基于HPLC-MSn和化学计量学的指纹图谱在毛诃子鞣质部位质量评价中的应用

目的：建立毛诃子鞣质部位HPLC指纹图谱。方法：采用Atlantic T3（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,流动相为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL?min-1,进样量20 μL,柱温30℃。采用相似度软件和SPSS、SIMCA软件对11批毛诃子鞣质部位的色谱数据进行化学计量学分析。结果：标定出20个共有峰。结果显示11批毛诃子鞣质部位相似度在0.832-0.973之间,只有新疆产地药材的鞣质部位的相似度在0.9以下。聚类分析将鞣质部位大致分为3类,与主成分分析结果一致。偏最小二乘判别分析找到1、13和14号峰可能是鉴别毛诃子样品最主要的色谱峰。采用HPLC-MSn方法总结出毛诃子鞣质部位中14个化合物的液质信息。结论：将毛诃子鞣质部位HPLC指纹图谱数据采用化学计量学分析方法进行分析,方法快速、简便、重复性好,可作为藏药毛诃子鞣质部位质量控制有效方法之一。     

基于化学计量学分析的诃子药材高效液相色谱指纹图谱研究

目的：建立诃子药材HPLC指纹图谱。方法：安捷伦ZORBAX SB-Aq C18色谱柱（4.6×250 mm,5 μm）;流动相为0.1%磷酸水-甲醇,梯度洗脱,流速1 mL·min-1,柱温35℃,检测波长270 nm,进样量20 μL。采用相似度软件和SPSS、SIMCA软件对10批诃子药材的色谱数据进行化学计量学分析。结果：标定17个共有峰,10批药材相似度在0.984-0.999之间,表明所含化学成分基本相同,差异不大。聚类分析可将样品分为4类,与主成分分析、偏最小二乘判别分析结果一致,VIP分析结果显示色谱峰5（没食子酸甲酯）、11、1（没食子酸）、10、12可能是鉴别诃子样品最主要的色谱峰。结论：所建立的诃子药材HPLC指纹图谱方法准确、稳定,通过化学计量学分析寻找区分不同品质诃子样品的标志性成分,可为诃子质量控制及评价提供参考。     

不同产地牛蒡子药材炮制前后HPLC指纹图谱研究

目的:应用HPLC对不同产地牛蒡子药材炮制前后进行指纹图谱研究。方法:采用Agilent EclipseXDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL.min,检测波长254 nm。结果:炮制对牛蒡子的HPLC指纹图谱模式有影响:生品共有峰有12个,指认了3个峰,炮制品共有峰有19个,指认了3个峰,本实验建立了牛蒡子药材及其制品的HPLC指纹图谱。结论:各产地牛蒡子药材HPLC色谱图中各成分得到了很好的分离,本实验建立的HPLC指纹图谱分析方法可用于区分牛蒡子药材生品及制品,可作为牛蒡子药材的专属性指纹。     

南药“凉粉草”药材水溶性成分HPLC指纹图谱鉴别研究

目的建立南药"凉粉草"水溶性成分的HPLC指纹图谱,为药材质量控制提供依据。方法采用Kromasil C_(18)(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脱,流速1.0 mL·min~(-1),检测波长254nm,柱温25℃。结果建立凉粉草药材水溶性成分HPLC指纹图谱,确定11个共有色谱峰,并指认图谱中的5个色谱峰,分别为咖啡酸、异槲皮苷、迷迭香酸苷、紫云英苷、迷迭香酸。对16批凉粉草药材指纹图谱进行聚类分析和主成分分析,筛选并判断合格样品,以合格样品构建指纹图谱共有模式,并用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004B版)对其质量进行分析与评价。结论该色谱方法简单、准确、重复性好,可用于凉粉草药材的质量评价。     

毛冬青HPLC-UV指纹图谱与化学模式识别

为了建立毛冬青的高效液相(HPLC-UV)指纹图谱的质量评价方法。该文采用Phenomenex Luna C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 m L·min~(-1),柱温30℃,进样量10μL。检测波长210 nm,根据相似度评价,结合化学计量学方法对毛冬青进行质量评价。结果建立了16批毛冬青HPLC-UV指纹图谱,标定共有峰29个,通过对照品指认了12个共有峰,其中14批样品指纹图谱的相似度均0.92,通过聚类分析可将样品聚为3类,结合主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析发现其中7个成分是造成不同批次样品差异性的主要标记物。根据色谱峰的紫外吸收特征,可将毛冬青药材的指纹图谱分为3个区:A区域色谱峰主要为木脂素及酚酸类成分;B区域色谱峰主要为皂苷类成分;C区域色谱峰主要为其他类成分。该文所建立的液相指纹图谱特征性和专属性强,可作为毛冬青药材内在质量控制的有效方法。     

