1种血清戊型肝炎病毒荧光定量RT-PCR快速检测方法的建立

目的建立一种从血清样本中基于荧光定量PCR的快速检测戊型肝炎病毒的方法。方法 (1)从GeneBank获得包含我国流行的3个基因型的100条戊型肝炎病毒序列。选择合适的序列设计合成荧光定量引物和Tanqman探针。(2)将引物从血清模板中PCR扩增片段在体外转录产物作为荧光定量PCR标准品,同时引入了微量核酸裂解液。(3)取10份临床戊肝阳性患者血清样品,用建立的方法检测,进一步验证该方法。结果该检测技术可以有效检测I型和IV型戊型肝炎阳性患者的血清样本,而对其他病毒传染病患者血清检测为阴性结果,证实该RT-PCR检测技术的特异度较高、可靠性较好。对10份临床血清样品的验证检测进一步证实了该方法快速、便捷、灵敏且重复性好。结论建立了一种适用于中国人群戊型肝炎病毒主要基因型检测的荧光定量RT-PCR检测技术。可满足戊型肝炎病毒临床早期快速诊断的需求。     

树状DNA杂交技术在戊型肝炎病毒检测中的应用

目的　研究树状DNA杂交 (DDH)技术在戊型肝炎病毒 (HEV)检测中的应用。方法　以逆转录巢式PCR法 (RT nPCR)检测筛选HEV阳性标本 ,逆转录产物进行DDH。研究DDH技术检测HEV病毒的敏感性和通用性。结果　 2 5份HEV阳性标本的逆转录产物DDH检测均显阳性 ,HEV 5个不同基因型和亚型逆转录产物DDH检测也呈阳性。结论　RT DDH检测HEV病毒有较好的敏感性和通用性     

无偿献血者戊型肝炎病毒现症感染情况调查

目的 对武汉地区无偿献血人群进行戊型肝炎病毒核酸筛查,调查无偿献血者戊型肝炎病毒现症感染情况,为完善血液筛查策略提供依据。方法 对2020年11～12月武汉地区经常规筛查合格的献血者血液标本进行HEV核酸检测,对筛查结果进行分析,并对检测结果呈重复反应性的献血者进行追踪随访以明确其感染状态。结果 2020年11～12月共收集17 409份献血者标本,对其中经常规筛查合格的17 322份标本进行了HEV核酸检测,检出HEV RNA反应性1例,追踪随访结果显示该献血者献血时处于HEV血清学窗口期。本地区无偿献血人群的戊型肝炎病毒现症感染率为0.058‰(1/17 322)。结论 武汉地区无偿献血人群的戊型肝炎病毒现症感染率相对较低,通过对献血者采取选择性筛查的策略,可进一步降低输血感染戊肝的潜在风险。     

北京地区急性散发性戊型肝炎病毒基因型及亚型分布

源性分别为77.0%～80.5%,78.6%～81.2%,76.7%～81.0%,83.3%～93.7%,41例均属于基因Ⅳ型.进化树分析提示41例可能属于3个基因亚型,6例为Ⅳa亚型,34例属Ⅳb亚型,1例(ya30)属于Ⅳ型,但单独形成一个亚型分支,可能为一个新的亚型.结论 北京地区的急性散发性戊型肝炎中HEV属于Ⅳ型.     

应用蛋白芯片技术筛选戊型肝炎病毒优势表位抗原

目的筛选戊型肝炎病毒优势表位抗原以便研发新型戊型肝炎诊断试剂。方法通过计算机辅助软件分析,利用改构的高效表达载体表达了HEV1型与HEV4型ORF2和OBF3的17种表位抗原,利用蛋白芯片技术平台筛选优势表位抗原。结果在所获得的17种表位抗原中筛选到4种可以作为研发新型戊型肝炎诊断试剂候选抗原的优势表位抗原。结论利用蛋白芯片技术快速准确地筛选到4种可用于研发新型戊型肝炎诊断试剂的候选优势表位抗原。     

戊型肝炎病毒研究进展

戊型肝炎病毒(HEV)属嵌状病毒科,人HEV是HEV样病毒属,为无外膜的正链RNA病毒。病毒颗粒存在于HEV感染者的粪便和胆汁中。哺乳动物HEV分为4种基因型,但只有1种血清型。HEV检测常采用酶联免疫吸附试验检测HEV抗体(包括IgM和IgG抗体)和HEV抗原,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HEV-RNA。采用先进的RT-PCR可在猪、鹿、鸡等动物体内检测到HEV-RNA。本文综述了HEV的生物学和分子生物学特性、检测方法、感染人和动物的情况及其疫苗研制情况。     

人戊型肝炎病毒IgG、IgM及IgA抗体ELISA检测方法的建立与初步应用

目的 建立用于检测戊型肝炎病毒(HEV)IgG、IgM及IgA抗体的间接ELISA方法.方法 用重组HEV杆状病毒感染Tn-5细胞表达HEV病毒样颗粒(VLP),用作包被抗原,建立间接ELISA检测方法,进行方法学评估,分析云南省西双版纳地区献血者HEV抗体流行率.结果 收集纯化的VLP能具有HEV抗原性.西双版纳州献...     

