重症肌无力骨骼肌减少的25000蛋白分子鉴定

目的:解析重症肌无力(MG)骨骼肌特异减少的相对分子质量约25000的蛋白分子结构。方法:用双向电泳分离纯化骨骼肌25000蛋白,电喷射离子化质谱和Edman降解法分别测定其精确分子质量和N端部分氨基酸序列,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定其肽指纹图谱,在上述基础上,用ImmunoWesternblot分析骨骼肌蛋白与25000蛋白抗体及碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)抗体的结合。结果:质谱和N端部分氨基酸序列的测定表明,电泳显示的表观相对分子质量为25000的蛋白其精确分子质量为29632.05,该蛋白的N端氨基酸可能是酰基化的;肽指纹图谱解析和蛋白资料库查询结果,结合对25000蛋白生化和生物学特征的了解,发现25000蛋白与CAⅢ的分子是非常相似的。结论:MG骨骼肌特异减少的相对分子质量约25000的蛋白分子很可能是已知的蛋白质CAⅢ,该活性物质与MG发病的关系值得进一步研究。     

Ⅰ型重症肌无力的早期误诊分析

目的研究Ⅰ型重症肌无力(OMG)早期误诊病例的临床特点。方法回顾性分析我院收治的26例Ⅰ型重症肌无力早期误诊患者的临床资料,探讨其误诊原因。结果本组以上睑下垂首发6例,单眼一条眼外肌麻痹首发10例,双眼多条眼外肌麻痹首发2例,单眼全眼外肌麻痹首发1例,类似眼病表现7例,经各种检查确诊为重症肌无力。结论多数Ⅰ型重症肌无力患者早期临床表现缺乏特异性,眼科医生应加强对该病的理解认识,特别是婴幼儿及高龄老年人,以防漏诊、误诊,延误病情。     

重症肌无力P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位

目的：表达、纯化重症肌无力相关P9基因TRAF型锌指结构(P9 TRAF-type zinc finer domain，简称P9-ZFD)编码的蛋白质，制备P9-ZFD多克隆抗体，研究P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位。方法：应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆编码P9-ZFD的cDNA序列，构建pET24a-P9-ZFD表达载体，在E．coli B121(DE3)中胞内诱导表达P9-ZFD蛋白，组氨酸亲和色谱法纯化P9-ZFD蛋白并免疫Balb／c小鼠制备其多克隆抗体。ELISA和Western blot鉴定抗体效价及其免疫特异性。免疫组织化学及免疫电镜观察P9-ZFD蛋白在骨骼肌中的表达部位及其亚细胞分布。结果：表达、纯化的P9-ZFD蛋白相对分子质量约30kD，纯度达95％以上。制备的P9-ZFD抗体具有特异的免疫反应性。免疫组织化学和免疫电镜结果显示，P9-ZFD蛋白的免疫染色部位集中沿MG骨骼肌细胞膜分布。结论：重症肌无力相关的P9-ZFD蛋白在MG骨骼肌细胞膜处表达，是一种骨骼肌细胞膜蛋白组分。     

重症肌无力患者骨骼肌中减少的25000蛋白即为碳酸酐酶Ⅲ的论证

目的论证重症肌无力(MG)患者骨骼肌中特异性减少的25000蛋白为碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)分子。方法用双向电泳结合免疫Western blot分析25000蛋白抗体和CAⅢ抗体有免疫反应的蛋白质分子的物化特征,分别用免疫Dot blot与免疫Western blot观察两种抗体对纯化的25000蛋白及骨骼肌蛋白匀浆的竞争结合,用免疫Western blot分析健康人与MG患者骨骼肌CAⅢ的蛋白表达。结果双向电泳结合免疫Western blot显示,25000蛋白抗体和CAⅢ抗体识别的蛋白质具有相同的相对分子质量和等电点;免疫Dot blot与免疫Western blot的竞争结合证实25000蛋白与CAⅢ为同一物质;免疫Western blot表明,用25000蛋白抗体与CAⅢ抗体检测健康人与MG患者骨骼肌25000蛋白表达的结果亦几乎是相同的。结论MG患者骨骼肌特异减少的25000蛋白分子就是CAⅢ,这为进一步深入研究CAⅢ与MG的发病奠定了基础。     