蒙药肋柱花HPLC指纹图谱的研究

目的采用HPLC对15批不同采集地的蒙药肋柱花药材进行指纹图谱研究,并采用相似度评价蒙药肋柱花药材的质量。方法采用HPLC进行测定,色谱柱为YMC C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸水-甲醇,梯度洗脱,体积流量0.8 m L/min,检测波长254 nm,柱温30℃。运用色谱软件对指纹图谱进行相似度评价。结果建立了蒙药肋柱花药材的HPLC指纹图谱,确定了15个共有峰,指认了5个共有峰,15批次肋柱花药材与生成对照指纹图谱的相似度在0.881~0.997。结论首次建立肋柱花药材的HPLC特征指纹图谱,所建立的指纹图谱测定方法精密度、稳定性和重复性良好。     

新疆石榴皮HPLC指纹图谱研究

目的建立新疆石榴皮HPLC指纹图谱。方法采用Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%三氟乙酸溶液,梯度洗脱,流速1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长370 nm,进样量10μL,测定12批石榴皮样品,运用相似度分析软件建立石榴皮指纹图谱共有模式,并对色谱峰进行指认。结果建立了石榴皮HPLC指纹图谱,标定了18个共有峰,3个色谱峰得到指认,分别为α-安石榴苷、β-安石榴苷、鞣花酸。结论本研究建立的石榴皮HPLC指纹图谱方法稳定可行,可用于控制石榴皮质量。     

玉葡萄根HPLC指纹图谱研究

目的：建立玉葡萄根药材HPLC指纹图谱,为玉葡萄根质量评价提供依据。方法：色谱柱为Welch Ultimate LP-C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5μm)柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为280 nm;柱温为30℃。建立19批玉葡萄根指纹图谱,分别采用相似度评价、聚类分析、主成分分析等多元统计分析法对数据进行分析。结果：建立的玉葡萄根HPLC指纹图谱确定8个共有峰,通过与对照品比对,指认了5个成分,分别为没食子酸、5-O-没食子酰奎宁酸、儿茶素、2-methylphenyl-O-β-xylopyranosyl-(1→6)-O-β-glucopyranoside、表儿茶素没食子酸酯;除了S4号样品相似度为0.880外,其余样品相似度均在0.900以上;聚类分析可将19批样品分为4类,主成分因子分析结果显示色谱峰3、6～8号对药材质量影响较大。结论：该研究建立的指纹图谱方法重现性好,稳定可行,可为玉葡萄根药材的质量控制和评价提供参考。     

川建曲中5种成分含量的测定及HPLC指纹图谱的初步建立

目的:采用HPLC法同时测定建曲中5种成分的含量,并初步建立建曲HPLC指纹图谱。方法:采用YMC-Pack ODS-A(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱,检测波长:300nm,柱温:30℃,流速:1.0 mL/min,进样量:10μL。结果:通过12批样品指纹图谱的比较,确定17个共有峰,,指认5个主要成分,样品S3中没食子酸、异绿原酸B、异绿原酸C的含量最高,样品S12中隐绿原酸、异绿原酸A的含量最高。结论:所建方法为建曲质量标准的制订提供了参考。     

牛蒡根RRLC指纹图谱研究

目的研究不同产地牛蒡根药材的HPLC指纹图谱,为鉴定牛蒡根药材提供依据,为确定其最佳产地提供参考。方法以在牛蒡根中分离的5个化合物为对照峰,TSK gel ODS-140HTP(50mm×1.8 mm,2.3μm)色谱柱,流动相为0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),采用梯度洗脱;体积流量0.2 ml/min;柱温30℃;检测波长210 nm。利用HPLC法测定不同采收地的10个样品的色谱图谱。结果牛蒡根中所含成分的各色谱峰均得到了有效分离,在测定的10批药材中,共有13个色谱峰,其中图谱显示有12个峰为10批样品所共有,确定为特征指纹峰,对其中5个共有指纹峰进行了标记。结论该法建立的RRLC指纹图谱具有可靠性,可为进一步研究制定牛蒡根的质量标准提供依据。     

