感染日本血吸虫小鼠CD4＋和CD8＋T细胞中Fas及Fas的表达研究

目的：探讨在日本血吸虫感染过程中,宿主CD4＋和CD8＋T细胞中死亡受体（Fas) 及死亡配体（Fas ligand,FasL)的表达情况,。方法：利用免疫组化的方法检测在日本血吸虫感染过程中,Fas和FasL在CD4＋和CD8＋T细胞中的表达,结果：在日本血吸虫感染过程中,Fas和FasL在CD4＋和CD8＋T细胞的表达随感染时间的延长而升高,但感染10wk后,FasF 在CD4＋T细胞的表达接近并超过Fas的表达,结论：在日本血吸虫感染过程中,CD4＋ T细胞凋亡比率超过CD8＋T细胞和CD4＋／CD9＋T细胞比值下降与相关蛋白Fas,FasL的表达有关。     

致小鼠脾脏T细胞凋亡日本血吸虫虫卵抗原蛋白的筛选

目的 观察日本血吸虫虫卵致小鼠脾脏淋巴细胞凋亡情况,筛选SEA中致脾脏T细胞凋亡的蛋白组分。方法 采用TUNEL(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase-mediated dUTP nick end labeling, TdT介导的dUTP缺口末端标记法)检测日本血吸虫感染鼠脾脏虫卵肉芽肿细胞凋亡情况。制备日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen, SEA)并免疫小鼠。将小鼠处死,取脾,制备脾细胞悬液,分别以15、30、60μg/mlSEA刺激脾脏细胞,流式观察脾脏淋巴细胞凋亡情况。用层析柱及超滤管按分子质量将SEA初步分离为4个分子区段,蛋白分别富集于Fr1,>55 ku; Fr2,30～70 ku; Fr3,5～30 ku; Fr4,<5 ku。体外分离培养免疫小鼠脾脏细胞,分别加入60μg/ml的不同SEA区段分子,培养48 h后以Annexin V标记进行流式检测,采用DNA ladder法和RT-PCR检测T细胞中Fas, FasL mRNA水平。将致凋亡作用显著的SEA区段进行SDS-PAGE,电洗脱富...     

日本血吸虫慢性感染致CD+4T细胞凋亡的分子基础

目的　立足于全基因水平考察日本血吸虫慢性感染小鼠CD 4T细胞的凋亡相关基因的变化。方法　采用三色流式细胞术结合高密度寡核苷酸芯片 (Affemetrix芯片 ) ,对日本血吸虫感染 13周的小鼠脾脏中的CD 4T细胞进行凋亡观察及基因转录分析 ,获得凋亡相关基因的表达图谱。结果　日本血吸虫慢性感染小鼠CD 4T细胞的凋亡率均明显高于正常小鼠 (P <0 0 1) ;感染小鼠的CD 4T细胞中有 2 5个凋亡相关基因与正常小鼠相比有显著性差异 ,包括凋亡促进基因—生长抑制和DNA损伤 -GADD家族和肿瘤坏死因子α诱导蛋白 3,凋亡抑制基因—IAP等。结论　日本血吸虫慢性感染小鼠CD 4T细胞的凋亡可能是导致宿主免疫下调的原因之一。凋亡通路中存在复杂的凋亡促进基因和抑制基因的相互作用 ,其中肿瘤坏死因子α诱导蛋白 3可能是日本血吸虫感染诱导CD 4T细胞凋亡的特征性因子。     

日本血吸虫细胞凋亡及其诱导的研究

[目的 ]探讨日本血吸虫的细胞凋亡现象及诱导日本血吸虫细胞凋亡的可能性。 [方法 ]分离、培养日本血吸虫成虫混合细胞和虫卵。用原位末端标记法和琼脂糖凝胶电泳法分别检测正常培养条件下和诱导因素存在时细胞凋亡发生情况。 [结果 ]未经诱导的成虫细胞 ,DNA琼脂糖凝胶电泳未见凋亡所特有的“梯形”条带 ,成虫细胞核可见少量明显的凋亡所特有阳性着色。经诱导的成虫细胞和卵细胞琼脂糖凝胶电泳均呈凋亡所特有的“梯形”条带 ,诱导组的成虫细胞核可见明显的凋亡所特有的阳性着色和凋亡小体。 [结论 ]首次观察到日本血吸虫成虫细胞存在凋亡现象 ,且外源性因素可诱发日本血吸虫成虫细胞和卵细胞凋亡。     

