多色荧光探针的滚环扩增技术检测结核分枝杆菌耐药基因

本研究旨在构建基于核酸滚环扩增（RCA）的简便快速、超灵敏的光学生物传感技术,并将其运用于结核杆菌耐药相关基因的多重检测。本研究在2020年2月至2021年5月期间,于陆军军医大学第一附属医院检验科,针对异烟肼、利福平和链霉素耐药的高频基因突变位点katG315（AGC?ACC）、rpoB531（CAC?TAC）和rp...     

Exposure to traffic pollutants and effects on 17-β-estradiol (E2) in female workers

Objective: The aim of the study is to evaluate whether the occupational exposure to urban pollutants including endocrine disruptors (EDs) could cause alterations in plasma 17-β-estradiol (E2) levels and related diseases (adverse pregnancy outcome and mental health disorders) in female traffic police compared to a control group. Methods: After excluding the subjects with the principal confounding factors, traffic police and controls were matched by age, years of police work, age of menarche, menstrual cycle day, body mass index (BMI), drinking habit, cigarette smoking habit, habitual intake of soy or liquorice in diet and habitual consumption of Italian coffee. Thirty-seven traffic police and 31 controls (seventh day; follicular phase of the ovarian cycle); 38 traffic police and 42 controls (14th day; ovulatory phase of the ovarian cycle); and 25 traffic police and 28 controls (21st day; lutheal phase of the ovarian cycle) were included in the study and then matched for the above-mentioned variables. Results: In follicular and in lutheal phases, mean E2 levels were significantly lower in traffic police compared to controls. The distribution of E2 values in traffic police and controls was significant in follicular, ovulatory and lutheal phases. In ovulatory phase, mean E2 levels were lower but not significant in traffic police compared to controls. An increase was found concerning mental health disorders referred to in the questionnaire items in traffic police compared to controls, although the difference was not significant. Conclusions: Considering that the potential confounding effect of extraneous factors was controlled for by restricting the study population and by matching traffic police and controls on the above-mentioned variables, our results suggest that occupational exposure to urban pollutants, EDs included, might alter E2 plasma concentrations. E2 could be used in occupational set as an early biomarker of exposure to urban pollutants, valuable for the group, even before the onset of the related pathologies (adverse pregnancy outcome and mental health disorders).     

17β-雌二醇对体外人脐静脉内皮细胞ACE及ACE2表达的影响

目的 探讨17β-雌二醇(E2)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管紧张素转化酶(ACE)及血管紧张素转化酶2(ACE2)表达的影响.方法 以E2(浓度分别为10-9,10-8,10-7mol/L)刺激HUVECs 24 h;浓度为10-3mol/L E2分别刺激6、12和24 h;逆转录聚合酶链反应检测ACE、ACE2 mRNA表达量,蛋白质免疫印迹法检测ACE、ACE2蛋白表达量.结果 E2呈剂量(浓度)和时间依赖性使ACE2 mRNA及蛋白表达量增加,ACE mRNA及蛋白表达量减少.与对照组比较,E2各浓度刺激组ACE2 mRNA表达分别增加为1.41±0.03、2.52±0.04、3.12±0.07倍,ACE2蛋白表达分别增加为1.20±0.04、2.24±0.02、2.91±0.05倍:ACE mRNA表达分别减少为0.78±0.07、0.58±0.04、0.32±0.06倍,ACE蛋白表达减少为0.71±0.03、0.53±0.05、0.39±0.06倍.6、12和24 h时间刺激组,ACE2 mRNA表达分别增加为1.60±0.02、2.12±0.06、2.73±0.03倍,ACE2蛋白表达增加为1.30±0.02、2.15±0.04、2.42±0.03倍;ACE mRNA表达分别减少为0.72±0.05、0.52±0.03、0.48±0.07倍,ACE蛋白表达减少为0.68±0.05、0.59±0.01、0.48±0.02倍.结论 E2呈剂量(浓度)和时间依赖性显著上调ACE2mRNA及蛋白表达,下调ACEmRNA及蛋白表达.     

