糖尿病大鼠肾小球产生转化生长因子β的研究

本文检测糖尿病大鼠肾小球产生的转化生长因子β的水平，并探讨体外高糖环境对系统膜细胞产生ＴＧＦβ的影响，建立ＳＴＺ诱发的糖尿病大鼠模型，４周后肾小球分泌的总量及活性ＴＧＦβ均比对照组明显增加，其中活性ＴＧＦβ增加为明显，体外高糖培养后的系膜细下降，而活性ＴＧＦβ却有上升。结果表明高糖环境下肾上球和系膜细胞确实存在着ＴＧＦβ分泌和激活的异常ＴＧＦβ分泌和激活的异常，ＴＧＦβ可能与了糖尿病肾病系膜区扩张     

转化生长因子β介导高糖对系膜细胞生长的抑制作用

转化生长因子β介导高糖对系膜细胞生长的抑制作用南京金陵医院全军肾脏病研究所（南京２１０００２）姚建，黎磊石近来的研究表明：高糖抑制体外系膜细胞的增殖、刺激细胞外基质的产生。高糖的这些作用与转化生长因子β（ＴＧＦβ）对体外系膜细胞的作用相仿，因而推测Ｔ...     

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白和TGF-β1表达的影响

目的：研究醛固酮（ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（SPI）对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白（FN），以及对转化生长因子B1（TGF-β1）基因表达的影响。方法：（1）以不同浓度的ALD（10^-11、10^-9、10^-7mol／L）及／或10^-7mol／L SPI刺激肾小球系膜细胞48h后，用ELISA法测定培养上清中FN的浓度。用半定量RT-PCR法检测该细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。（2）以10^-9mol／L的ALD刺激系膜细胞不同时间（24、48、72h）后，分别用上述方法测定培养上清中FN的浓度和细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。结果：（1）ELISA的结果显示，ALD可促进系膜细胞合成分泌FN，且呈剂量和时间依赖性，SPI能拮抗ALD的作用。（2）半定量RT-PCR的结果显示，ALD可促进系膜细胞FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达，也呈剂量和时间依赖性，SPI也能拮抗ALD的作用。结论：ALD在蛋白和基因水平上均可促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN，及TGF-β1mRNA的表达，SPI能拮抗ALD的作用，具有一定的肾脏保护作用，从而有益于延缓肾小球硬化的进展。     

IgA肾病患者血清IgA1对人肾小球系膜细胞转化生长因子β1/Smads信号通路的影响

目的 研究IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1对人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad3(p-Smad3)和纤连蛋白(FN)的刺激作用,探讨IgA1对TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 体外培养HMC,分5组.即健康对照组、健康人IgA1(NIgA1)刺激组、健康人聚合IgA1(aNIgA1)刺激组、IgAN患者IgA1(PIgA1)刺激组和IgAN患者聚合IgA1(aPIgA1)刺激组.RT-PCR检测各组细胞TGF-β1、p-Smad3和FNmRNA的表达.Western免疫印迹检测HMC p-Smad3蛋白水平.ELISA检测HMC培养上清液中TGF-β1、FN蛋白水平.结果 PIgA1和aPIgA1能显著上调TGF-β1,P-Smad3、FN mRNA和蛋白的表达(P<0.05).aPIgA1上调三者mRNA表达的能力分别为PIgA1的1.5倍、1.3倍和1.5倍(均P<0.05).aPIgA1上调TGF-β1和p-Smad3蛋白表达的能力分别为PIgA1的2.1倍和1.6倍(均P<0.01).在aPIgA1刺激不同时间,TGF-β1和p-Smad3 mRNA表达于12 h达高峰(0.866±0.055和0.891±0.251),于24h回到基线水平.FNmRNA表达于24 h达高峰(0.968±0.031).TGF-β1和p-Smad3蛋白表达逐渐升高,TGF-β1于12 h达高峰[(246.960±1.270)ng/L],p-Smad3于6 h达高峰(0.490±0.046)后开始下降.FN蛋白表达逐渐升高,24 h达高峰[(1.804±0.038)mg/L](均P<0.01).结论 PIgA1和aPIgA1能显著上调HMC TGF-β1、p-smad3、和FNmRNA表达和蛋白水平.且aPIgA1的作用强于PIgA1,提示IgAN患者血清的IgA1,主要是aIgA1可通过TGF-β1/Smads信号通路在IgAN进展中起作用.     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧和TGF-β1表达的影响