感染日本血吸虫小鼠CD_4~ 和CD_8~ T细胞中Fas及FasL的表达研究

目的　探讨在日本血吸虫感染过程中 ,宿主 CD4 和 CD8 T细胞中死亡受体 (Fas)及死亡配体 (Fas ligand,FasL)的表达情况。　方法　利用免疫组化的方法检测在日本血吸虫感染过程中 ,Fas和 Fas L 在 CD4 和 CD8 T细胞中的表达。　结果　在日本血吸虫感染过程中 ,Fas和 Fas L在 CD4 和 CD8 T细胞的表达随感染时间的延长而升高 ,但感染10 wk后 ,Fas L在 CD4 T细胞的表达接近并超过 Fas的表达。　结论　在日本血吸虫感染过程中 ,CD4 T细胞凋亡比率超过 CD8 T细胞和 CD4 / CD8 T细胞比值下降与相关蛋白 Fas、Fas L的表达有关     

一氧化氮诱导日本血吸虫成虫原代培养细胞凋亡的研究

目的探讨NO诱导的日本血吸虫细胞凋亡的细胞毒作用。方法用不同剂量NO供体一硝普钠(SNP)处理日本血吸虫成虫原代培养细胞，8h后用Annexin-V-FITC标记原代培养细胞，荧光显微镜下观察细胞的凋亡情况。结果SNP能明显诱导日本血吸虫原代培养细胞发生凋亡，且细胞凋亡的发生率具剂量依赖性，300μmol／LSNP处理组细胞的凋亡发生率明显高于100μmol／LSNP处理组。结论NO能诱导日本血吸虫细胞凋亡，NO对血吸虫童虫的细胞毒作用可能与此有关。     

日本血吸虫感染过程中宿主CD^＋4CD^＋8T细胞凋亡的相关基因转录水平的研究

目的：探讨在日本血吸虫感染的过程中,宿主CD^ 4和CD^ 8T细胞凋亡的相关基因p53,bcl-2,TGFβ在转录水平上的变化,方法：用地高辛标记的探针作原位杂交,观察凋亡相关基因在日本血吸虫感染过程中CD ^ 4和CD^ 8T细胞中转录水平的变化,结果：在日本血吸虫感染过程中,CD^ 4和CD^ 8T细胞中促凋亡基因p53和TGF－βRNA的表达随感染时间的延长而升高,感染后第10周起CD^ 4T 细胞p53和TGF－βmRNA的表达明显高于CD^ 8T细胞,差异有显著意义,抑制凋亡发生的基因bcl-2mRNA表达水平则与之相反,CD^ 4T细胞bcl-2mRNA的表达从感染从第10周起显著下降,而CD^ 4T细胞bcl-2mRNA的表达水平无显著性变化,结论：在日本血吸虫感染过程中,CD^ 4T细胞凋亡比率超过CD^ 4/CD^ 8T细胞,CD^ 4/CD^ 8T细胞比值下降与p53,bcl-2,TGF-β基因的活化有关。     

HIV感染与T细胞凋亡

艾滋病是由HIV感染引起的,CD_4~+T细胞显著减少,多克隆B细胞活化和细胞因子失调等为特征的获得性免疫缺陷综合征。临床上表现为免疫缺陷的同时伴各种机会菌感染及恶性肿瘤的临床症候群:包括卡波济肉瘤,肺外非空洞性结核,口腔念珠     

一氧化氮诱导日本血吸虫成虫原代培养细胞凋亡的研究

目的　探讨NO诱导的日本血吸虫细胞凋亡的细胞毒作用。　方法　用不同剂量NO供体—硝普钠 (SNP)处理日本血吸虫成虫原代培养细胞 ,8h后用Annexin V FITC标记原代培养细胞 ,荧光显微镜下观察细胞的凋亡情况。结果　SNP能明显诱导日本血吸虫原代培养细胞发生凋亡 ,且细胞凋亡的发生率具剂量依赖性 ,3 0 0 μmol/LSNP处理组细胞的凋亡发生率明显高于 10 0 μmol/LSNP处理组。　 结论　NO能诱导日本血吸虫细胞凋亡 ,NO对血吸虫童虫的细胞毒作用可能与此有关。     

