基质金属蛋白酶-8在寻常型银屑病患者血清及皮损中的表达研究

 目的:探究基质金属蛋白酶-8（MMP-8）在寻常型银屑病（PV）炎症反应中的作用。方法:将20例PV患者根据银屑病面积和严重程度指数（PASI）分为轻度组6例、中度组6例及重度组8例。用ELISA法检测并比较PV患者组及正常对照组(12例)血清中MMP-8浓度;用荧光定量PCR扩增并比较不同病情严重程度组间皮损处以及外观正常的周边皮肤MMP-8相对表达量;用免疫组化法观察MMP-8在皮损部位的分布状况。结果:血清MMP-8浓度比较：轻度组明显低于对照组(t=2.54,P=0.022）、重度组（t=2.69,P=0.020）。PV患者皮损部位MMP-8表达明显高于皮损相邻部位外观正常的皮肤（t=2.91,P=0.009）;重度组PV皮损部位MMP-8表达明显高于轻度组（t=3.45,P=0.005）及中度组（t=2.74,P=0.018）。在PV皮损部位,MMP-8主要表达于表皮基底细胞及棘细胞,而在皮损周边部位,MMP-8在基底细胞中表达较明显。真皮中MMP-8主要表达于小血管处。结论:MMP-8在炎症反应较强的皮损中表达上升,推测其通过调控炎症反应及促进血管新生等参与PV的免疫病理进程。     

RUNX家族在寻常型银屑病皮损中的表达

 目的 探究Runt相关转录因子（RUNX）家族在寻常型银屑病（PV）皮损中的表达和分布，并分析其水平与皮损中增殖、凋亡、免疫信号通路的相关性。方法 通过基因芯片分析14例健康人皮肤（HC）和17例PV患者皮损中RUNX1、2、3的转录水平，免疫组化分析11例HC、11例慢性湿疹（CE）和12例PV患者皮损中RUNX1、2、3的蛋白水平和分布，利用R语言分析基因芯片中RUNX与其他基因的相关性，并进行GO富集分析。结果 转录水平上，相比HC，PV皮损中RUNX1下调（HC：0.61±0.06，PV：0.54±0.02，P<0.01）、RUNX3上调（HC：0.77±0.04，PV：0.84±0.05，P<0.01），而RUNX2的表达无差异（HC：0.78±0.05，PV：0.82±0.04，P=0.18）。免疫组化提示皮肤中RUNX1在表皮和真皮浸润炎症细胞中均有表达，而RUNX2、RUNX3则在炎症细胞上更为富集。相比HC，CE和PV表皮中RUNX1蛋白水平下调（HC：0.24±0.06，PV：0.11±0.02，CE：0.11±0.02，HC vs PV：P＜0.01，HC vs CE：P＜0.01），PV表皮的RUNX2较HC、CE升高（HC：0.02±0.01，PV：0.04±0.02，CE：0.02±0.02，HC vs PV：P=0.018，PV vs CE：P=0.019），RUNX3在三组间无差异（HC：0.005±0.004，PV：0.011±0.016，CE：0.015±0.20，P=0.861）。相关性和功能分析提示PV中RUNX1与增殖凋亡分子（BCL2A1、WNT2、WNT7B、WNT8A、WNT9B）相关，与Th17相关细胞因子（IL-17A、IL-17F、IL-17E）相关。与RUNX3呈正相关的基因主要富集在T细胞、淋巴细胞的活化和分化等通路，负相关的基因参与负调节WNT通路。RUNX3与Th1（STAT4、CXCR3、TNF）、Th17（CCR6、IL-22）、Treg（TGFB、IL-10）相关分子正性相关。结论 银屑病皮损中RUNX家族表达显著改变，其中RUNX1、3与皮损中的增殖凋亡、T细胞免疫尤其是Th17通路密切相关，可能参与银屑病发病。     

