华重楼地上部分新的甾体皂苷类成分

重楼药材的供不应求促进了对其基原植物地上部分废弃资源的综合利用与开发研究。前期基于液质联用技术明确了华重楼地上部分的化学组成,并从中分离得到一系列黄酮和甾体皂苷类成分,该研究继续针对基于液质联用技术发现的潜在新化合物进行分离和结构鉴定研究。采用硅胶、ODS、Flash快速制备等柱色谱技术,结合制备高效液相色谱,从华重楼地上部分75%乙醇提取物分离得到5个化合物,通过波谱数据结合化学转化的方法鉴定了5个化合物的结构,分别为(23S,25R)-23α,27-二羟基薯蓣皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、(25R)-26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-呋甾-5-烯-3β,22α,26-三醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、(25R)-27-O-β-D-吡喃葡萄糖基-5-烯-3β,27-二羟基螺甾-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)]-...     

基于多指标成分含量测定及HPLC指纹图谱的多茎重楼品质评价

目的 HPLC法测定不同产地多茎重楼Paris polyphylla Smith var. yunnanensis根茎中重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅴ的含量,建立其HPLC指纹图谱,并与滇重楼根茎对照药材HPLC指纹图谱进行比较分析。方法采用Thermore C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为水-乙腈,梯度洗脱,检测波长203 nm;柱温30℃;体积流量1 mL/min;进样量10μL,外标法与一测多评法同时对不同产地多茎重楼根茎中重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅴ的含量进行测定,采用单因素方差分析法对含量差异进行分析;建立多茎重楼根茎HPLC指纹图谱,并与滇重楼根茎对照药材HPLC指纹图谱进行比较分析。结果不同产地多茎重楼根茎重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅴ的含量测定结果表明,在线性范围内线性关系良好(r0.9997),平均加样回收率为98.34%～99.34%,RSD≤1.00%;不同产地多茎重楼根茎中重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅴ的含量存在显著(P0.05)或极显著(P0.01)差异,重楼皂苷(Ⅰ+Ⅱ+Ⅵ+Ⅶ)总量在1.239%～6.236%,显著高于《中国药典》规定的重楼药材质量控制标准的0.60%,且外标法与一测多评法测定结果无显著性差异。HPLC指纹图谱相似度评价结果表明,不同产地多茎重楼和滇重楼对照药材根茎中共有12个共有指纹特征峰,二者HPLC指纹图谱相似度较高。结论该方法操作简单、准确、重复性好,可用于多茎重楼根茎中重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅰ、Ⅴ的含量测定;不同产地多茎重楼根茎中重楼皂苷(Ⅰ+Ⅱ+Ⅵ+Ⅶ)总含量较高,不同产地多茎重楼与滇重楼对照药材根茎HPLC指纹图谱相似度较高。     

生长年限对滇重楼中甾体皂苷活性成分和生物量积累的影响

目的 探究云南重楼Paris polyphylla var.yunnanensis（滇重楼）根茎中甾体皂苷活性成分和生物量积累随生长年限的变化状况,以期为滇重楼的质量控制提供科学依据。方法 以7、8、9、11、12、13、14、15年生滇重楼为研究对象,采用HPLC法和直接称重法测定不同年限滇重楼根茎中8种甾体皂苷（重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅲ、H、V和纤细薯蓣皂苷）含量和生物量。结果 8种甾体皂苷活性成分线性关系良好（R²≥0.999 5）,精密度、重复性、稳定性和加样回收率的RSD值均小于3%,验证了该方法的可行性;随着年限的增长,滇重楼根茎生物量呈逐渐增长的趋势,其生长发育可分为增长缓慢期（第1～4年）、增长快速期（第5～10年）和增长平缓期（第11年后）3个阶段,其中7年生滇重楼根茎生物量增长最快,平均年增长量达（31.843±14.225）g;滇重楼根茎中8种甾体皂苷成分含量在不同生长年限的变化呈随机波动、无规律,《中国药典》2020版规定的3个指标成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ含量之和与8种甾体皂苷总和的变化趋势一致;用4个主成分对不同年限滇重楼药材进行综合评价,结果显示7年生样品在所有样品中的综合得分位于前7名。结论 建立了同时测定滇重楼中8种甾体皂苷活性成分含量的方法,可用于滇重楼的质量评价;滇重楼并非种植年限越长越好,建议以7年生滇重楼采收入药为最佳。     