目的 探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧(ROS)和转化生长因子β1，(TGF-β1)表达的影响及茶多酚的干预作用。方法 培养人肾小球系膜细胞，分为正常对照组、高糖组、茶多酚组和茶多酚干预组，培养0、12、36h后，用分光光度比色法测定细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，用半定量RT-PCR和免疫细胞化学法检测细胞内TGF-β1，mRNA和蛋白表达的变化。结果 高糖导致系膜细胞SOD活性下降和MDA含量升高，上调TGF-β1，mRNA和蛋白表达，随时间延长更为明显；茶多酚干预可拮抗高糖时系膜细胞的上述改变。结论 高糖能促进人肾小球系膜细胞ROS产生增加，上调TGF-β1 mRNA和蛋白表达，茶多酚能抑制高糖对系膜细胞的作用。     

高糖对大鼠肾小球系膜细胞ERK转导通路的影响

目的： 探讨高糖环境下系膜细胞中ERK转导途径的活性变化及其对TGF-β1 mRNA表达的影响。方法： 分离培养大鼠肾脏系膜细胞，调整培养液浓度为以下3组，即正常糖组、高糖组、甘露醇组。分别于干预24 h、48 h、72 h后用免疫细胞化学法和Western blotting法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2（pERK1/2）的表达进行定位、定性及半定量分析，用RT-PCR法检测细胞中TGF-β1 mRNA的表达。结果： 高糖组系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达明显高于正常糖组，并由胞浆向胞核内转移，随培养时间延长其表达上升(P<0.01)，高糖组TGF-β1mRNA的含量也明显高于正常糖组(P<0.01)，甘露醇组上述指标与正常糖组差异不显著(P>0.05)。结论： 高糖环境下系膜细胞中ERK信号转导通路可被激活，进而使TGF-β1 mRNA表达上调，这可能是糖尿病肾病系膜细胞受损、肾小球硬化的机制之一。     

大鼠肾小球系膜细胞产生的生长抑制性因子－转化生长因子β

本文观察了肾小球系膜细胞产生的自分泌生长抑制因子的情况。结果显示，肾系膜细胞培养上清中含有抑制自身生长的活性物质，后者有耐酸性；ＨＰＬＣ分析洗脱液中最主要的抑制性活性物质的分子量为１６～３０ｋｄ；抗－转化生长因子β（ＴＧＦβ）抗体能中和其大部分抑制活性；生物学方法检测表明上清中含有活性ＴＧＦβ；此外，培养液中加入抗ＴＧＦβ抗体能明显增强细胞的增殖。结果表明：大鼠肾系膜细胞能产生活性ＴＧＦβ，后者是一种自分泌的生长抑制性因子。     

血小板活化因子介导肾小球系膜细胞产生活性氧的研究

为探讨血小板活化因子（ＰＡＦ）对肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）产生活性氧的调节作用，本研究观察了ＰＡＦ对体外培养的大鼠ＧＭＣ产生超氧化物阴离子（Ｏ）和过氧化氢（Ｈ－２Ｏ－２）的影响。结果表明１０￣（－９）Ｍ／Ｌ的ＰＡＦ已能诱导ＧＭＣ产生Ｏ和Ｈ２Ｏ２（１．１４±０．４２ｎｍｏｌ／１０￣５ＧＭＣ、０．９７±０．１６ｎｍｏｌ／１０－５ＧＭＣ），这一效应呈剂量依赖性；溶ＰＡＦ无诱导ＧＭＣ产生活性氧作用；特异性ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１抑制ＰＡＦ的刺激作用，抑制作用也呈剂量依赖性，５×１０￣（－５）Ｍ／ＬＢＮ５２０２１完全抑制ＧＭＣ合成活性氧。本研究说明ＰＡＦ可诱导ＧＭＣ合成活性氧。     

