白附子提取物对胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制

目的：研究白附子提取物对人SHG-44脑胶质瘤细胞生长的影响,初步探讨白附子对胶质瘤细胞增殖和凋亡的作用机制。方法：培养脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为空白对照组和8、40、200及1 000 μg•L^-1白附子提取物组,MTT法检测白附子提取物对SHG-44细胞生长的影响,倒置显微镜观察细胞凋亡形态,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,细胞免疫组织化学法检测Bcl-2与Bax蛋白表达。结果：MTT结果,与空白对照组比较,8和200 μg•L^-1白附子提取物组细胞在30 min和3 h时,细胞增殖均明显受抑制,细胞增殖活性降低（P＜0.05);1 000 μg•L^-1白附子提取物组细胞在30 min、1 h和3 h时,细胞增殖活性均明显降低（P＜0.05）;不同浓度白附子提取物对胶质瘤细胞增殖抑制作用呈剂量-时间依赖性。镜下观察,与空白对照组比较,各药物组细胞均出现数量不等的凋亡小体。流式细胞术分析,部分细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高。细胞免疫组织化学检测,与空白对照组比较,200 μg•L^-1白附子提取物组细胞Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）,Bax蛋白表达增高（P<0.01）。结论：白附子提取物可抑制SHG-44细胞的增殖及诱导其发生凋亡,其作用机制与Bcl-2蛋白表达下降和Bax蛋白表达上升有关。
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白藜芦醇体外抑制类风湿关节炎滑膜细胞的增殖及其机制

目的：检测白藜芦醇（Res）体外对类风湿关节炎（RA）滑膜细胞增殖的影响，并探讨其可能机制。方法：用不同浓度Res处理RA滑膜细胞24h后，采用四唑蓝（MTT）法检测滑膜细胞的增殖水平；用缺口末端标记法（TUNEL）和流式细胞仪检测其凋亡百分率；采用Western-blot分析caspase-3酶原的裂解；用比色法测定Res（200μmol／L）处理RA滑膜细胞不同时间及不同浓度的Res处理RA滑膜细胞12h后，caspase-3的相对活性。结果：加入不同浓度Res处理RA滑膜细胞24h后，增殖水平均显著低于对照组（P〈0．01）；对照组与不同浓度Res处理组凋亡细胞百分率比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；用200μmol／LRes分别处理RA滑膜细胞不同时间，caspase-3活性与未处理组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；用不同浓度的Res处理细胞12h，caspase-3活性成浓度依赖性升高：用不同浓度Res处理培养的RA滑膜细胞24h，caspase-3酶原的表达随药物浓度的增加而减少。结论：Res在体外抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖，诱导细胞凋亡，可能与caspase-3的活化有关。     

山茶花提取物抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探究山茶花提取物通过调控miR-526b-3p的表达抑制磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法 收集对数期SW1088细胞,用浓度为30、60、120 mg/L的山茶花提取物处理细胞,分别记为低剂量组、中剂量组、高剂量组,以正常培养SW1088细胞作为对照组;按照脂质体法将miR-NC、miR-526b-3p转染至SW1088细胞中分别记为miR-NC组、miR-526b-3p组;将anti-miR-NC、anti-miR-526b-3p转染至SW1088细胞中,并加入高剂量山茶花提取物分别记为anti-miR-NC+高剂量组、anti-miR-526b-3p+高剂量组。MTT、Transwell分别检测细胞增殖活性和细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞周期素D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、磷酸化的PI3K（p-PI3K）、磷酸化的AKT（p-AKT）蛋白表达水平;qRT-PCR检测miR-526b-3p相对表达量。结果 山茶花提取物或过表达miR-526b-3p可降低胶质瘤细胞SW1088增殖活性,同时降低细胞迁移数量、侵袭数量,以及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平,增加miR-526b-3p相对表达量。此外,高剂量组可降低SW1088细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白水平。抑制miR-526b-3p可减弱山茶花提取物对胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭以及PI3K/AKT信号通路的影响。结论 山茶花提取物可能通过调控miR-526b-3p/PI3K/AKT信号通路抑制胶质瘤细胞SW1088增殖、迁移和侵袭     