UPLC法测定云南省不同地区云南重楼及多芽品系中7种甾体皂苷量及其指纹图谱建立

目的以云南省不同地区云南重楼及多芽品系为材料,采用UPLC-ELSD法同时测定7种甾体皂苷量并建立高黎贡山地区样品UPLC指纹图谱,评价其质量。方法采用UPLC-ELSD法,ACQUITY UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,体积流量0.2 m L/min,漂移管温度55℃,氮气压力275.8 k Pa,增益500,以乙腈-水为流动相梯度洗脱。结果样品在23 min内能完全被分离,方法学考察均符合要求;23份样品中19份符合《中国药典》2015年版要求,《中国药典》项下4个皂苷平均质量分数为1.42%,其中高黎贡山地区的样品平均质量分数高达1.660%;10批次高黎贡山地区云南重楼(多芽品系)样品间相似度小于0.9,标定了8个共有特征峰,并对4个特征峰进行了归属;样品中7个皂苷的种类和量经PCA分析和系统聚类分析均不能明显分类。结论该方法简便、快速、灵敏度高,可用于云南重楼的质量快速评价;云南重楼及其多芽品系在化学成分种类和量上并无明显区别;高黎贡山地区的云南重楼(多芽品系)是一个值得推广栽培和深入研究的品种。     

四川盆周山地重楼属植物药用资源的筛选及评价

目的挖掘具有药用价值的优异重楼属植物资源,缓解药用重楼资源压力,为促进重楼的可持续利用提供材料基础。方法在四川盆周山地采集21份重楼资源,根据表型筛选出大块茎资源GQ与MH,多芽资源GK。初步形态鉴定后,利用DNA条形码ITS、psbA-trnH序列,采用Kimura双参数模型构建ML系统聚类树,进行系统发育分析。采用HPLC法检测其主要活性成分皂苷的含量,以预测其潜在药用价值。结果形态学结合分子鉴定结果表明,GQ、GK和MH分别依次为华重楼、滇重楼和长柱重楼。GQ、GK、MH和对照滇重楼(CK)的重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量及其比例表现各异,其中总含量表现为GQMHCKGK,重楼皂苷Ⅰ在GQ和MH中占比较高,分别较CK高出67.61%和73.25%,而重楼皂苷Ⅶ在GK中占比最高,表现为56.38%。结论 GQ、GK和MH分别为产于四川盆周山地特定居群的华重楼、滇重楼和长柱重楼,引种至成都平原后性状表现优良,为后续的重楼的育种研究提供了材料基础;同时3个资源均具药用潜力,其中长柱重楼MH居群资源的重楼皂苷Ⅰ及重楼皂苷总含量较高,为滇重楼、华重楼替代药材的筛选提供了新选择。     

重楼皂苷VII对骨关节炎大鼠病理损伤和细胞外基质的影响

目的:研究重楼皂苷VII对大鼠骨关节炎和细胞外基质影响。方法:采用前交叉韧带横断(ALCT)手术处理大鼠,将成模大鼠分为:骨关节炎模型组、重楼皂苷VII 25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg组和双醋瑞因胶囊50 mg/kg组,另设假手术组。开放性运动测试检测大鼠10 min运动距离;苏木素-伊红染色和番红O-固绿染色检测大鼠骨关节病理损伤程度;ELISA试剂盒检测膝关节液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)水平和血清中IL-1β、基质金属蛋白酶9(MMP9)、解聚素金属蛋白酶5(ADAMTS-5)含量。结果:与假手术组相比较,骨关节炎模型组10 min运动距离显著降低,病理损伤程度明显改善且Mankin's评分及OARSI评分显著升高,膝关节液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著升高,血清中IL-1β、MMP9、ADAMTS-5含量显著升高;与骨关节炎模型组相比较,重楼皂苷VII 50、100 mg/kg和双醋瑞因胶囊组10 min运动距离显著升高,病理损伤程度明显改善且Mankin's评分及OARSI评分显著降低,膝关节液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低,血清中IL-1β、MMP9、ADAMTS-5含量显著降低。结论:重楼皂苷VII具有改善骨关节炎病理损伤程度,调节细胞外基质的作用。     