一测多评法测定枇杷叶有效部位中6种三萜酸成分的量

目的 建立枇杷叶有效部位中蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸的一测多评HPLC-ELSD测定方法。方法 以熊果酸对照品为内参物,建立其与蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸的相对校正因子,采用校正因子计算这5种三萜酸成分的量,实现一测多评;同时用外标法测定有效部位中该6种成分的量,并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评的合理性、可行性和重复性。结果 15批有效部位中6种三萜酸成分量的计算值与实测值无显著性差异。结论 该方法操作简便,测定结果准确,实现了只用一个对照品同步测定枇杷叶总三萜酸有效部位中6个成分的量,可为中药多指标成分质量评价模式提供参考。     

忍冬不同部位UPLC指纹图谱及化学模式识别研究

目的采用UPLC法建立金银花、忍冬叶和忍冬藤指纹图谱,对忍冬不同部位采用指纹图谱相似度评价及聚类分析和主成分分析等化学模式识别技术进行研究,以期为忍冬药材的综合利用提供科学依据。方法采用ACQUITYUPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,柱温30℃,样品室温度8℃,检测波长326、238、350 nm,进样量1μL。结果 28批样品有14个共有峰,与对照品色谱峰比对,指认了10个色谱峰,分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、马钱苷、芦丁、木樨草苷、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C,金银花(10批)、忍冬叶(9批)和忍冬藤(9批)化学成分组成及量均存在一定差异。采用聚类分析及主成分分析从化学成分上揭示了忍冬不同部位28批样品的相似性及差异性。结论金银花与忍冬叶化学成分较为相似,而与忍冬藤间存在差异,所建立的指纹图谱方法可为金银花、忍冬叶、忍冬藤的质量控制提供参考。     

基于UPLC-Triple-TOF-MS液质联用技术分析薏苡仁中的脂肪酸及其酯类化学成分

目的通过超高液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法(UPLC-Triple-TOF-MS)建立一种对薏苡仁中的脂肪酸及其酯类化学成分进行快速定性分析的方法。方法采用Agilent ZORBAX-SB C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm),流动相为乙腈-异丙醇(1∶1),等度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。采用电喷雾离子源正离子模式,扫描范围为m/z 100～1 500,并采用全扫描模式对样品数据进行收集,根据高分辨质谱结合二级质谱所得的信息对薏苡仁中脂肪酸及其酯类化学成分进行快速的鉴定。结果检测出薏苡仁中29种脂肪酸及其酯类化学成分,并对化合物的裂解规律进行分析。通过分子离子峰和碎片离子的质荷比、Scifinder和Reaxy网络数据库以及文献得知,这些化合物在离子源的作用下通过失去油酸、亚油酸、棕榈酸、氧化油酸等结构,得到不同质荷比的碎片离子,从而推测出29种脂肪酸及其酯类化合物的名称及结构式。结论研究建立的薏苡仁脂肪酸及其酯类化学成分定性分析的方法准确、快速、灵敏,为提高薏苡仁的质量控制水平及后续阐明薏苡仁的药效物质基础提供了实验依据。     

藏药坐珠达西中8种成分HPLC定量测定

目的建立藏药坐珠达西中8种成分的HPLC定量测定方法,提高藏药坐珠达西HPLC检测标准。方法采用HPLC法,Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1 mL/min,检测波长:没食子酸、苯甲酸、山柰酚、木香烃内酯和去氢木香烃内酯检测波长为225 nm,绿原酸检测波长为352 nm,西红花苷I和西红花苷II检测波长为455 nm。结果该方法分离度良好,标准曲线在线性范围内相关性良好,平均回收率为97.13%~101.42%。对5批10份坐珠达西测定和主成分分析(PCA),结果显示不同厂家的产品各聚一类,表明不同厂家产品质量差异较大;偏最小二乘法(PLS)的打分图分析表明,8种指标成分中没食子酸、苯甲酸、山柰酚、去氢木香烃内酯和西红花苷II对坐珠达西的质量贡献尤为明显。结论该方法稳定可靠、结果准确,具有较好的稳定性和重复性,可用于坐珠达西的HPLC定量检测和质量控制。     