戊型肝炎病毒不同生物标志物的关联和基因分型

目的 分析戊型肝炎病毒不同生物标志物的相关性及其基因型和流行病学特点.方法 收集2007～2009年安庆市立医院临床检测为急性散发性肝炎患者的系列血清,采用酶联免疫(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂检测HEV-IgG抗体、HEV-IgM抗体,采用巢氏逆转录聚合酶链式反...     

献血者中戊型肝炎病毒血症研究

目的　了解湖州地区献血者戊型肝炎病毒感染情况。方法　采用ELISA法检测 30 4 7名无偿献血者血清抗 HEVIgM和IgG抗体 ,巢式RT PCR检测抗 HEVIgM阳性血清中HEVRNA。 结果　 30 4 7名无偿献血者中抗 HEVIgG的检出率为 4 1.7% ,抗 HEVIgM检出率为 1.5 %。 4 6份抗 HEVIgM阳性中发现 6份HEVRNA阳性。献血者中病毒血症阳性率为 0 .2 %。 6名HEV病毒血症者中 4名为HEV基因Ⅰ型 ,另 2例为HEV基因Ⅳ型。结论　在献血者中HEV病毒血症并不罕见 ,有必要对输血后戊肝的潜在危险进行评估。     

戊型肝炎病毒感染检测的资料分析

戊型肝炎是目前能明确诊断的六型病毒性肝炎之一,是危害人类健康的急性传染病,多在发展中国家引起流行或非流行急性肝炎[1],由戊型肝炎病毒（HEV）引起,其基因组是HEVRNA,主要通过粪一口途径传播[2],多为自限性急性感染,其抗-HEVIgM是戊型肝炎病毒的特异性抗体,出现早,消失也快,目前抗-HEVIgM是戊型肝炎的早期诊断依据。 1 材料与方法 1.1 研究对象:本院门诊及住院疑似肝炎患者,653例,年龄3个月至75岁,男女均有。 1.2 检测方法:采用上海实业科华生物技术有限公司的抗-HEVIgM EIA试剂盒,按说明书操作,并     

乙型肝炎病毒血清DNA定量检测的临床意义

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染者乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 (HBV DNA)定量检测的临床意义 ,以及与乙型肝炎血清学e系统 (HBe)标志、丙氨酸转氨酶 (ALT)和天冬氨酸转氨酶 (AST)水平的相关性。方法　采用荧光标记探针定量聚合酶链反应 (PCR)技术、酶联免疫吸附测定法及速率法 ,对 14 0例乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒血清DNA含量、血清学标志、ALT和AST进行检测 ;同时动态检测了 2 0例乙肝患者 2 4周拉米夫定治疗期间的血清HBe标记系统和HBV DNA含量变化。结果　e抗原 (HBeAg)阳性组的HBV DNA含量 (M =6 .4 8)显著高于e抗体 (HBeAb)阳性组的HBV DNA含量 (M =4 .2 8) ,差异有统计学意义 (H =2 8.4 8,P <0 .0 0 1) ;不同临床类型乙肝患者的HBV DNA含量检测结果之间的比较 ,差异无统计学意义 (H =2 .181,P >0 .0 5 ) ;在拉米夫定治疗期间 ,血清HBV DNA含量的下降和转阴明显先于血清学标志系统的转换。结论　HBeAg是反映HBV DNA复制的重要指标 ,HBeAg阳性表示乙型肝炎病毒复制活跃 ,但在抗病毒治疗期间 ,血清学标志指标反映HBV复制状态存在局限性 ,HBV DNA定量检测是反映HBV复制和判断药物疗效的最直接、可靠的指标 ;乙型肝炎患者病程的变化、ALT和AST水平与HBV复制是否活跃没有直接相关关系     

