Ca2+在紫外线诱导成纤维细胞凋亡中的作用

目的了解细胞内外钙离子浓度对紫外线(UVB)辐射诱导成纤维细胞(NIH3T3)凋亡作用的影响.方法 UVB照射成纤维细胞10 min,培养12 h后,用流式细胞仪测定凋亡率. 结果 UVB照射组比UVB不照射组凋亡率有明显增加;UVB照射组内各组间凋亡率因细胞内外Ca2+浓度不同存在明显差异. 结论 UVB辐射诱导成纤维细胞发生凋亡与胞内外Ca2+浓度有关,Ca2+参与了凋亡的信号转导.UVB诱导成纤维细胞发生的凋亡,主要通过Ca2+转导凋亡信号这一途径,还反映出胞浆Ca2+升高既来源于胞内钙池,又来源于胞外游离Ca2+.     

miRNA在中波紫外线照射的NIH3T3细胞中的差异表达谱

目的应用miRNAs芯片筛选中波紫外线（UVB）照射的NIH3T3细胞表达miRNAs,并寻找差异表达miRNAs调控的靶基因。方法 miRNAs微阵列技术筛选UVB照射的NIH3T3细胞差异表达miRNAs,同时运用miRNAs特异的引物组对差异表达的miRNAs进行荧光定量RT-PCR验证。结果 NIH3T3细胞受不同剂量UVB照射后,MTT结果显示细胞生存率明显下降。miRNAs芯片结果显示,实验组细胞与对照组细胞差异表达的miRNA共30个（占11%）,其中27个表达上调,3个表达下调。mmu-miR-365和mmu-miR-21显著上调,而mmu-miR-465在不同的时间点都下调。其差异表达均在2倍以上;mmu-miR-let-7a、mmu-miR-24、mmu-miR-376b和mmu-miR-21的实时荧光定量RT-PCR验证结果与芯片表达结果基本一致。结论 miRNA在UVB照射的NIH3T3细胞中有差异表达,提示miRNA可能参与UVB照射后NIH3T3细胞内的多种信号调控途径。     

五种抗氧化剂对细胞膜紫外线损伤的防护作用

目的 研究5种抗氧化剂对细胞膜流动性的防护作用。方法 用粘附式细胞仪(ACAS570) 检测。结果与结论 紫外线（UVB）照射能迅速增高NIH3T3细胞中的脂质过氧化物。UVB照射10 min的NIH3T3细胞 (阳性对照组) 膜流动性明显低于阴性对照组(正常NIH3T3细胞,不用UVB照射)。超氧化物歧化酶（SOD）的保护作用不明显,加入该抗氧化剂的样本其细胞膜的流动性降低到与阳性对照组相同的数量级。维生素E、过氧化氢酶（CAT）、SOD+CAT、茶多酚的保护作用较明显,加入这些抗氧化剂的样本其细胞膜的流动性与阳性对照组比较,均高出一个数量级。     

受体介导甲胎蛋白对NIH3T3细胞增殖的促进作用

目的:探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)促新生细胞增殖作用的分子机理。方法:从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的NIH3T3细胞;用3H-TdR参入法观察AFP对细胞DNA合成的影响以及放射受体分析法分析NIH3T3细胞膜表面AFP受体分布;观察在AFP作用下细胞内的第二信使物质环磷酸腺苷(cAMP)浓度及依赖cAMP激活的蛋白激酶A(PKA)活性的改变;Westernblot分析AFP对增殖相关的P21ras表达的影响。结果:10～80mg/L的AFP对NIH3T3细胞的DNA合成有明显的促进作用,与对照组比较最大增幅为121.9%;在NIH3T3细胞膜表面存在2种不同解离平衡常数(KD)的AFP受体,KD1=2.722nmol/L(12810位点/细胞);KD2=89.305nmol/L(119700位点/细胞);AFP能显著提高NIH3T3细胞内的cAMP浓度及PKA活性;对P21ras的表达也有明显的促进作用。结论:AFP促NIH3T3细胞增殖是通过细胞膜表面受体介导,经跨膜cAMP-PKA信号转导途径,影响基因表达来实现的。     

人类乳头瘤病毒16型DNA诱导NIH 3T3细胞的恶性转化

用人类乳头瘤病毒（ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ，ＨＰＶ）１６型ＤＮＡ，通过磷酸钙沉淀技术在体外成功地使ＮＩＨ３Ｔ３细胞发生恶性转化，转化细胞克隆后分析表明存在如下特征：转化细胞形态上变宽，呈多角状生长并形成集落；细胞的停泊依赖性下降；能在含１％小牛血清培养基中良好生长。转化细胞的密度依赖性下降。用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交发现ＨＰＶ１６ＤＮＡ以整合状态存在于ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＤＮＡ中。     

