聚合酶链反应检测慢性丁型肝炎血清HDV RNA的实验研究和临床观察

本文建立一种高度敏感和特异性的检测丁型肝炎病毒(HDV)RNA的方法,提高了丁型肝炎的诊断水平。以HDV RNA保守区ORF5′末端第929～1640位核苷酸为靶基因设计一对引物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了35例慢性丁型肝炎患者血清HDV RNA,并同时检测HBVM。35例中共检出HDV RNA421例(60％),10例HDAg阳性者HDV RNA全部阳性,25例抗-HD阳性者中有11例HDV RNA阳性(44％)。表明采用RT-PCR可以准确、快速、敏感地检测出HDV RNA,具有很强的特异性。35例中HBV DNA的检出率为34.2％,而HDV RNA的检出率为60％,HBV DNA和HDV RNA同时阳性者共9例占25.7％,提示慢性乙型肝炎病人合并丁型肝炎时,HBV的复制受到不同程度的抑制而HDV的复制较为活跃。     

HDV及其抗原研究进展

目前已知,HDV是导致人类丁型肝炎的一种小的缺陷RNA病毒,其病毒抗原(HDAg)是在RNA介导的RNA复制过程中由HDV抗基因链的ORF(-5)编码一种核糖核酸蛋白,HDAe和病毒RNA组成病毒核壳体,在病毒颗粒和被感染的     

HDV相关终末期肝病患者肝移植后外周血HDV RNA载量迅速下降但肝内HDAg可持续存在

【据J Hepatol 2012年1月报道】题:HDV相关终末期肝病患者肝移植后外周血HDV RNA载量迅速下降但肝内HDAg可持续存在(作者Ozanne B等)德国Mederacke等最近的研究表明,HDV相关终末期肝病患者移植后血中HDV RNA载量迅速下降但肝内HDAg可持续存在。对于大部分HDV相关肝脏终末期疾病患者而言,肝移植是当前唯一的治愈方法。HDV需要HBV的HBsAg作为其表面蛋白方能完成复制,故HDV感染患者体内必定存在HBV感染。对于HBV/HDV共感染患者,目前尚未完全明确患者在肝移植并清除HBsAg后,其体内是否还可检测出HDV。     

在原发性胆管上皮细胞性肝癌细胞中检出HBV DNA和HDV RNA

利用地高辛配基标记的HBV DNA及HDVcDNA探针,原位杂交检测了一例胆管细胞性肝癌及癌旁肝组织中的HBV DNA和HDV RNA。在癌巢及癌旁肝组织中均检出HBV DNA及HDV RNA阳性细胞,以核型为主。癌巢中阳性细胞数及阳性信号强度明显高于癌旁肝组织。经阴性对照、空白对照及DNase I,RNase A处理试验,证实阳性信号为HBV DNA或HDV RNA产生。进一步用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检出了HDV RNA,确证了HDV感染的存在。     

HDV RNA检测的研究现状

HDV感染导致的丁型肝炎是最严重的肝炎类型。由于缺乏精准HDV RNA检测方法，HDV的流行率被严重低估。HDV RNA是诊断HDV感染的金标准，在HDV的诊断、筛查和指导治疗方面具有重要意义。但因HDV基因型多、二级结构牢固，导致HDV RNA检测困难。本文就HDV RNA诊断方法的进展进行综述，阐述了HDV RNA检测方法从定性到定量检测的进展，为了解HDV RNA检测重要意义以及促进HDV RNA检测新方法的研发提供新思路。     

120例丁型肝炎病毒在各型肝炎中的分布情况

丁型肝炎病毒(HDV)是一种缺陷负链的RNA病毒,动物实验证明HDV需要在乙型肝炎病毒辅助下才能进行复制。故临床上表现与HBV同时或重叠感染。由于我国人群HBV感染率较高,故了解HDV感染状况及其与乙型肝炎的关系,对于防治HDV感染是十分重要的。现将1998～2000年收住我院的120例合并HDV感染的病例资料进行分析研究,报告如下。     

