大鼠海马神经元核受体-盐皮质激素受体于穹窿切断同时摘除肾上腺后表达的变化

目的:探讨海马神经元核受体-盐皮质激素受体(MR)参与下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴调节的机制.方法:建立大鼠穹窿切断模型,采用ELISA方法检测穹窿切断0、4、7、10d后血中糖皮质激素的浓度,建立大鼠穹窿切断同时摘除肾上腺7d的模型,采用免疫组织化学、免疫印迹方法检测海马MR表达的变化.结果:穹窿切断7d后血中糖皮质激素的浓度升高,穹窿切断同时摘除肾上腺7d后,海马神经元MR表达升高.结论:海马核受体MR的表达变化可能与糖皮质激素的浓度有关,且为负相关.     

大鼠海马神经元核受体-盐皮质激素受体于穹窿切断后表达的变化

目的:建立大鼠穹窿切断模型,研究海马神经元核受体-盐皮质激素受体(MR)表达的变化.方法:建立大鼠穹窿切断模型,于穹窿切断术后0、4、7、10 d取材;同时取材假手术组(非穹窿切断术)、正常组作为对照,应用免疫组织化学、免疫印迹方法分别进行各组海马神经元MR表达变化的观察及定量检测.结果:穹窿切断7 d后,免疫组织化学和免疫印迹结果显爪海马神经元MR表达下调,10 d下调更为显著.结论:穹窿切断后,海马MR表达下调,提示海马对下丘脑-垂体-肾上腺轴的抑制作用可能在穹窿切断后减弱.     

创伤后应激障碍大鼠蓝斑核受体-糖皮质激素受体表达的变化

目的 探讨创伤后应激障碍(PTSD)大鼠蓝斑(LC)神经元核受体-糖皮质激素受体(GR)表达的变化。 方法 成年健康雄性Wistar大鼠60只,使用无连续单一应激(SPS)方法建立PTSD大鼠模型, 分别取SPS处理后24h、4d、7d、14d和28d大鼠蓝斑组织,同时取正常蓝斑组织(非SPS刺激) 作为对照, 应用尼氏染色观察蓝斑形态,采用免疫组织化学、免疫印迹和RT-PCR方法分别观察及检测各组蓝斑神经元GR表达的变化,并进行图像分析和统计学处理。 结果 GR分布在蓝斑神经元核上,GR的表达24h、4d、7d逐渐上调,14d、28d恢复性下调,但仍然高于对照组(P<0.05)。 结论 SPS处理后,蓝斑GR出现短暂上调,随后下调,提示PTSD大鼠蓝斑神经元核受体GR表达的变化可能直接参与PTSD持续精神症状的发生发展过程。     

大鼠下丘脑内糖皮质激素受体在创伤后应激障碍时的表达变化

目的:研究大鼠下丘脑神经元内糖皮质激素受体(GR)在创伤后应激障碍(FTSD)过程中的表达变化.方法:采用国际认定的连续单一应激(SPS)方法刺激大鼠,制作PTSD大鼠模型,SPS处理后分别取24 h、7 d、14 d的大鼠下丘脑;同时以非SPS刺激的下丘脑作为正常对照,应用免疫组织化学、免疫印迹方法分别进行各组下丘脑神经元GR表达变化的观察及定量检测.结果:经SPS处理后,下丘脑神经元GR表达于24 h时降低,7 d时回升且高于正常,14 d时呈现恢复正常趋势.结论:下丘脑神经元内GR在PTSD的表达变化可能是下丘脑与海马反馈调节过程中重要因素之一,为进一步揭示PTSD发病机制奠定理论基础.     

连续单一应激后大鼠海马5-HT_(1A)受体活性与糖皮质激素受体表达的关系

目的:观察连续单一应激(SPS)大鼠海马糖皮质激素受体(GR)变化与5-HT1A受体的关系,探讨创伤后应激障碍的发病机制。方法:选用雄性成年Wistar大鼠45只,将大鼠随机分为对照组、模型组和阻断组,每组15只。模型组和阻断组给予SPS应激,其中阻断组大鼠在接受SPS前用55-HT1A受体阻断剂WAY100635预处理。采用免疫组织化学和免疫印迹技术测定海马GR水平,采用逆转录-聚合酶链式反应检测GRmRNA表达变化。结果:(1)免疫组织化学结果显示,模型组大鼠海马GR表达高于对照组(P0.01),阻断组则低于模型组(P0.05);(2)WesternBlot结果显示,模型组大鼠海马GR相对表达高于对照组(P0.01),阻断组低于模型组(P0.01);(3)RT-PCR结果表明,与对照组比较,模型组大鼠海马GRmRNA表达增强(P0.01);与模型组比较,阻断组表达量降低(P0.05)。结论:SPS海马GR表达变化与5-HT1A受体有关。     