血小板生长因子在NIH3T3成纤维细胞和MT3转化细胞应答中的作用

血小板生长因子(PDGF)通过促进细胞外Ca~(2 )内流,增加细胞内Ca~(2 )浓度,但在亲代NIH3T3成纤维细胞和转化的MT3细胞中,却表现出不同的作用。在亲代NIH3T3成纤维细胞中,PDGF能够抑制舒缓激肤介导的细胞内Ca~(2 )浓度增加,未能见到细胞内Ca~(2 )波动现象;而在转化的MT3细胞中,PDGF丧失了对舒缓激肽介导的细胞内Ca~(2 )浓度增加的抑制作用,常常引起细胞内Ca~(2 )波动现象。对于DNA的合成,PDGF在两种细胞中,也表现出有时程的差异。     

超氧阴离子自由基致NIH3T3细胞DMA损伤与c—myc基因表达

目的 研究超氧阴离子自由基（Ｏ２．＾－）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞ＤＮＡ的损伤及其脂质过氧化作用和对ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。方法 用黄嘌呤黄嘌呤氧化酶（Ｘ－ＸＯ）系统产生Ｏ２．＾－,测定ＤＮＡ－溴乙锭结合物荧光强度变化确定ＤＮＡ损伤程度以太代巴比妥酸法测定脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）含量,以细胞原位杂交法检测ｃ－ｍｙｃ基因表达。结果 高剂量Ｏ２．＾－能直接引起ＤＮＡ断裂损伤。Ｏ２．＾－能引起明显的ｃ－     

稳定表达NT-3的NIH3T3细胞对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响

目的通过体外共培养观察NT-3对耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响.方法建立能够稳定表达、分泌NT-3蛋白的NIH3T3细胞系;选择出生2～4 d的BALA/CA小鼠,进行耳蜗螺旋神经节细胞原代培养并分为3组,其中Ⅰ组与稳定分泌NT-3的NIH3T3细胞共培养,Ⅱ组与传染空载体NIH3T3细胞共培养,Ⅲ组与NIH3T3细胞共培养,共培养2周后,观察各组螺旋神经节细胞的数量及轴突长度的变化.结果共培养2周后,与对照组相比,NIH3T3-NT-3共培养组SGC的数量以及突起的长度均显著高于对照组.结论NT-3可显著减轻耳蜗螺旋神经节神经的退行性改变.     

稳定表达神经营养素-3的NIH3T3细胞建立及鉴定

目的：建立稳定表达NT3的NIH3T3细胞株，通过体外共培养实验观察其对耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响．方法：以阳离子脂质体作为载体，将携带有外源性基因NT3的重组真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3转染小鼠成纤维细胞，进行RT-PCR，Western-blot分析及免疫组化鉴定，并与耳蜗螺旋神经节细胞进行共培养实验．结果：得到抗G-418的阳性细胞克隆；RT-PCR的产物约为744 bp；Western-blot可见一清晰的蛋白条带，与NT3的蛋白分子量相符合．NT3免疫组化染色结果显示转染NT3-cDNA的NIH3T3细胞胞质呈棕黄色着色．NT3转染组细胞与耳蜗螺旋神经节细胞共培养2wk后，与对照组相比，耳蜗螺旋神经节细胞无明显减少．结论：成功建立了稳定表达NT3的NIH3T3细胞株；该细胞对耳蜗螺旋神经节细胞有很好的营养支持作用．     

DJ-1L166P与DJ-1M26I基因对NIH3T3细胞增殖和凋亡的比较

目的 在细胞学水平比较DJ、DJ-1M261、DJ-1L166P基因对NIH 3T3细胞增殖速率与凋亡的关系,为建立转基因动物模型及帕金森疾病发病机制研究奠定基础.方法 分别将pcDNA3.1/myc-His-DJ-1、pcDNA3.1/myc-His-DJ-1L166P和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M261重组质粒脂质体方法转染NIH 3T3细胞,500 μg/ml G418压力筛选稳定克隆,对3种转染细胞在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和Annexin V-FITC试剂盒进行转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡检测.结果 pcDNA3.1/myc-His-DJ-1、pcDNA3.1/myc-His-DJ-1L166P和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M261重组质粒转染NIH 3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个、4个、3个阳性细胞克隆,RT-PCR及Western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,Caspase-3 RNA水平检测DJ-1L166P和DJ-1M261组表达高于正常NIH 3T3细胞组,而DJ-1组caspase-3转录水平相对最低,MTT实验结果初步证明转染DJ-1L166P和DJ-1M261基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率均低于DJ-1组和正常NIH 3T3细胞组(P＜0.05),转染DJ-1基因的NIH 3T3阳性细胞增殖速率与正常NIH 3T3细胞相比无明显差别;细胞凋亡检测表明转染DJ-1L166P和D J-1M261基因的NIH3T3阳性细胞凋亡率均高于正常NIH 3T3细胞,转染DJ-1基因的NIH 3T3阳性细胞凋亡率低于正常NIH 3T3细胞(P＜0.05).结论 DJ-1L166P和DJ-1M261基因突变均降低NIH3T3细胞增殖速率,DJ-1L166P和DJ-1M261基因突变更易导致NIH 3T3细胞的凋亡,DJ-1L166P和DJ-1M261基因突变对NIH3T3细胞增殖速率和细胞凋亡影响是相似的.     