肾小球系膜细胞增生与系膜硬化机制的初步探讨

我们应用细胞培养及免疫组化的方法，探讨了肾小球系膜细胞增生及系膜硬化的机制，并进而观察了它们在肾小球硬化听作用。结果显示：系膜细胞有自分泌功能，肿瘤坏死因子和血管内皮素可促进系膜细胞增生。大量增多的系膜基质不但含有Ⅳ型胶原，也有Ⅲ型胶原。系膜细胞增生，系膜基质增多最终导致肾小球硬化。     

血管紧张素-（1-7）对转化生长因子β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响并初步探讨其机制.方法:采用WST法检测培养系膜细胞增殖;RT-PCR法检测细胞内信号传递分子Smad3/7基因mRNA的表达.结果:与对照组比较, Ang-(1-7)明显抑制TGF-β1诱导的GMC增殖(P＜0.05);同时, Ang-(1-7)对TGF-β1诱导的系膜细胞内Smad3, Smad7基因mRNA表达有明显的抑制作用(P＜0.05).结论:Ang-(1-7)对TGF-β1诱导的系膜细胞增殖有抑制作用, 其机制可能是通过下调细胞内信号传递分子Smad3/7的表达.     

肾小球系膜细胞与氧化应激

肾小球系膜细胞是最活跃的细胞固有成分,其在多种因素如高糖、血管紧张素-Ⅱ、醛固酮、机械牵拉、炎症反应、脂质沉积等刺激下表现为氧化应激(活性氧类产生过多和清除减少),促进肾小球硬化(包括糖尿病肾病)的发生和发展.干预治疗如噻唑烷二酮、血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂、醛固酮受体拮抗剂、他汀类药物、抗氧化剂等...     

高氨基酸血症对肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响及与氧化应激的关系

目的研究高氨基酸血症对肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响,探讨氧化应激在其中的作用。方法大鼠肾小球系膜细胞分为不同培养环境下的对照组(C组)、高氨基酸组(HA组)、维生素E组(HAE组)。培养24h后用荧光染料2',7'-Dichloroluores-cin diacetate(20μmol/L)测定各组细胞内活性氧产物(reactive oxygen specie,ROS)的生成情况从而反应细胞内氧化应激水平,培养24h后采用RT-PCR检测各组CTGF mRNA表达,培养48h后采用Western印迹检测各组CTGF蛋白的表达。结果HA组氧化应激水平、CTGF mRNA及蛋白的表达均明显高于C组(P<0.05);HAE组其氧化应激水平、CTGF mRNA及蛋白表达较HA组明显降低(P<0.05),且与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论高氨基酸血症可使肾小球系膜细胞氧化应激水平升高并产生过多的CTGF,抗氧化剂维生素E可减轻系膜细胞氧化应激及CTGF的表达,提示高氨基酸诱导的CTGF表达增多可能与氧化应激有关。     

12(S)-HETE对大鼠系膜细胞和肾小球内p27~(kip1)表达的影响

目的:探讨12-脂氧化酶的活性代谢产物12(S)-HETE对系膜细胞和肾小球内p27~(kip1)表达的影响.方法:12(S)-HETE刺激的系膜细胞和皮下包埋的微型渗透泵长期持续恒速注入12(S)-HETE刺激的大鼠提取的肾小球来观察p27~(kip1)的表达.采用总蛋白量/细胞数的比值作为细胞肥大的评价指标,利用RT-PCR和Western blot方法检测p27~(kip1) mRNA和蛋白的表达.结果:12(S)-HETE刺激能够直接诱导系膜细胞发生肥大.12(S)-HETE刺激的系膜细胞内p27~(kip1)mRNA水平没有变化,而p27~(kip1)蛋白的表达明显增加.然而,在微型渗透泵持续恒速注入12(S)-HETE刺激的大鼠提取的肾小球内p27kip1mRNA水平和蛋白的表达均增加.结论:12(S)-HETE能够通过促进p27~(kip1)的高表达而参与细胞周期的调控,是引起肾小球系膜细胞和肾小球肥大、衰老的重要原因之一.     