创伤后应激障碍大鼠前额叶内侧皮质糖皮质激素受体表达增高

目的 观察创伤后应激障碍（PTSD）大鼠前额叶内侧皮质（mPFC）神经元糖皮质激素受体（GR）表达的变化。 方法 采用单一连续应激(SPS)方法建立PTSD大鼠模型,取成年健康雄性Wistar大鼠90只,随机分为PTSD模型1d、7d、14d、28d和正常对照组。采用免疫组织化学、免疫印迹和RT-PCR方法分别进行各组mPFC神经元GR表达变化的观察及检测,进行图像分析和统计学处理。结果PTSD大鼠mPFC神经元GR的表达高于对照组,SPS后14d最高,SPS后28d恢复性下调,但仍然高于对照组(P<0.05)。结论PTSD模型大鼠经SPS处理后,mPFC区域出现GR表达的增高。     

切割穹窿海马伞后海马齿状回内Lhx8的表达变化及其对RGCs向胆碱能神经元分化的影响

目的:明确Lhx8在SD大鼠切割穹窿海马伞后海马齿状回颗粒下层和门区中的表达变化。方法:切割SD大鼠穹窿海马伞,成功制备海马去神经支配动物模型后,通过Western Blot的方法检测切割后第1、3、7、14、21、28 d海马中Lhx8蛋白的表达变化;通过免疫组织化学方法检测切割后第7天海马齿状回颗粒下层和门区中Lhx8阳性细胞的表达定位,并通过免疫荧光化学方法检测Lhx8/ChAT双标阳性细胞的共定位情况;切割SD大鼠穹窿海马伞并制备海马提取液,将其加入至细胞培养液中,模拟体内海马神经再生微环境,检测培养的海马放射状胶质细胞(radial slia cells,RGCs)向胆碱能神经元分化的情况。结果:切割穹窿海马伞后第7 d,Lhx8蛋白表达量较其他各时相点明显增高;海马齿状回颗粒下层和门区中Lhx8阳性细胞数目和光密度也明显高于正常侧,Lhx8/ChAT双标阳性细胞数目也较正常侧增多;体外细胞培养,切割穹窿海马伞侧海马提取液也较正常侧海马提取液更能促进海马放射状胶质细胞向胆碱能神经元的分化。结论:切割穹窿海马伞后,Lhx8表达明显上调,与海马齿状回的胆碱能神经再生有关。     

雌雄大鼠海马神经元内GR和MR的表达变化

目的研究创伤后应激障碍(PTSD)雌雄性大鼠行为学改变的差异及海马神经元核受体:盐皮质激素受体(MR)和糖皮质激素受体(GR)表达的变化。方法采用国际认定的单一延长刺激(SPS)方法刺激大鼠建立PTSD大鼠模型,应用水迷宫、旷场实验、高架十字实验三种行为学方法检测SPS刺激后雌雄大鼠的空间记忆能力和焦虑水平,应用免疫荧光、Western blot等方法分别检测海马神经元GR和MR蛋白表达水平。结果 SPS组大鼠与对照组相比焦虑水平升高及空间记忆受损;而且雌性大鼠与雄性大鼠相比,焦虑水平升高及空间记忆受损更为明显。SPS组雌雄大鼠海马神经元GR、MR表达都低于对照组,而且雌性大鼠GR和MR相较于雄性大鼠降低更为显著。结论 SPS刺激引起雌雄大鼠之间的行为学差异,可能与雌雄大鼠海马神经元内GR和MR的表达变化有关。     