垂体瘤转化基因反义寡核苷酸抑制胶质瘤增殖的实验研究

目的 观察垂体瘤转化基因(pituitary tumortr ansforming gene,PTTG)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对恶性胶质瘤增殖的抑制作用.方法 将C6胶质瘤细胞接种于大鼠右侧尾状核.按照不同的PTTG反义寡核苷酸浓度在选定的时间点立体定向原位注射于肿瘤区域.3周后处死大鼠,取标本做GFAP、PTTG、PCNA免疫组化染色.结果 不同浓度的PTTG-ASODN对C6胶质瘤模型的增殖抑制呈时间、浓度依赖性,而且高浓度,早期应用,反复应用PTTG-ASODN抑制胶质瘤模型肿瘤增殖的效果明显.结论 PTTG-ASODN可以抑制胶质瘤的增殖,有望成为胶质瘤基因治疗的一种新策略.     

上调microRNA-34a抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭

目的 探讨microRNA-34a(miR-34a)在胶质瘤组织中的表达情况以及对人脑胶质瘤细胞系U251增殖及侵袭的影响.方法 选取川北医学院附属医院2013年3月至2017年3月胶质瘤组织标本30例和重症脑外伤需行手术者正常脑组织标本10例作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测miR-34a在胶质瘤组织表达情况.体外实验,将人工合成的miR-34a模拟物miR-34a mimic转染至U251细胞系,采用荧光定量PCR、MMT、Transwell法检测miR-34a在U251细胞系中表达以及对U251细胞增殖和侵袭能力的影响.依据细胞转染情况,分为Control组(不转染任何基因)、Mock组(转染miRNA-neg序列)和miRNA-34 a mimic组(转染miRNA-34a mimic序列).结果 miRNA-34a在人脑胶质瘤组织中相对表达水平为(0.35±0.07),低于正常人脑组织的(1.00±0.13),差异有统计学意义(P<0.05);转染后,荧光定量PCR结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组miRNA-34a相对表达水平分别为(1.00±0.08)、(0.98±0.11)和(6.19±0.34),miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义(P<0.05);MMT结果显示,在不同时间点,miRNA-34a mimic组U251细胞增殖抑制率高于Control组、Mock组,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组侵袭细胞数分别为(90.53±5.84)个、(88.21±5.04)个和(27.46±2.76)个,miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-34a在胶质瘤组织中表达下调,上调miR-34a表达可抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭.     

蛋白酶体抑制剂Lactacystin对胶质瘤C6细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：通过观察蛋白酶体抑制剂Lactacystin（LAC）对C6细胞增殖率的影响,探讨LAC引起胶质瘤细胞增殖率发生改变的机制,为临床上治疗胶质瘤提供理论依据。方法：体外培养大鼠胶质瘤C6细胞,选择处于对数生长期的细胞,实验分为对照组、LAC 2.5 μmol/L组、LAC 5.0 μmol/L组及LAC 10.0 μmol/L组,MTT法检测各组C6细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电势,RT-PCR方法检测各组细胞中Bax和bcl-2 mRNA表达,Western blotting方法检测各组细胞中Bax、bcl-2和P65 蛋白表达。结果：与对照组比较,LAC 5.0 μmol/L组和LAC 10.0 μmol/L组细胞增殖率、线粒体膜电势和P65蛋白表达水平降低（P<0.05）,而细胞凋亡率、Bax/bcl-2 mRNA和蛋白的比值增加（P<0.05）。结论：LAC通过诱导细胞凋亡抑制C6细胞的增殖率,其引起凋亡的方式可能是通过线粒体途径,此外在这个过程中NF-κB信号通路也可能影响细胞的增殖率。     