家兔胫前肌肌亚体诱发电位和梭内外肌纤维出生后的增龄改变*

背景：家兔骨骼肌生后发育过程中,梭内外肌纤维酶组织化学构成比例和肌电特征的变化反映其与功能的关系。目前,国内外缺乏对长肌胫前肌肌亚体的相关结构功能的系统研究。 目的：探讨生后不同年龄阶段家兔胫前肌肌亚体的诱发电位和酶组织化学表现。 方法：应用大体解剖结合酶组织化学法明确不同年龄阶段家兔胫前肌肌亚体。来用电生理记录仪测量家兔胫前肌肌亚体的诱发电位振幅、持续时间及波形,ATP酶组织化学染色观察ⅡB型、ⅡA型、ⅡX型、Ⅰ型梭外肌纤维组成,梭内肌纤维的构成特点。 结果与结论：幼年家兔的诱发电位振幅、持续时间及波形波动均较小,波形相对较简单且波动平缓;随着年龄增长,成年后诱发电位振幅、持续时间及波形波动较大,波形比幼年的延续时间长而复杂,有小的棘波出现。胫前肌前、后亚体内ATP酶组织化学染色显示ⅡB型、ⅡA型梭外肌纤维随增龄而增加;而ⅡX型、Ⅰ型梭外肌纤维随增龄而减少。梭内肌纤维分为核袋纤维b1、b2和核链纤维c,其外被结缔组织构成的梭囊包绕。结果表明在行走和奔跑状态下,后亚体协助维持小腿的姿势和保持后肢关节的稳定性,当运动需要力量和速度时,前亚体与后亚体一起提供足够的收缩速度和力量以适应运动的需要。 关键词：胫前肌;诱发电位;腺苷三磷酸酶;梭内肌纤维;梭外肌纤维;家兔     

杆状体肌病合并先天性单一Ⅰ型肌纤维肌病临床及病理报告

目的探讨杆状体肌病及单一Ⅰ型肌纤维肌病的临床及病理特点。方法杆状体肌病合并单一Ⅰ型肌纤维肌病患者行组织化学染色病理分析。结果肌肉活检modified Gomori trichrome（MGT）染色肌浆内、肌膜下紫色杆状体聚集ATPase染色（酸性、碱性）肌纤维类型几乎全部为Ⅰ型肌纤维，散在单个Ⅱ型肌纤维。结论肌活检发现特异性杆状体、单一型肌纤维分布是确诊此类疾病的唯一可靠方法。     

重症肌无力P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位

目的:表达、纯化重症肌无力相关P9基因TRAF型锌指结构(P9 TRAF-type zinc finger domain,简称P9-ZFD)编码的蛋白质,制备P9-ZFD多克隆抗体,研究P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆编码P9-ZFD的cDNA序列,构建pET24a-P9-ZFD表达载体,在E.coli BL21(DE3)中胞内诱导表达P9-ZFD蛋白,组氨酸亲和色谱法纯化P9-ZFD蛋白并免疫Balb/c小鼠制备其多克隆抗体.ELISA和Western blot鉴定抗体效价及其免疫特异性.免疫组织化学及免疫电镜观察P9-ZFD蛋白在骨骼肌中的表达部位及其亚细胞分布.结果:表达、纯化的P9-ZFD蛋白相对分子质量约30 kD,纯度达95%以上.制备的P9-ZFD抗体具有特异的免疫反应性.免疫组织化学和免疫电镜结果显示,P9-ZFD蛋白的免疫染色部位集中沿MG骨骼肌细胞膜分布.结论:重症肌无力相关的P9-ZFD蛋白在MG骨骼肌细胞膜处表达,是一种骨骼肌细胞膜蛋白组分.     

