不同载体蛋白制备的3型肺炎球菌结合物在小鼠体内免疫原性比较

目的:比较由破伤风类毒素(TT)、破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物(TT_AH)、重组铜绿假单胞菌外毒素A(r EPA)、重组铜绿假单胞菌外毒素A己二酸酰肼衍生物(r EPAAH)4种载体蛋白与3型肺炎球菌荚膜多糖制备的3型肺炎球菌结合物在小鼠体内免疫原性。方法:3型荚膜多糖先经0.5M乙酸水解降低其分子量制备成水解物,水解物经1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化后分别与4种载体蛋白制备成结合物。结合物均经Sepharose 4 Fast Flow柱层析纯化,收集KD0.0～0.2部分得到4种结合物,将结合物分别免疫小鼠,采用ELISA法检测,比较各结合物在小鼠体内产生的抗体水平。结果:4种结合物均能在小鼠体内产生较高水平的Ig G抗体。对于同类载体蛋白,PS3-TT_AH在小鼠体内产生的Ig G抗体水平比PS3-TT低,但二者抗体水平的差异无统计学意义(P>0.05);PS3-r EPAAH在小鼠体内产生的Ig G抗体水平比PS3-r EPA低,二者抗体水平的差异也无统计学意义(P>0.05);对于不同类载体蛋白,PS3...     

转化生长因子-β1 抗体对肝星状细胞内钙离子浓度的影响

目的: 研究转化生长因子-β1 (TGF-β1 )抗体对肝星状细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)的影响,探讨其预防、治疗肝纤维化和门脉高压的分子机制. 方法: 分别用TGF-β1 抗体和四氯化碳(CCl4 )处理大鼠肝星状细胞,作用24 h后,以Fluo-3/AM为细胞内钙离子荧光指示剂负载细胞,通过激光共聚焦显微镜观察[Ca2 ]i的变化. 再利用正交设计方法,研究不同浓度CCl4 、 TGF-β1 抗体及其作用的先后顺序和二者作用的时间间隔对[Ca2 ]i 的影响. 结果: 不同浓度TGF-β1 抗体、CCl4 及其作用的前后顺序对[Ca2 ]i有显著性影响(P<0.05),两因素作用的时间间隔对[Ca2 ]i的影响无显著性(P>0.05). CCl4在5 ～15 mmol/L范围内显著增加[Ca2 ]i (P<0.05),5 ～20 mg/L TGF-β1 抗体可降低[Ca2 ]i (P<0.05). 结论: TGF-β1抗体可以缓解肝星状细胞内钙超载.     

血浆醛固酮放射免疫测定及其临床应用

首先制备了醛固酮肟蛋白结合物,其克分子比为35:1。用它免疫家兔,获得高滴度抗血清,其亲和常数为10~9～10~(10)升/克分子。并用此抗体建立了血浆醛固酮放射免疫测定法。本方法的特异性、灵敏度、精密度及准确性较好。正常卧位基础值8.37±2.92毫微克/100毫升;立位2小时后为13.64±7.51毫微克/100毫升。所得醛固酮的结果与临床情况相符。当它与     

HRPO-单抗、HRPO-兔抗鼠Ig的制备及其活性测定

本文应用过碘酸钠氧化结合法制备HRPO-Mc-Ab和HRPO-兔抗鼠Ig结合物,现报告如下。 1 材料和方法 1.1 单克隆抗体(McAb)的制备及纯化:抗骨髓瘤蛋白λ链单抗Sλ,抗白血病患者IgM单抗SM_3、SM_6由本室制备。 1.2 兔抗鼠Ig的制备及纯化:取鼠Ig 1mg/ml加福氏完全佐剂1ml,搅拌混匀后于健康雄性家兔背部、腹股沟、足趾、足跟皮下多点注射。2周后取鼠Ig加福氏不完全佐剂按上述方法加强免疫。再隔2周后取1 ml鼠Ig耳静脉注射。于末次免疫后1周心脏抽血,分离兔血清加1‰叠氮钠-30℃保存备用。琼脂双向扩散效价1:32～1:64,经饱和硫酸胺沉淀,透析除盐后过DEAE_(22)柱提取兔抗鼠Ig。 1.3 HRPO-抗体结合物的制备,采用过碘酸钠氧化结合法。     