华重楼皂苷类化学成分与生态因子的相关性

目的:明确华重楼皂苷类成分与生态因子的相关性。方法:利用HPLC测定了不同华重楼样品中重楼皂苷的含量;利用数字高程模型和Arc GIS软件提取生态因子数据(年平均气温,海拔,相对湿度,年日照时数,年降水量,7月最高气温,7月平均气温,1月最低气温和1月平均气温);应用主成分分析方法确定了偏诺皂苷-3-O-β-D-glu(1→3)[α-L-rha(1→2)]-β-D-glu(PGGR),重楼皂苷Ⅶ,H,Ⅰ和Ⅴ是华重楼的主要有效成分;采用回归分析法分析了这些生态因子与重楼药材皂苷类化学成分之间的相关性和变量投影重要性,应用SPSS 22.0偏最小二乘回归方法建立了回归方程。结果:青川、洪雅、巴中的重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ的总量达到了2015年版《中国药典》重楼项下0.6%的最低限量标准,认为这几个产地华重楼品质较优;生态因子中日照时数,7月最高气温,7月平均温度与重楼皂苷Ⅶ和PGGR呈负相关关系,1月最低气温和1月平均气温与重楼皂苷Ⅶ和PGGR呈正相关关系。日照时数,7月最高气温,7月平均气温与重楼皂苷H,I和V呈正相关关系,海拔高度,相对湿度,年均降水量,1月平均气温与重楼皂苷H,I和V呈负相关关系。结论:明确了华重楼化学成分与气象因子之间的相关性,为培育质优、高产的华重楼提供理论基础,同时为华重楼的规范化生产提供理论支持。     

重楼中几个甾体皂苷类成分对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的 对重楼中的成分进行分离鉴定,结合药理模型筛选具有抑制血管生长活性的成分.方法 采用乙酸乙酯提取和硅胶柱层析法进行提取分离;利用1HNMR、13CNMR、13CNMR-APT、MS、IR、UV确定其化学结构,并且应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选.于鸡胚发育的第7天,将加药后的明腔海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育2d后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出观察.结果 从重楼中分离得到了4个甾体皂苷类成分,分别为重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅴ和纤细薯蓣皂苷.通过活性筛选发现重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷3组鸡胚尿囊膜的小血管数目均小于空白组,其中重楼皂苷Ⅰ经统计分析P＜0.05具有显著性差异.结论 重楼皂苷Ⅰ具有抑制血管生长的活性.     

陕重楼甾体皂苷类单体豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:探讨陕重楼甾体皂苷类单体A(BM-26)豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响。方法:将不同浓度单体A(BM-26)与人肝癌SMMC-7721细胞分别在24、48、72 h处理后,采用MTT法,测定吸光度A值,并计算细胞增殖抑制率,检测陕重楼甾体皂苷类单体A(BM-26)对肿瘤细胞增殖的影响。结果:不同质量浓度陕重楼甾体皂苷类单体A(BM-26)对人肝癌SMMC-7721细胞均有抑制作用:24 h处理时,质量浓度为8、40、200μg·m L~(-1),1、5、25 mg·m L~(-1)组与对照组相比较,吸光度A值有显著性降低(P0.01或P0.05);48 h处理时,质量浓度为0.3、1.6、8、40、200μg·m L~(-1),1 mg·m L~(-1)组与对照组相比较,吸光度A值有显著性降低(P0.01或P0.05);72 h处理时,质量浓度为8、40μg·m L~(-1)组与对照组相比较,吸光度A值有显著性降低(P0.01或P0.05)。其中质量浓度为8μg·m L~(-1)时,在24、48、72 h抑制率分别为45%、41%、36%。结论:陕重楼单体A(BM-26)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖具有一定的抑制作用,且最强抑制质量浓度为8μg·m L~(-1),有效抑制质量浓度范围是8~40μg·m L~(-1)。     

白首乌中3个C21甾体皂苷类成分对人肺癌A549细胞生长及周期的影响

目的:探讨白首乌的3个C_(21)甾体皂苷类成分对人肺癌A549细胞生长的抑制作用及对细胞周期的影响.方法:按浓度梯度配置3个C_(21)甾体皂苷类成分,使终浓度分别为5,10,20,40,60,80,100 μmol·L~(-1),采用MTT法检测3个C_(21)甾体皂苷类成分作用48 h各浓度对人肺癌A549细胞生长的抑制作用;分别选择3个C_(21)甾体皂苷类成分的IC_(50)近似浓度(47,34,60 μmol·L~(-1))处理细胞12,24,48 h后,采用流式细胞仪检测对细胞周期变化的影响.结果:分离得到的3个C_(21)甾体皂苷:隔山消苷C_1N、隔山消苷C_3N、隔山消苷K_1N作用48 h的IC_(50)分别为46.07,33.02,59.92μmol·L~(-1);细胞周期分析显示,随着作用时间的延长(12,24,48 h),隔山消苷C_1N、隔山消苷C_3N使G_0/G_1期细胞数逐渐增加,S和G_2/M期细胞数逐渐减少(P<0.05,P<0.01);隔山消苷K_1N使S期细胞数减少,G_2/M期细胞数增加(P<0.05,P<0.01).结论:3个甾体皂苷对A549细胞均有不同程度的生长抑制作用,并呈浓度依赖性,其作用机制可能与3个甾体皂苷诱导细胞周期阻滞有关.     