Clinical presentation and genotype of hepatitis delta in Karachi

AIM: To assess the clinical presentation and genotypes of delta hepatitis in local population. METHODS: In this prospective study, 39 consecutive patients who were positive for HBsAg and hepatitis D virus (HDV) antibody were included. The patients were divided in two groups on the basis of presence or absence of HDV RNA and a comparative study was done. Genotype of HDV was determined in PCR positive patients. RESULTS: Overall there is male dominance, in which 34 patients out of 39 (87.2%) were male. Twenty (51%) patients were from the adjacent areas of three provinces; Sindh, Punjab and Balochistan indicating the higher prevalence of delta hepatitis in this mid region of Pakistan. Patients of all age groups were affected with delta hepatitis (median 31.5 years, range 12-75). HDV RNA was detectable in 23 patients (59%). All the HDV strains belonged to genotypeⅠ. HBV DNA was detectable only in 3 cases who were also HBeAg and HDV RNA positive. Patients with detectable HDV RNA were younger than patients with undetectable RNA; mean age 29.7 ± 12.8 years vs 36.8 ± 15.2. There were no statistically significant differences in the clinical presentation and routine biochemical profile of patients with detectable or undetectable HDV RNA. Clinical cirrhosis was present in 19 (49%) patients; 12 with detectable RNA and 7 with undetectable HDV RNA (P = 0.748). Decompensated disease was seen in eight patients; five and three respectively from each group. Four patients with undetectable RNA and two patients with detectable RNA had normal ALT and ultrasound abdomen. CONCLUSION: HDV may infect at any age, usuallyyoung adult males. GenotypeⅠ is prevalent. With time some of the patients become HDV RNA negative or asymptomatic carrier. Most of the patients have suppressed HBV DNA replication. Significant numbers of patients have cirrhosis.     

内蒙古自治区蒙古族聚集区丁型肝炎流行现状分析

目的 探讨内蒙古自治区蒙古族聚集区丁型肝炎病毒(HDV)感染情况以及分子流行病学特点。方法 纳入2019年4月—2020年10月在国际蒙医医院就诊的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性的患者230例，根据患者情况分为乙型肝炎合并肝硬化组(n=18)和乙型肝炎组(n=212);并以HBsAg定量值250 IU/mL为界限将患者分为HBsAg<250 IU/mL组(n=104)和HBsAg≥250 IU/mL组(n=126)。采用ELISA方法进行HDV抗体的检测，抗体阳性者进一步利用实时定量PCR方法进行HDV RNA检测。并对HDV RNA阳性标本进行分型检测。计数资料两组间比较采用χ²检验。结果 HDV抗体检测阳性率为16.09%,抗体阳性患者中HDV RNA阳性率为91.89%。乙型肝炎合并肝硬化患者共18例，HDV抗体检测阳性率为44.44%,抗体阳性患者HDV RNA阳性率为100%。HBsAg<250 IU/mL的患者共104例，其中只有3例(2.88%)HDV抗体阳性。而HBsAg≥250 IU/mL的患者共126例，HDV抗体阳性率为26....     

丁型肝炎病毒（HDV）研究现状

近年来,随着分子生物学技术的进展,对HDV的认识日渐深入,本文拟就当前国内外病毒学界对HDV的研究现状综述如下。一、HDV(又称δ因子) 1.HDVRNA HDVRNA的分子生物学研究已取得了重要突破。1986年,Denniston氏等以HDV RNA为模板获得166个碱基对的互补DNA(cDNA)片段,并重组至质粒pBR_(322)中,成功地在大肠杆菌中获得稳定的表达。此后,Wang氏等又先后获得7个cDNA库。它们分别为δ_1(核苷酸个数为567)。δ_2(250),δ_3     