阿霉素肾硬化大鼠肾转化生长因子-β1表达和细胞凋亡相关性及商陆的影响

目的探讨阿霉素肾硬化大鼠转化生长因子-β（TGF-β）表达和细胞凋亡的相关性,及商陆对其的影响。方法采用单侧肾切除并阿霉素尾静脉注射的方法构建。肾小球硬化大鼠模型。36只SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,商陆治疗组,分别给予灌胃治疗,连续93d。观察肾小球病理改变,采用免疫组化法检测各组大鼠。肾小球TGF-β1的表达;TUNEL法检测肾小球细胞凋亡,并分析TGF—β1水平和细胞凋亡的相关性。结果与模型组比较,商陆水煎剂能明显改善肾小球病理损害程度,降低肾小球硬化指数（90．15&#177;19．73对40．49&#177;8．86）;显著降低阿霉素肾硬化大鼠肾小球TGF-β1,的表达（6．34&#177;0．44对2．76&#177;0．73,P〈0．01）及肾小球细胞凋亡指数（63．62&#177;9．92对34．46&#177;7．19,P〈0．01）;并且肾小球细胞凋亡指数和TGF-β1的表达（r=0．658,P〈0．01）、肾小球硬化指数（r=0．768,P〈0．01）间均存在相关性。结论（1）阿霉素肾小球硬化大鼠肾小球TGF—β1的表达与肾小球实质细胞凋亡间存在显著相关性。（2）商陆在降低肾小球TGF-β1的表达的同时降低了肾小球细胞过度凋亡,改善了肾小球病理损害,保护了肾功能。     

转化生长因子β及其信号转导分子Smad4在肾小球硬化中的作用研究

目的：探讨转化生长因子β（TGF-β1）及其信号转导分子Smad4在肾小球肾炎中的表达及其意义。 方法： 以20例正常肾组织为对照组,对38例各种不同组织学类型肾小球肾炎的肾活检标本,分别行免疫组化方法观察TGF-β1、Smad4、胶原Ⅰ（collagen type Ⅰ）在肾小球中的染色强度,并对其检测结果作图像分析处理;以体外培养的人系膜细胞为对象，观察TGFβ1对系膜细胞表达Smad4、胶原Ⅰ的影响，Smad4、胶原Ⅰ的基因表达用RT-PCR检测，蛋白表达用Western blotting检测。 结果： 所有增生、硬化病理类型肾炎中病变肾小球TGFβ1、Smad4、胶原Ⅰ蛋白表达均高于对照组（P<0.05）,且TGFβ1、Smad4两者在肾小球中的表达与胶原Ⅰ在肾小球中的堆积呈多重相关（P<0.05）；外源性TGFβ1刺激人肾系膜细胞后，细胞的Smad4基因表达和蛋白表达增高（P<0.05）；胶原Ⅰ的基因表达和蛋白表达也相应增高（P<0.05）。 结论： TGFβ1及其信号转导分子Smad4可能参与病变肾小球ECM的过量堆积，在肾小球硬化过程中起重要作用。     

