PEG沉淀结合碱裂解法提取DNA可消除肝素对PCR检测结果的影响

乙型肝炎病毒(HBV)感染的判断主要依赖于血清特异性抗原抗体和HBV DNA定量的检测。其中外周血中HBV DNA定量是病毒复制最直接和可靠的标志,对乙肝治疗效果的评价和预后也有重要的参考价值。临床上常采取全血或血浆作为检测标本,由于抗凝血液标本中可能存在着抑制PCR的因子,因此     

PCR法检测献血员血清HBV—DNA

输血是传播乙型肝炎的重要途径；判断献血员是否带有HB2Ag，目前主要采用免疫学方法；近年来随着分子生物学的发展，笔者用PCR法检测100份献血者HBV—DNA，以求从分子水平揭示献血员血清中HBV—DNA状况，为保证血源质量寻找依据。     

PCR杂交梳法在HBV检测中的应用

聚合酶链反应（PCR）以其灵敏性高、特异性强的特点,近年来正广泛应用于乙型肝炎病毒（HBV）感染的研究和诊断。然而,实践证明,PCR影响结果的因素很多,这主要是由于过去PCR产物分析的手段较落后。如琼脂糖凝胶电泳（即一次PCR）的方法只能判断产物的大小,并不能鉴别产物的特异性,因此不可避免地会出现一些难以判别的非特异产物[1],而造成人为主观因素导致的误差,出现假阳性和重复性差等现象。另外,在实际应用中PCR大约只可以将约103个模板DNA分子扩增出来[2、3],而不是理论上的只要具有一个拷贝的模板就可以被反应系统扩…     

HBV—DNA和HBV—M定量检测的相关性研究

目的探讨HBV—DNA和乙型肝炎五项（HBV—M）定量检测之间的相关性及其在乙型肝炎感染诊断中的应用价值。方法收集我院363例乙型肝炎和既往感染HBV患者血清,实时荧光定量PCR检测HBV—DNA,同时以时间分辨免疫荧光技术（TRFIA）定量检测HBV-M,用统计软件分析两者之间的关系。结果乙型肝炎大三阳（HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性）患者外周血HBV—DNA阳性率为92．9％（79／85）,平均DNA含量（4．31±1．64）×10^6Copies／ml。乙型肝炎小三阳患者（HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性）外周血HBV．DNA阳性率为47．7％（105／220）,平均DNA含量（2．47±2．21）×10^4Copies／ml。HBsAg、HBcAb阳性3例,HBV-DNA均阳性,HBV—DNA为（5．73±1．14）×10。Copies／ml。余人群外周血HBV—DNA均阴性。HBV—DNA拷贝量与HBeAg载量呈正相关（r=0．59,P=0．041）;HBV。DNA拷贝量与HBsAg含量相关一致性不明显（r=0．221,P=0．077）。结论HBV—M与HBV—DNA之间既有联系又有不同,临床上可以多项检测来估计病情,判断疗效。     

HBsAg和HBV DNA在乙型肝炎及肝硬化患者中的关系研究

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒(HBV)DNA在乙型肝炎及肝硬化患者中的关系。方法选取2013年10月至2015年1月该院接受治疗的乙型肝炎患者50例及肝硬化患者50例,分别进行HBsAg和HBV DNA定量检测,统计学分析两者的相关性及临床意义。结果乙型肝炎组HBsAg定量水平高于乙型肝炎肝硬化组,2组数据对比差异有统计学意义(Z=-3.751,P0.05)。乙型肝炎组HBV DNA定量水平高于乙型肝炎肝硬化组,2组数据对比差异有统计学意义(Z=-3.766,P0.05)。乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性组中,乙型肝炎组HBsAg定量水平高于乙型肝炎肝硬化组,2组数据比较差异有统计学意义(Z=-3.086,P0.05);HBeAg阴性组中,乙型肝炎组HBsAg定量水平同样高于乙型肝炎肝硬化组,但2组数据比较差异无统计学意义(Z=-1.691,P0.05)。结论 HBsAg、HBV DNA在乙型肝炎组和乙型肝炎肝硬化组中呈正相关关系。     