增殖抑制基因诱导血管平滑肌细胞凋亡

目的:研究增殖抑制基因(hyperplasia suppressor gene,HSG)诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用,探讨其可能的机制.方法:采用重组复制缺陷型腺病毒载体携带大鼠HSG基因,转染培养的大鼠主动脉平滑肌细胞后,通过荧光染色检测细胞核的完整性,用流式细胞术检测细胞DNA含量的变化,用测定caspase-3活性等方法评价过表达HSG对细胞凋亡的作用;进行Western印迹检测过表达HSG对凋亡信号通路相关蛋白表达的影响.结果:用流式细胞术和细胞核染色结果显示过表达HSG能诱导血管平滑肌细胞凋亡,与对照组相比,流式细胞术检测到过表达HSG 72 h显著增加亚二倍体细胞百分率(39.6%±3.2% vs. 2.6%±0.9%,P＜ 0.01).测定细胞内caspase-3活性发现,与对照组相比,过表达HSG能增高caspase-3活性(0.354±0.104 vs. 0.064±0.022,P＜0.01).Western印迹显示HSG能增加细胞色素c的释放和下调Bcl-2的表达(0.26 ± 0.03 vs. 1.06±0.07,P＜0.01).结论:HSG通过影响Bcl-2/Bax的表达,促进细胞色素c的释放继而激活caspase-3诱导血管平滑肌细胞凋亡,活化线粒体途径可能是其诱导凋亡的机制之一.     

CWF19L1抑制细胞周期以抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移

目的 下调胶质瘤细胞系中CWF19L1(CWF19 like cell cycle control factor 1)的表达,探究胶质瘤细胞的增殖能力、迁移能力及侵袭能力的变化,为胶质瘤治疗研发新的治疗靶点。方法 生物信息学分析肿瘤与正常组织中CWF19L1表达差异,验证胶质瘤细胞中CWF19L1蛋白质的基础表达量,构建敲低慢病毒转染胶质瘤细胞,下调胶质瘤细胞中CWF19L1蛋白质表达。使用该稳转细胞系进行细胞周期、细胞增殖、细胞迁移和Transwell实验,以验证CWF19L1敲低对胶质瘤细胞功能的影响。结果 生物信息分析表明肿瘤细胞中CWF19L1基因表达上调,蛋白质印迹法(WB)证明在U251胶质瘤细胞系中CWF19L1蛋白质表达量最高。敲低U251胶质瘤细胞中CWF19L1表达后,细胞周期实验示处于S/G2期的细胞比例上调(42.22%比33.00%P<0.05),CCK-8实验结果表明细胞数量明显上调(P<0.001),划痕实验显示划痕宽度明显缩短(P<0.001),迁移和侵袭实验证明穿过小室的细胞数量明显增多(P<0.001)。结论 CWF19L1能...     

青藤碱抑制胶质瘤细胞SHG-44增殖和侵袭研究

目的:探究青藤碱对胶质瘤细胞SHG-44增殖和侵袭的影响.方法:以0 mmol/L、0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L、2 mmol/L浓度的青藤碱作用于胶质瘤细胞SHG-44,12 h、24 h、36 h后采用CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测胶质瘤SHG-44细胞的侵...     

野黄芩苷对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：探讨野黄芩苷（SCU）对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用,并初步阐明其作用机制。方法：培养U87细胞,采用不同浓度（20、40和80 mg·L^-1） SCU处理U87细胞（野黄芩苷组）,同时设空白对照组。MTT法检测各组U87细胞存活率,倒置显微镜观察U87细胞的形态表现,Annexin Ⅴ/PI双染检测各组U87细胞凋亡率,Western blotting法检测各组U87细胞中bax和bcl-2蛋白表达水平。结果：MTT法,与空白对照组比较,20、40和80 mg·L^-1SCU组细胞存活率均明显降低（P<0.01）。倒置显微镜观察,与空白对照组比较,80 mg·L^-1SCU组细胞数明显减少,细胞体积变小,细胞间距变大;细胞出现皱缩、脱落,贴壁细胞轮廓模糊。Annexin Ⅴ/PI双染,与空白对照组比较,80 mg·L^-1SCU组细胞晚期凋亡率和总凋亡率均明显升高（P<0.01）。Western blotting法,与空白对照组比较,20、40和80 mg·L^-1 SCU组U87细胞中bcl-2蛋白水平降低,80 mg·L^-1SCU组差异有统计学意义（P<0.01）;与空白对照组比较,80 mg·L^-1 SCU组U87细胞中bax/bcl-2比值升高（P<0.01）。结论：SCU通过上调U87细胞中bax/bcl-2比值诱导细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的生长。     