不同乳汁成分乙型肝炎病毒DNA定量检测的结果分析

目的分析不同乳汁成分中乙型肝炎病毒(HBV)-DNA定量检测的结果,为乳汁标本HBV-DNA检测提供参考和依据。方法对152例乙肝产妇乳汁分别选用混匀乳汁、乳酪、乳清和沉淀进行HBV-DNA定量检测。结果选用不同的检测对象时,HBV-DNA检测的阳性率差异无统计学意义(χ2=0.437,P=0.933);HBV-DNA载量间差异有统计学意义(F=2.835,P=0.043),沉淀中HBV-DNA载量高于乳清中HBV-DNA载量;两两比较后,混匀乳汁、乳酪、乳清间检测结果差异无统计学意义(P0.05),混匀乳汁、乳酪、沉淀间检测结果差异无统计学意义(P0.05)。结论对乳汁标本进行HBV-DNA定量检测时,混匀乳汁可能是更为适合的检测对象。     

标本处理方法对荧光定量PCR检测HBV DNA的影响

目的为提高标本检出率,比较煮沸法、Chelex 100树脂法和核酸纯化法等3种不同标本处理方法对荧光定量聚合酶链反应（FQPcR）技术检测乙型肝炎（简称乙肝）病毒（HBV）DNA的影响。方法收集36例乙肝确诊患者和14例非乙肝患者的血标本,分别经煮沸法、Chelex 100树脂法和核酸纯化法平行处理后,采用FQ-PCR进行检测。结果经3种方法处理的标本HBVDNA的检出率分别为52．78％、55．56％和100．00％。核酸纯化法的检出率明显高于其他2种方法（P〈0．01）。结论标本处理质量对进行HBVDNAFQ-PCR检测十分重要,煮沸法和Chelex 100树脂法不适用于临床标本检测,用核酸纯化法处理标本可保证FQ-PCR检测结果的准确性。     

Risk factors for hepatitis E virus infection and disease

Hepatitis E, caused by hepatitis E virus, is a disease of global significance, causing 20 million infections each year. Genotypes 1 and 2 have vastly different epidemiological patterns from genotypes 3 and 4. In genotype 1 and 2 endemic areas, most infections and illness occur in persons 15–30 years of age, with pregnant women being the most likely to experience severe disease. In genotype 3 and 4 endemic areas, most infections and illness occur in those of age 40–60 years, with males representing a large portion of those with severe disease. However, the lack of an easily accessible serologic assay in many countries continues to be a barrier to the diagnosis and recognition of hepatitis E virus.     

戊型肝炎病毒感染与胰腺癌发生的关系

目的 探讨戊型肝炎病毒(HEV)感染与胰腺癌发生的关系.方法 以住院患者为研究对象,包括2 900例病毒感染者(9例甲型肝炎、2 129例乙型肝炎、81例丙型肝炎、146例戊型肝炎和535例EB病毒感染)和5 569例对照,检测患者血清甲、乙、丙、戊型肝炎病毒标志物和EB病毒EB-VCA-IgA,收集相关临床资料包括CD4/CD8比值、总胆红素、糖类抗原(CA19-9)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)和脂肪酶等,比较HEV和其他病毒感染与胰腺癌的关系.结果 在HAV、HBV、HCV、HEV、EBV感染组中胰腺癌病例分别为0、5、1、12、1例,与对照组相比,HEV感染组罹患胰腺癌的风险增加约48倍(OR 49.16,CI 1.31～41.23),而其他病毒感染组和对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05),而且HEV感染的胰腺癌患者血清CA19-9、总胆红素和γ-GT均增高,而CD4/CD8降低.结论 戊型肝炎病毒感染可能与胰腺癌的发生有一定的关系,HAV、HBV、HCV、EBV病毒感染与胰腺癌发生无关.     

HIV检测基因芯片的研制和应用评价

目的研制用于HIV检测的基因芯片,并评价其在临床诊断和出人境检疫中的应用价值。方法针对HIV-1gags基因相对保守区域,设计检测探针,并设计内标和对照探针,制备HIV检测微阵列基因芯片;设计引物,以1：20引物比例不对称扩增HIV基因靶标,Cy3荧光标记扩增产物,作为杂交模板。Cy3荧光标记PCR扩增产物与微阵列探针杂交反应,结果经荧光扫描,并用分型软件分析判断阳性探针和样本HIV阴阳性。采用信号放大、梯度临界值技术,增加了检测的灵敏度和特异性。采用70例临床样本实样检测与DNA测序作对照,评价试剂盒的性能和应用价值。结果70例样本,采用本试剂盒与DNAN序并行检测,两者符合率为98．57％。结论本HIV检测基因芯片试剂盒具有高通量、操作简便、低成本、准确度好等优点,应用研究表明,在临床HIV诊断检测和出入境检测方面具有很高的应用价值。     

Quantitation of hepatitis B virus DNA in serum by ammonium sulfate precipitation and molecular hybridization

