日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对虫卵肉芽…

应用日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０腹腔注射致敏Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，继之经脾脏注射虫卵形成的肝虫卵肉芽肿模型。用ＳＥＡ致敏组作阳性对照，ＳＰ２／０腹水组作阴性对照。实验结果表明，在虫卵攻击后第４ｄ，ＮＰ３０致敏组肝虫卵肉芽肿面积、体积即开始明显增加，出现多量嗜酸性粒细胞浸润。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对虫卵肉芽肿形成的致敏作用

应用日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０腹腔注射致敏Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，继之经脾脏注射虫卵形成的肝虫卵肉芽肿模型。用ＳＥＡ致敏组作阳性对照，ＳＰ２／０腹水组作阴性对照。实验结果表明，在虫卵攻击后第４ｄ，ＮＰ３０致敏组肝虫卵肉芽肿面积、体积即开始明显增加，出现多量嗜酸性粒细胞浸润。肉芽肿面积在第８ｄ、体积在第１５ｄ达高峰值，与ＳＥＡ致敏组的高峰值相近（Ｐ＞０．０５）。而ＳＰ２／０腹水组肉芽肿的面积、体积至第３２ｄ才达高峰值，其高峰值低于ＮＰ３０致敏组（面积Ｐ＜０．０５，体积Ｐ＜０．０１）。本文提示ＮＰ３０对肝虫卵肉芽肿的形成具有致敏作用。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对虫卵肉芽肿免 …

目的 研究日本血中有虫单克隆抗独特抗体ＮＰ３０对虫卵肉芽肿的影响。方法 ＮＰ３０腹腔注射主动免疫ＩＣＲ小鼠,对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水,分别在尾蚴攻击感染后第４、８、１２、１６、２０、２４周处死,观察和比较虢人虫卵肉肿的形成和演变。应用计算机图像分析技术,测量虫卵肉肿大小。结果 尾蚴攻击感染第１２以后。ＮＰ３０免疫组虫卵肉芽肿的直径明显低于ＳＰ２／０对照组。虫卵肉芽肿的为时相提前,并出现２种特殊     

抗独特型抗体NP30对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的调节作用

目的　研究单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫对血吸虫病虫卵肉芽肿及肝纤维化的影响。方法　实验组ICR小鼠腹腔注射NP30 10 0 μg/次 ,连续免疫 3次 ,对照组腹腔注射SP2 / 0腹水。尾蚴攻击感染后第 4、8、12、16、2 0和 2 4周分别处死小鼠剖取肝脏 ,用VG(VanGieson)组织化学染色 ,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白 (FN)免疫组织化学染色 ,应用计算机图像分析系统对肝脏虫卵肉芽肿体积和虫卵肉芽肿内的胶原沉积进行定量测定。结果　尾蚴攻击感染第 12周后 ,实验组虫卵肉芽肿的体积明显小于对照组 ,虫卵肉芽肿细胞组分与对照组明显不同 ,出现两种不典型肉芽肿。VG染色显示实验组虫卵肉芽肿内胶原的平均光密度值明显小于对照组。免疫组织化学显示实验组虫卵肉芽肿内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及FN含量均比对照组低。结论　NP30接种可能诱导体液和细胞两种保护性免疫 ,对血吸虫病虫卵肉芽肿具有负调节作用 ,对血吸虫性肝纤维化有明显的抑制作用     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导抗卵免疫的研究

目的观察日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对日本血吸虫雌虫生殖产卵及卵胚发育的影响。方法腹腔注射ＮＰ３０主动免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,连续３次,对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水。结果尾蚴攻击感染后第２７天,ＮＰ３０免疫组肝组织内虫卵数下降了３０．９１％,雌虫子宫内虫卵数减少了３８．５５％。尾蚴攻击感染后第３９天,ＮＰ３０免疫组肝组织内的成熟虫卵下降了６６．６３％,死亡虫卵增加了６０．６６％。结论ＮＰ３０主动免疫小鼠具有抗雌虫生殖产卵和抗卵胚发育的双重功效,为一很有希望的血吸虫病抗病疫苗候选分子     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株...

A hybridoma cell line secreting an IgM monoclonal antibody designated NP30 was obtained from a fusion of SP2/o and spleen cells of a BALB/c mouse chronically infected with schistosoma japonicum for one and a half year and identified by screening with immunized rabbit sera against gut-associated antigen (GAA) and soluble egg antigen (SEA) of S. japonicum, indicating that the NP30 was an anti-anti-antigen or anti-antibody. NP30 was further determined to be an anti-idiotypic antibody (anti-id) which was serologically and functionally identical to GAA, so that it could be portrayed as the internal image of GAA, which might have the potential to be used as an antigenic reagent in immunodiagnostic assays of schistosomiasis japonica.     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30保护性免疫力持续时间的研究