黄芪抑制胶质瘤的作用机制和基因靶点研究

目的探讨黄芪抑制胶质瘤的作用机制和基因靶点。方法基于网络药理学分析获得黄芪可能治疗胶质瘤的基因靶点,采用基因本体论（GO）富集分析和京都基因和基因组数据库（KEGG）通路分析,构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络并筛选出Hub基因,最后构建疾病-药物-成分-靶点-通路的可视化网络。同时取胶质瘤细胞株U251进行细胞实验论证,采用细胞计数试剂盒、活死细胞双染色法检测不同浓度黄芪培养液对U251细胞存活率和凋亡的影响。结果共筛选出145个黄芪可能治疗胶质瘤的基因靶点,GO富集分析显示最主要的生物学功能包括不同蛋白结合、相同蛋白结合、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正向调控、酶结合等,KEGG通路分析显示最主要的信号通路包括癌症通路、脂质与动脉粥样硬化、流体剪切应力和动脉粥样硬化、化学致癌-受体激活等。Hub基因关联程度从高到低依次为血管内皮生长因子A、蛋白激酶B（AKT）1、JUN、基质金属蛋白酶9、PTGS2、IL-6、IL-1B、CASP3、TP53、HIF1A。在所有生物活性成分中,MOL000098（槲皮素）的度值最高,为118;在所有信号通路中,hsa05200（癌症通路）的度值最高,为61;在所有基因靶点中,AKT1、RELA、PTGS2、MAPL1、TP53的度值较高,分别为21、20、20、19、18。细胞实验证实,不同浓度（1、5、10mg/mL）黄芪培养液对U251细胞增殖均有抑制和促进凋亡作用,其作用强度呈浓度依赖性（均P＜0.05）。结论黄芪对U251细胞增殖具有抑制和促进凋亡作用,主要基因靶点包括AKT1、RELA、PTGS2、MAPL1、TP53。     

苦参碱对BT325胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的　观察苦参碱对人胶质瘤细胞株BT32 5体外增殖的影响 .方法　应用MTT比色法检测不同浓度苦参碱对BT32 5细胞的增殖抑制 ,应用流式细胞仪观察苦参碱对BT32 5细胞周期的影响 ,采用透射电镜观察瘤细胞形态学改变 .结果　苦参碱对BT32 5细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性 ,当浓度为 0 5g·L- 1 时 ,对BT32 5增殖的抑制率最大 ,达到 (32 1±1 1) % .流式细胞仪分析显示 ,用 0 5g·L- 1 苦参碱培养 72h ,BT32 5细胞出现典型凋亡峰 ,凋亡细胞占细胞总数 2 3 9% .透射电镜观察 ,发现有凋亡细胞存在 ,表现为细胞皱缩 ,染色质边集 .结论　苦参碱对人胶质瘤细胞系BT32 5的增殖具有明显的抑制作用 ,并能诱导其发生凋亡 .     

蜂毒肽对人神经胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 研究蜂毒肽对体外培养的入神经胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.方法 MTT法检测蜂毒肽对两种人神经胶质瘤细胞(U87、U251)的增殖抑制率;流式细胞仪和凝胶电泳法检测蜂毒肽对两种肿瘤细胞的凋亡诱导作用.结果 蜂毒肽能够明显抑制两种细胞的生长(P＜0.05);浓度为1、10、20、40、80、160、200 mg/L的蜂毒肽诱导U87和U251细胞的凋亡率分别达到12.80%、16.92%、22.69%、34.05%、41.82%、59.87%、80.25%和11.61%、16.21%、22.03%、30.57%、41.10%、58.33%、79.12%,其诱导凋亡作用与剂量呈正相关.结论 蜂毒肽对人神经胶质瘤细胞具有明显的增殖抑制和促进凋亡作用.     

