应用荧光偏振技术检测HBV DNA

目的　建立一种简便、灵敏、特异的DNA检测方法。方法　用荧光偏振技术检测 10 2例乙型肝炎患者血清中的HBVDNA ,并与多聚酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)方法作比较。结果　该方法可以检测出 1× 10 1拷贝的HBVDNA模板 ,CV为 6 .4 4 % ,对 10 2例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBsAg( )、HBeAg( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 10 0 % ( 4 0 / 4 0 ) ;HBsAg( )、抗HBe( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 81.8% ( 2 7/ 33) ;HBsAg( )、抗HBc( )血清HBVDNA阳性率为 72 .4 % ( 2 1/ 2 9) ,其余为阴性。 30例非乙型肝炎患者血清中HBVDNA的检测结果均为阴性。结论　该方法简单、灵敏、特异 ,适用于临床进行大样本核酸检测     

改良PCR-ELISA的建立及初步应用

目的　建立操作简单、灵敏、特异的PCR -ELISA。方法　采用短DNA片段扩增 ,其中上游引物 5′端标记有生物素 ,使PCR扩增产物的一条链上带有生物素 ,随着PCR反应的结束 ,PCR反应液中的地高辛标记的探针与PCR产物中的生物素标记的DNA链杂交 ,形成杂交产物 ,然后杂交产物通过生物素与微孔板上固定的链霉亲合素结合 ,被固定在微孔板上 ,最后用ELISA检测被固定的杂交产物。结果　该方法可以检测出 1× 10 1拷贝的HBVDNA模板 ,对 10 0例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBSAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清 10 0 %(30 /30 )检出HBVDNA ;HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)的血清HBVDNA阳性为 78 6 %(2 2 /2 8) ;HBsAg(+)、抗HBc(+)的血清HBVDNA阳性为 6 6 7%(16 /2 4) ,其余为阴性。非乙型肝炎血清的结果均为阴性。结论　该PCR -ELISA操作简单 ,方法灵敏、特异。     

聚合酶链反应荧光偏振技术在乙型肝炎病毒DNA检测中的应用及价值

目的　探讨聚合酶链反应荧光偏振技术 (PCR FP)检测乙型肝炎病毒 (HBV)DNA的临床应用价值。方法　将PCR扩增得到的HBVDNA特定片段 ,与荧光素标记探针和PCR产物中的一条DNA链杂交 ,形成特异杂交体 ,用荧光偏振光检测仪检测特异杂交体 ,最终判断HBVDNA是否存在。并对对 10 2份乙型肝炎患者和 30份非乙型肝炎患者血清进行检测结果比较。结果　PCR FP检测HBVDNA的最低检测限为 1× 10 1拷贝 ,在 4 0份乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)、乙型肝炎e抗体 (HBeAg)和抗乙型肝炎核心抗原 (抗HBc)均阳性患者血清标本中检出HBVDNA阳性率为 10 0 % ;33份HBsAg、抗乙型肝炎e抗体 (抗Hbe)和抗HBc均阳性患者血清HBVDNA阳性率为 81 8% ;2 9份HBsAg和抗HBc阳性患者血清HBVDNA阳性率为 72 4 % ;14份乙型肝炎患者和 30份非乙型肝炎患者血清均为阴性。方法的灵敏性和特异性分别为 86 %和 10 0 %。结论　PCR FP操作简单、灵敏、特异 ,适用于临床HBV基因检测。     

全血乙型肝炎病毒定量检测方法的初步研究

目的探讨聚合酶链反应(PCR)检测全血中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量及临床应用价值.方法取20μl血清裂解液提取HBV DNA、和取同样量的全血经不同裂解液提取血液中血清及白细胞内总HBV DNA,同时经PCR检测.对78份乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性患者两种取材方法检测HBV DNA含量进行比较.结果检测HBV DNA的最低检测限为1×103拷贝/ml,29份乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)和抗乙型肝炎核心抗体(抗HBc)均为阳性患者全血检测HBV DNA阳性率为100%,血清阳性率为100%,P＞0.05;37份HBsAg、抗乙型肝炎e抗体(抗HBe)和抗HBc均为阳性患者全血检测HBV DNA阳性率为97.30%,血清阳性率为48.65%,P＜0.01;12份HBsAg和抗HBc均为阳性患者全血检测HBV DNA阳性率为91.67%,血清阳性率为25%,P＜0.01;20份非乙型肝炎患者血清均为阴性.血清HBVDNA阳性多数是ALT升高患者,其拷贝数均小于全血测定的拷贝数.结论全血检测HBV DNA阳性率高,避免血液中白细胞内HBV漏检,它能准确地反应血液HBV含量,更好地为临床治疗效果作监测.     