目的确定日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫诱导保护性免疫力的持续时间.方法实验组昆明种小鼠腹腔注射NP30 10 μg/鼠,主动免疫3次,每次间隔2周,对照组腹腔注射生理盐水.末次免疫后8、12、16、20、24周感染日本血吸虫尾蚴(40±1)条,尾蚴感染后40 d行足垫试验.结果 NP30末次免疫后8、12、16周感染日本血吸虫尾蚴的减虫率为21.43%～41.16%,分别与对照组相比差异有显著性;足垫试验结果显示8、12周实验组与对照组差异有显著性.结论 NP30主动免疫诱导的保护性免疫力持续约4个月;足垫试验结果与细胞免疫有关.     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对血吸虫病肝纤维化 …

为研究日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对血吸虫病肝纤维化的影响，将４５只ＩＣＲ小鼠随机分为两组，实验组腹腔注射ＮＰ３０，对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水。尾蚴攻击感染后第４、８、１２、１６、２０、２４周分别处死小鼠取肝、ＶＧ组化染色和Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白（ＦＮ）免疫组化染色，应用ＮＹＤ－１０００型计算机图像分析系统对肝纤维化程度进行定量测定，实验结果表明，ＶＧ染色显示实验组肝组织胶原的平均光     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单链抗体基因的构建和表达

目的　构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单链抗体 (scFv)基因。　方法　通过PCR方法体外扩增并经测序验证的重链、轻链可变区 (VH、VL)基因先后重组入原核表达质粒 pTHA90相应的位点上 ,中间通过一连接肽 (Gly4 Ser) 3基因连接构建成单链抗体基因 (scFv) ,连接产物转化相应受体菌Top1 0 ,提取质粒 ,酶切鉴定重组克隆。表达产物经ELISA方法测定活性。　结果　重组克隆经酶切鉴定可见预期大小的片段 ,表明重组成功。表达产物经ELISA检测 ,OD4 92 值为 1 .0 6 ,高于阴性对照 3倍以上 ,证实具有与相应抗原结合的能力。　结论　成功地构建了scFv基因 ,且其表达产物保留了抗体的亲和性和特异性     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株及初步鉴定

用感染8条日本血吸虫尾蚴,时间长达一年半的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用兔抗日本血吸虫肠相关抗原和兔抗可溶性虫卵抗原免疫血清与细胞培养上清进行ELISA筛选阳性克隆,最终建立了分泌单克隆抗独特型抗体细胞株NP30。作者用一系列试验证明,NP-30是日本血吸虫肠相关抗原的内影象抗独特型抗体,有替代日本血吸虫虫源性抗原用于血清学诊断的可能性。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体N P30对血吸虫病肝纤维化的调节作用

为研究日本血吸虫单克隆抗独特型抗体 Ｎ Ｐ３０ 对血吸虫病肝纤维化的影响，将４５ 只 Ｉ Ｃ Ｒ 小鼠随机分为两组，实验组腹腔注射 Ｎ Ｐ３０，对照组腹腔注射 Ｓ Ｐ２／０ 腹水。尾蚴攻击感染后第４、８、１２、１６、２０、２４ 周分别处死小鼠取肝， Ｖ Ｇ 组化染色和Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白（ Ｆ Ｎ）免疫组化染色，应用 Ｎ Ｙ Ｄ１０００ 型计算机图像分析系统对肝纤维化程度进行定量测定。实验结果表明， Ｖ Ｇ 染色显示实验组肝组织胶原的平均光密度值、卵均面积和总面积明显小于对照组。免疫组化显示实验组Ⅰ、Ⅲ型胶原及 Ｆ Ｎ 含量比对照组低。本文提示 Ｎ Ｐ３０ 对血吸虫病肝纤维化有明显的抑制作用，是一很有希望的血吸虫病抗病疫苗候选分子。     

血吸虫卵肉芽肿分离培养及培养上清液中抗体检测的初步研究

自感染25条日本血吸虫尾蚴6wk后的小鼠肝脏分离虫卵肉芽肿进行体外培养,用ELISA方法检测培养上清液中的SEA特异性抗体。感染鼠肝内分离到的虫卵肉芽肿大小不一,其直径的频数分布呈正偏态分布。在某些小鼠个体间虫卵肉芽肿大小也有些差异。虫卵肉芽肿在培养时宜根据肉芽肿的容积按1:10的比例进行调整,培养持续时间在48h以内即可。虫卵肉芽肿在体外培养时能分泌特异性抗体,提示抗体与虫卵肉芽肿的形成有关。     