哌立福辛抑制胃癌细胞SGC7901增殖及其作用机制

目的:探讨哌立福辛对体外培养的人胃癌SGC7901细胞生长增殖的影响并探讨其机制?方法:分别用不同浓度的哌立福辛 (0.125?0.250?0.500?0.750?1.500 ?滋mol/L) 对SGC7901细胞进行干预后,采用磺酰罗丹明B (SRB)法检测细胞增殖变化;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;Real－time PCR?Western blot法检测癌症相关基因eIF4E及AEG－1 mRNA及蛋白表达?结果:哌立福辛呈时间及浓度依赖性抑制胃癌SGC7901细胞的增殖,并降低细胞的克隆形成能力;细胞内AKT信号通路中AEG－1?eIF4E的表达明显降低?结论:哌立福辛具有抑制胃癌SGC7901细胞增殖的作用;通过降低AKT信号通路中AEG－1和eIF4E的mRNA及蛋白表达可能是发挥增殖抑制作用的机制之一?     

CD151基因对前列腺癌细胞增殖、转移的促进作用及其机制

目的研究人前列腺癌细胞株PC3细胞转染CD151基因后其增殖和迁移能力的变化及机制。方法用FuGENE HD分别将质粒pAAV-CD151(CD151组)、pAAV-GFP(GFP组)转染入PC3细胞,并设加入等体积PBS的对照组。48 h后采用Western blot检测CD151蛋白、磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)和总ERK的表达。采用MTT法检测CD151基因对PC3细胞增殖的影响,采用Boyden趋化小室研究CD151基因对PC3细胞迁移的影响。结果与对照组和GFP组相比,CD151组的CD151蛋白表达水平明显增加(均P<0.05);磷酸化ERK的表达量亦明显高于其它两组;细胞增殖能力比对照组和GFP组明显增高[相对吸光度值分别为:(0.245 7±0.006 4)vs(0.175 2±0.007 4)、(0.179 0±0.008 4)];细胞迁移数(107.8±9.6)亦显著高于对照组和GFP组[(53.0±7.6)和(57.0±5.2),P<0.05]。结论 CD151在前列腺癌细胞的增殖、转移中起着重要作用,是肿瘤转移的重要分子基础,其分子机制可能是CD151对ERK信号通路的激活。     

小檗碱及其亲脂性衍生物抑制恶性胶质瘤C6细胞的增殖及迁移与侵袭

[目的]考察小檗碱及其亲脂性衍生物对大鼠C6胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响.[方法]合成四种小檗碱衍生物9-O-十二烷基小檗碱(B3)、9-O-十六烷基小檗碱(B4)、9-O-十八烷基小檗碱(B5)、9-O-苄基小檗碱(B6).采用1H NMR、13C NMR及ESI-MS确证其结构.四唑盐(MTT)比色法检测化合物在不同浓度下作用24、48、72 h后对C6细胞增殖活性的影响;细胞划痕实验和transwell迁移实验检测对细胞迁移能力的影响,transwell侵袭实验检测对细胞侵袭能力的影响.[结果]MTT结果显示,衍生物抑制细胞增殖作用显著强于对照组与小檗碱组(P＜0.05);其中,B3的抑制作用最强.划痕实验、transwell迁移与侵袭实验结果显示,与对照组比较,小檗碱及其衍生物能明显抑制C6细胞的迁移与侵袭(P＜0.05);其中,B3与B4抑制作用最强.[结论]小檗碱的亲脂性衍生物能有效地抑制C6胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭,为开发新的恶性胶质瘤治疗方法提供新的思路.     