超广谱β-内酰胺酶检测的临床意义

目的研究临床分离的肺炎克雷白杆菌和大肠埃希菌的耐药性及产超广谱β-内酰胺酶的比率。方法应用双纸片协同实验筛选产超广谱β-内酰胺酶的细菌,确正实验采用头孢他啶联合克拉维酸纸片扩散法。结果肺炎克雷白杆菌、大肠埃希菌对亚胺培南的敏感度均为100.0%,其次为头孢他啶,分别为71.7%和91.1%,产超广谱β-内酰胺酶的比率分别为28.3%和8.9%。结论随着三代头孢菌素类抗生素在临床应用的增多,临床分离的革兰阴性杆菌对头孢他啶等的耐药性及产超广谱β-内酰胺酶的比率呈上升趋势;准确的检测超广谱β-内酰胺酶对临床合理应用抗生素具有指导意义。     

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞增殖及p38表达的影响

目的:探讨不同浓度的17β-雌二醇(E2)对雌激素受体(ER)阴性的JEC细胞和ER阳性的Ishikawa子宫内膜腺癌细胞系细胞的增殖及细胞内p38蛋白表达的影响。方法:选用人子宫内膜腺癌细胞系JEC和Ishikawa进行体外培养,加入含不同浓度E2培养液,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)的方法,观察子宫内膜腺癌细胞系JEC和Ishikawa细胞的增殖活性及P-p38的表达。结果:①MTT法观察细胞增殖:10-7、10-8和10-9 mol/L E2作用JEC细胞4、5天后OD值与对照组比较有差异(P<0.05),其中10-7 mol/L E2组在第5天OD值与对照组比较差异较显著(P<0.01);而不同浓度E2作用Ishikawa细胞均能促进增殖(P<0.05)。②共聚焦显微镜测定细胞内P-p38蛋白的表达:10-7 mol/L的E2作用JEC 4、5天后可使细胞内P-p38表达增加,平均荧光强度值与对照组相比有统计学意义(P<0.05);10-7 mol/L的E2作用Ishikawa 3、4天后P-p38表达增加,与不加E2对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞和Ishikawa细胞均可受到雌激素的调控,一定浓度的雌激素能促进ER阴性JEC细胞和ER阳性的Ishikawa细胞增殖,且均能使细胞内P-p38表达增加。     

小剂量17β-雌二醇对预防卵巢切除大鼠骨丢失的研究

为观察生理剂量的１７β－雌二醇（Ｅ２）对卵巢切除大鼠骨代谢、骨密度和骨力学特性的影响。将大鼠分为假手术组（Ａ）、去卵巢组（Ｂ）和去卵巢并给雌二醇组（Ｃ）。给Ｅ２９周后同时处死各组大鼠。结果Ｂ组大鼠血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）和骨钙素（ＯＣ）水平明显上升,右股骨近端１／３及第三腰椎骨密度（ＢＭＤ）明显低于对照组,雌二醇可逆转上述情况。Ｂ组骨力学参数明显低于对照组,而Ｃ组力学参数未见好转。结论认为生理剂量Ｅ２可抑制骨吸收和骨形成并增强骨量,但骨强度未见明显改善。     

