人类X染色体的异染色质的形成:复制型式的分类

人类基因组的某些部位看起来似乎不遵循DNA复制的一般规律。例如女性细胞中的2条X染色体在S期末产生的DNA合成产物的数量和分布不一致。有活性的一条X染色体,通过显带技术显示不出差异,它与常染色体同步进行合成,而它的同源染色体即失活的X染色体在合成的开始和终结过程都延迟了。在失活的X染色体中,DNA复制开始比较早的带是Xp22和q23—q28。最主要特征在复制末期进行Xq21和Xq23的复制。从8个正常女性取出的末梢血淋巴细胞     

DNA复制的发动

DNA复制是遗传信息流的第一个枢纽。为什么衰老的细胞DNA不复制,而癌细胞DNA却异常复制,这些问题都与DNA复制的发动紧密相关。DNA复制的发动引人注目的原因还在于:复制发动在机制上是独立于复制中链延长阶段;复制子复制的特异性主要表现为复制发动的特异性,而其后的链延长阶     

异常X染色体DNA复制特征的研究

本文对5例X染色体结构异常的Turner综合征患儿进行了DNA复制特征研究，结果表明，2例X短臂缺失伴有DNA复制特征改变．Xpll,Xqll出现频率较正常对照组显著降低，3例X长臂等臂病例两臂复制带型基本对称出现，复制情况与正常女性X染色体长臂带纹出现频率类似，揭示X染色体DNA复制特征可能参与表型效应。     

建立基于自主复制型载体的端粒酶转录调节细胞系

端粒酶通过催化端粒合成，保持端粒长度，从而保证细胞的持续分裂能力。其活性与生殖细胞和干细胞的增殖，体细胞的衰老和异常增殖、癌变等病理生理过程密切相关。逆转录催化亚单位hTERT的转录调节是端粒酶活性调节中的限速步骤，然而，目前对hTERT基因表达的具体机制仍不明了。研究基因转录调控的体内方法多通过瞬时转染及检测报告基因表达情况来分析启动子活性。由于众多因素的存在，这种瞬时转染的敏感性较低、重复性差。如将报告基因整合细胞基因组则容易受到基因组本身的影响。复制子Episome是一类可以在细胞中以染色体外形式独立复制的环状质粒。本研究中，我们运用EB病毒的复制子载体p220，建立了稳定的hTERT启动子介导-荧光素酶报告细胞系，并以此分析了c—MYC，p53基因对hTERT启动子的转录调节作用。     

HCV复制子系统的研究进展及其应用

丙型肝炎病毒(HCV)感染率占全世界人口的1%～2%[1],约占我国人口的3.2%[2],是急慢性肝病的主要致病因素之一,其转归和肝硬化及肝细胞癌有密切关系[3].在美国,HCV感染已经成为重症肝病晚期进行肝移植的最主要原因[4].由于其高流行性、病程的隐匿性和长期感染导致预后不良,丙型病毒性肝炎成为一个严重的医学和社会经济学问题.由于HCV基因组有显著的序列变异,并且HCV在体外自主复制水平极低,其唯一可感染的动物为黑猩猩,故缺少有效的细胞培养系统和经济的小动物模型来研究HCV复制及其机制.1999年Lohmann等在Science上首先报道了选择性双顺反子亚基因组HCV RNA复制子系统[5],此复制子在人类肝癌细胞株中能够自主复制,被公认为是HCV体外复制模型研究获得突破进展的里程碑.此后复制子系统在很多方面得到了发展并不断完善,其中报告基因复制子的发展能够方便、快捷的高流量筛选抗HCV药物.本文对HCV复制子系统的研究、发展及其应用进行阐述.     

DNA复制的研究进展

“半保留”的DNA复制是在多种酶及蛋白质因子作用下完成的复杂过程。DNA复制时,可能以特异的四文样寡聚核苷酸顺序为原点,在DNA解开酶及解链蛋白的协同作用下,由ATP为解提供能量,使DNA的双链解开,以间断复制的方式进行新链的合成。RNA引物是在引物酶及多种蛋白质因子参与下合成的。真核细胞的染色质是由组蛋白,NHC蛋白和DNA组成的复杂结     

人体显带染色体研究的进展(二)(综述)

四、染色体结构与显带机理染色体带型的亚微结构上述五种带型之间的密切关系提示了,染色体上的带谱并不是制片程序中造成的假象,而是染色体上一定结构的客观反映,这一论断从染色体电子显微镜观察得到了证实。 Golomb等(1974)在光学显微镜和电子显微镜下观察人淋巴细胞B组第5号染色体。在染色单体结构很典型,经过荧光染料和Giemsa染色后,长臂显五条深带,短臂显两条深带,和5号染色体典型带型完全相同,在电子显微镜下,长臂有五个染色粒,短臂     