胭脂红对3T3细胞DNA损伤的SCGE检测

目的 研究人工合成偶氮类色素胭脂红对体外培养小鼠胚胎成纤维细胞株(NIH3T3)DNA的损伤作用.方法 单层培养的3T3细胞中加入不同浓度胭脂红培养4 h,用碱性单细胞凝胶电泳技术(single cell gel electrophoresis, SCGE)检测3T3细胞DNA的单链断裂(single-strand breaks,SSBs)情况.结果 各染毒组彗星细胞率、彗星细胞的尾长、尾部DNA含量及尾矩与胭脂红浓度正相关,呈剂量-反应关系.结论 胭脂红对体外培养3T3细胞DNA具有损伤作用,浓度越大,损伤越严重.     

紫外线诱导成纤维细胞凋亡时胞浆pH值的变化

研究紫外线诱导成纤维细胞凋亡时胞浆ＰＨ值的变化。方法利用粘附式细胞仪测定ＵＶＢ诱导ＮＨ３Ｔ３细胞凋亡时，胞浆ＰＨ值的变化。结果ＮＨ３Ｔ３细胞经ＵＶＢ照射后，胞内ＰＨ值会逐渐升高，并在１．６ｈ左右达到最大值，２５ｍｉｎ后恢复正常，在细胞内外钙被螯合后，不管ＵＶＢ照射与否，胞内ＰＨ值无变化。     

PMA诱导节律基因表达对细胞紫外线损伤的影响

目的研究诱导NIH3T3细胞节律基因表达对细胞紫外线损伤的影响。方法用体外节律诱导剂乙酰肉豆蔻佛波酯诱导NIH-3T3细胞节律基因表达。分别选择mPer2基因表达的谷值和峰值时刻对细胞进行紫外线照射,以非诱导节律的单纯照射组为对照,通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,平板克隆形成试验检测细胞增殖情况。结果mPer2基因表达峰值时进行紫外线照射的细胞,与mPer2基因表达谷值时和非诱导节律紫外线照射细胞比较,增殖能力强、凋亡率低、G1期阻滞明显。结论节律基因诱导的NIH3T3细胞的紫外线损伤减小,并与mPer2的基因表达相关,其保护作用可能与mPer2基因过表达有关。     

丙型肝炎病毒NS3不同末端在COS、NIH3T3细胞中的转录与表达

目的:建立丙型肝炎病毒NS 3区不同末端的COS和NIH 3T3的细胞系表达系统,以探讨其慢性化及肝癌的发病机理.方法:用脂质体共转录法,将含有丙型肝炎病毒NS 3区不同末端的重组质粒pSG 5 neo转录至COS和MH 3T3细胞系中表达,并用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和Southern blot法在DNA水平检测.用Western blot法在蛋白水平检测.结果:在转录的COS和MH 3T3的细胞系中,存在有丙型肝炎病毒NS 3在3和5基因片段,并可表达相应的抗原.结论:此表达细胞系的建立,有利于对丙型肝炎病毒的复制,丙型肝炎慢性化及肝癌发病的研究.     

重组白细胞介素13对成纤维细胞增殖的影响

目的：观察重组白细胞介素13（rIL-13）对NIH3T3细胞增殖作用的影响，探讨肺纤维化的发病机制。方法：NIH313细胞分为rIL-13组和不含rIL-13的对照组，rIL-13组加入不同浓度的rIL-13，作用24及48h。透射电镜观察313细胞的超微结构，Hoechst试剂盒观察细胞DNA形态变化，噻唑蓝比色试验（MTT法）测定细胞增殖率。结果：rIL-13呈剂量依赖方式刺激313细胞细胞生长。经rIL-1380ng／ml孵育的细胞DNA合成增加，细胞核增大，细胞质中可见较多核糖体及线粒体。rIL-13组细胞增殖率增加，与对照组比较有显著性差异（P〈0．05）。结论：rIL-13可能通过促进成纤维细胞增殖，在肺纤维化的发病机制中发挥重要作用。     

