miR-144组miR-144的表达(2178.84±838.52)明显高于空白对照组(1.00±0.00)和阴性对照组(2.06±0.73)(P均＜0.01).与阴性对照组和空白对照组比较,miR144组细胞增殖明显低、Caspase-3活性明显高、细胞凋亡率明显高,而阴性对照组与空白对照组以上数值比较差异均无统计学意义.结论合成的miR-144片段(miR-144 mimics)能选择性上调miR144的表达,并促进心肌细胞凋亡、抑制细胞增殖.

Abstract：

Objective To investigate the effects of microRNA-144 (miR-144) expression on H9C2(2-1) myocytes. Methods MiR-144 was up-regulated in primary cultured H9C2 (2-1) myocytes through transfection. Cells transfected with LipofectamineTM 2000 and its mixture with miRNA synthesized randomly as blank control and negative control respectively. The up-regulation of miR-144 was confirmed by real-time PCR. Cell apoptosis was evaluated by means of CCK-8, Caspase-3 and flow cytometry. Results Real-time PCR results showed that the miR-144 expression was obviously increased in miR-144 up-regulation group (2178.84±838.52) compared with negative (2.06±0.73) and blank (1.00±0.00) control group ( all P ＜0. 01 ). The proliferation was lower, the activity of Caspase-3 was elevated and the apoptosis rates were significantly increased in miR-144 up-regulation group compared with negative and blank control group,while no significant difference was found between the latter 2 groups. Conclusion MiR-144 mimics may selectively up-regulate the expression of miR-144 in myocardial cells and consequently promote apoptosis and inhibit proliferation in myocardial cells.     

微小RNA-144表达对大鼠心肌细胞凋亡的影响

Objective To investigate the effects of microRNA-144 (miR-144) expression on H9C2(2-1) myocytes. Methods MiR-144 was up-regulated in primary cultured H9C2 (2-1) myocytes through transfection. Cells transfected with LipofectamineTM 2000 and its mixture with miRNA synthesized randomly as blank control and negative control respectively. The up-regulation of miR-144 was confirmed by real-time PCR. Cell apoptosis was evaluated by means of CCK-8, Caspase-3 and flow cytometry. Results Real-time PCR results showed that the miR-144 expression was obviously increased in miR-144 up-regulation group (2178.84±838.52) compared with negative (2.06±0.73) and blank (1.00±0.00) control group ( all P ＜0. 01 ). The proliferation was lower, the activity of Caspase-3 was elevated and the apoptosis rates were significantly increased in miR-144 up-regulation group compared with negative and blank control group,while no significant difference was found between the latter 2 groups. Conclusion MiR-144 mimics may selectively up-regulate the expression of miR-144 in myocardial cells and consequently promote apoptosis and inhibit proliferation in myocardial cells.     

微小RNA-144表达对大鼠心肌细胞凋亡的影响

Objective To investigate the effects of microRNA-144 (miR-144) expression on H9C2(2-1) myocytes. Methods MiR-144 was up-regulated in primary cultured H9C2 (2-1) myocytes through transfection. Cells transfected with LipofectamineTM 2000 and its mixture with miRNA synthesized randomly as blank control and negative control respectively. The up-regulation of miR-144 was confirmed by real-time PCR. Cell apoptosis was evaluated by means of CCK-8, Caspase-3 and flow cytometry. Results Real-time PCR results showed that the miR-144 expression was obviously increased in miR-144 up-regulation group (2178.84±838.52) compared with negative (2.06±0.73) and blank (1.00±0.00) control group ( all P ＜0. 01 ). The proliferation was lower, the activity of Caspase-3 was elevated and the apoptosis rates were significantly increased in miR-144 up-regulation group compared with negative and blank control group,while no significant difference was found between the latter 2 groups. Conclusion MiR-144 mimics may selectively up-regulate the expression of miR-144 in myocardial cells and consequently promote apoptosis and inhibit proliferation in myocardial cells.     

小胶质细胞与阿尔茨海默病

自从研究发现并证实阿尔茨海默病病人脑部易损区域的小胶质细胞大量表达其活化标志-主要组织相容性复合体Ⅱ类分子（MHCⅡ），作为阿尔茨海默病两个发病机制中潜在的中介物，小胶质细胞已经引起人们越来越多的关注。这两个发病机制其一是伴随阿尔茨海默病特征性病理改变的局部炎症反应；其二是β-淀粉样蛋白（Beta-amyloid protein，Aβ）的清除。大量的在体、原位及离体研究结果提示这两个机制是相互联系的，即β-淀粉样蛋白沉积吸引小胶质细胞，并激活小胶质细胞，使之产生炎性介质，其中一些炎性介质反过来诱导更多的小胶质细胞趋化、活化，另一些则导致局部的组织损伤。而在β-淀粉样蛋白沉积部位，一旦活化的小胶质细胞吞噬清除β-淀粉样蛋白，可能导致其本身进一步的活化。     