脂多糖处理的孕期SD大鼠所产仔鼠下海马区皮质激素受体的变化及机制北大核心CSCD

目的观察脂多糖(LPS)介导的宫内感染对仔鼠海马盐皮质激素受体(MR)与糖皮质激素受体(GR)表达的影响。方法 10周龄雌雄SD大鼠1∶1配对,将孕鼠随机分为对照组(10只)和LPS处理组(20只),孕第10天时,在LPS处理组大鼠腹腔内注射LPS(66μg/kg),对照组注射相同体积生理盐水。取48日龄仔鼠,采用旷场实验检测仔鼠对新环境的探索能力,采用HE染色观察仔鼠海马组织的病变情况,免疫荧光组织化学染色法检测仔鼠海马组织MR和GR的表达,地塞米松抑制实验研究孕期感染对仔鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴调节功能的影响。结果与对照组相比,LPS处理组仔鼠对新环境的探索能力减低,海马组织CA1区、齿状回(DG)区神经元排列杂乱,多处可见细胞核固缩、碎裂、溶解,CA1区MR和GR的表达降低、DG区GR表达增加,CA3区MR、GR及海马DG区MR表达无明显变化;仔鼠注射生理盐水和注射地塞米松后的血清皮质酮(COR)水平无明显变化,与应用生理盐水相比,应用地塞米松后LPS处理组和对照组子代大鼠的COR水平降低。结论 LPS处理的孕鼠可引起子代大鼠对新环境的探索能力减退,与子代大鼠海马各区MR、GR表达量改变及伴随的MR/GR比率降低有关。     

切割穹窿海马伞大鼠海马IGF2及其受体IGF2R蛋白的表达变化

目的:观察穹窿海马伞切割后不同时间点海马胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor,IGF2)及其受体IGF2R蛋白的表达变化及定位。方法:应用ELISA、Western blot和免疫荧光组织化学方法检测海马内IGF2及其受体IGF2R蛋白,以及齿状回门区和颗粒下层中IGF2/Hoechst和IGF2R/Hoechst阳性细胞的数量及形态学变化。结果:(1)ELASA结果显示:IGF2在切割后7 d表达开始上升,14 d达最高水平,随后缓慢下降,28 d时降至正常水平。(2)Western blot结果显示:IGF2R也存在一个相应的表达升高与消退的过程,说明两者具有明显的相关性。(3)免疫荧光染色结果显示:正常组海马齿状回门区和颗粒下层IGF2及其受体IGF2R阳性细胞的数量较少,切割穹窿海马伞后第3 d数量稍有增多,但差异不明显;7 d时阳性细胞明显增多;14 d时阳性细胞继续增多,并达到最高水平;21 d后阳性细胞的数量开始下降,28 d时接近正常组水平。结论:切割穹窿海马伞后IGF2及其受体IGF2R的高表达可能与海马神经再生中抑制神经干细胞和放射状胶质细胞增殖,从而启动其向神经元等分化有关。     

PEBP在切割穹窿海马伞大鼠海马中的表达变化

切割大鼠右侧穹窿海马伞,应用Western blot、免疫组化技术,观察切割后海马中磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidyle-thanolamine binding protein,PEBP)的表达的时空变化。Western blot结果显示:PEBP在切割后3 d表达开始上升,7 d达最高水平,随后缓慢下降,28 d时降至正常。免疫组化结果显示:术后各时间点切割侧海马CA1～CA3区的锥体细胞层和齿状回颗粒层的PEBP阳性细胞数与正常侧相比无显著性差异(P>0.05),但切割侧PEBP阳性细胞染色加深,7 d时最为明显,两侧比较灰度值有显著性差异(P<0.01)。切割侧齿状回门区和颗粒下层中可见较多深染的PEBP阳性细胞,其细胞数和灰度值与正常侧相比均有显著性差异(P<0.05)。结合本课题组以往的工作,本结果提示切割穹窿海马伞后PEBP的高表达可能与海马神经再生有关。     

切割穹窿海马伞大鼠海马内Lhx8 mRNA表达的变化

目的:探讨切割穹窿海马伞大鼠切割侧与正常侧海马内Lhx8 mRNA表达的差异。方法:切割SD大鼠右侧穹窿海马伞。切割后7d制备海马冰冻切片,用体外转录法制备地高辛标记的Lhx8 RNA探针进行原位杂交,分析切割侧和正常侧海马锥体细胞层和齿状回颗粒层中及齿状回门区和颗粒下层中的Lhx8 mRNA阳性细胞的数量和平均光密度值。结果:切割侧和正常侧海马锥体细胞层和齿状回颗粒层Lhx8 mRNA阳性细胞数量无明显差异,但切割侧平均光密度值较正常侧明显增加;在齿状回的门区和颗粒下层,切割侧Lhx8 mRNA阳性细胞数和平均光密度值均较正常侧升高。结论:切割穹窿海马伞后海马中Lhx8 mRNA表达上调,可能与其中的神经干细胞向胆碱能神经元分化的神经再生机制有关。     