The effect of MAGE-A1 gene on NIH3T3 cells

Objective: Melanoma antigen genes(MAGE) genes have been found in many kinds of tumor tissue, but not in normal tissue except testis and placentas. The Ags encoded by MAGE genes therefore are strictly tumor-specific. The most current researches associated with these genes focus on the tumor vaccination using these Ags. Few reports are concerning these genes‘ functions. In this study, we investigated the role of MAGE-A1 gene on NIH3T3 cells after transferring with it. Methods: Clone the MAGE-A1 into the plasmids pEGFP-C3 and pcDNA3.1, then transfer the reconstructed plasmids and primary plasmids into the NIH3T3 cells using a new transfer reagent FuGENE 6. Selecting the positively transferred cells by G418. Identified by RT-PCR, Western blot, Immunocytochemistry,Laser Scanning Confocal Microscope and Fluoroscope. The cells mobile ability was measured with Millicell-PCF. The cell cycle and apoptosis were measured with Flow Cytometry. Results: The apoptosis rate of NIH3T3 cells that transferred with control plasmid pcDNA3.1 was 13.4% and the ratios that stay in S phase and G2-M phase were 5.68% and 1.04,% respectively. The apoptosis rate of NIH3T3 cells that transferred with pcDNA3, l-A1 was 0.90% and the ratios that stayed in S phase and G2-M phase were 19.31% and 13.47% respectively. The apoptosisrate of the cells that transferred with control plasmid pEGFP-C3 was 1.87%, a little higher than 1.47% of those transferred with pEGFP-C3-A1. Conclusion:The MAGE-A1 gene may enhance the cell cycle, inhibit the apoptosis and raise the mobile ability of NIH3T3 cells.     

稳定表达Trop-2基因的NIH3T3细胞系的构建和特性分析

目的:建立稳定表达人滋养层细胞表面抗原(Trop-2)NIH3T3细胞,分析过表达Trop-2对NIH3T3细胞的生长?增殖和侵袭特性的影响?方法:将Trop-2基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1,转染NIH3T3细胞,通过G418筛选及RT-PCR鉴定获得稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞(NIH3T3-Trop-2)?用MTS法检测NIH3T3-Trop-2细胞的增殖能力,软琼脂集落形成实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的克隆形成能力,明胶酶谱法检测NIH3T3-Trop-2细胞的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的分泌及细胞划痕实验检测NIH3T3-Trop-2细胞的迁移能力?结果:稳定表达Trop-2的NIH3T3细胞在生长增殖?克隆形成及侵袭能力均较NIH3T3细胞强,细胞培养上清中的MMP-2和MMP-9增多?结论:Trop-2对细胞的增殖与迁移能力具有明显的促进作用?     

核仁磷酸蛋白突变基因表达对NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。方法通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株,RT-PCR和Western blot检测NPM突变基因和蛋白的表达。MTT、克隆形成实验检测细胞体外增殖能力;FCM检测细胞周期分布及凋亡水平的改变,并通过对周期调控因子p21及凋亡相关分子Caspase-3活性检测,初步探讨NPM突变参与细胞恶性增殖的分子机制。结果建立了稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞株。NPM-mA实验组细胞较对照组细胞增殖能力及平板克隆形成率明显增高(P<0.05);甲基纤维素集落形成实验显示各组细胞在甲基纤维素上均不能形成集落;与对照组比较,NPM-mA实验组细胞中G1期细胞比例(42.27±0.86)%显著减低(P<0.01),S期细胞比例(43.08±0.74)%显著增加(P<0.01),同时伴有p21 mRNA水平下降,稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞凋亡率(1.00±0.13)%明显降低(P<0.01),C...     

中波紫外线对成纤维细胞的损伤作用

目的：探讨中波紫外线(UVB)对成纤维细胞的损伤作用，建立细胞损伤模型。 方法：采用UVB灯照射小鼠成纤维细胞株NIH3T3，MTT法测细胞存活率，流式细胞术检测细胞周期、凋亡和H₂O₂的生成。 结果：0.2～3.0 kJ •m^-2 UVB照射后24 h细胞存活率明显降低（P<0.05或0.01）；1.5 kJ•m^-2 UVB照射后4、8、18和24 h细胞G₁期细胞百分数升高，凋亡小体增多；1.5 kJ •m^-2 UVB照射后8 h H₂O₂生成增多，与0、4、18和24 h组比较差异有显著性（P<0.05）。 结论：UVB照射可诱导成纤维细胞出现G₁期阻滞、细胞凋亡及H₂O₂生成增多。