IgA肾病患者血清IgA1诱导正常人肾小球系膜细胞钙离子释放、转化生长因子β表达上调和纤连蛋白分泌

目的:研究IgA肾病患者血清IgA₁对正常人肾小球系膜细胞(HMC)活化及分泌炎症硬化因子的刺激作用,比较与正常人IgA₁的差异,探讨IgA肾病患者血清IgA₁病理生理作用。方法:亲和层析提取血清IgA₁,加热聚合(aIgA₁),激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙离子(Ca²⁺)释放,RT-PCR法检测细胞内TGF-β mRNA表达,间接竞争ELISA法检测细胞上清纤连蛋白(Fn)含量。结果:IgA肾病患者aIgA₁呈时间依赖性诱导正常HMC细胞内游离Ca²⁺释放、TGF-β mRNA表达和Fn分泌,作用趋势与正常人aIgA₁相同,高峰时间分别为孵育后60 s、24-36 h和36-48 h,但作用强度显著高于正常人aIgA₁;在作用高峰时间,患者组和正常人组Fluo-3最大相对荧光强度增加值分别为(95.83±11.43)和(55.88±12.72),TGF-β／GAPDH的比值分别为0.96±0.06和0.74±0.02,Fn含量分别为(6.45±0.18)μg/L和(5.54±0.43)μg/L,均有显著差异(P<0.05)。结论: IgA肾病患者血清IgA₁可以诱导体外培养的正常HMC活化并分泌炎症硬化因子,其作用较正常人IgA₁强,提示患者血清IgA₁分子与肾小球系膜细胞直接相互作用可能是IgA肾病发病机制之一。     

微机图象处理技术研究PAF对肾小球系膜细胞的收缩效应

肾小球系膜细胞（ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒｍｅｓａｎｇｉａｌｃｅｌ，ＧＭＣ）是肾小球中功能最为活跃的细胞。ＧＭＣ收缩可影响肾小球滤过率。血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）是一种重要的免疫炎性介质，通过多种途径参与了...     

抗Fas抗体诱导人肾小球系膜细胞凋亡

研究抗Ｆａｓ抗体对人肾小球系膜细胞的致凋亡作用，探讨Ｆａｓ－ＦａｓＬ在肾脏损务中的作用。方法：常规方法分离，培养人肾小球系膜细胞，并传代鉴定，用不同浓度的抗Ｆａｓ抗体刺激４－６代Ｍｃｓ１６ｈ后，荧光染色观察Ｍｃｓ凋亡变化，二苯胺法和ＤＮＡ凝胶电泳方法定量和定性分析ＭｃｓＤＮＡ片段化变化。     

转化生长因子β1/Smad信号通路对大鼠肾系膜细胞基质金属蛋白酶2及其组织抑制因子2表达的影响

目的　探讨转化生长因子 β1(TGF β1) /Smad信号通路对大鼠肾系膜细胞 (MsC)基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )及其组织抑制因子 2 (TIMP 2 )蛋白表达和酶活性的影响。方法　采用脂质体介导法 ,分别将Smad 2 3 7基因瞬时转染体外培养的大鼠MsC ,并用免疫荧光 逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和Western印迹法检测其转染成功与否 ;再分别用Western印迹 酶谱法或反式酶谱法 ,观察转基因MsC及其在TGF β1作用下MMP 2和TIMP 2蛋白表达和酶活性的改变。 结果　转染Smad 2基因的MsC ,MMP 2和TIMP 2蛋白表达和酶活性均略有升高 ,蛋白表达分别增强 1 4倍和 1 1倍 ;酶活性分别提高 1 4倍和 1 3倍 ,经TGF β1作用后有明显升高 ,蛋白表达分别增加 2 8倍和 3 0倍 (P <0 0 1) ;酶活性分别提高 3 0倍和 1 7倍 (P <0 0 1) ;转染Smad 3基因的MsC ,TIMP 2蛋白表达和酶活性略有升高 ,蛋白表达增强 1 2倍 ,酶活性提高 1 2倍 ,TGF β1作用后升高更为明显 ,蛋白表达增强 2 9倍 ,酶活性提高 1 8倍 ,而MMP 2蛋白表达和酶活性均无明显变化 ;转染Smad 7基因的MsC ,MMP 2和TIMP 2蛋白表达和酶活性均略有下降 ,蛋白表达均降低 1 2倍 ,酶活性均下降 1 2倍 ,在TGF β1作用下更为明显 ,蛋白表达分别