痢疾志贺氏Ⅰ型菌O-特异性多糖与破伤风类毒素结合物生物活性的测定

目的　检测痢疾志贺氏I型菌特异性多糖 (O SP)和破伤风类毒素结合物O SP TT的生物学活性。方法　应用ELISA间接法测定O SP、O SP TT分别免疫小鼠后其血清中IgG、IgM的水平 ;应用补体介导的杀菌活性实验检测血清的体外杀菌活性。结果　单独使用O SP免疫小鼠后抗体无显著性升高 (P >0 0 5 )。O SP TT免疫注射后三次之间IgG和抗TT抗体均有显著性增高 (P <0 0 1 )。多糖 蛋白结合物免疫后的血清中抗体可激活补体产生杀菌作用的效价为 1∶1 60。结论　多糖 蛋白结合物注射后对O SP和TT均可加强免疫应答 ,其刺激产生的抗体具有体外杀菌活性     

Wilson蛋白N端多克隆抗体的制备和纯化

[目的]制备并纯化Wilson蛋白(ATP7B)的N端多克隆抗体，为进一步研究其基因表达蛋白的结构和功能打下基础。[方法]RT-PCR扩增目的基因，GST基因融合载体表达融合蛋白，亲和层析进行蛋白纯化，Thrombin酶切并收集目的蛋白，免疫家兔，ELISA检测抗体滴度，离子交换层析纯化抗体血清，Western blot检测抗体特异性。[结果]ELISA方法检测抗体滴度达到了1：2500，Western blot表明该抗体有很好的特异性，非变性SDS-PAGE显示纯化后的抗体IgG纯度很高。[结论]应用该方法成功制备了Wilson病蛋白质量的多克隆抗体。     

抗多巴胺抗体的制备

多巴胺是人体内重要神经递质,由于其分子量小,结构主体儿茶部分在碱性溶液中和有氧存在时极不稳定,所以制备多巴胺—蛋白质结合物非常困难,而且抗多巴胺抗体特异性不高。本文以Mannich反应并加以改良将多巴胺与载体牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)相连成多巴胺结合物,以此结合物免疫家兔制备抗多巴胺抗体,现报告如下。     

高敏受者肾移植术前双滤过法血浆分离治疗

背景 :肾移植术前受者由于输血、妊娠、移植等原因导致体内致敏抗体的产生 ,这些患者不易找到合适的供体 ,且术后排斥发生率高。等待肾移植的高度致敏患者 [群体反应性抗体(PRA) >40 % ]我中心采用双滤过法血浆分离治疗 ,取得了良好的临床效果。目的 :探讨双滤过法血浆分离术 (DFPP)治疗肾移植术前高度致敏受者 [群体反应性抗体 (PRA>40 % ) ]的疗效和安全性。方法 :33例肾移植术前高敏受者接受了 DFPP治疗 1～ 6次 ,平均 (1 .9± 1 .2 )次。结果 :33例中除 3例女性受者 (PRA 96 -1 0 0 % )无明显下降外 ,1 6例完全转为阴性 ,1 4例受…     

免疫球蛋白G-葡萄糖脱氢酶结合物的研究

介绍一种新的酶结合物的制备方法,研究了该结合物在酶联免疫吸附测定中的初步应用。通过2-亚氨硫杂戊烷的修饰反应,在葡萄糖脱氢酶、抗体(IgG)分子上分别引入新的游离巯基。巯基化的葡萄糖脱氢酶和免疫球蛋白G之间,通过双功能试剂二马来酰亚胺甲醚(进行)偶联,偶联产物由Sephacryl S-300柱层析纯化。按非竞争性固相双抗体夹心法,将精制的IgG-葡萄糖脱氢酶(A)结合物用于人白蛋白(Ⅰ),人甲胎蛋白(Ⅱ)和牛胰岛素(Ⅲ)的定量检测。在0～10 ng/mL范围内,Ⅰ和Ⅱ与A活性均呈良好的线性相关;但Ⅲ与A活性之间没有任何相应关系。     