HDV核酶对人肝癌细胞端粒酶组分阻断作用的研究

目的:观察HDV核酶对人肝癌细胞端粒酶RNA组分的阻断作用。材料与方法:人工设计和合成了HDV核酶的序列,构建体外转录载体PGEM.RZ。提取人肝癌7402细胞端粒酶cDNA序列并构建体外转录质粒PGEM hTR。将上述质粒转录,测定了不同条件下HDV核酶对端粒酶的切割效力及其动力常数Kcat,Km及Kcat/Km的值。结果:核酶对底物的最大剪切效率为70.4％。在同一种离子存在的条件下,Km随温度而升高,Kcat则始终在0.71～1.3/min之间波动。结论:HDV核酶(g.RZ57)对人肝癌细胞端粒酶 RNA组分具有体外切割效力,其可以用来切割端粒酶等异源性RNA分子,可作为潜在的肿瘤治疗抑制剂。     

丁型肝炎病毒感染的诊断

选择最适当的 HDV 感染的试验,对其解释需要对临床背景有清楚了解,尤其疑及急、慢性 HDV 感染时。对疑似急性 HDV 共同感染病例,应送验总抗-HD 和抗-HD IgM。此外,在感染早期,可应用 EIA 检测 HDAg,这种病人血清中也应有抗-HBcIgM。HDV 重叠感染较易被认识,多数病人抗-HD IgM 及总抗-HD滴度升高。因这种感染发生在慢性 HBV 感染的基础上,故抗 HBc IgM 在血清中缺如。慢性 HDV 感染最易诊断,因为这些病人血清中有高滴度的抗-HD。诊断可由免疫染色显示肝内 HDAg 的存在而证实。血清中 HDV RNA 的检测,可能是进行性HDV 感染最敏感的方法,该试验除研究实验室应用外,临床尚不普及。因此,这一技术仅用于常规检测不能证实诊断的病人。此外,检测血清中 HDV RNA 可能是监察治疗和明确该病自然史的有用工具。免疫印迹法检测 HDV抗原血症在临床实践中显然有诊断价值。     

新疆地区单中心乙型肝炎病毒感染者中丁型肝炎病毒感染的血清流行病学特点

目的探讨新疆地区乙型肝炎病毒(HBV)感染者中丁型肝炎病毒(HDV)感染的血清流行病学特点。方法采用单中心横断面分析的方法, 选取新疆医科大学第一附属医院感染病·肝病中心自2021年8月至2022年1月住院的264例HBV感染患者, 对所有患者均进行了HDV Ag、抗-HDV IgM、抗-HDV IgG和HDV RNA检测, 分别依据患者的临床类型、HBV病毒载量、HBsAg水平进行分组, 分析HDV的感染状况。计量资料符合正态分布的数据采用配对t检验, 治疗前后不符合正态分布的数据采用配对秩和检验。结果 HDV血清学标志物检测共36例(13.64%)阳性, HDV RNA检测共26例(9.85%)阳性。依据临床类型分组:慢性乙型病毒性肝炎、乙型肝炎相关肝硬化、肝癌以及肝衰竭组患者中, HDV血清学标志物阳性率分别为13.46%、12.43%和20.83%, 3组比较, 差异无统计学意义(χ2=0.86, P=0.649);HDV RNA阳性率分别为11.54%、8.11%和20.83%, 3组比较, 差异无统计学意义(χ2=4.015, P=0.134)。依据HBV病毒载量分组;病毒...     

有关丁型肝炎病毒的新认识

正既往研究已知丁型肝炎病毒(HDV)是一种缺陷病毒,利用HBsAg进入肝细胞。合并HDV感染的慢性乙型肝炎患者更有可能死于晚期肝病,且他们患肝细胞癌的风险高达9倍[1]。由于HDV缺乏特定的病毒聚合酶,变异率高,迄今为止,没有特异性的HDV抑制剂应用于临床。普通干扰素在20世纪80年代第1次被用于治疗慢性丁型肝炎,从大部分的小型非对照临床试验来看,其效果并不理想[2]。聚乙二醇干扰素是目前唯一推荐的治疗HDV感染的治疗方法,但治疗成功率仍然很低。最近新的治疗方法的发展,包括入胞抑制剂bulevirtide,可能会改善治疗结果。了解HDV的流行病学对于实施有效的检测和治疗策略至关重要。     