熊胆粉不同极性部位HPLC指纹图谱及化学模式识别研究

目的 建立熊胆Fel Ursi粉不同极性部位的HPLC指纹图谱,比较不同提取部位化学成分之间的差异,为全面评价熊胆粉的质量评价提供参考。方法 将熊胆粉分别用醋酸乙酯、三氯甲烷、丙酮、无水乙醇、乙腈依次提取,浓缩干燥,用甲醇溶解,建立HPLC指纹图谱,并采用相似度评价系统软件进行数据分析。结果 10批熊胆粉醋酸乙酯部位共有模式共标记6个共有峰,三氯甲烷部位共有模式共标记8个共有峰,丙酮部位共有模式共标记8个共有峰,乙腈部位共有模式共标记10个共有峰,乙醇部位共有模式共标记16个共有峰,5种溶剂提取物均指认了4个共有指纹峰（牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸）。综合聚类分析和主成分分析（principal component analysis,PCA）结果,发现相同产地的熊胆粉,受不同厂家加工方法不同的影响,也存在一定的质量差异。通过正交偏最小二乘-判别分析（orthogonal partial least squares- discriminant analysis,OPLS-DA）,发现牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、乙醇部位10号峰、乙腈部位1、2号峰可能是熊胆粉质量差异的主要标志性成分。结论 所建立的HPLC指纹图谱可以反映熊胆粉的化学成分分布,为熊胆粉的整体质量评价提供参考,并为熊胆粉谱效关系研究提供一定依据。     

炒制对牵牛子中酚酸类成分含量的影响

目的 建立牵牛子中6个酚酸类成分（新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C）的HPLC含量测定方法,研究炒制前后牵牛子中这些成分的含量变化规律。方法 采用HPLC法同时测定新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C的含量,运用化学计量学方法对含量测定结果进行分析,并通过模拟炮制的方法对此类成分在不同温度下的转化进行初步研究。色谱条件为Kromasil C₁₈（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱（0～20min,10%甲醇;20～25min,10%～15%甲醇;25～45min,15%甲醇;45～50min,15%～30%甲醇;50～75min,30%甲醇;75～80min,30%～40%甲醇;80～110min,40%甲醇）,检测波长330nm,体积流量 1 mL/min,进样量10μL,柱温30℃。结果 与生品比较,炒制后牵牛子中绿原酸的含量无明显变化,新绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸 C 在炒制后含量显著上升;咖啡酸和异绿原酸A在炒制后含量显著下降。层次聚类分析（hierarchical clusteranalysis,HCA）将30批样品分为生品与炮制品2类,主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘-判别分析（partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA）均标记了4个差异性成分。各单体化合物在模拟炮制过程中发生了相互转化,转化程度与加热温度相关。结论 牵牛子与炒牵牛子的化学成分含量发生了一定程度改变,其中新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C可作为牵牛子炒制前后质量评价的关键性指标,可为牵牛子与炒牵牛子质量标准的建立和深入研究提供科学依据。     

不同产地薏苡仁药材中甘油三酯和脂肪酸含量测定及其质量评价

目的对不同产地薏苡仁药材中的7种甘油三酯含量及2种不饱和脂肪酸含量进行测定,评价不同产地薏苡仁药材的质量。方法采用HPLC-ELSD法测定薏苡仁药材中7种甘油三酯含量,建立HPLC-UV法测定油酸、亚油酸含量,并结合聚类分析对薏苡仁药材质量进行评价。结果 14批薏苡仁药材中三亚油酸甘油酯、1,2-二亚油酸-3-油酸甘油酯、1,2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油酯、1,2-二油酸-3-亚油酸甘油酯、1-棕榈酸-2油酸-3-亚油酸甘油酯、三油酸甘油酯、1,2-二油酸-3-棕榈酸甘油酯质量分数分别在0.31%～0.83%、0.81%～1.81%、0.38%～0.95%、1.19%～2.39%、0.67%～1.58%、0.71%～1.55%、0.44%～1.13%;14批薏苡仁药材中油酸、亚油酸含量分别在0.45%～0.72%、0.37%～0.53%;聚类结果可知,以甘油三酯和脂肪酸为变量可以把薏苡仁药材聚为3类。结论不同产地薏苡仁药材甘油三酯及脂肪酸的含量存在一定的差异,聚类结果未发现其含量和产地的相关性。多组分含量测定能更全面地反映薏苡仁药材的质量。     