胃癌单克隆抗体用于氯甲喋呤导向治疗的实验研究

作者报道胃癌单克隆抗体 MGb_2-BSA-MTX结合物的制备及其对肿瘤靶细胞的杀伤作用。首先将 MTX引入BSA,继与单抗连接得到结合物。结合物中IgG:BSA:MTX克分子比为1:15:62。偶联过程中抗体活性无明显丧失,结合物与肿瘤靶细胞的结合能力与未修饰抗体相近。噻唑蓝活细胞染色的检测结果表明,结     

IgM-抗HBc检测中去除类风湿因子干扰的研究

本文报道在IgM-抗HBc测定(固相酶标记双抗体法)中,应用抗 HBc-IgGF(ab′)_2段制备的酶结合物,能完全去除类风湿因子(RF)所致的假阳性反应(0/10),较加用阴性血清、凝聚IgG 等方法显著为优。文中简述了制备的方法。     

CEA单抗-MTX结合物的选择性细胞毒作用

氨甲喋呤(MTX)和癌胚抗原(CEA)单克隆抗体(McAb)共价结合,制备成MTX-McAb结合物。反应中MTX/McAb为1∶40时,结合物中的MTX/McAb为1∶14,抗体蛋白无明显变性,结合物保留了相当的抗体特异性和药物细胞毒活性。细胞毒试验表明,MTX-McAb对CEA阳性大肠癌细胞HT-29的细胞毒作用明显大于NIgG-MTX和MTX,且能被CEA McAb竞争性阻断。对CEA阴性细胞,MTX-McAb,NIgG-MTX和MTX三者的细胞毒作用无明显差异。提示MTX-McAb通过CEAMcAb的导向作用,能选择性地杀伤CEA阳性细胞。CEA McAb可作为MTX等化疗药物的载体用于CEA阳性肿瘤的治疗。     

抗磷脂抗体引起不育症的研究述要

不育症系指反复自然流产或孕2 4周前胎死宫内而不能得到存活婴儿者。其原因有:子宫异常、内分泌异常、夫妻染色体异常、感染等。上述原因分别占12 3% ,13 4 % ,4 5 %和1 9% [1] 。此外多数为原因不明的反复流产。近年来,由于生殖免疫学的发展,人们开始认识到不育与自身免疫有关。1975年Nillsson等就注意到不明原因的反复自然流产与抗磷脂抗体(APA)有密切关系。习惯性流产患者中有10 %～2 0 %抗磷脂抗体阳性[2 ] 。抗磷脂抗体是针对各种磷脂抗原的抗体总称[3 ] ,包括抗心磷脂抗体(ACA) ,抗磷脂酰丝氨酸抗体,抗磷脂酰肌醇抗体,抗磷脂酸抗…     

5-氟尿嘧啶-花生凝集素结合物的反应条件优化及性质研究

目的优化5-氟尿嘧啶(5-Fu)-花生凝集素(PNA)结合物的反应条件,以期制备得到既有生物活性又有较高药物结合率的结合物。方法采用单因素法优化反应条件,考察结合物稳定性,以药物结合率和体外活性为判断指标。结果以优化条件：5-Fu;EDC;NHS-1;5：2,D-半乳糖;PNA(w／w)-2．5：1,连接反应时间12h制备得到了既有生物活性又有较高药物结合率的结合物。结论D-半乳糖能保护花生凝集素的活性中心,在D-半乳糖保护下可以制备出既有生物活性又有较高药物结合率的结合物。结合物性质比较稳定。     

斑点免疫结合实验用于乙酰胆碱受体抗体的检测

0　引　　言抗乙酰胆碱受体抗体 (Ach R- Ab)为重症肌无力 (mgasthemia graris,MG)特异的自身抗体 ,对辅助临床诊断、疗效观察及研究 MG的发病机制有重要意义[1,2 ] 。我们在原 ELISA法的基础上 ,采用α-银环蛇毒素 (α- BGT)包被硝酸纤维素膜 (NC) ,建立了检测 Ach R- Ab的斑点免疫结合实验 (DIBA) ,对各类疾病患者进行了初步的临床观察 ,现报告如下。1　材料与方法1 .1　主要试剂与仪器　α- BGT由广西医科大学蛇毒研究所提供 ,辣根过氧化物酶 (HRP)和葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,均购自上海生物制品研究所 ,其酶结合物采用改良过…     