C基因截短的HBV复制与包装

目的 探讨C基因截短型HBV变异体的复制与包装。方法 采用分子克隆、人工定点突变等技术构建C基因截短型HBV变异体质粒，用脂质体法转染HepG2细胞，提取细胞内及培养上清液中DNA分别进行Southem杂交，PCR及实时定量荧光PCR分析。结果 经DNA测序及酶切鉴定证实C基因截短型HBV质粒载体构建成功；C基因截短型HBV为复制缺损型，与辅助质粒共转染HepG2细胞，可在细胞内及培养上清液中检测到HBV各种DNA构型；DNA定量分析提示C基因截短型HBV的包装效率较野生型HBV提高3～40倍。结论 C基因截短型HBV变异体为复制缺损型，单独转染后不能在肝细胞内包装与复制，但在缺失包装信号ε的相应辅助病毒辅助下可有效复制并包装成子代病毒颗粒分泌到胞外，且包装效率大大提高。     

应用Array-based CGH技术检测先天性心脏病染色体异常的研究

目的应用高分辨芯片比较基因组杂交技术(aCGH),对先天性心脏病(先心病)患儿进行基因组拷贝数变异(CNVs)筛查,探讨染色体拷贝数异常与先心病的关系。方法对17例先心病患者进行染色体核型分析,再运用Agi-lent 8×60K DNA芯片筛查染色体拷贝数异常情况,之后查询中国人类染色体异常核型目录数据库,并结合临床资料分析染色体拷贝数异常与先心病关系。结果 17例先心病患者染色体核型正常;aCGH检测结果表明有6例患者存在不同程度的染色体DNA拷贝数的扩增或缺失,其中4例染色体变异被认为是正常多态性;另外2例染色体区段的变异可能与先心病相关。结论 aCGH技术检测染色体核型正常的先心病患者DNA拷贝数的变化,为由DNA拷贝数异常引发先心病的临床诊断提供分子依据。     

癌基因定位的最新资料

下表列出46个癌基因的位置。其中20个己精确定位在染色体的某一条带上,在这20个癌基因中又有20%定位在特殊的亚带。这样在人类高分辨核型中仅有9%(4/45)的癌基因定位在亚带。另外,57%(26/40)癌基因定位在多带区,这些区域多数都很大,这种不确切的区段是研究的严重障碍。其它91%(42/46)的癌基因仍有可能位于亚带,这就迫切需要用癌基因探针与染色体进行原位杂交,以精确定位这些位点。     

人类基因组制图的新策略

一般说来,人类遗传学依靠家系调查制定连锁图并依靠细胞遗传学鉴别染色体结构异常。最近,由于引用了下列技术而得到了改进,比如,提供一种新的连锁标记来源的重组DNA技术,染色体高分辨显带技术和应用克隆的DNA顺序在染色体上精确定位的原位杂交。虽然有了这些进展,家系调查和细胞遗传学研究仍有许多不足之处,特别是这些研究不能解决百万碱基对(Mb)或较短的DNA片段的分辨能力。因此,对人类遗传学家来说,在现有的常规技术的分辨     

性染色体结构异常的DNA复制及失活类型 Ⅰ.X-常染色体易位,环状染色体,染色体断片,等臂染色体及假同形双着丝粒

本文用高分辨染色体分析及BrdUrd掺入法研究了结构异常的性染色体复制类型,共研究了性染色体结构异常14例,包括2例非平衡的X常染色体(XA)易位,7例X和Y染色体断片或环状染色体和5例双着丝粒等臂染色体(Xq)。应用高分辨染色体技术和BrdUrd掺入实验证明,在人类淋巴细胞培养中,细胞周     

细菌转座因子研究进展

细菌转座因子是存在于细菌染色体或质粒上的一段DNA顺序,它作为一个可以分离的,但不与其他DNA顺序进行交换的单元,能从一个位点转座到另一个位点,或从一种复制子转座到另一种复制子。生物中的第一个转座因子是McClintock1952年在研究玉米籽粒的色素变异时发现的。但在当时并没有引起人们应有的重     