不同遮阴处理对七叶一枝花生长 光合特性及品质的影响

目的 七叶一枝花是典型的阴生植物,研究不同遮阴条件对七叶一枝花叶片光合作用、生长和代谢产物含量的影响。方法 在85%和95%遮阴条件下,采用紫外-可见分光光度法测定七叶一枝花叶片的光合色素含量,运用便携式光合作用测定仪测定叶片净光合速率（P_n）、胞间二氧化碳浓度（C_i）、蒸腾速率（T_r）、气孔导度（G_s）并拟合光响应曲线,测定植株的生长指标并利用超高效液相色谱-紫外法（UPLC-UV）与高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）测定不同部位皂苷类及糖类成分含量。结果 95%遮阴条件下叶绿素含量与植株生长指标均优于85%遮阴;95%遮阴条件下叶片的日光合速率低于85%遮阴,但C_i、T_r和G_s的光响应差异无统计学意义;不同遮阴条件对重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷含量有极显著影响,且往年生根茎和须根中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅶ总量在2种遮阴条件下差异有统计学意义（P<0.01）,85%遮阴较高;不同遮阴条件对根部的蔗糖含量影响较大,95%遮阴处理蔗糖含量较高。七叶一枝花移栽到北京后极喜阴,在95%遮阴下植株农艺性状得到改善。结论 研究结果为开展优化遮阴度和遮阴时间以平衡植物生长、增加活性代谢产物的积累研究提供参考。     

华重楼植株的快速繁殖研究

目的以华重楼Paris polyphylla var.chinensis根茎为外植体,建立华重楼植物的快速繁殖技术。方法以MS为基本培养基,通过研究激素6-BA、2,4-D、NAA、IBA、KT、IAA和头孢曲松钠、活性炭等对愈伤组织诱导、不定芽分化和不定根产生的影响,找出组培苗诱导培养的最佳培养基配方。结果华重楼最佳愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.5mg/L+2,4-D 3.0 mg/L;最佳不定芽分化培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+IAA 0.3 mg/L+KT 1.0 mg/L+头孢曲松钠300 mg/L;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+活性炭0.5%。当组培苗长出第1片叶且不定根长出4条以上时将组培苗取出,先放在无菌水中栽培5 d,再移栽至松软土壤中,组培苗生长健壮,成活率为100%。结论在获得愈伤组织的基础上,进一步完成对不定芽的诱导与无根苗生根培养,筛选出了培育华重楼组培苗的最佳条件。     

七叶一枝花种子萌发不同阶段生理生化变化研究

目的探讨七叶一枝花Paris polyphylla var.chinensis种子萌发不同阶段的酶和内源激素调控机制,为其种子解除休眠、萌发不同阶段采取有效处理措施,提高出苗率提供科学依据。方法通过观察和测定变温层积处理后七叶一枝花种子萌发不同阶段形态差异,采用常规的生理生化方法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、苹果酸脱氧酶(MDH)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PDH)5种酶活性,采用质谱定量方法测定吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)、水杨酸(SA)、反玉米素(TZ)、茉莉酸(JA)量;研究种子萌发过程中胚率与酶活性和内源激素量变化之间的相关性。结果七叶一枝花种子从未萌动、上胚轴休眠到即将出苗阶段,种子质量和胚率逐步上升;SOD和POD活性逐步升高;CAT和MDH活性逐步减弱,G-6-PDH活性出现双峰,未萌动阶段和萌动后上胚轴未伸长阶段显著高于其他阶段;IAA、GA3、ABA、JA的量逐步升高,IAA和JA量在即将出苗阶段显著高于其他阶段(P0.01);TZ和SA的量先升高后降低,TZ的量在子叶分化形成期和胚乳成熟期显著高于其他阶段(P0.01),SA出苗前期量最高,已萌动胚根刚突破种皮阶段和胚乳形成阶段量次之;CAT酶活性变化与胚率呈显著负相关,IAA和JA的量变化与胚率呈显著正相关。结论CAT对种胚的生长有抑制作用,IAA与JA对种胚的生长有正向促进作用。     