蛋白组学分析寻常型银屑病患者皮损中的差异表达蛋白

 目的: 通过蛋白组学技术探讨寻常型银屑病患者皮损中的差异表达蛋白。方法:纳入6例于2020年6月—9月在我院就诊的寻常型银屑病（PV）患者和6例色素痣患者作为研究对象,手术获取PV患者皮损和色素痣皮损周边正常皮肤组织。通过蛋白组学技术筛选出PV患者（n=4）皮损与正常皮肤组织（n=4）中的差异表达蛋白,并将差异表达蛋白进行GO富集和KEGG富集分析,通过蛋白互作（PPI）分析筛选出PV皮损中的核心蛋白。将核心蛋白在2例PV皮损和2例正常皮肤组织中进行 Western blot验证。结果:相对于正常皮肤组织,PV皮损中发生显著上调的蛋白有291个,显著下调的蛋白有163个,涉及的生物学过程主要为中性粒细胞活化、中性粒细胞介导的免疫、TNF-α介导的信号通路、B细胞介导的免疫、上皮细胞分化及角质化为主,涉及的发病机制可能与IL-17信号通路、氧化磷酸化、PPAR信号通路等有关。PPI结果显示有12个蛋白（S100A7、S100A9、neutrophil gelatinase associated lipocalin、cytochrome c oxidase subunit NDUFA4、fatty acid binding protein 5、peroxisomal acyl coenzyme A oxidase 1、platelet glycoprotein 4、cathepsin B、eosinophil cationic protein、haptoglobin、arginase-1和apoptosis associated speck like protein containing a CARD)可能在银屑病的发病机制中扮演重要作用。相对于正常皮肤组织,PV患者皮损中S100A7 （t=5.54）、S100A9 （t=45.23）、Cathepsin B（t=4.23）、Haptoglobin（t=4.12）和Arginase-1（t=6.65）蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义（均P<0.05）。结论:多种免疫信号通路及差异表达蛋白可能在PV的发病机制中扮演了重要作用,为PV的治疗靶点研究进一步提供了方向。     

Toll样受体2、4 和9在皮肤结核皮损中的表达

目的 研究Toll样受体2、4和9 （TLR-2、TLR-4、TLR-9）在寻常狼疮和疣状皮肤结核皮损中的表达,探讨其在皮肤结核发病中的作用。方法 经临床与病理确诊的皮肤结核（包括寻常狼疮和疣状皮肤结核）患者皮损标本18份,斑块状银屑病皮损15份为阳性对照,色素痣边缘正常皮肤10份为阴性对照。用免疫组化法观察TLR-2、TLR-4、TLR-9的表达情况。采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,组间比较行t检验。结果 TLR-2在正常皮肤表达于除基底层外的表皮全层,而在皮肤结核和银屑病皮损表达于表皮的中上层,3组的表达强度均为高表达（A值分别为0.28 ± 0.03、0.25 ± 0.04和0.25 ± 0.05）,3组差异无统计学意义（P > 0.05）。TLR-4在正常皮肤和银屑病呈低或无表达（A值分别为0.07 ± 0.09和0.02 ± 0.05）,而皮肤结核（0.16 ± 0.07）呈低表达,其表达强度高于正常皮肤（t = 2.58,P ＜ 0.05）和银屑病皮损（t = 6.24,P ＜ 0.01）。TLR-9在正常皮肤和皮肤结核表达于表皮全层、附属器及血管壁,而皮肤结核的表达强度（A值为0.25 ± 0.05）高于正常皮肤（0.19 ± 0.05）,两组比较,t = 2.88,P ＜ 0.05。结论 TLR-2、TLR-4和TLR-9在皮肤结核皮损中均存在表达,其中TLR-4和TLR-9的表达高于正常皮肤,提示其在皮肤结核的免疫应答中可能起一定的作用。     

磷酸化c-Jun氨基末端激酶和P38丝裂原活化蛋白激酶在寻常性银屑病皮损中的表达

目的 探讨磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）和P38丝裂原活化蛋白激酶（p-P38MAPK）在寻常性银屑病皮损中的表达。 方法 收集30例确诊的寻常性银屑病患者皮损,同时收集30例健康人皮肤组织作为对照组。采用免疫组化及Western印迹法分别检测p-JNK和p-P38MAPK蛋白在寻常性银屑病皮损组织和正常人皮肤中的表达情况。 结果 免疫组化结果显示,寻常性银屑病皮损组织p-JNK和p-P38MAPK表达的平均吸光度（AOD）值分别为0.663 ± 0.016和0.436 ± 0.011,均明显高于对照组（0.333 ± 0.009和0.306 ± 0.010）,差异有统计学意义（t = 44.869、21.913,均P < 0.001）。Western印迹法同样显示,寻常性银屑病皮损p-JNK和p-P38MAPK蛋白相对表达量均显著高于对照组,差异均有统计学意义（t值分别为20.477和165.084,均P < 0.05）。结论 JNK和P38MAPK的活化可能参与了寻常性银屑病表皮细胞的过度增殖。     