葡萄球菌蛋白A免疫吸附治疗全身型重症肌无力的临床研究

目的研究葡萄球菌蛋白A免疫吸附治疗全身型重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的疗效和安全性。方法采用蛋白A免疫吸附治疗19例成人全身型MG并进行临床疗效和安全性的判定。结果所有入选病人均完成2次免疫吸附治疗;第2次治疗后的IgG、IgA、IgM浓度明显下降(P<0.0001);Osserman分级、改良美国MG基金会(MGFA)评分、MG日常生活量表(ADL)和徒手肌力量表(MMT)均明显改善(P<0.0001)。MG特异性乙酰胆碱受体(AChR)抗体阳性的患者2次治疗后抗体滴度明显下降;治疗后外周血调节性T细胞百分比明显上升。部分病人有轻度不良反应,但总体耐受性良好,各项安全性临床评定指标在治疗前后的变化均无统计学意义。结论葡萄球菌蛋白A免疫吸附可以迅速改善全身型MG病人的病情。     

骨形态发生蛋白9诱导骨骼肌源性干细胞的成骨分化***

背景：已有实验报道部分骨形态发生蛋白能够诱导间充质干细胞等向成骨细胞的分化。 目的：评估骨形态发生蛋白9定向诱导骨骼肌源性干细胞成骨分化的能力。 方法：采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶二步消化法提取兔骨骼肌源性干细胞,用重组腺病毒的方法将骨形态发生蛋白9导入细胞,通过碱性磷酸酶定量测定、钙盐沉积实验观察骨形态发生蛋白9对于骨骼肌源性干细胞成骨分化的定向诱导作用。 结果与结论：成功分离培养兔骨骼肌源性干细胞,免疫细胞化学染色80%以上的细胞呈Sca-1 阳性。骨形态发生蛋白9能诱导骨骼肌源性干细胞碱性磷酸酶的表达,且能够促进细胞的钙盐沉积。提示,骨形态发生蛋白9具有定向诱导骨骼肌源性干细胞分化成骨的能力。     

强直性肌营养不良Ⅰ型临床、病理、骨骼肌磁共振特点

目的总结11例强直性肌营养不良Ⅰ型(DM1)患者的临床、病理和双下肢肌肉受累的特点。方法回顾性分析2012年01月至2020年10月就诊于南京鼓楼医院神经内科的11例DM1患者的临床、骨骼肌活检病理及5例双下肢骨骼肌磁共振的特点。结果11例患者均有不同程度的肌强直、伴有肌无力/肌萎缩症状,肌无力/肌萎缩远端重于近端。骨骼肌病理特点:10/11例患者可见Ⅰ型肌纤维轻度萎缩,部分患者可见核内移、核聚集、肌浆块现象。双下肢肌肉磁共振:5例患者双下肢远端脂肪浸润重于近端,双侧肌肉受累程度不对称,大腿肌肉脂肪浸润以股中间肌最严重,小腿肌肉以腓肠肌、比目鱼肌、腓骨长肌最严重。结论骨骼肌磁共振对诊断强直性肌营养不良Ⅰ型有重要的提示意义。     

正常及重症肌无力肌肉蛋白成分的比较

目的：了解正常及重症肌无力（ＭＧ）肌肉蛋白成分是否存在差异。方法：用ＰＢＳ提取正常和ＭＧ肌肉的蛋白,以常量及超微量ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析蛋白成分;扫描计算有差异的谱带密度,并以双向电泳鉴定其组分。结果：正常肌肉有一相对分子质量约２５×１０３的蛋白明显高于ＭＧ肌肉,常量分析该谱带密度：正常肌肉为４．２０±２．３１,ＭＧ肌肉为１．４０±０．４７,差异十分显著（Ｐ＜０．０１）。微量分析该谱带密度：正常肌肉为４．６２±１．９４ＭＧ肌肉为１．６６±０．５６,差异非常显著（Ｐ＜０．００１）。双向电泳显示２５×１０３谱带至少有两个主要的蛋白成分组成,有差异的蛋白为一偏碱成分。结论：ＭＧ肌肉２５×１０３蛋白水平明显低于正常肌肉,提示该蛋白很可能与ＭＧ的发病或发展有密切的关系。     