七叶一枝花繁育技术研究进展

七叶一枝花作为《中国药典》重楼药材的重要来源,具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之功效,临床用于抗肿瘤、抗菌、止血、镇痛等。而七叶一枝花为多年生草本植物,繁殖率低,耗时长,从种子萌发到药用需7年以上时间,资源再生慢。由于近几年的过度采挖,七叶一枝花消耗量远超其野生资源生长量,导致市场售价随之飙升,严重威胁药材资源的正常生存和可持续利用。为解决这种资源匮乏和临床需求矛盾,发展人工繁育技术,培育七叶一枝花人工繁育品,已成为保护野生资源、满足临床需要的最佳途径。通过检索七叶一枝花繁育技术相关文献,对其内容进行归纳总结,并从繁殖采种及种苗培育两方面对其进行综述,为人工繁育技术提供理论指导,同时结合种苗生长过程中相关性影响的化学成分,探讨其繁育品的种植质量。七叶一枝花人工繁育技术作为培养优质繁育品的第一步至关重要,但其后续品质的检测同等关键,本文展望未来以多学科、多角度对中药七叶一枝花人工繁育品及野生品建立品质评价体系研究,以保障中药材品质质量,为近一步开发利用七叶一枝花资源提供参考。     

重楼根际及药用部位内生真菌多样性与群落结构差异分析

目的寻找能促进宿主植物活性代谢产物合成的微生物,为后续功能菌群的建立及功能基因的发掘,提供理论支持。方法应用IlluminaMiseqPE250高通量测序技术对重楼根际土壤真菌、根及根茎内生真菌ITS1区进行序列测定,并进行生物信息学分析。结果测序结果共获得154228条序列,这些序列对应的根际土、根茎、根分别被聚类为408、119、57个OTUs。结论重楼根际及内生真菌多样性的关系为根际土根茎根,在重楼药用部位根茎中发现Mucoromycota门较非药用部位根中的门为特有门,Ascomycota门为优势门,Roseodiscus属真菌为重楼根茎内生真菌优势菌群,根茎和根部的特有种群及优势菌群可能与重楼活性产物合成密切相关。     

基于16 S rRNA序列研究华重楼植株可培养内生细菌的多样性

目的分析华重楼Paris polyphylla健株和茎腐病感病植株内生可培养内生细菌的多样性。方法用牛肉膏蛋白胨培养基分离华重楼茎腐病及健康植株根茎、茎、叶等不同部位的细菌,采用16 S rRNA通用引物27F/1492R进行PCR扩增结合DNA测序技术,对分离自华重楼健株及茎腐病植株不同部位的细菌进行初步鉴定。结果从华重楼的健康植株和感病植株中分离到11属23种细菌。从健株分离到4属11种内生细菌,其中根茎、茎、叶分别分离到9、10和5种内生细菌。从病株分离得到10属14种内生细菌,其中根茎、茎、叶分别分离到11、8和3种内生细菌。华重楼健株的根茎部内生细菌量最高,达2.999×105 cfu/g,叶部内生细菌量较低,为7.32×104 cfu/g,华重楼健株根茎、茎、叶中的芽孢杆菌量最高,比例分别为73.3%、67.1%和81.8%。华重楼病株的茎部内生细菌量最高,达2.817×105 cfu/g,叶部内生细菌量较低,为2.76×104 cfu/g,华重楼病株的根茎、茎、叶部的假单胞菌量最高,比例分别为35.6%、50.3%和60.5%。华重楼健株不同部位的多样性指数和均匀度指数均高于病株。结论华重楼健康植株以芽孢杆菌为优势细菌类群,华重楼茎腐病植株以假单胞菌为优势细菌类群。华重楼健株相比病株具有更为丰富的内生细菌群落多样性。     