Th17细胞、IL-17A mRNA及IL-23R mRNA与寻常性银屑病的关系

目的 探讨寻常性银屑病（PV）皮损中IL-17A mRNA及IL-23R mRNA水平、外周血CD4+IL-17+ T细胞数量及它们与疾病严重程度的关系。方法 PV组25例,对照组14例。对PV皮损面积和严重指数（PASI）评分,用RT-PCR检测皮肤中IL-17A mRNA及IL-23R mRNA的水平,并用流式细胞仪测定20例PV患者及10例对照组外周血CD4+IL-17+ T细胞的数量。结果 PV组IL-17A mRNA的水平明显高于对照组（0.996 ± 0.231比0.437 ± 0.096,t = 10.57,P < 0.05）,IL-23R mRNA水平也明显高于对照组（1.006 ± 0.339比0.491 ± 0.196,t = 6.02,P < 0.05）。PV皮损中IL-17A mRNA与IL-23R mRNA的水平与PASI均呈线性正相关（分别为r s ＝ 0.67,P < 0.05;r s ＝ 0.70,P < 0.05）。外周血CD4+IL-17+ T细胞数量在两组差异无统计学意义。PV组中,外周血中CD4+IL-17+ T细胞数量与皮损中IL-17A mRNA、IL-23R mRNA水平无相关性。结论 PV皮损中IL-17A mRNA及IL-23R mRNA 的水平升高,与疾病严重程度相关,外周血Th17细胞数量无改变。     

他克莫司对特应性皮炎皮损中蛋白酶活化受体2表达的影响

目的 观察蛋白酶活化受体2（PAR-2）在特应性皮炎（AD）患者皮肤中的表达以及他克莫司对其表达的影响。方法 比较6例中重度AD患者外用0.1%他克莫司软膏治疗3周前后的临床症状、体征变化,切取患者治疗前后皮损及外观正常的皮肤,6例正常皮肤作对照,免疫组化方法检测皮肤PAR-2的表达变化。结果 PAR-2在皮肤的表皮全层尤其是颗粒层以及毛囊、汗腺、血管内皮细胞、神经纤维样结构均表达。AD患者皮损内角质形成细胞PAR-2染色的平均吸光度为4339.6 ± 115.8,与非皮损部位（4189.0 ± 228.9）和正常对照皮肤（3864.0 ± 237.3）比较,其表达明显升高（t = 2.85,P < 0.05;t = 4.31,P < 0.05）;0.1%他克莫司软膏治疗3周后原皮损处角质形成细胞PAR-2染色的平均吸光度为3942.4 ± 176.6,表达较治疗前明显下降（t = 4.55,P < 0.05）;PAR-2的表达水平与AD患者的瘙痒VAS评分、EASI指数和IGA评分均呈正相关。 结论 PAR-2在AD患者皮损角质形成细胞内的表达增加,表达水平与瘙痒程度和皮损严重程度呈正相关,PAR-2在皮损角质形成细胞内的过度表达可被他克莫司抑制。     