17β-雌二醇对卵巢颗粒细胞增殖转移的影响及作用机制

目的探究17β-雌二醇(17β-E_2)对卵巢颗粒细胞增殖、转移的影响及其作用机制。方法体外培养卵巢颗粒细胞系—KGN细胞,采用MTT法检测17β-E_2对KGN细胞增殖的影响;划痕实验检测17β-E_2单独或和G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)特异性拮抗剂—G15共同处理对KGN细胞转移的影响;分别于17β-E_2单独或和G15共同处理KGN细胞0 min、10 min、30 min及60 min后收集细胞,采用Western Blot法检测细胞ERK1/2的磷酸化水平。结果 MTT结果显示,17β-E_2对KGN细胞增殖无显著影响;划痕实验结果表明,17β-E_2单独处理能够显著抑制KGN细胞的转移,而联合G15处理对细胞转移则无显著影响;Western Blot结果显示,17β-E_2单独处理细胞10 min、30 min及60 min后,细胞ERK1/2磷酸化水平均显著降低;而17β-E_2和G15共同处理细胞不同时间后,细胞ERK1/2磷酸化水平相比于处理前无显著性变化。结论 17β-E_2能够显著抑制KGN细胞的转移,其机制与GPER1介导的雌激素非基因组效应有关。     

产超广谱β-内酰胺酶菌实验室检测技术的研究进展

自上世纪60年代β-内酰胺类抗生素被研制以来,一直广泛应用,目前占全球抗生素消耗的50%[1].尤其近些年来对β-内酰胺酶水解作用有抵抗性的新型该类药物也被研制应用,然而产β-内酰胺酶的细菌随即相继出现,其产生的超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum betalactamases,ESBLs)成为对第三代头孢类抗生素耐药的主要原因.ESBLs是质粒介导的A类酶,按Bush分类法归于2be酶[2],能有效水解青霉素、窄谱头孢菌素及一些广谱头孢菌素、单胺类抗生素(如氨曲南).β-内酰胺酶抑制剂(克拉维酸、青霉矾、他佐菌素)通常可以抑制产ESBLs菌株的生长[3].     

不动杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测

目的研究不动杆菌产超广谱β-内酰胺酶的检测方法,分析其与抗生素耐药的关系。方珐采用NCCLS（美国临床标准委员会）推荐方法对收集120株不动杆菌进行产ESBLs（超广谱β-内酰胺酶）的筛选和确认实验,按照PCR基因分型原则采用碱裂解法提取质粒DNA,以此为模版设计引物和反应条件,用PCR法对产ESBLs株进行基因分型．结果产ESBLs共检出20株,检出率占16．7％．产酶株耐药率明显高于非产酶株。PCR进行ESBLs基因分型。检出TEM型12株,SHV型4株,PER型4株,未检出OXA．姑论西安市不动杆菌产ESBLs株基因型以TEM为主,产ESBLs可能是西安市不动杆菌耐药的主要机制。     

超广谱β-内酰胺酶的检测及临床意义

超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)由革兰阴性杆菌(主要是肺炎克雷伯菌，其次是大肠埃希菌、奇异变形杆菌、粘质沙雷菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌等)产生，可来源于TEM和SHV酶(由于其固有序列的基因点突变导致)，该酶最早发现于肺炎克雷伯菌中，仅局限于少数肠杆菌和肠球菌中，可     

不同水平维生素E和β-胡萝卜素对Cu~(2 )氧化修饰低密度脂蛋白的影响

研究不同浓度的维生素 E(VE)和β-胡萝卜素 (βC)对 Cu2 诱导的氧化修饰低密度脂蛋白 (L DL )作用的影响 ,通过测定硫代巴比妥酸反应物质 (TBARS)、L DL 的电泳迁移率 (Rf)以及荧光物质 (L ipofusin)扫描 ,反映 L DL的氧化修饰程度。结果表明 :VE、βC均可减少 TBARS的产生、减小 L DL的 Rf,并且具有剂量 -效应关系 ,随浓度增加 ,VE抑制作用加强而 βC抑制作用减弱 ,而且 VE对 TBARS的影响比 βC小 ,对 Rf的影响比βC大。二者对荧光物质均有降低作用 ,但无剂量 -效应关系。提示 VE、βC均可不同程度的抑制Cu2 氧化修饰 L DL 的作用 ,在降低机体脂质过氧化反应、减少氧化修饰型 L DL(OX- L DL)的形成方面具有重要作用 ,但二者作用机理可能并不相同     