氮、磷、钾配施对华重楼根茎的产量和有效成分含量的影响

目的 研究不同梯度水平氮、磷、钾肥对华重楼根茎的产量和品质的影响,确定华重楼植物的最适施肥方案,为合理施肥提供科学依据。方法 采用3因素5水平2次通用旋转组合设计进行田间试验,研究氮、磷、钾肥配施对华重楼根茎的产量总皂苷含量、灰分、水分和浸出物的影响。结果 建立的回归方程均达到显著水平;当施用氮肥41.66~52.60 kg/hm²、磷肥181.38~244.38 kg/hm²、钾肥24.16~35.20 kg/hm²时,华重楼根茎的增重率大于81.72%;当施用氮肥45.48~53.83 kg/hm²、磷肥179.98~236.83 kg/hm²、钾肥29.80~39.95 kg/hm²时,华重楼根茎的总皂苷含量大于11.09%;当施用氮肥28.01~37.79 kg/hm²、磷肥127.18~209.18 kg/hm²、钾肥25.27~34.09 kg/hm²时,华重楼根茎的浸出物含量大于14.31%。结论 氮、磷、钾肥配施有利于华重楼根茎的增重率、总皂苷含量和浸出物含量的提高,华重楼植物的最佳施肥量为氮肥37.79~45.48 kg/hm²、磷肥181.38~209.18 kg/hm²、钾肥29.80~34.09 kg/hm²。     

基于形态和红外光谱分析的云南重楼及近似种的快速鉴别

目的基于形态和红外光谱法建立云南重楼及近似种的鉴别方法,并进一步分析其亲缘关系,为资源开发利用提供依据。方法对云南重楼及其近似种进行了原植物形态比较,并对光谱数据进行自动基线校正、自动平滑、纵坐标归一化、二阶求导等预处理,采用主成分分析(principalcomponentanalysis,PCA)、偏最小二乘判别分析(partialleastsquares discriminantanalysis,PLS-DA)及系统聚类分析(hierarchicalclusteranalysis,HCA)分析光谱数据。结果云南重楼与近似种在植株大小、叶片、叶脉、萼片、花瓣、花亭和雄蕊等形态特征上存在典型的鉴别特征,可为其提供形态鉴别依据。6种重楼的二阶导数在3 000～2 000 cm-1和指纹区1 800～500 cm-1波段内差异明显,HCA和PLS-DA均能较好地区分云南重楼及近似种,可为其提供红外光谱鉴别证据。HCA结果表明云南重楼、七叶一枝花、狭叶重楼、矮重楼和多叶重楼亲缘关系较近。结论傅里叶变换红外光谱(FTIR)结合原植物形态鉴定能够快速鉴别云南重楼及其近似种,为指导重楼栽培、临床应用和资源开发提供科学依据。     

武当山区重楼属植物基于ITS2的种内鉴别研究

目的对武当山区重楼属植物进行种内分子鉴定研究,以DNA条形码技术解决重楼因种内形态差异小而难以鉴别的问题,规范重楼的正品来源,确保本地药材的质量以及临床用药的有效性。方法对ITS(internal transcribed spacers)序列进行克隆测序,以核基因ITS2片段作为DNA条形码,对研究材料进行PCR(polymerase chain reaction)扩增并双向测序,所得序列经Codon Code Aligner拼接后,用软件MEGA6.0(Molecular Evolutionary Genetics Analysis 6.0)进行相关数据分析,并构建NJ邻接树(neighbor-joining tree),利用Keller等建立的ITS2数据库及其网站预测ITS2的二级结构。结果经BLAST鉴定,采集的武当山区重楼样本来源准确;武当山区重楼属植物ITS2序列长度均为232 bp,与七叶一枝花的基因序列相比,球药隔重楼有16个变异位点,华重楼只有1个变异位点;武当山区重楼的ITS2序列种内K2P(Kimura-2-parameter)距离为0~0.073 6,种内平均K2P距离为0.027 2;由所构建的系统聚类树可以看出,本地区重楼主要分为七叶一枝花和球药隔重楼2大类,华重楼为七叶一枝花的变种,宽叶重楼、狭叶重楼与七叶一枝花为一支,不支持宽叶重楼、狭叶重楼成为独立的变种;比较ITS2二级结构发现,武当山区重楼属植物螺旋区的茎环数目、大小、位置有明显差异。结论 DNA条形码为重楼属药用植物鉴别开辟一条新途径,不论是相似性搜索法、最近距离法还是NJ系统发育树等方法,其分析结果均充分表明,ITS2序列可将不同品种重楼药材很好地区分开;七叶一枝花、狭叶重楼、宽叶重楼的ITS2基因232个碱基序列完全相同,MEGA 6.0的分析结果也表明宽叶重楼、狭叶重楼与七叶一枝花属于一支,不支持宽叶重楼、狭叶重楼成为独立的变种,建议作为七叶一枝花的变型处理;ITS2作为DNA条形码序列能够有效地区别重楼属植物,在中药材的鉴定中具有重要的应用前景,在实现规范化种植规程中可用于种质种源的正确鉴定。