小胶质细胞与阿尔茨海默病

小胶质细胞是中枢神经系统的免疫细胞,在致炎因素作用下小胶质细胞被激活成反应性小胶质细胞,反应性小胶质细胞既具有保护神经元的作用。也能分泌细胞毒因子、补体蛋白而损害神经元。目前认为β淀粉样蛋白沉积引起的炎症反应是阿尔茨海默病的病理机制核心。免疫组化显示老年斑中含有急性期反应蛋白、炎性细胞因子、补体蛋白、反应性小胶质细胞等。     

微小RNA-16对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和炎症反应的影响及其机制研究

目的：探讨微小RNA(miR)-16对急性心肌梗死（AMI）大鼠心肌细胞凋亡和炎症反应的影响,并分析其作用机制。方法：选取SPF级雄性SD大鼠80只,采用左前降支（LAD）永久结扎法建立AMI模型。实验分为假手术组（sham组）、急性心肌梗死组（AMI组）、重组腺相关病毒血清型9(r AAV9)-mi R-16抑制剂阴性对照组（r AAV9-anti-NC组）、r AAV9-mi R-16抑制剂组（r AAV9-anti-mi R-16组）、rAAV9-miR-16抑制剂+维甲酸受体相关孤核受体A(RORA)短发夹RNA的阴性对照组（r AAV9-anti-mi R-16+sh-NC组）、rAAV9-miR-16抑制剂+RORA沉默的短发夹RNA组（r AAV9-antimi R-16+sh-RORA组）,每组12只。尾静脉注射含mi R-16抑制剂、RORA短发夹RNA(sh-RORA)及其阴性对照的腺病毒进行干预,sham组和AMI组经尾静脉注射等体积的生理盐水,注射2周后,超声心动图检测大鼠左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期内径（LVESD）、左心室射血分数（LVE...     

微小RNA-221对HepG2细胞增殖及其凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-221(miR-221)对肝癌细胞株HepG2细胞增殖与凋亡的影响.方法 将miR-221阻遏物及模拟物转染至HepG2后,用实时荧光定量RT-PCR检测miR-221的表达水平;用细胞增殖试剂盒、Hoechst 33342及碘化丙啶(PI)双重染色、流式细胞仪及caspase3/7活性试剂盒检测HepG2细胞增殖与凋亡情况.对数据进行多样本的单因素方差分析,两两比较采用LSD法;相关性比较用Pearson检验.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-221阻遏物后其表达受到抑制,而转染miR-221模拟物可促进其表达.细胞增殖试剂盒及Hoechst 33342/PI染色结果显示,48 h后miR-221阻遏物明显抑制HepG2细胞增殖(P＜0.05),而miR-221模拟物促进HepG2细胞增殖(P＜0.05),两种方法结果呈正相关(r=0.993,P＜0.01).流式细胞仪检测细胞周期显示,miR-221模拟物组G1期细胞比例(47.6%±1.53%)明显低于空白对照组(59.00%±1.00%)及阴性对照组(58.00%±1.00%,F=81.77,P＜0.01); S期细胞比例(20.33%±1.15%)明显高于空白对照组(11.00%±1.00%)及阴性对照组(12.00%±1.00%,F=70.90,P＜0.01).Hoechst 33342/PI染色、流式细胞仪膜联蛋白V凋亡试剂盒检测均显示,转染miR-221阻遏物48 h后,细胞凋亡和坏死增加(P＜0.05),差异有统计学意义.Caspase-3/7试剂盒检测caspase-3/7活性变化结果显示,转染miR-221阻遏物24 h后,细胞caspase3/7活性明显增高(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 miR-221可促进肝癌细胞生长增殖,抑制miR-221表达可诱导细胞凋亡.miR-221有望成为治疗肝癌新的分子靶点之一.     