微粉化17-β雌二醇阴道片剂对绝经后女性生活质量的影响

目的观察微粉化17-β雌二醇25μg阴道片剂对绝经后女性生活质量的影响。方法对主诉为生殖道雌激素缺乏症状的绝经后女性122名,给予微粉化17—β雌二醇阴道片剂治疗,评估用药前、用药2周、用药8周阴道干燥、烧灼感、刺痛、性交痛及出血、pH值、尿频尿急、应激性尿失禁。结果上药2周后阴道、泌尿道症状好转,随后以每周上药2片的维持量用药6周,阴道、泌尿道症状消失率各为83．3％、61．8％以上,91％患者阴道pH下降至≤4．5,80％以上患者清洁度及黏膜、分泌物正常化。结论微粉化17-β雌二醇阴道片剂治疗绝经后妇女阴道雌激素缺乏疗效肯定,改善了妇女阴道、泌尿道的症状,提高了绝经后妇女的生活质量。     

利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)快速检测霍乱弧菌

目的:建立基于环介导等温核酸扩增技术(LAMP)的霍乱弧菌快速检测方法,为霍乱疫情监测与预防提供及时的应急检测服务和参考结果。方法:通过Genbank检索、下载霍乱弧菌ctxA基因序列,使用BLAST、GENtle、DNAMan等相关核酸序列分析软件比对分析确定目标序列,使用PrimerExplorer v4软件设计霍乱弧菌LAMP引物。以SYBR Green I作为荧光剂在荧光定量PCR仪上实时检测LAMP反应结果,作为本研究的主要研究方式。通过优化反应温度、时间、组成浓度等实验条件对LAMP检测方法进行改进,并与PCR方法进行比较与评价。结果:从分属不同种属的20株实验菌株中分别正确地检出所有5株产霍乱毒素的霍乱弧菌菌株,对菌株纯培养物的检出限达到了5 cfu/μl(10 cfu/reaction)。结论:本研究建立的霍乱弧菌LAMP检测方法是一种灵敏、特异、快速、简便的霍乱弧菌检测方法,适于基层单位推广使用,对霍乱疾病监测与暴发后疫情应急检测具有重要意义。     

环介导等温扩增(LAMP)技术检测奇异变形杆菌方法的建立

[目的]建立一种检测奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)快速且特异的环介导等温扩增(LAMP)检测方法. [方法]针对奇异变形杆菌脲酶调节子编码基因(ureR)特异性序列的6个位点设计4条LAMP引物,65℃孵育约60min,完成对奇异变形杆菌的扩增,扩增产物经电泳和酶切鉴定.利用LAMP和普通PCR方法同时检测1株奇异变形杆菌和13株非奇异变形杆菌来验证LAMP方法的特异性;将奇异变形杆菌菌液做一系列10倍稀释后用LAMP和PCR方法同时进行检测来比较两者敏感性. [结果]1株奇异变形杆菌扩增出LAMP特征性梯状条带,13株非奇异变形杆菌没有出现LAMP扩增,酶切也证实了LAMP产物的特异性;LAMP检测奇异变形杆菌的特异性与普通PCR相同,但其敏感性比普通PCR高10倍:LAMP检测奇异变形杆菌的检测下限为5 cfu/ml,PCR检测下限为50 cfu/ml.LAMP检测速度相比PCR更快速,在60 min内即可完成扩增反应.[结论]建立了一种特异、敏感、快速且不需要特殊设备的奇异变形杆菌LAMP检测方法,有望用于奇异变形杆菌的快速检测.     