慢性乙型肝炎抗—HBe阳性与HBV—DNA检出关系分析

目的 分析慢性乙型肝炎抗－HBe阳性与HBV－DNA检出关系。方法 采用斑点杂交法检测101例抗－HBe阳性的慢性乙型肝炎患HBV－DNA。结果 HBV－DNA阳性36例，阳性率35.64%，HBV－DNA阳性检出率，以慢性重型肝炎最高，其次慢性乙型肝炎重度、中度患，轻度慢性乙型肝炎最低，检出率随着病程的延长而升高。结论 表明抗－HBe阳转，体内HBV－DNA并未彻底清除，HBV的持续存在是变异发生的基础。     

乙肝患者血清HBV DNA检出率分析

探讨ＰＣＲ技术测定ＨＢＶ ＤＮＡ的临床应用价值。用ＰＣＲ法与ＥＬＩＳＡ法测定乙国清标志物。结果表明ＨＢＶ ＤＮＡ在乙肝患者血清平均检出率５４．８％。人为ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率与乙现毒所处的临床阶段,基因的整合与突变及抗病毒药物的应用相关。     

聚合酶链反应检测乙型肝炎血清HBV—DNA的临床意义

我们对112例乙型病毒性肝炎用聚合酶链反应(PCR)检测血清HBV-DNA,并与血清乙肝病毒标志(HBVM)检测对照,以观察其临床意义,现将结果报告如下。 1 对象与方法 1.1 对象 112例乙型病毒性肝炎为我院传染科1995年6月～1996年6月的住院患者,男86例,女26例;年龄8～70岁,其中20～30岁65例,占58％。依据1990年(上海)全国病毒性肝炎学术会议修订的诊断标准分     

乙肝患者HBV DNA表达与Ig和CIC的关系

近年来，许多学者对乙肝患者的免疫应答和免疫调节功能进行了大量研究，发现细胞免疫功能的异常在其发病机理中有重要作用［１，２］。本文对ＨＢＶＤＮＡ阳性和阴性的乙肝患者血清免疫球蛋白（Ｉｇ）和循环免疫复合物（ＣＩＣ）水平进行观察，结果报告如下。１对象和方法...     

荧光定量PCR检测HBV—DNA的临床意义

本文采用荧光定量ＰＣＲ法对本院临床和门诊血清标本2 0 0份进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定 ,探讨ＨＢＶ ＤＮＡ含量与肝病变发展的关系。1　材料和方法1 1　材料　标本取自确诊或怀疑乙肝的患者及无症状体检者 ,共检测 2 0 0例。试剂∶荧光定量ＨＢＶ ＤＮＡ试剂盒由匹基公司提供。仪器∶ＰＥ5 70 0ＰＣＲ仪。1 2　方法　ＨＢＶ ＤＮＡ定量分析采用荧光定量ＰＣＲ法。按操作说明书进行。1 3　统计学方法　各组ＨＢＶ ＤＮＡ含量均数比较采用ｔ检验。遇有阴性结果不参加平均值的统计。2　结果2 1　ＨＢＶ ＤＮＡ、ＦＱ ＰＣＲ标准曲线　ＨＢＶ …     

乙型肝炎病毒感染性病人及携带者的HBV DNA诊断研究

核酸分子杂交技术，能直接从血清中检出１０－１Ｐｇ的ＨＢＶＤＮＡ，最近发展起来的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术能检出１０－３Ｐｇ的ＨＢＶＤＮＡ。本文所介绍的ＰＣＲ与染色技术的结合于１９９７年８月检测４１６人ＨＢＶＤＮＡ，并与溴化乙锭（ＥＢ）染色进行对比分...     