神经生长因子对穹窿海马伞切割后海马自体神经干细胞增殖和向神经元分化的影响

目的 探讨切割穹窿海马伞及脑室给予神经生长因子(NGF)后,对大鼠海马自体神经干细胞增殖和分化为神经元的影响.方法 12只SD大鼠,随机分成给药组和对照组,每组6只,切割右侧穹窿海马伞,两组切割后即时及第2d、4d向侧脑室分别注射NGF和人工脑脊液, 并在术后第3～7d每日腹腔注射2次BrdU.于术后28d灌注取脑、冷冻切片,行BrdU/NF-200免疫荧光双标检测.结果 海马齿状回内BrdU阳性细胞数,给药组和对照组切割侧明显多于正常侧,给药组切割侧和正常侧分别多于对照组切割侧和正常侧;海马齿状回内的BrdU/NF-200双标神经元数,给药组切割侧最多,给药组正常侧和对照组切割侧较少,而对照组正常侧则无.结论 切割穹窿海马伞后,可致大鼠海马齿状回自体神经干细胞增殖加快并向神经元分化,脑室施加 NGF可促进其增殖和分化.     

穹隆海马伞切割后大鼠海马内RUNX1T1 mRNA和蛋白的表达变化

目的 观察穹隆海马伞切割后不同时间点海马内RUNX1T1 mRNA和蛋白的表达变化及定位。方法 行穹隆海马伞切割术,制备模型大鼠。实验分为正常组、切割3d组、切割7d组、切割14d组、切割21d组、切割28d组。1.提取海马组织总mRNA,用Real-time PCR 检测大鼠海马组织中RUNX1T1mRNA 的表达;2.提取海马组织总蛋白,用Western blotting 检测海马内RUNX1T1蛋白的表达;3.行脑冷冻切片,行RUNX1T1免疫荧光检测和Hoechst标记,观察海马齿状回中RUNX1T1/Hoechst双标阳性细胞。 结果 Real-time PCR检测显示,切割3d组海马组织中RUNX1T1 mRNA的表达明显上调,其余各组差异不明显;Western blotting检测结果显示,正常组海马中有微量RUNX1T1蛋白表达,而切割3d组海马组织中RUNX1T1蛋白表达量明显上升,并达到高峰,7d时仍有较多的表达,此后,14d、21d、28d组中RUNX1T1蛋白表达很快又恢复到正常水平;免疫荧光检测结果表明,正常组海马齿状回中有少量的RUNX1T1/Hoechst阳性细胞,切割3d组海马齿状回中RUNX1T1/Hoechst阳性细胞数量最多,切割7d组逐渐减少,切割14d组、21d组和28d组与正常组差别不明显。结论 穹隆海马伞切割后海马内RUNX1T1 mRNA和蛋白表达在早期呈短暂性上调,并定位于海马齿状回颗粒下层,推测可能与海马神经再生过程中神经干细胞向神经元分化有关。     

穹窿海马伞切割侧海马提取液对神经干细胞分化为神经元的促进作用

目的 探讨穹窿海马伞切割侧海马提取液对神经干细胞分化为神经元和AchE阳性神经元的影响。方法 切割SD大鼠右侧穹窿海马伞，14d后取两侧海马制成提取液；将神经干细胞接种于3块24孔培养板中，每板分成切割组、正常组和对照组各8孔，前2组分别加入切割侧和正常侧海马提取液。第1、2块分别于第7d和14d时行MAP-2免疫荧光检测；第3块于10d时行AChE组织化学染色。计数MAP-2和AChE阳性神经元数，观察胞体大小和突起长度。结果 切割组第7d时MAP-2阳性神经元较多，胞体大、突起长，14d时细胞进一步迁移、成熟；正常组第7d时仅见少量突起短的MAP-2阳性神经元，14d时细胞稍增多，突起稍增长：对照组第7d时未见MAP-2阳性神经元，14d时仅有少量胞体小、突起短的MAP-2阳性神经元。第10d切割组AChE阳性神经元较多，突起多而长，正常组仅见少量无突起的AChE阳性神经元，对照组未见AChE阳性神经元。结论 穹窿海马伞切割侧海马提取液可明显促进神经干细胞分化为神经元和AChE阳性神经元。     