芳香烃受体在特应性皮炎患者外周血及皮损组织中的表达及意义

目的 检测特应性皮炎（AD）患者外周血单个核细胞（PBMC）及血清中芳香烃受体（AhR）及其下游分子的表达水平,并分析其表达与AD患者疾病严重程度与血清中细胞因子的相关性。方法 采用实时PCR检测29例AD患者及17例健康对照PBMC中AhR、细胞色素P4501A （CYP1A1）、芳香烃受体抑制因子（AHRR）和芳香烃受体核转位蛋白（ARNT）mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测AD患者血清中白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-4、IL-22和AhR的表达水平,免疫组化检测AD患者皮损和色素痣患者（21例）的正常皮肤中AhR的表达水平。计量资料比较采用非配对Student′s t检验,计数资料采用χ2检验比较,Pearson检验分析各指标间的相关性。结果 AD组血清AhR水平（41.26 ± 4.52） pmol/L高于健康对照组［（33.73 ± 2.49） pmol/L,t = 6.507,P＜0.001］。AD患者PBMC中AhR mRNA（1.572 ± 0.392比1.000 ± 0.173,t = 6.819,P = 0.007）、AHRR mRNA（2.402 ± 1.716比1.000 ± 0.788,t = 3.722,P = 0.039）、CYP1A1 mRNA（2.258 ± 1.598比1.000 ± 0.796,t = 3.400,P = 0.002）和ARNT mRNA（1.383 ± 0.842比1.000 ± 0.586,t = 1.653,P = 0.105）相对表达量均显著高于健康对照组。AD组皮损组织中AhR的表达量高于正常皮肤对照组（0.191 ± 0.041比0.087 ± 0.017,t = 10.036,P＜0.001）。AD组PBMC中AhR mRNA表达与湿疹面积及严重程度指数呈正相关（r = 0.448,P = 0.019）,与血清IL-6水平呈正相关（r = 0.377,P = 0.046）,AHRR mRNA与血清IL-1β水平呈正相关（r = 0.467,P = 0.021）。结论 AD患者AhR及其下游分子的表达高于健康对照组, 且AhR表达与血清IL-6水平和严重程度呈正相关,推测AhR信号通路在AD发病机制中发挥一定作用,AhR可作为评价疾病严重程度的有效指标。     

白癜风患者外周血单一核细胞Toll样受体7、9 mRNA表达的初步研究

目的 探讨Toll样受体7、9 （TLR7、TLR9）mRNA在白癜风患者外周血单一核细胞（PBMC）中的表达及其意义。方法 应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测50例白癜风患者及25例正常人对照PBMC中TLR7、TLR9 mRNA的表达。采用SPSS11.5软件进行统计学分析,两样本均数比较采用t检验。结果 白癜风患者PBMC中TLR7 mRNA（目的基因绝对定量校正拷贝数为0.85 ± 1.90）、TLR9 mRNA（0.94 ± 2.25）表达均明显高于对照组（分别为0.44 ± 1.18和0.11 ± 0.31,P ＜ 0.05和 ＜ 0.01）;稳定期与进展期、局限型与泛发型白癜风患者TLR7、TLR9 mRNA表达差异均无统计学意义（P值均 ＞ 0.05）。结论 白癜风患者PBMC中TLR7、TLR9 mRNA的表达均上调,TLR7、TLR9的异常表达可能参与白癜风的发病机制。     

银屑病患者皮损和外周血中CD123+BDCA-2+ 浆细胞样树突细胞的表达

目的 探讨CD123+BDCA-2+浆细胞样树突细胞（PDC）在寻常性银屑病患者皮损和外周血中的表达及意义。方法 收集22例寻常性银屑病患者和15例健康人皮肤组织和外周血,免疫组化法检测患者皮损和健康人皮肤组织中PDC的表达水平,流式细胞仪检测外周血中PDC的比例。结果 免疫组化结果显示,银屑病皮损中PDC的表达水平为（10.1 ± 2.1）/mm2,健康对照组为（0.4 ± 0.6） /mm2,银屑病组显著高于健康对照组（t = 17.34,P < 0.01）。银屑病患者外周血中CD123+BDCA-2+PDC占外周血单一核细胞的比例为（0.17 ± 0.07）%,健康对照组为（0.33 ± 0.20）%,银屑病组显著低于健康对照组（t = 4.48,P < 0.01）。结论 PDC通过在皮损中重新分布,在银屑病外周血中下降,可能与银屑病的发生、发展相关。     