抗独特型抗体NP30诱导虫卵肉芽肿细胞凋亡的分子机制

目的研究抗独特型抗体NP30诱导虫卵肉芽肿细胞凋亡的分子机制.方法 BALB/c 小鼠随机分为两组,实验组腹腔注射NP30 10 μg/次,连续3次,对照组腹腔注射生理盐水,分别在尾蚴攻击感染后第39、49、64、108、112天处死,应用免疫组化S-P法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Fas、FasL和c-Fos的表达,原位分子杂交检测Bax与Fas mRNA.结果虫卵肉芽肿细胞均表达Bax、Fas、FasL和c-Fos蛋白,其中实验组Bax和FasL蛋白表达均高于对照组(P<0.05);实验组Fas和c-Fos蛋白表达在第64天和第112天低于对照组,其余各时间点均高于对照组(P<0.05);Bcl-2蛋白在实验组和对照组均无表达.实验组Bax和fas mRNA表达均高于对照组.结论死亡受体Fas和FasL途径启动了NP30诱导肉芽肿细胞凋亡的信号,NP30通过凋亡相关基因Bax和c-Fos表达增强来诱导肉芽肿的细胞凋亡.     

小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型的建立

本文报告应用腹腔注射SEA致敏C57BL/6小鼠,继之经脾脏攻击注射虫卵的方法,建立了小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型,并与自然感染模型作比较.结果证明,SEA致敏组小鼠肝虫卵肉芽肿发生率为100%.其肉芽肿的形态、细胞组成、转化发展过程及单虫卵肉芽肿的直径和面积均与自然感染模型相似.本实验表明经脾脏注射虫卵及SEA致敏建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型是一种良好的肉芽肿实验动物模型.     

日本血吸虫卵源性抗原诱导的抗肉芽肿病变保护性免疫调节机制的研究

日本血吸虫卵源性组分抗原ＳｊＲ４７可诱导小鼠产生明显的抗虫卵肉芽肿病变保护性免疫力。本文对免疫小鼠脾Ｔ淋巴细胞亚群表型动态和抗体免疫应答进行了研究,结果显示ＳｊＲ４７免疫小鼠的ＣＤ４＋和ＣＤ８＋Ｔ细胞水平,在感染后早期（４ｗｋ）升高,随后下降,至感染后８ｗｋ时,ＣＤ４＋和ＣＤ８＋Ｔ细胞比值＜１．００,呈免疫抑制现象。ＳｊＲ４７免疫小鼠感染后０～１２ｗｋ时血清抗ＳｊＲ４７抗体（ＩｇＧ）水平显著高于抗ＳＥＡ抗体水平,也显著高于同时期的佐剂和感染对照组小鼠抗ＳｊＲ４７抗体水平（Ｐ＜０．０１）,进一步测定小鼠血清特异性抗体ＩｇＧ及其亚类表明,ＳｊＲ４７免疫小鼠的ＩｇＧ１水平升高非常显著。实验结果表明,ＳｊＲ４７免疫小鼠后诱导的抗虫卵肉芽肿病变保护性免疫力与细胞免疫及体液免疫均密切相关,其中ＩｇＧ１抗体可能起着重要作用。     

日本血吸虫未成熟卵抗原和成虫抗原分别与联合免疫小鼠的研究

目的探讨日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（SIEA）和成虫抗原（SA）分别与联系免疫小鼠的抗卵胚胎发育效果和抗感染效果。方法采用SIEA与SA分别与联合免疫小鼠,于攻击感染后48天剖杀,统计雌雄虫数及肝脏各期虫卵数。结果与对照组比较,SIEA单独免疫产生显著抗卵胚胎发育的免疫力,肝组织成熟卵数下降37,3％,成熟卵比例下降24．0％;SA单独免疫产生显著抗感染免疫力,减虫率为34．5％;SIEA与SA联合免疫,产生显著抗感染免疫力和最佳抗卵胚胎发育免疫力,减虫率33．5％,成熟卵数和成熟卵比例分别下降73．8％和45．0％,抗卵胚胎发育免疫力显著高于SIEA单独免疫组。结论提示来源于成虫的抗感染抗原与来源于未成熟虫卵的抗卵胚胎发育抗原联合应用是血吸虫疫苗研制中有希望的发展方向。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区基因的克隆及序列分析

[目的]分离日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区 (VL)基因并测定其序列。 [方法 ]根据鼠免疫球蛋白轻链可变区基因FR1和FR4序列的保守性 ,化学合成用于体外扩增Ig轻链可变区基因的数对引物。以日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的杂交瘤细胞株基因组DNA为模板 ,扩增VL 基因 ,将其克隆入 pUC19载体 ,重组子用Sanger的双脱氧链终止法测定序列 ,将序列与GenBank中已发表的抗体序列比较。 [结果 ]VL 基因全长 318bp ,属鼠免疫球蛋白κ轻链第IV亚类 ,由种系基因V与Jκ4 重排而来。该VL 基因序列已被GenBank收录 (accessionNo AF2 0 6 72 0 )。 [结论 ]该VL 基因为日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30轻链可变区基因。