乙型肝炎血清学模式（HBVM）与HBV DNA的关系

为了探讨乙型肝炎血清学模式与HBV DNA的关系，近两年来对与HBV DNA的关系HBVM与HBV DNA之间的关系做了统计比较。     

慢性HBV感染者血清中HBV DNA与HBeAg量的关系及其临床意义

目的　研究不同感染阶段的慢性乙型肝炎病毒 (HBV)感染者血中HBVDNA载量及其与HBeAg滴度的相关性和临床意义。方法　采用信号引物能量转移定量聚合酶链反应测定血清HBVDNA载量 ;用全自动快速微粒子酶免分析系统检测血清HBeAg滴度。 结果　不同HBVDNA载量的血清 ,其HBeAg滴度有所不同 ,特别是HBVDNA低载量组与中、高载量组相比 ,其HBeAg滴度差异有显著性 (P <0 .0 5 )。免疫耐受期患者HBVDNA载量较高 ,免疫清除期HBVDNA载量相对较低 ,病毒残留期HBVDNA载量较低或无HBVDNA复制。结论　HBVDNA载量与HBeAg滴度之间有一定的相关性 ,但也不完全一致。临床应结合HBVDNA与HBeAg水平综合判断HBV复制程度 ,以指导治疗     

PreS1、乙肝两对半与HBV—DNA检测相关性分析

[目的]探讨慢性乙型病毒肝炎病人乙肝两对半（HBV—M）、前S1（PreS1）及HBV—DNA检测的相关性。[方法]HBV—M和PreS1采用ELISA法检测，HBV—DNA采用Real—time PCR法检测。[结果]131例慢性乙肝病人的HBV—M检测中，HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、抗-HBc（＋）（1．3．5阳性）俗称“大三阳”，HBsAg（＋）、抗-HBe（＋）、抗-HBc（＋）（1．4．5阳性）俗称“小三阳”，HBsAg（＋）、抗-HBc（＋）（1．5阳性）3种典型感染模式为126例，占96．2％；其中72例1．3．5阳性病例中PreS1和HBV—DNA阳性分别为60例和72例，阳性率分别为83．3％和86．1％，而42例1．4．5阳性病例中PreS1和HBV—DNA阳性分别为12例和28例，阳性率为28．6％和66．7％；在78例PreS1阳性病人中HBV—DNA阳性占68例，其阳性率为87．2％，48例PreS1抗原阴性的病人中HBV—DNA阳性为32例，其阳性率为66．7％。[结论]在慢性乙型肝炎患者HBV—M检测“大三阳”模式中PreS1与HBV—DNA均表现高阳性率，二者具有良好的相关性（P〈0．01）；而“小三阳”模式中PreS1阳性率较低，但HBV—DNA仍有较高的阳性率，表明在慢性乙肝患者“小三阳”模式中HBV—DNA检测比PreS1检测更有价值（P〈0．01）。值得注意的是在我们的观察中PreS1阳性和阴性病人均有较高的HBV—DNA阳性率，二者没有明显差异（P〉0．05）。因而，在临床诊断、治疗和疗效观察中HBV—DNA可作为检测“金标准”，而PreS1检测时PreS1阴性的病人也不应忽视。     

定量检测乙型肝炎HBeAg与HBV—DNA的临床意义

目的：探讨乙型肝炎患者血清中HBeAg定量结果与乙型肝炎病毒核酸（HBVDNA）的检测结果在临床上的意义。方法：本院住院及门诊HBV感染患者248例,抽取静脉血,采用1235全自动时间分辨荧光免疫分析仪和PE5700全自动荧光PCR仪对这248例标本分别进行检测。结果：乙型肝炎患者定量测定e抗原（HBeAg）阳性者其HBV—DNA阳性率远大于HBeAg阴性者（P〈0.05）;HBsAg及HBeAg2项阳性模式HBeAg定量结果显著大于HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性模式（P〈0.05）,其HBV—DNA波动范围也大于H＆Ag、HBeAg、HBcAb阳性模式。结论：HBeAg定量结果能较好地反映乙型肝炎患者体内HBV—DNA的含量,并对患者病情进展和诊治有一定应用价值。     