甘露糖结合凝集素在寻常性银屑病皮损中的表达

目的 检测甘露糖结合凝集素（MBL）在寻常性银屑病患者皮损中的表达,初步探讨皮肤中MBL蛋白与银屑病发病的关系。 方法 采用免疫组化法和Western印迹检测30例进行期寻常性银屑病患者皮损、非皮损区皮肤（皮损周围外观正常皮肤）及30例健康人对照皮肤中MBL的表达。采用SPSS13.0统计软件进行数据分析,组间资料比较采用t检验。 结果 免疫组化检测显示,银屑病皮损区MBL呈现阳性表达（相对表达量为0.636 7 ± 0.515 1）,非皮损区及健康对照皮肤中MBL表达弱或几乎无表达（分别为0.416 3 ± 0.160 1和0.381 6 ± 0.310 9）,银屑病皮损区较非皮损区和健康对照皮肤显著升高（t值分别为2.24和2.32,均P < 0.05）,非皮损区与健康对照皮肤MBL表达水平间比较差异无统计学意义（t = 1.51,P > 0.05）。Western印迹检测结果显示,银屑病皮损区、非皮损区及健康对照皮肤中均有MBL蛋白表达,相对表达量分别为0.273 1 ± 0.129 4、0.186 3 ± 0.193 1、0.149 2 ± 0.268 7,银屑病皮损区较非皮损区及健康对照皮肤显著增高（t值分别为2.05和2.28,均P < 0.05）,非皮损区与健康对照皮肤表达差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 结论 银屑病患者皮损区MBL蛋白高表达,可能与银屑病的发病存在一定关系。     

寻常型银屑病患者miR-124与Th17 Treg细胞及相关细胞因子表达的关系

 目的探讨寻常型银屑病患者miR-124与Th17 Treg细胞及相关细胞因子表达的相关性。方法选取寻常型银屑病患者100例作为实验组（进行期47例,稳定期53例）,同时选取50例体检健康者作为对照组,采集外周血样本;用PCR法检测各组miR-124表达水平;用流式细胞仪检测Th17和Treg细胞数量;用双抗体夹心ELISA法检测各组细胞因子TNF-α、IFN-γ、TGF-β、IL-6、IL-17、IL-21、IL-23水平;采用RT-PCR法检测各组ROR-γt mRNA和Foxp3 mRNA转录水平,同时分析miR-124表达与Th17 Treg细胞及相关细胞因子表达的相关性。结果银屑病进行期组和稳定期组miR-124表达水平均低于对照组（均P<0.05）。对照组Th17、Treg和Th17/Treg水平分别为（0.64±0.31）%、（5.11±1.45）%和（0.13±0.05）,均低于银屑病进行期组和稳定期组患者（均P<0.05）。寻常型银屑病进行期和稳定期患者TGF-β的浓度分别为（476.52±34.42）、（471.10±52.39） pg/L,均低于对照组（均P<0.05）;而其他细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-17、IL-21和IL-23水平均高于对照组（均P<0.05）。对照组患者ROR-γt mRNA和Foxp3 mRNA值分别为9.14±2.98、2.45±0.97,均高于银屑病进行期组和稳定期组患者（均P<0.05）。对照组miR-124水平与Th17和Treg之间无相关性（r=0.30,P=0.542;r=0.35,P=0.612）,而银屑病进行期组和稳定期组患者miR-124水平与Th17和Treg之间均存在相关性（P<0.05）。IFN-γ、TGF-β、IL-17、IL-21和IL-23与miR-124表达之间均存在相关性（均P<0.05）。结论寻常型银屑病患者Th17和Treg细胞的分化失衡与miR-124表达有关,miR-124表达异常减少可能是寻常型银屑病患者发生发展的因素之一。     