17β-雌二醇对小鼠肺成纤维细胞凋亡及Ⅰ型胶原表达的影响

目的探讨不同浓度17β-雌二醇(17β-E2)对小鼠肺成纤维细胞凋亡及Ⅰ型胶原表达的影响。方法将体外培养的小鼠肺成纤维细胞分为5组:空白对照组,SiO2组,SiO2+不同剂量17β-E2组(10-8、10-7、10-6 mol/L),于作用24、48、72h后收集细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组化法检测Ⅰ型胶原表达。结果与空白对照组比较,SiO2处理组小鼠肺成纤维细胞凋亡率明显降低(P0.05),而SiO2+17β-E2处理组各时点随着17β-E2剂量增大凋亡率明显升高(P0.05),随处理时间延长,各剂量17β-E2组成纤维细胞凋亡率明显升高(P0.05);各处理组Ⅰ型胶原表达有明显差异,与空白对照组比较,SiO2组Ⅰ型胶原表达均明显增高(P0.05),而17β-E2处理组Ⅰ型胶原表达均明显低于SiO2处理组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 17β-E2促进小鼠肺成纤维细胞凋亡,抑制Ⅰ型胶原表达,进而抑制肺纤维化。     

生化样品中β_2-激动剂克伦特罗检测技术研究进展

对生化样品中β2 激动剂克伦特罗的检测技术及其进展进行了综述。样品前处理中 ,固相萃取、膜分离、超临界流体萃取、基质固相分散技术得到迅速发展和广泛应用。气相色谱 质谱、液相色谱、毛细管电泳、免疫分析、传感器技术和流动注射技术都已应用于生化样品中克伦特罗的检测中。对生化样品中 β2 激动剂克伦特罗的检测技术的发展进行了展望。     

120 生化样品中β2-激动剂克伦特罗检测技术研究进展

对生化样品中β2激动剂克伦特罗的检测技术及其进展进行了综述。样品前处理中，固相萃取、膜分离、超临界流体萃取、基质固相分散技术得到迅速发展和广泛应用。气相色谱-质谱、液相色谱、毛细管电泳、免疫分析、传感器技术和流动注射技术都已应用于生化样品中克伦特罗的检测中。对生化样品中β2-激动剂克伦特罗的检测技术的发展进行了展望。     

儿科病房产超广谱β-内酰胺酶菌的检测

目的:调查儿科病房产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactam ases,ESBLs)菌的感染和耐药状况。方法:用纸片初筛试验和表型确证试验检测ESBLs,用K-B纸片扩散法对抗菌药物进行敏感试验。结果:大肠埃希菌和克雷伯菌是产ESBLs的两种主要革兰氏阴性杆菌。产ESBLs菌的耐药率与不产ESBLs菌相比差异有显著性。结论:儿科病房产ES-BLs菌所导致的感染已不容忽视;产ESBLs菌对大多数抗生素耐药。     

VITEK-2 Compact高级专家系统对CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的检测分析

目的 评估VITEK-2 Compact(V2C)高级专家系统(AES)对CTX-M型ESBLs的检测分析能力.方法 随机抽取2010年1-8月AES所提示的产ESBLs菌株194株,进行CTX-M表型分析,并与聚合酶链反应(PCR)方法加以比较.结果 194株产ESBLs菌株经AES提示CTX-M型94株,检出率为48.5％,PCR证实携带CTX-M基因型164株,检出率为84.5％,差异有统计学意义(P＜0.05);AES报告的94株CTX-M型产ESBLs,经PCR确认为89株,头孢他啶MIC值≤1μg/ml占95.5％,其耐药表型以CTX-M型为主,而漏检的75株中,头孢他啶MIC值≤1 μg/ml只占2.7％,其耐药表型大肠埃希菌以产ESBLs为主,肺炎克雷伯菌以产ESBLs或ESBLs+膜渗透障碍为主;AES与PCR漏检株对氨曲南、头孢他啶、头孢吡肟耐药率要高于符合株.结论 AES对混合型耐药机制的CTX-M型产ESBLs检测有一定的漏检;如需进一步进行产ESBLs的亚型研究或相关流行病学调查,仍需要以分子生物学方法进行验证.