丁型肝炎病毒核酶在细胞内抑制丙型肝炎病毒RNA活性的研究

目的 探讨丁型肝炎病毒(HDV)核酶在细胞内抑制丙型肝炎病毒(HCV)RNA的可能性。方法 针对HCV-5′NCR-C RNA的不同靶位构建了pC1-RzC1(107～113nt)、pC1-RzC2(268～274nt)、pC1-RzC3(345～351nt)3个HDV核酶重组真核表达载体,采用脂质体介导将它们转染至HCV阳性胎肝细胞中,通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞和培养上清液中的HCV RNA,初步探讨HDV核酶对HCV RNA的抑制活性。结果 (1)重组表达载体通过PCR、酶切和碱基序列测定证实了3组HDV核酶定向插入到真核表达载体。(2)免疫组织化学观察到HCV阳性胎肝细胞中HCV NS3、NS5抗原及逆转录-PCR法检测胎肝细胞及上清液中的HCV RNA正、负链,同时利用Light Cycler荧光PCR定量检测HCV RNA的含量,证明HCV感染胎肝细胞成功。(3)HCV阳性胎肝细胞中HDV核酶对全长HCV RNA的抑制活性,当剂量为0.5μmol/L时,pC1-RzC1、pC1-RzC2、pC1-RzC3抑制活性分别为53.2%、50.5%、10.6%(t=5.25,P<0.01)。pC1-RzC1连续1周作用于HCV阳性的胎肝细胞,结果显示第2～7天的抑制活性分别是60.7%、64.2%、68.4%、71.9%、78.8%、83.1%(t=15.34,P<0.01)。结论 pC1-RzC1、pC1-RzC2在HCV阳性胎肝细胞中对HCV RNA的抑制活性明显高于pC1-RzC3。     

Co-treatment with pegylated interferon alfa-2a and entecavir for hepatitis D: a randomized trial

AIM: To investigate the efficacy of pegylated interferon alfa(PEG-IFNα) therapy with and without entecavir in patients with chronic hepatitis D. METHODS: Forty hepatitis D virus(HDV) RNA positive patients were randomized to receive either PEG-IFNα-2a 180 μg weekly in combination with entecavir 0.5 mg daily(n = 21) or PEG-IFNα alone(n =19). Patients who failed to show 2 log reduction in HDV RNA level at 24 wk of treatment, or had detectable HDV RNA at 48 wk of therapy were considered as treatment failure. Treatment was continued for 72 wk in the rest of the patients. All the patients were followed for 24 wk post treatment. Intention to treat analysis was performed.RESULTS: The mean age of the patients was 26.7 ± 6.8 years, 31 were male. Two log reduction in HDV RNA levels at 24 wk of therapy was achieved in 9(43%) patients receiving combination therapy and 12(63%) patients receiving PEG-IFNα alone(P = 0.199). Decline in hepatitis B surface antigen(HBs Ag) levels was insignificant. At the end of treatment, HDV RNA was negative in 8 patients(38%) receiving combination therapy and 10 patients(53%) receiving PEG-IFNα-2a alone. Virological response persisted in 7(33%) and 8(42%) patients, respectively at the end of the 24 wk follow-up period. One responder patient in the combination arm lost HBs Ag and became hepatitis B surface antibody positive. Six out of 14 baseline hepatitis B e antigen reactive patients seroconverted and four of these seroconverted patients had persistent HDV RNA clearance.CONCLUSION: Administration of PEG-IFNα-2a with or without entecavir, resulted in persistent HDV RNA clearance in 37% of patients. The addition of entecavir did not improve the overall response.     