先天性肌纤维类型不均的临床表现和病理特点（附1例报道）

目的：探讨先天性肌纤维类型不均（CFTD）的临床表现和病理特点。方法：回顾复旦大学附属华山医院神经科收治的1例CFTD患者的临床表现和肌肉病理改变,并结合国外文献报道的3组共21例病例进行分析比较。结果：21例CFrD患者中,男11例,女10例。平均发病年龄为2．84岁,约28．6％的患者有家族史。除四肢无力及肌张力低下外,伴面肌无力者42．9％,喂养困难者19．0％,呼吸肌受累者38．1％,约1／3患者有高腭穹、脊柱侧凸、关节挛缩等骨骼畸形,所有病例认知功能均正常。约71．43％的患者病情稳定,28．6％的患者病情缓慢加重。与文献报道比较,本文所报道的病例临床表现具有肌无力和肌萎缩进展缓慢,而呼吸肌和骨骼不受累等肌营养不良样的特点。结论：CFTD作为先天性肌病的一种,可有肌营养不良样的临床表现,明确诊断有赖于肌肉活检。     

Protein phosphorylation in fast and slow chicken skeletal muscles: Effect of denervation

We have identified proteins in adult chicken skeletal muscle whose phosphorylation can be used as markers for the mature fast and slow muscle phenotype. These include phosphorylase, phosphorylase kinase, and a cyclic adenosine 3′,5′-monophosphate (cAMP)-stimulated, calmodulin-inhibited 28-kDa band (markers for fast muscle), a calmodulin-stimulated 50-kDa band, and two cAMP-stimulated bands at 44 and 46 kDa (markers for slow muscle), and the relative concentrations of the regulatory subunits of cAMP-dependent protein kinase (RI and RII). After denervation the pattern of phosphorylation in fast muscle changed to resemble that of slow muscle: phosphorylation of the fast phenotype markers decreased; the slow phenotype markers, barely detectable in normal fast muscle, appeared as significant phosphoproteins; and the concentration of RII increased with no change in RI. This is consistent with denervation-induced changes observed using other phenotypic markers and indicates the potential for using these phosphoprotein markers in studies of muscle development and pathophysiology. © 1998 John Wiley & Sons, Inc. Muscle Nerve 21:504–513, 1998.     

Fatigue in type I fiber predominance: a muscle force and surface EMG study on the relative role of type I and type II muscle fibers

The relative proportions of fiber types within muscle and the characteristics of these fiber types are important determinants of the surface electromyogram (SEMG) during fatigue. In this study, patients suffering from congenital myopathy characterized by a strong type I fiber predominance were studied. Six patients with 95-100% type I fibers, 2 patients with 80% type I fibers, and 12 healthy volunteers participated in an ischemic, isomeric, intermittent exercise test of m. quadriceps femoris at 80% MVC. Considering the results of the morphometric analysis of muscle biopsy specimen and of the anthropometric estimated muscle-bone volume, it was found that type I muscle fibers had a lower force generating capacity than type II fibers. The initial conduction velocity along the muscle fiber membrane (MFCV) was low in patients with 95-100% type I fibers. During the ischemic exercise test, the 95-100% type I fibers showed less fatigability than type II fibers, which was reflected by a nearby absent decrease of the muscle membrane excitability as measured by the MFCV, and only a slight increase of the SEMG amplitude compared with patients having 80% type I fibers and controls. The absence of a definite MFCV decrease was related to the nearby lacking lactate formation in 95-100% type I fibers.