辣椒素促进大肠癌细胞凋亡作用机制的研究

目的观察辣椒素对大肠癌细胞增殖和凋亡的作用,进一步了解其作用机制是否参与经典Wnt信号通路和(或)非经典Wnt信号通路。方法用免疫组化染色法显示大肠癌细胞Ls174是否表达COX-2、β-catenin、STAT3、AP-1。不同浓度梯度的辣椒素在不同时间点24 h、48 h、72 h作用于大肠癌细胞后,用MTT法观察其对大肠癌细胞增殖率的影响,同时用流式细胞仪检测其对大肠癌细胞凋亡率的影响。用荧光定量PCR仪分别检测基因COX-2、β-catenin、STAT3、AP-1 mRNA的表达量在辣椒素对其作用前后的变化。结果免疫组化染色法显示大肠癌细胞Ls174中,COX-2、β-catenin、STAT3、AP-1均呈阳性表达。辣椒素可下调COX-2和β-catenin mRNA的表达。200~400μmol/L辣椒素作用大肠癌细胞24~48 h后COX-2 mRNA下调为对照组的18.0%~89.0%,β-catenin mRNA下调为对照组的21.6%~81.9%,且下调幅度随辣椒素浓度的加大及作用时间的延长而增强。STAT3的表达在24~48 h内则增加了20.0%~100%。而AP-1的表达则无明显变化。MTT法检测显示其对细胞增殖的影响呈时间和浓度依赖。100~400μmol/L辣椒素作用细胞24 h,细胞增殖的抑制率由4.5%增至59.0%,延长至48 h后抑制率为65.0%~87.0%,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测的细胞凋亡率随浓度及时间延长也呈现出依赖性,且细胞周期G1期由28.0%上调至40.0%,而S期则由58.0%下调至34.5%。结论辣椒素在抑制大肠癌细胞增殖的同时促进细胞的凋亡,其作用呈时间和浓度依赖。     

微小RNA-190低表达调控肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA(miR)-190对肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的A549细胞分为对照(Ctrl)组、抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)组和miR-190抑制剂(anti-miR-190)组,转染miR-190抑制剂及其阴性对照后,采用实时荧光定量PCR检测检测A549细胞...     

微小RNA-760在H9c2细胞中的表达及对凋亡的影响

目的探讨微小RNA-760(miR-760)在缺血再灌注(H/R)后H9c2细胞中的表达及对凋亡的影响。方法采用H9c2细胞制备H/R模型,通过转染调控H9c2细胞的miR-760表达,并通过系统随机化法分为对照组、模型组(H/R组)、阴性对照组(H/R+miR NC组)和H/R+miR-760 mimics组,以RT-PCR检测H9c2细胞中miR-760的表达,CCK-8检测miR-760对H9c2细胞活力的影响,流式细胞术检测miR-760对H9c2细胞凋亡的影响,Western blot检测miR-760对心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3表达的影响。结果 miR-760在H/R组H9c2细胞中的相对表达量较对照组显著降低(P<0.001),而H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的miR-760表达量较H/R组明显上调(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞活力显著降低(P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的活力显著增加(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞的凋亡率显著增加(P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的凋亡率显著降低(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞的Bcl-2表达量显著下调,Bax和cleaved caspase-3表达量显著上调(均为P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组的Bcl-2表达量显著上调,Bax和cleaved caspase-3表达量显著下调(均为P<0.001)。结论 miR-760在H/R后H9c2细胞中表达下调,上调miR-760的表达能够抑制H9c2细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-2、下调Bax和cleaved caspase-3的表达有关。     

阿尔茨海默病与细胞凋亡及其基因调控

细胞凋亡是阿尔茨海默病神经细胞的死亡形式,受多种基因和调节剂的控制,其中促进细胞凋亡的主要有Bax、Fas抗原、P_(53)、c-fos、c-jun、突变的App_(695)、P_(75)NGRF和NFkb;抑制凋亡的主要是Bcl-2基因。     

微小RNA-126与心脑血管疾病的研究进展

<正>大量研究表明,非编码RNA在心血管疾病中起到重要作用,在非编码RNA中,微小RNA(microRNA,miRNA)是最具有代表性的分子,它是近22个核苷酸序列的RNA,通过不完全互补配对的原则与信使核糖核酸(mRNA)的3′端非翻译区特异性结合,从而使mRNA降解、抑制或者激活,调控体内大约1/3的基因表达。miRNA在生物体内细胞的生长、分化和凋亡过程中扮演着重要的角色,比如我们前期     

微小RNA-21与心血管疾病关系的研究进展

<正>微小RNA(microRNA,miRNA)是广泛存在于真核生物中的一类长度为20～24个核苷酸所构成的内源性非编码调控单链小分子RNA,它是由含有茎环结构的miRNA前体经Dicer剪切而成。越来越多的研究证实,miRNA作为重要的转录后调节基因,通过抑制靶信使mRNA的翻译而起到重要的负性调控作用,参与细胞的分化、增殖、凋亡以及多种生物组织的发育调节过程[1]。包括miRNA-21在内的     

微小RNA-155与心血管疾病关系的研究进展

MicroRNAs是一类单链、保守的非编码小RNA,其作用是抑制靶信使的转录和翻译,其中微小RNA-155是其家族中的一员,同时亦是一种重要的多功能调节因子,与心血管系统密切相关,可通过调节各种分子和细胞机制进而影响心血管疾病的发生发展.