穹窿海马伞切割后大鼠海马伞内神经干细胞的观察研究

目的观察穹窿海马伞切割侧和非切割侧大鼠海马伞内神经干细胞的表达情况。方法切割SD大鼠右侧穹窿海马伞,于术后2d经腹腔注射BrdU,连续5d,术后7d取脑冰冻切片,进行BrdU/Nestin免疫荧光双标检测。结果穹窿海马伞切割侧海马伞内的BrdU阳性细胞数和Nestin阳性细胞数均明显多于非切割侧,且出现较多的BrdU/Nestin双标的阳性细胞,而非切割侧未见BrdU/Nestin双标的阳性细胞。结论穹窿海马伞切割后,切割侧海马伞内出现较多增殖的神经干细胞,我们推测海马伞的损伤,导致海马伞内局部微环境发生变化,产生某些信号物质,刺激脑内其他部位的神经干细胞增殖并迁移到海马伞内。     

神经生长因子对老年鼠穹窿海马伞损伤后齿状回胆碱能突触重构的作用

损伤老年鼠左侧穹窿海马伞，造成隔-海马胆碱能系统损害模型。用免疫电镜和形态计量学分析NGF对齿状回分子层受体（NGFr）阳性突触和胆碱乙酰转移酶（ChAT）阳性轴突终未的影响。结果显示：损伤一个月后，损伤侧齿状回分子层NGFr阳性突触前终末、实触后致密物和ChAT阳性轴突终末面积和周长都有不同程度的缩小；脑室注射NGF，损伤侧齿状回分子层NGFr阳性突触和ChAT阳性实触终末都有一定的恢复．提示NGF对齿状回分子层受损的NGFr阳性突触和ChAT阳性轴突终未的重构具有促进作用。     

Delayed NGF infusion fails to reverse axotomy-induced degeneration of basal forebrain cholinergic neurons in adult p75(LNTR)-deficient mice

The p75 low-affinity neurotrophin receptor (p75^LNTR) appears to have various functions that include enhancing nerve growth factor (NGF)-mediated survival by increasing TrkA (high-affinity NGF receptor) efficiency, and mediating apoptosis by acting as a ligand-regulated pro-apoptotic receptor. Here, we investigated the role of p75^LNTR for adult cholinergic basal forebrain neurons by comparing neuronal responses to injury in control and p75^LNTR-deficient mice. In both types of mice, 70% of the cholinergic neurons in the ipsilateral medial septum had lost their markers choline acetyltransferase and tyrosine kinase A by 28 days following unilateral transection of the dorsal septohippocampal pathway (fimbria fornix). A 7-day delayed infusion of NGF that started 28 days after the injury resulted in reversal of choline acetyltransferase expression and cell atrophy in control, but not in p75^LNTR-deficient, mice. This lack of response to delayed NGF treatment in p75^LNTR-deficient mice was most likely not due to cell death, as all of the septohippocampal neurons, labeled with Fluorogold before the lesion, were present at 28 days post-lesion, similar to control mice. p75^LNTR-deficient cholinergic neurons can respond to NGF as they were protected by NGF infusions that started immediately after the injury. These observations, the fact that lesioned p75^LNTR-deficient neurons atrophy faster, and that non-lesioned neurons hypertrophy in response to NGF in control but not in p75^LNTR-deficient mice, suggest that p75^LNTR is needed for tyrosine kinase A and NGF signaling efficiency.

In conclusion, during adulthood p75^LNTR appears to play a beneficial role in the response of cholinergic neurons to injury, consistent with the proposed role of p75^LNTR in the enhancement of TrkA signaling and the transport of neurotrophins by these neurons.     

大鼠海马内胆碱能纤维损伤后的侧枝抽芽

目的观察穹窿海马伞损伤鼠海马胆碱能纤维损伤后的再生状况。方法切断SD成年大鼠穹窿海马伞,用染AChE纤维的组织化学方法结合网格测试,分析术后1、2、3、4周海马Cal区和齿状回的分子层胆碱能纤维的侧支抽芽。结果损伤1周时Cal区和齿状回的分子层胆碱能纤维明显减少,分别减少到67．50％和66．9l％;从第2周开始纤维数量逐渐恢复,至第4周Cal区分子层纤维恢复到正常的82．42％,而齿状回分子层纤维恢复到97．82％。结论成年哺乳类海马内胆碱能纤维损伤后有很强的侧支抽芽能力。