We developed a method to quantitate hepatitis B virus (HBV) DNA in serum by ammonium sulfate fractionation and DNA hybridization. Serum samples were precipitated with 45% saturated ammonium sulfate, resuspended in buffer, and spotted on a nylon membrane. Following denaturation in alkali, HBV DNA sequences on the membrane were detected by hybridization with a ³²P-labeled DNA probe of the entire HBV genome. Bound radioactivity was measured with liquid scintillation counting. Ammonium sulfate fractionation of positive samples increased assay sensitivity by 10–30-fold compared to no treatment. Sensitivity for detection of cloned HBV DNA added to negative serum was 0.2 pg. Recovery of cloned HBV DNA added to negative serum before fractionation was equivalent to direct spotting of DNA onto the membrane in the absence of serum. This method enhanced HBV DNA recovery from serum into small volumes, thereby expanding the potential analytic range of spot hybridization assays. © 1994 Wiley-Liss, Inc.     

Molecular detection and sequence analysis of hepatitis E virus in patients with viral hepatitis from North India

Viral hepatitis is a major cause of mortality and morbidity in developing countries. Hepatitis E virus (HEV) is responsible for both sporadic and epidemic outbreaks of viral hepatitis in India. Here a total of 843 samples were collected: 685 from patients with acute viral hepatitis (AVH), 70 from patients with fulminant hepatic failure (FHF), 53 from patients with chronic liver disease (CLD), 11 from patients with antituberculosis therapy (ATT)–induced jaundice, and 24 from pregnant women. When tested for anti-HEV IgM, 58.3% of the pregnant women, 41.4% of the patients with FHF, 38.6% of the patients with AVH, 9.4% of the patients with CLD, and 18.2% of the patients with ATT-induced jaundice tested positive. We found that 34% and 16% of the acute hepatitis patients and fulminant hepatitis patients, respectively, showed no reactivity to the existing viral hepatitis markers and were thus grouped as non A to E. Among the HEV IgM–positive cases, males outnumbered females (62.8% versus 37.1%). HEV RNA was found in 35% of fulminant and 9.4% of acute hepatitis patients. From phylogenetic analysis, we observed that all the isolates were clustered within genotype 1. Critical analysis placed the acute isolates along with strains under subtype Ia, while the fulminant isolates clustered along with the FHF strain (X98292) under subtype Ic. The segregation of HEV isolates from AVH and FHF patients into different subtypes raises interesting questions on the molecular basis of HEV disease severity.     

乙型肝炎病毒外膜大蛋白临床意义及其与病毒复制的相关性

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）外膜大蛋白（LHBs）与 HBV 复制的相关性。方法随机收集深圳市第四人民医院2013年8～11月乙型肝炎患者血清标本170例,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测 LHBs ,电化学发光法检测 HBV 表面抗原（HBsAg）及 HBV e 抗原（HBeAg）,实时荧光定量聚合酶链反应方法检测 HBV‐DNA 。按 HBeAg 结果分为 HBeAg 阳性组（58例）和 HBeAg 阴性组（112例）。比较 LHBs 和 HBV‐DNA 的阳性率,同时分析 LHBs 水平与 HBsAg 浓度及 HBV‐DNA 拷贝数的相关性。结果 HBeAg 阳性患者血清中,LHBs 阳性率与 HBV‐DNA 阳性率差异无统计学意义（χ2＝0．342,P ＞0．05）;HBeAg 阴性患者血清中,LHBs 阳性率与 HBV‐DNA 阳性率有统计学意义（χ2＝5．349,P＜0．05）。 LHBs 水平与 HBV‐DNA 拷贝数（r＝0．979,P＜0．05）、HBsAg 浓度（r＝0．923,P＜0．05）呈正相关。结论 LHBs 是从蛋白水平反映乙型肝炎患者体内病毒复制情况的可靠指标,尤其是对 HBeAg 阴性患者抗病毒治疗和预后判断有重要意义。     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测的临床应用价值

目的 探讨乙型肝炎病毒前S1抗原与病毒复制的相关性.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量(PCR)检测100例乙型肝炎患者血清的前S1抗原、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA).结果 100例乙型肝炎患者标本中,前S1抗原78例阳性,阳性率为78%;HBV-DNA 86例阳性,阳性率为86%;HBeAg 56例阳性,阳性率为56%,在56例HBeAg阳性中,前S1抗原阳性例数为44例,阳性率为78%,HBV-DNA的阳性例数为49例,阳性率为88%,前S1抗原与HBV-DNA的差异性用χ2检验差异无统计学意义(P>0.05).在86例HBV-DNA阳性中,前S1抗原阳性例数为74例,阳性率为86%,HBeAg阳性例数为50例,阳性率为58%,前S1抗原与HBeAg的检测结果用χ2检验差异有统计学意义(P<0.05).结论 乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV-DNA高度相关,是乙肝病毒在体内复制的可靠指标.