丁型肝炎病毒核酶结构改建及其对丙型肝炎病毒RNA的剪切活性

目的 观察经过结构改建的丁型肝炎病毒核酶（HDV核酶）对丙型肝炎病毒（HCV）基因组RNA是否存在剪切作用。方法 对HDV基因组核酶的茎IV区和底物结合区进行改建,获得3种针对HCV RNA的HDV核梅RzCI、RzC2和RzC3。体外转录制备含HCV RNA 5′－非编码区（5′-noncoding region,5′-NCR)及部分C区的底物RNA（HCV RNA5′-NCR-C）,进行5′端放射性标记。在一定的pH、温度、Mg^2 浓度和有或无去离子甲酰胺存在等条件下,将核酶和底物按摩尔比100：1混合,反应2h后聚丙烯酰胺凝电泳,放射自显影,推算剪切百分率。结果 RzCI和RzCI2可剪切HCV RNA5′-NCR-C,在适宜浓度的去离子甲酰胺存在时剪切效率较高,RzC3对底物几乎无剪切活性。结果 设计得当的HDV基因组核酶可以剪切异源性RNA分子HCV RNA。     

HDV核酶对人肝癌细胞端粒酶组分阻断作用的研究

目的：观察HDV核酶对人肝癌细胞端粒酶RNA组分的阻断作用。材料与方法：人工设计和合成了HDV核酶的序列，构建体外转录载体PGEM．RZ。提取人肝癌7402细胞端粒酶cDNA序列并构建体外转录质粒PGEM hTR.将上述质粒转录，测定了不同条件下HDV核酶对端粒酶的切割效力及其动和常数Kcat,Km及Kcat/Km的值。结果：核酶对该物的最大剪切效率为70．4％。在同一种离子存在的条件下，Km随温度而升高，Kcat则始终在0．71－1．3/min之间波动。结论：HDV核酶（g.RZ57)对人肝癌细胞端粒酶RNA组分具有体外切割效力，其可以用来切割端粒酶等异源性RNA分子，可作为潜在的肿瘤治疗抑制剂。     

RNA干扰靶向白血病融合基因的研究

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是新近发展起来的一种静止基因表达的有效方法,是由双链RNA分子介导的特异性靶基因转录后基因沉默过程.1998年由Fire等[1]在对线虫的研究中首先提出,2001年Elbashir等[2]报道RNAi同样存在于哺乳动物细胞,这一突破性的进展使RNAi技术在哺乳动物细胞中的探索与应用逐渐成为研究热点.     

HDV感染后乙型肝炎患者血清肝炎病毒标志物的变化

目的　分析HDV感染患者血清病毒性肝炎标志物的变化和意义 ,探讨HDV致病机理。方法　对 469例HDV阳性乙型肝炎患者常见各类型病毒性肝炎血清标志物的变化等作统计分析 ,以 2 13例HDV( -)乙型肝炎患者作对照。结果　HDV感染后血清HBeAg检出率降低 (P <0 .0 1)。在HDV ( +)HBVDNA( -)组 ,HBeAg( -)的机会大 (P <0 .0 1)。在急性肝炎、重型肝炎和肝硬化患者HDAg( +)HBeAg( -)为主要血清病毒表现形式 (P <0 .0 1或 0 .0 5 )。HDV感染后合并其它肝炎病毒感染率高于乙型肝炎组。结论　HDV感染可抑制HBV复制或HBeAg表达 ,混合感染HDV的乙型肝炎中HDV的直接细胞毒性作用可能起主要致病作用。重叠感染HDV的乙型肝炎患者其病情重、病死率高和容易慢性化。     

HDV感染的血清和肝组织学标志与HBV复制的关系

丁型肝炎病毒(HDV)感染后对宿主体内HBV的复制有何影响报道不一。本文通过检测肝组织及血清标本两种病毒的感染标志,对其相互关系进行初步分析。材料与方法一、血清:84例HDV感染标志阳性患者及150例HDV感染标志阴性对照组患者血清中,除1例HDV标本阳性者血清未检出HBV标志,其余HBsAg均阳性。检查血清HDAg、抗-HDIgM的ElA试剂盒,由北