肾上腺素能β1受体亚型特异性抗体的制备及鉴定

[目的]制备和鉴定β1受体亚型特异性抗体。[方法]人工合成β1受体细胞膜外第二环197-222位氨基酸序列作为抗原。连接钥孔冒贝血蓝蛋白（KLH）增加抗原性后免疫兔获得抗血清，通过凝胶又扩散实验和ELISA法鉴定其效价；通过免疫荧光法及ELISA法鉴定其特异性；通过离体蛙心灌流实验鉴定其药理活性。[结果]该抗血清效价高（分别为1：64和1：10^6)、特异性强，能和心肌β1受体发生特异性结合（1：10^4-1:10^5)，为异丙肾上腺素的非竞争性拮抗剂。（pD2′-1.62)。[结论]成功制备的β1受体亚型特异性抗体可能成为进一步研究β1受体分布，功能和定量的有力工具。     

犬瘟热病毒（CDV）ELISA检测方法的建立与应用

目的 建立犬CDV抗体ELISA检测方法.方法培养vero细胞,接种CDV病毒,制备vero正常抗原和CDV特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验.结果正常、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为1∶32 000、10 μg/mL和1∶8 000;正常、特异抗原批内变异系数分别为9.1%和5.8%,批间平均变异系数分别为8.8%和6.6%;检测灵敏度为1∶2 560;与犬细小病毒(CPV)、犬肝炎病毒(ICHV)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25%.结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强.可用于犬CDV抗体的检测.     

自身免疫性甲状腺疾病患者血清C1q抗体的变化

[目的]了解自身免疫性甲状腺疾病患者血清C1q抗体水平,探讨血清C1q抗体水平与甲状腺功能、甲状腺自身抗体的关系.[方法]采用ELISA方法测定28例Graves病患者(GD组)、34例慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者(CLT组)和27例正常对照(CON组)血清C1q抗体水平.[结果]CON组、GD组和CLT组血清C1q抗体水平分别为:3.130(2.773～3.833) U/mL、4.625(2.888～11.798)U/mL和3.125 (2.750～4.625) U/mL.GD组的C1q抗体水平显著高于CON组(P＜0.05),阳性率也显著高于CON组(46.4％ vs 7.4％,P＜ 0.05);C1q抗体水平与TRAb水平呈正相关(r=0.436,P=0.029).CLT组C1q抗体与TT4水平呈负相关(r=-0.351,P=0.045).[结论]本研究Graves病患者血清C1q抗体水平显著升高,与TRAb呈正相关;慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者血清C1q抗体水平与血清甲状腺素水平呈负相关.     

抗5-羟色胺抗体的制备

5-羟色胺(5-HT)抗体对5-HT能神经、5-HT免疫活性的APUD细胞的定性、定位和原位定量研究,对机体组织和血液中游离5-HT的定量分析等具有重要的作用,但5-HT是一种半抗原性的小分子,制备其特异性抗体难度较大,国内迄今未见有成功的报道,为此,我们进行了试制5-HT抗体的研究, 参照Ranadive(1967)和(Steinbusch(1978)等人的方法,并加以改进,以牛血清白蛋白作为载体,通过Mannich反应,与5-HT硫酸肌酐进行化学共价交联,摸索了各种反应条件,制得5-HT-牛血清白蛋白免疫原结合物。采用多点皮下注射的方法,以此结合物免     

糖尿病患者血清中柯萨奇B组病毒抗体检测

Banatvala等[1 ] 研究表明 ,肠道病毒感染 ,特别是柯萨奇B组病毒 (CoxB)感染与 1型糖尿病 ( 1型DM)相关。CoxB隶属于小RNA病毒科 ,其感染引起人类心肌炎、无菌性脑膜炎等多种疾病[2 ] ,临床上主要靠检测特异性IgM抗体分析其可能病因。我们对 1 2 0例糖尿病 (DM)患者进行CoxB抗体检测 ,报告如下。1　资料与方法1 1　一般资料　观察组 :2 0 0 1年 9月至 2 0 0 2年 1 0月在本院内科住院临床诊断为DM患者 ,于入院 1～ 2d内采集静脉血 (出院前再采集第 2份血 )共 1 2 0例 ( 2型DM 70例 ,其他类型DM 5 0例 )。其中男 5 4例 ,女 6 6例 ,…