YB-1基因沉默抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移

目的探讨RNA干扰沉默Y-盒结合蛋白1(YB-1)对前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖和侵袭力的影响。方法将YB-1siRNA(pGenesil-1-YB-1-1、pGenesil-1-YB-1-2质粒)用脂质体转染PC-3细胞(转染组),以逆转录-PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Wesretn blotting)分别检测YB-1mRNA和蛋白的表达,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法和Transwell小孔实验检测PC-3细胞的增殖和侵袭力。结果与质粒对照组相比,转染组YB-1mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。重组质粒pGenesil-1-YB-1-1和pGenesil-1-YB-1-2组mRNA的抑制率分别达36.23%和39.42%,YB-1蛋白的抑制率分别达41.56%和55.33%。与正常对照组相比,转染组细胞增殖明显抑制(P<0.05),转染处理的穿膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默YB-1基因表达降低了前列腺癌细胞的增殖和迁移能力。     

晚期糖基化终末产物抑制大鼠外周血单个核细胞及成骨细胞增殖的作用机制

目的: 探索核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路在晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)干预大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)及下颌成骨细胞(osteoblasts,OB)后的作用机制,为进一步研究糖尿病所致牙周组织炎症的临床治疗提供一定的实验基础和理论依据。方法: 采用经典的制备方法获得AGEs,体外分离培养大鼠OB、PBMCs。应用CCK-8活力测试检测AGEs不同浓度、不同时间对细胞活力的影响。采用Western blot及qRT-PCR检测NF-κB、PI3K/PKB以及MAPK信号通路相关基因的表达变化。结果: 体外成功分离并培养出PBMCs和OB,PBMCs和OB的细胞活力与AGEs的作用浓度、时间以及二者交互作用均显著相关,随着AGEs刺激浓度及时间的增加,PBMCs和OB活力显著降低(P<0.001)。AGEs刺激可显著增加PBMCs 中NF-κB的表达,并使肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量增加(P<0.01);抑制NF-κB通路后,TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.01)。AGEs刺激OB后,随着作用时间的延长,NF-κB p65、JNK、p38磷酸化和非磷酸化蛋白显著升高(P<0.05),而IκB磷酸化蛋白表达显著升高的同时还伴有非磷酸化蛋白表达下降(P<0.01)。在mRNA水平,NF-κB p65、JNK、p38的表达显著升高,IκB mRNA表达显著下降(P<0.05);而Akt不论是磷酸化及非磷酸化蛋白表达,还是在mRNA水平的表达,差异均无统计学意义(P>0.05);加入MAPK信号通路抑制剂后,NF-κB p65、p38、JNK磷酸化和非磷酸化蛋白表达较只加了AGEs组均显著降低,IκB磷酸化蛋白显著降低,非磷酸化蛋白显著升高(P<0.05);qRT-PCR结果发现,与只加了AGEs组相比,加入JNK通路阻断剂后IκB表达显著升高(P<0.05),NF-κB p65、p38、JNK的表达呈下降趋势,但差异不具有统计学意义(P>0.05);与只加了AGEs组相比,加入p38信号通路阻断剂后NF-κB p65、p38、JNK的表达显著降低(P<0.05),IκB表达显著升高(P<0.05);而Akt改变在蛋白水平和mRNA水平依然未见统计学意义(P>0.05)。结论: AGEs能够抑制PBMCs和OB的增殖,NF-κB和MAPK信号通路很有可能参与调控过程,但与PI3K/PKB信号通路无关。     

下调Pygo2抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其cyclin D1的表达

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pygo2shRNA对U251细胞Pygo2mRNA和蛋白表达的干扰效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,BrdU掺入法检测DNA合成,Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pygo2shRNA对U251细胞cyclin D1、β-catenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2shRNA显著抑制了U251细胞Pygo2mRNA和蛋白的表达;Pygo2shRNA抑制U251细胞Pygo2表达后,细胞增殖显著降低,细胞更多地阻滞在G1期,且BrdU掺入显著减少,侵袭细胞数显著减少。此外,抑制Pygo2表达可显著下调U251细胞cyclin D1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体。抑制Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,可能通过下调Wnt信号靶基因cyclin D1的表达,使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。