日本血吸虫感染小鼠肝脏及脾脏NKT细胞的变化

目的观察日本血吸虫感染后小鼠肝脏及脾脏自然杀伤(NK)T细胞的动态变化特征。方法将24只6～8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为4组,其中3组每鼠经腹部皮肤感染(14±2)条日本血吸虫尾蚴,分别于感染后3、6、12周剖杀小鼠,分离肝脏及脾脏单个核淋巴细胞,应用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CD49b单克隆抗体及藻红蛋白(PE)标记的CD3e单克隆抗体标记细胞,流式细胞仪检测CD3/CD49b双阳性的NKT细胞占单核淋巴细胞的比例。体外刺激实验中将分离的正常小鼠脾脏单个核淋巴细胞,分别用SEA、虫卵蛋白、虫卵脂质作为刺激物,观察其中NKT细胞的比例变化。结果日本血吸虫感染小鼠脾脏中NKT细胞,于感染后12周比例为(4.73±0.41)%,显著高于对照组比例(2.07±0.12)%(P0.01);肝脏NKT细胞在感染后3周(8.03±0.23)%与对照组(8.60±1.48)%无明显变化,但感染后6周及12周NKT比例明显上升,分别为(15.90±0.76)%和(21.00±0.30)%,与对照组相比差异有统计学意义(P0.01)。体外实验结果显示,刺激物为SEA和虫卵脂质时,NKT细胞的比例分别为(0.77±0.03)%及(0.80±0.06)%,明显高于空白对照组(0.53±0.03)%及虫卵蛋白组(0.50±0.06)%(P0.05)。结论日本血吸虫感染导致小鼠脾脏及肝脏中NKT细胞比例上调,其上调可能与虫卵可溶性抗原中的脂质组分有关。     

日本血吸虫促凋亡基因SjBAD的初步研究

目的了解日本血吸虫促凋亡基因Sj BAD的生物学、免疫学和转录表达特征,评估Sj BAD重组蛋白作为日本血吸虫病疫苗候选分子的潜力。方法根据Sj BAD的参考序列设计引物,应用PCR技术扩增Sj BAD基因,构建重组表达质粒p ET-28a(+)-Sj BAD。采用实时定量PCR检测Sj BAD基因在日本血吸虫不同发育期及42 d雌、雄虫体内的转录水平;应用Western blotting和间接ELISA法分析Sj BAD重组蛋白的抗原性和免疫原性。用重组抗原Sj BAD免疫BALB/c小鼠,通过计算减虫率及肝脏减卵率,评估重组抗原作为血吸虫病候选疫苗分子的潜力。结果成功克隆了日本血吸虫Sj BAD基因,构建了重组表达质粒p ET-28a(+)-Sj BAD,并在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白分子量约为22 k Da。Western blotting表明Sj BAD具有较好的抗原性和免疫原性,间接ELISA法检测表明重组蛋白免疫小鼠产生了高水平的特异性抗体Ig G。实时定量PCR检测发现Sj BAD基因在日本血吸虫的各个发育阶段均有转录,以14 d表达量最高,且在雄虫体内的表达量高于雌虫。两次动物免疫试验表明,重组蛋白Sj BAD在BALB/c小鼠体内诱导了30.82%和27.87%的减虫率,及42.52%和45.84%的肝脏虫卵减少率,均显著高于PBS对照组(P均0.05)。结论成功克隆、表达了日本血吸虫促凋亡相关基因Sj BAD,该基因在日本血吸虫不同发育期虫体内均有表达。纯化的重组Sj BAD蛋白在小鼠体内能诱导产生部分抗血吸虫感染的免疫保护效果。     