恩替卡韦抑制乙型肝炎病毒复制型小鼠体内病毒的复制

目的 了解乙型肝炎病毒（HBV）复制型小鼠模型能否用于抗HBV药物的筛选。方法 采用高压注射体内转染法将HBV复制型重组质粒pHBV4.1导入雄性BALB/C小鼠,转染后24h按体重、年龄、血清HBeAg水平对小鼠进行配对,分为实验组和对照组（n=4）,2组小鼠分别连续3d（每日1次）给恩替卡韦和生理盐水灌胃。最后1次给药后24h处死小鼠。分别用Northern、Southern杂交检测小鼠肝脏HBV mRNA和HBV DNA复制中间体;ELISA检测血清中HBeAg和HBsAg。结果 重复2次实验的结果显示,实验组小鼠HBV DNA复制中间体水平明显低于对照组,而两组小鼠HBV mRNA、HBeAg和HBsAg水平无明显差异。结论 恩替卡韦抑制HBV复制型小鼠体内HBV的复制,提示该小鼠模型可以用于抗HBV药物的初步筛选。     

姊妹染色单体交换与DNA复制及修复

姊妹染色单体交换(SCE)指一条染色体中两条姊妹染色单体之间同源片段交换。这种交换是完全的、对称性的交换,用放射自显影或特异的染色方法可将其检出。己经证实,SCE对潜在的致癌剂或突变剂是一种敏感而易变的筛选试验。溴脱氧尿苷(BrdU)标记细胞的SCE率及其动力分析不仅可用于检测DNA损伤及/或修复,亦可监测各种理化制剂引起的细胞毒性作用。SCE机理仍属不清,它与DNA复制相关提示SCE是DNA复制水平的不规则所致。DNA复制期间的DNA损伤可增加SCE     

端粒酶的表达与癌症的发生风险

端粒酶一直是研究的热点 ,特别是近年来端粒酶的表达与癌症的发生风险之间的关系 ,更是不断地被人们去研究 ,去探索。但根据最近的一些相关文献报道来看 ,这种讨论该结束了。存在于真核生物染色体末端的端粒是重复的DNA单位 ,它保护染色体使之免受降解 ,融合和重组 ,是一个非常重要的结构。由于 DNA聚合酶不能在线性染色体末端发挥其复制作用 ,所以端粒随着每一次的有丝分裂周期而缩短。线性 DNA分子通过 DNA聚合酶只能由 5′→ 3′方向复制 ,而且需要一个 RNA引物去始动 DNA的合成。因此 ,RNA引物的移动导致每一次分裂都有 DNA丢…     

酵母人工染色体的构建与应用

酵母人工染色体(YAC)是1987年发展起来的DNA大片段克隆载体.插入YAC载体的外源DNA片段大小可达1Mb或更多,并能在酵母中稳定复制。目前,YAC技术已成为构建复杂基因组DNA文库,进行基因组图谱分析的有力工具。并在克隆完整的基因单位,以进行DNA功能研究和遗传病及基因治疗等研究中具有广泛的应用前景。     

从免疫遗传学看基因——Ⅳ、DNA复制与转录中的跳越现象

我们在第三篇文章中提出了空间离散基因的空间转录模型。该模型的关键是DNA聚合酶、RNA聚合酶在转录时可能借助DNA的交叉(细胞分裂间期的染色质网络)从一条DNA单链跳越到另一条DNA单链上去,或借助R环由一条DNA的某一区段跳越到另一区段上去。染色体畸变、DNA损伤的修复、一个B-细胞SIg的多种类及其互相转化、一个B-细胞SIg的多特异性及其互相转化以及免疫球蛋白肽链的顺反式结构,都表明跳越转录的可能性。     

用新技术分析人类染色体的结构和变异

目前除了用AT—特异荧光染料分析染色体外,GC—特异荧光抗菌素也是有效的方法。染色体带是由大量的含有相似AT:GC比率的DNA序列组成。在染色体带中,与平均AT:GC比的一致性差异。只能解释为这些区域中短序列DNA至少有一部分是重复的。通过各种染色技术的比较还可以得到更多的人类异染色质组成的知识。当用各     

疑似Prader-Willi综合征患儿的细胞遗传学和基因组拷贝数变异检测

目的 对1个疑似Prader-Willi综合征患儿进行基因组拷贝数变异检测,确诊其病因.方法 收集临床诊断疑似Prader-Willi综合征患儿及其父母外周血,常规G显带和高分辨染色体检查并提取患儿基因组DNA行全基因组拷贝数变异检测.结果 患儿及其父母高分辨染色体技术结果未见异常,但全基因组拷贝数检测患儿结果提示染色体15q11.2-13.1区域杂合缺失5 Mb;患儿定期做Baylay、Gesell发育量表检查提示智商为60～70分,符合Prader-Willi综合征的临床特征.结论 染色体15q11.2-13.1区域杂合缺失是该家系Prader-Willi综合征的病因.当Prader-Willi综合征患者在细胞遗传学未发现异常时,应进一步分子遗传学检查可弥补细胞遗传学方法的不足.