一测多评法测定菊苣中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸B和异绿原酸A的量

目的建立菊苣Cichorium intybus中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸B和异绿原酸A的一测多评方法。方法以秦皮乙素为内参物,分别建立绿原酸、异绿原酸B和异绿原酸A的相对校正因子,并用该校正因子进行绿原酸、异绿原酸B和异绿原酸A量的计算(计算法),实现一测多评;同时采用外标法测定菊苣中4种成分的量(实测法),并比较计算值与实测值间的差异性,验证所建立方法的准确性、适用性和重复性。结果 8批菊苣中绿原酸、异绿原酸B和异绿原酸A量的计算值与实测值无显著差异。实验建立的菊苣中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸B和异绿原酸A的一测多评法准确性、可行性、重复性好。结论一测多评法测定菊苣中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸B和异绿原酸A的质量评价模式得到了验证,可用于菊苣药材的质量控制。     

光果甘草GgUGE基因的克隆和序列分析

目的:通过克隆光果甘草Glycyrrhiza glabra UDP-葡萄糖4-差向异构酶(UDP-glucose 4-epimerase,UGE)基因并进行生物信息学分析,探究光果甘草UGE基因与甘草酸生物合成分子调控之间的潜在关系。方法:从光果甘草主根中提取RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆得到UGE基因c DNA序列,测序并进行序列分析。结果:成功克隆得到一条长度为1 121 bp的光果甘草UGE基因(Gg UGE) c DNA序列,包含1个长度为1 053 bp的开放阅读框(ORF),共编码350个氨基酸残基,在Gen Bank上对所得c DNA序列进行注册,序列注册号为MK638908。序列分析表明Gg UGE基因编码蛋白为不稳定亲水蛋白,理论相对分子质量为39. 02 k Da,等电点为6. 13,不含信号肽,无跨膜区,二级结构以α-螺旋为主,保守结构域含有葡萄糖4-差向异构酶基因家族结构域。Gg UGE基因的c DNA序列和氨基酸序列聚类分析结果表明其与豆科植物亲缘关系最近,而与杨柳科植物亲缘关系较远。结论:首次克隆得到了光果甘草Gg UGE c DNA序列,对其进行了生物信息学分析,为后续Gg UGE基因的功能研究以及甘草酸生物合成分子调控机制的解析提供参考。     

基于主成分分析和聚类分析的发酵虫草菌粉类产品氨基酸比较研究

目的分析不同发酵虫草菌粉类产品氨基酸的含量差异,结合聚类分析和主成分分析法评价发酵虫草菌粉类产品的质量。方法采用氨基酸自动分析仪测定氨基酸含量,色谱柱为LCA K06/Na离子柱,流动相为柠檬酸钠0.06 mol/L(pH 3.45)(A)-柠檬酸钠0.1 mol/L(pH 10.85)(B),梯度洗脱:0~3.5 min,100%A;3.5~11.0 min,85%A;11.0~17.0 min,80%A;17.0~23.5 min,67%A;23.5~28.0 min,20%A;28.0~45.0 min,100%B,体积流量为0.45 m L/min洗脱泵+0.25 m L/min衍生泵;检测波长440 nm(脯氨酸)+570 nm(其余氨基酸);温度为58~74℃梯度控温,进样50μL,外标法测定氨基酸含量。结果分别对3种发酵虫草菌粉类产品A、B、C中氨基酸进行含量测定,产品A总氨基酸质量分数为251.82~265.93 mg/g,产品B总氨基酸质量分数为279.67~333.40 mg/g,产品C总氨基酸质量分数为321.37~370.86 mg/g,样品各批次间一致性较好。产品A和产品B为同一原料药,氨基酸含量差异不明显,产品C中组氨酸和精氨酸含量与产品A和产品B存在较大差异。主成分分析筛选的前3个主成分的累积方差贡献率达到93.551%,包含了各样品中氨基酸含量的大部分信息。聚类分析将30批样品聚为2类,其中产品A和产品B聚为一类,产品C聚为一类,聚类分析结果与实际情况相符。变量聚类分析表明当氨基酸变量聚为5类时,随机选择其中的5个变量能够准确反映发酵虫草菌粉氨基酸的质量。结论通过氨基酸含量差异研究,能够有效区别不同发酵虫草菌粉类产品,结合主成分分析和聚类分析能够客观评价发酵虫草菌粉类产品的质量。