血吸虫细胞凋亡研究进展

细胞凋亡对血吸虫及各种生物体的生长、发育具有重要的作用。近年来,一些学者在血吸虫的细胞凋亡现象观察、凋亡在血吸虫生长发育中的作用方面开展了探索,以寻找、开拓防治血吸虫病的新途径,为控制血吸虫病的传播提供新思路。该文对有关血吸虫细胞凋亡、血吸虫与宿主细胞凋亡现象、血吸虫重要凋亡基因的相关研究及血吸虫细胞凋亡研究的应用前景作一简述。     

日本血吸虫可溶性成虫抗原和虫卵抗原诱导调节性T细胞能力差异的比较

目的 目的 观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原 （SWA） 与可溶性虫卵抗原 （SEA） 诱导CD4+ CD25+ Foxp3+ 调节性T （Treg） 细胞水平及其抑制能力的差异。方法 方法 分别以PBS、 SWA和SEA免疫小鼠, 取小鼠脾淋巴细胞, 采用流式细胞术检测各组Treg细胞占CD4+ T细胞的比例, 以及Treg细胞中产IL?10、 TGF?β的细胞比例。采用磁珠分选出各组小鼠的Treg细胞后, 以3 H?TdR掺入法检测其抑制靶细胞增殖的能力。结果 结果 与SWA相比, SEA可诱导更多的Treg细胞 （P < 0.05）, 刺激 Treg细胞免疫抑制功能的能力也更强 （P < 0.05）; SWA、 SEA免疫小鼠后, SEA刺激Treg细胞产生IL?10、 TGF?β的能力更强（P < 0.01）。结论 结论 SEA较SWA能更好地活化诱导Treg细胞发挥免疫抑制作用。     

慢性日本血吸虫感染C57BL／6小鼠体内Th1／Th2细胞凋亡的检测

目的 观察日本血吸虫感染晚期C57BL／6小鼠体内Th1、Th2细胞凋亡水平的变化。方法运用流式细胞技术，采用表面分子、胞内因子同时染色的三色标记和间接标记的方法，对日本血吸虫感染13周的C57BL／6小鼠脾脏、淋巴结中的Th1、Th2细胞的凋亡水平进行观察。结果日本血吸虫感染晚期C57BL／6小鼠与正常小鼠相比，Th1、Th2细胞凋亡均显著增加，但Th1细胞凋亡较多而Th2细胞凋亡较少。此阶段Th1细胞凋亡比Th2细胞更加易感。结论Th1、Th2细胞凋亡易感性的不同可能是导致血吸虫感染晚期Th2极化的原因之一，此为血吸虫感染过程中Th极化研究提供了新的证据。     

T细胞缺陷对日本血吸虫感染宿主存活及肝脏虫卵肉芽肿形成的影响

目的观察T细胞缺陷对日本血吸虫感染宿主存活时间,肝脏虫卵肉芽肿形成及日本血吸虫雌虫产卵的影响。方法T细胞缺陷小鼠（裸鼠）和BALB／c小鼠各20只,每只感染日本血吸虫尾蚴（25±1）条,记录感染后存活时间。感染后第42d,从2组存活小鼠中各随机取7只剖杀,取肝组织,计数肝内虫卵;制作肝组织切片,观察虫卵肉芽肿病理学变化,并测量单个虫卵肉芽肿直径。结果20只裸鼠感染日本血吸虫后46d全部死亡。裸鼠肝组织中的雌虫产卵数为（4759．5±2161．3）个／条,BALB／c小鼠为（7323．4±2254．6）个／条,差异有统计学意义（P％0．05）。裸鼠肝脏中单个虫卵肉芽肿直径为（138．4±31．9）μm,与感染组BALB／c小鼠（316．4±68．2）μm比较,差异有统计学意义（P〈0．01）,且不能形成典型局限性虫卵肉芽肿,肉芽肿内嗜酸性粒细胞明显减少,周围肝组织伴有大面积坏死。结论宿主T细胞对虫卵肉芽肿的形成和维持感染宿主的生存具有重要作用。     