活化抗原CD69、HLA-DR在寻常性银屑病外周血单一核细胞和皮损中的表达

目的 探讨活化抗原CD69和HLA-DR在寻常性银屑病患者外周血CD3+T淋巴细胞和皮损中的表达变化。 方法 流式细胞仪检测20例寻常性银屑病患者和20例健康对照外周血CD3+T细胞中CD69和HLA-DR的表达,同时采用免疫组化的方法检测15例寻常性银屑病患者和10例健康对照皮损组织中HLA-DR的表达并进行对比。两组统计学分析采用双侧t检验。 结果 CD69和HLA-DR在寻常性银屑病患者外周血CD3+T细胞中的表达率分别为（4.70 ± 1.90）%、（8.97 ± 1.79）%,比健康对照组［（1.56 ± 0.95）%、（3.02 ± 1.15）%］明显升高（均P < 0.01）。Pearson相关性分析发现,CD3+HLA-DR+细胞百分比与银屑病皮损和严重程度评分指数（PASI）评分呈正相关（r = 0.5626,P < 0.05）。与健康对照组比较,寻常性银屑病患者皮损真皮中HLA-DR表达升高,但表皮中HLA-DR表达降低（均P < 0.05）,HLA-DR在健康人主要分布在血管周围,而在寻常性银屑病患者则广泛表达于真皮组织。 结论 寻常性银屑病患者外周血CD3+T淋巴细胞及皮损中的炎症细胞存在异常活化,外周血CD3+HLA-DR+细胞与疾病严重程度存在相关性。     

寻常型银屑病患者皮损中白介素-22和S100A7,A8,A9mRNA的表达及关系

目的研究白介素-22(IL-22)和S100A7,A8,A9mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达及关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对35例寻常型银屑病患者皮损和16例正常人皮肤中IL-22,S100A7,A8,A9mR-NA进行检测。结果①IL-22和S100A8,A9mRNA在寻常型银屑病皮损中呈阳性表达,而在正常皮肤中为阴性;S100A7mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达水平为1.133±0.0403,较正常对照组0.744±0.0371明显升高,差异有显著性(P<0.01)。②IL-22mRNA与S100A7,A8,A9mRNA的表达呈显著正相关r1=0.543,r2=0.774,r3=0.621,P均<0.01。结论IL-22和S100A7,A8,A9与银屑病的发生和发展中明确相关,可能成为银屑病治疗新的靶位点。     

p27kip1和ki-67在寻常性银屑病皮损中的表达

目的检测p27kip1和ki-67在寻常性银屑病皮损中的表达水平,探讨其在银屑病发病中的意义。方法用免疫组化SP法检测细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p27kip1和增殖细胞核抗原ki-67在寻常性银屑病皮损及正常人皮肤中的表达水平。结果慢性斑块状与滴状皮损中p27kip1表达水平均显著低于正常人对照组(P<0.05和0.001),而慢性斑块状与滴状差异无统计学意义(P>0.05)。慢性斑块状与滴状皮损中ki-67表达水平均显著高于正常人对照组(P均<0.01);慢性斑块状皮损中ki-67表达水平低于滴状(P<0.01)。在寻常性银屑病皮损中,p27kip1表达和ki-67表达未发现相关性(r=0.08,P>0.05)。结论银屑病的发生可能与p27kip1下调有关;而ki-67的表达水平反映了角质形成细胞增殖状态。     

早幼粒细胞白血病基因在寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞中表达的研究

目的 检测寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞中早幼粒细胞白血病（PML）基因的表达,以探索PML基因与银屑病之间的相互关系。方法 收集年龄18 ~ 65岁、未经系统治疗的寻常性银屑病患者50例,健康人对照45例。分离外周血淋巴细胞,使用RNAprep pure 血液总RNA提取试剂盒提取淋巴细胞RNA,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测外周血淋巴细胞PML基因mRNA的表达;流式细胞仪检测30例银屑病患者和25例健康人对照外周血淋巴细胞PML蛋白荧光强度值。分别用独立样本t检验对检测结果进行统计分析。结果 50例银屑病患者和45例健康人对照外周血淋巴细胞PML mRNA相对定量（RQ）值分别为14.98 ± 3.64和5.50 ± 1.10,银屑病患者组显著高于健康人对照组（两组比较,t = 16.79,P ＜ 0.05）。30例银屑病患者和25例健康人对照外周血淋巴细胞PML蛋白荧光强度值分别为3.13 ± 0.27和2.43 ± 0.21,银屑病患者组亦显著高于健康人对照组（两组比较,t = 6.93,P ＜ 0.05）。结论 PML基因mRNA及蛋白在银屑病患者外周血淋巴细胞中高表达,提示PML基因可能在银屑病的发病中起一定作用。