HBV DNA相关检测的合理应用和结果分析

摘要： 随着分子诊断技术的进展,临床已常规开展某些与HBV DNA相关的分子检测,对HBV感染的防治发挥了重要作用。但在实际应用中,也存在一些应用不当或对结果误判等问题。本文扼要介绍了HBV DNA定量检测、病毒基因分型、病毒基因逆转录酶区和其他区域序列分析等常用项目的应用价值,以及如何科学分析和评判检测相应结果。同时指出需要客观地评价某些仅适合于研究的分子技术,如HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）的检测技术,不能夸大一些检测HBV变异的新方法的临床应用价值。     

乙肝患者血清中HBV DNA含量的测定及其意义

乙型肝炎病毒感染的诊断主要依赖于血清特异抗原抗体和ＨＢＶＤＮＡ的检测。我们用定量ＰＣＲ方法检测乙肝患者血清ＨＢＶＤＮＡ ,以探讨不同免疫标志的乙肝患者血清中ＨＢＶＤＮＡ含量及其意义。1　材料和方法1 1　研究对象　对象为本院 1999年 3月～ 1999年 5月住院及门诊的乙型肝炎患者 43例 ,全部乙肝病例均为临床确诊的乙型肝炎患者。年龄在 19岁～ 5 0岁 ,其中男 2 5例 ,女18例。另选择 7例体格检查后乙肝五项血清标志全阴性 ,肝功能正常作为对照。血清采用经高压灭菌的 1 5ｍｌＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管分装 ,于 - 2 0℃冻存待检。1 2　…     

HBsAg及HBV DNA定量检测在慢性乙型肝炎患者不同病程阶段中的应用价值

目的研究慢性乙型肝炎(简称乙肝)患者病程进展中HBsAg及HBV DNA定量水平变化及其相关性,比较其在慢性乙肝不同病程阶段的水平。方法收集2015年1月至2016年12月于该院就诊的302例慢性HBV感染患者血清,分为轻、中及重型慢性乙肝组。采用化学发光法定量检测HBsAg水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清HBV DNA水平。多组间比较采用非参数Kruskal-Wallis H检验,进一步两两比较采用Mann-Whitney U检验,采用Spearman检验进行数据间的相关性分析。结果轻、中、重型慢性乙肝组HBsAg定量水平中位数分别为2 583.96、6 998.34、3 669.91U/mL,3组比较差异有统计学意义(Z=15.50,P0.05);轻型慢性乙肝组与中型慢性乙肝组HBsAg定量水平比较,差异有统计学意义(Z=-3.89,P0.05);中型慢性乙肝组与重型慢性乙肝组HBsAg定量水平比较,差异有统计学意义(Z=-2.32,P0.05);轻型慢性乙肝组与重型慢性乙肝组HBsAg定量水平比较,差异无有统计学意义(Z=-1.22,P0.05)。轻、中、重型慢性乙肝组HBV DNA定量水平中位数分别为246 500、2 840 000、894 000log copy/mL,3组比较差异有统计学意义(Z=9.33,P0.05);轻型慢性乙肝组与中型慢性乙肝组HBV DNA定量水平比较,差异有统计学意义(Z=-2.96,P0.05);其他两两比较,HBV DNA定量水平差异无统计学意义(P0.05)。HBsAg与HBV DNA在轻型慢性乙肝组、中型慢性乙肝组、重型慢性乙肝组患者中均呈正相关(r=0.68、0.60、0.66,P0.05)。结论 HBsAg及HBV DNA在慢性HBV感染患者不同病程阶段均呈正相关,可作为预测慢性乙肝病程进展的血清学标志物。