日本血吸虫感染小鼠调节性T细胞水平动态变化及功能逆转研究

目的观察日本血吸虫感染小鼠调节性T细胞水平动态变化,筛选调节性T细胞功能抑制因子。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用流式细胞分析法检测不同感染阶段小鼠体内调节性T细胞水平;通过检测小鼠血清中细胞因子的水平变化,观察免疫反应的极化过程;采用磁珠分离法纯化小鼠脾脏的调节性T细胞,人工设计合成2条寡核苷酸（CpG1-ODN,CpG2-ODN）,通过淋巴细胞增殖试验筛选能逆转调节性T细胞功能的刺激因子。结果流式细胞分析发现,随着血吸虫感染进程的发展,小鼠外周血及脾脏调节性T细胞水平逐渐增加,免疫反应逐步向Th2型极化,血清IL-5水平增加,IFN-γ下降。淋巴细胞增殖试验显示,人工合成的寡核苷酸（CpG2-ODN）能有效刺激淋巴细胞增殖,使淋巴细胞的IL-2分泌增加,TGF-γ下降,并能解除调节性T细胞对效应T细胞增殖的免疫抑制作用。结论血吸虫感染可增加小鼠体内调节性T细胞水平,诱导免疫反应向Th2型极化。寡聚核苷酸CpG2-ODN能逆转调节性T细胞的免疫抑制功能。     

日本血吸虫凋亡诱导因子SjAIF功能区片段的克隆及表达分析

目的 克隆表达日本血吸虫凋亡诱导因子(SjAIF)功能区片段,并对其生物学特性进行初步分析。方法 应用PCR技术扩增日本血吸虫凋亡诱导因子的功能区片段,构建原核重组表达质粒并诱导其表达,实时定量PCR分析其在不同发育时期童虫和成虫的转录水平,通过Western-blot和间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性和免疫原性,应用免疫组化分析该蛋白在虫体内的分布情况。结果 克隆了SjAIF功能区片段,大小为831 bp。成功构建了原核重组表达质粒pET-28a(+)-SjAIF,并在大肠杆菌中获得表达,重组蛋白分子量35 kD。实时定量PCR分析表明SjAIF基因在童虫和成虫的各个发育阶段均有转录,其中7 d~21 d虫体表达量较低,42 d和28 d虫体表达量较高,雌虫表达量高于雄虫。重组蛋白具有较好的抗原性和免疫原性,免疫小鼠后诱导产生了较高水平的特异性IgG抗体。该蛋白主要存在于日本血吸虫体被,少部分分布于实质组织中。结论 成功表达了SjAIF基因的功能区片段,对其生物学特性进行了初步分析,为进一步研究该基因生物学功能和作用提供了基础。     

性别对日本血吸虫感染过程中滤泡辅助性T细胞比例和活性影响的初步分析

目的 目的 研究性别对日本血吸虫感染过程中滤泡辅助性T （Tfh） 细胞的数量和功能的影响。方法 方法 选择安徽省池 州市血吸虫病流行区的血吸虫病患者50例, 以及来自该市非流行区的健康对照50名。采集上述研究对象外周血, 采用 流式细胞术检测不同性别日本血吸虫病患者和健康志愿者外周血中总Tfh细胞、 ICOS+ Tfh细胞和PD?1+ Tfh细胞的比例, 并进行比较分析。 结果 结果 与健康男性及女性对照相比, 男、 女性血吸虫病患者外周血中的总Tfh细胞比例 （U男= 149.0、 U女 = 39.5, P均< 0.01）、 ICOS+ Tfh细胞比例 （t男 = 5.9, t女 = 7.7, P均< 0.01）、 PD?1+ Tfh细胞比例 （t男 = 3.2、 t女 = 5.9, P均< 0.01） 均升高, 差异均有统计学意义。进一步分析发现, 与男性患者相比, 女性患者外周血中的总Tfh细胞比例 （U = 187.5, P < 0.05）、 ICOS+ Tfh细胞比例 （t = 3.2, P < 0.05）、 PD?1+ Tfh细胞比例 （t = 3.0, P < 0.05） 均升高, 差异均有统计学意义。结论 结论 在日本血吸虫感染过程中, 性别因素可能在Tfh细胞的产生和活化中发挥了重要的作用。     

感染日本血吸虫小鼠CD4+和CD8+T细胞中Fas及FasL的表达研究

目的　探讨在日本血吸虫感染过程中,宿主CD4+和CD