HBV DNA定量检测及其与HBV标志物的相关性探讨

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)DNA与不同类型HBV免疫标志物之间的关系,为临床诊断和治疗提供有价值的判断标准。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)对220例血清标本进行HBV免疫标志物检测,同时用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA含量。结果 96例乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性(+)标本中HBV DNA阳性检出率为91.7%(88/96);100例HBsAg(+)/抗-HBe(+)抗-HBc(+)标本中HBV DNA阳性检出率为20.0%(20/100)。HBsAg阳性组与HB-sAg阴性组、HBeAg阳性组与HBeAg阴性组的DNA载量比较差异有统计学意义。结论 FQ-PCR可以检测HBV感染的真实性和复制情况,其与ELISA法检测HBV血清标志物相结合,对乙型肝炎的临床诊断及治疗方案的选择、疗效观察及预后判断具有极其重要的作用。     

乙型肝炎病毒DNA与血清标志物的关系

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)DNA与血清标志物的关系。方法在该院2014年11月至2016年2月期间诊治的乙型肝炎患者中抽取360例作为研究对象,对其HBV和血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)水平进行检测。结果在360例患者的血清HBV标志物中,HBsAg(+)HBeAg(+)组、HBsAg(+)HBeAg(+)抗HBc(+)组的HBV-DNA阳性率最高,与其他组比较,差异具有统计学差异(P0.05);159例HBeAg(+)患者的HBV-DNA阳性率为93.71%(149/159);201例HBeAg(-)患者HBV-DNA阳性率为26.87%(54/201),其大部分HBV-DNA出现于抗HBe(+)血清内。结论 HBV血清标志物、HBV-DNA均为乙型肝炎病原学临床诊断的重要依据,用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)技术检测HBV-DNA水平,能够更准确的指导临床诊断和治疗。     

乙型肝炎病毒血清标记物与 HB V‐D N A 定量联合检测的意义

目的探讨乙型肝炎病毒DNA (HBV‐DNA )与血清免疫标记物的关系.方法采用荧光定量聚合酶链反应检测血清样本中HBV‐DNA含量.结果 A组[乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg )(+)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)(+)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗‐HBc)(+)]、B组[HBsAg(+)、乙型肝炎e抗原(抗‐HBe)(+)、抗‐HBc(+)]、C组[HBsAg(+)、HBeAg (+)]、D组[HBsAg (+)、抗‐HBc(+)],4组阳性率分别为94.4%、89.0%、100.0%、58.0%.结论 HBV‐DNA与乙型肝炎病毒血清标记物联合检测,对临床 HBV感染的诊断、治疗、疗效观察、传染性和复制情况的判断及预后具有重要意义.     

PCR产物液相杂交检测的优化

目的 为了使液相杂交检测更加灵敏、特异、快速。方法 通过改进杂交液的成分,选择最佳的探针浓度,使5＇端标记生物素的PCR扩增产物与5＇端标记地高辛的探针在PCR反应管中进行液相杂交,杂交条件为:94℃ 10 s冷却到37℃ 10 s即完成杂交。杂交后产物通过链霉亲和素被固定在微孔表面,同时在含高浓度DMSO的杂交液中将非特异结合的探针解离,然后对被固定的特异杂交产物进行ELISA检测。结果 液相杂交的条件优化:杂交液中二甲基亚砜(DMSO)浓度为300 ml·L~(-1),探针浓度为0.5μmol·L~(-1),杂交温度为37℃。对60～600 bp的PCR产物的杂交特异性无明显差异,可以检测到1×10~4copy的PCR产物,对100例乙型肝炎患者的血清进行检测,HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清检出HBV DNA阳性率为100％(30/30);HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBe(+)的血清检出HBVDNA阳性率为78.6％(22/28);HBsAg(+)、抗HBe(+)的血清检出HBV DNA阳性率为66.7％(16/24),其余为阴性。结论 该液相杂交法操作简单、快速、灵敏、特异,适合临床实验室使用。     

乙肝小三阳患者前S1抗原及HBV DNA定量检测相关性分析

目的 探讨乙肝小三阳患者前S1抗原(Pre-S1Ag)与HBV DNA含量在反映乙肝病毒复制方面的相关性,了解检测Pre-S1Ag的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Pre-SlAg和HBV血清标志物,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA.结果 482例HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)小三阳患者中Pre-SlAg阳性率为39.2%(189/482),HBVDNA阳性率为44.4%(214/482).结论 检测Pre-S1Ag可了解乙肝小三阳患者是否存在病毒复制.     

南通地区乙型肝炎病人中低水平HBsAg测定及其临床意义

目的了解南通地区乙型肝炎病人中低水平血清乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人群分布及其相关乙肝病毒血清标志物(HBVM)模式特征.方法采用微粒子酶免疫分析技术(microparticle en-zyme immunoassay,MEIA)对668例乙肝患者进行HBVM定量测定同时采用PCR-ELISA方法进行HBV-DNA定量测定.结果南通地区HBV感染者中部分血清HBsAg呈低水平存在(5.5%),HBVM模式以HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)为主,其次为HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+).在668例中有4例HBsAg单独阳性,含量均小于1ng/ml.结论南通地区作为肝炎高发地区,低水平血清HBsAg人群不容忽视,提高HBsAg的检测灵敏度有重要意义.