肌成纤维细胞在皮肤瘢痕形成过程中的作用

目的 探讨表达α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的肌成纤维细胞在皮肤增牛性瘢痕中的作用.方法 免疫组织化学法检测皮肤增牛性瘢痕中α-SMA的表达;通过细胞培养,检测成纤维细胞与肌成纤维细胞羟脯氨酸含量并进行比较;ELISA法分别检测成纤维细胞与肌成纤维细胞Ⅲ型前胶原、纤维连接蛋白、TGF-β1含量并进行比较.结果 正常皮肤组织只有血管平滑肌细胞表达α-SMA,其他真皮细胞几乎不表达,增生性瘢痕皮肤组织中,α-SMA染色阳性细胞大大增加,比例高达96.89%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01);肌成纤维细胞羟脯氨酸含量较正常成纤维细胞显著增高(P<0.01);肌成纤维细胞Ⅲ型前胶原含量较成纤维细胞显著增高(P<0.05);肌成纤维细胞TGF-β1含量较正常成纤维细胞显著增高(P<0.01);肌成纤维细胞纤维连接蛋白含量较成纤维细胞显著增高(P<0.05).结论 肌成纤维细胞是造成增生性瘢痕的最关键细胞.     

烧伤创面愈合后瘢痕组织成纤维细胞DNA甲基化初步研究

目的研究探讨烧伤创面愈合后不同时期瘢痕组织中成纤维细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达及意义。方法收集烧伤创面愈合后不同时期的瘢痕组织标本(早期、增生期、消退期、成熟期)和正常皮肤组织标本作为研究对象,采用免疫组织化学方法检测瘢痕组织及正常皮肤组织中成纤维细胞内DNMT1的表达,并比较各组之间的差异;采用RT-PCR技术检测瘢痕组织及正常皮肤组织中成纤维细胞内DNMT1 mRNA的表达,并比较各组之间的差异。结果瘢痕组织形成早期,成纤维细胞内DNMT1的表达水平逐渐升高(免疫组化评分:8.57±1.83),并于增生期达到高峰(10.41±1.58),消退期(7.17±1.19)及成熟期(4.90±0.88)逐步降低,而正常皮肤组织中成纤维细胞的表达呈阴性或弱阳性(0.81±0.87),组间差异具有统计学意义(P=0.000,P0.01);RT-PCR技术检测的:DNMT1 mRNA的表达水平在各组中的差异与免疫组织化学方法的检测结果一致(P=0.000,P0.01)。结论成纤维细胞DNMT1在烧伤创面愈合后瘢痕组织的形成过程中发挥着重要作用,DNA甲基化可能参与了烧伤创面愈合后瘢痕的发展与演变。     

A型肉毒毒素通过抑制SMAD3信号通路抑制兔耳瘢痕形成

目的 探讨A型肉毒毒素通过抑制SMAD3信号通路对增生性瘢痕形成的影响。方法 选取12只清洁级新西兰大白兔,将其随机分为对照组与观察组,每组各6只,制作瘢痕模型。建模成功后,观察组于创面9点每点注射2 U浓度为40 U/ml的A型肉毒毒素;对照组于造模后即刻于创面9点每点注射0.05 ml生理盐水。于术后30 d将动物处死取材。HE、Masson染色检测观察组织形态;实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;蛋白质免疫印迹实验检测ColⅠ、α-SMA、SMAD3和SMAD3磷酸化的表达情况;免疫组织化学染色检测SMAD3磷酸化表达水平。结果 HE和Masson染色结果显示,经A型肉毒毒素治疗后,组织纤维化程度明显减轻,胶原沉积减少。实时荧光定量PCR检测结果发现,观察组的COLⅠ和α-SMA的mRNA均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。蛋白质免疫印迹实验结果发现,A型肉毒毒素能够显著抑制组织中COLⅠ、α-SMA蛋白的表达及SMAD3的磷酸化水平,但是不影响总的SMAD3表达情况。免疫组织化学染色结果显示,A型肉毒毒素能够明显...     

增生性瘢痕中成纤维细胞生物学功能变化与微血管病理改变的研究

目的 探索增生性瘢痕中成纤维细胞的生物学功能变化与微血管病理改变的关系.方法 首先取人增生性瘢痕组织和正常皮肤组织进行HE染色观察,分离和培养瘢痕和正常皮肤中成纤维细胞,ELISA分别测定2种来源的成纤维细胞在转移生长因子(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、内皮素-1(ET-1)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌水平的变化,再采用Transwell 共培养模式,观察增生性瘢痕中成纤维细胞对血管内皮细胞增殖的影响.结果 HE染色可见正常皮肤微血管数目较少,胶原疏松.增生期瘢痕胶原致密,微血管数目增多,微血管狭长扭曲,甚至闭塞.ELISA检测结果发现,增生性瘢痕中成纤维细胞TGF-β1、bFGF、PDGF、ET-1和VEGF分泌水平明显高于正常皮肤来源的成纤维细胞.另外,Transwell 共培养结果发现,增生性瘢痕来源的成纤维细胞具有显著促进血管内皮细胞增殖的作用.结论 增生性瘢痕中微血管的病理改变与成纤维细胞大量产生TGF-β1、FGF、PDGF、ET-1和VEGF等因子有关.     

骨母细胞特异性因子-2在创伤性肌腱瘢痕组织中的表达及其作用

目的探讨骨母细胞特异性因子-2(Periostin,osteoblast-specific factor 2)在创伤性瘢痕组织中的作用与意义。方法利用RT-PCR验证Periostin基因在肌腱瘢痕成纤维细胞中的表达。用免疫组织化学染色观察肌腱增生性瘢痕形成早期组织中Periostin在成纤维细胞的分布。结果肌腱增生性瘢痕组织成纤维细胞与包皮正常成纤维细胞中Periostin基因表达水平存在显著差异,瘢痕疙瘩组织成纤维细胞中高阳性表达,而包皮正常成纤维细胞中表达微弱甚至阴性表达。免疫组化结果显示肌腱增生性瘢痕形成早期,组织中Periostin主要表达于增生的成纤维细胞。Periostin的阳性表达主要集中于大量增殖的成纤维细胞胞浆中,部分存在于胞核。结论Periostin的阳性表达主要集中于大量增殖的成纤维细胞胞浆,并且肌腱增生性瘢痕成纤维细胞中表达程度远高于正常成纤维细胞。     

假上皮瘤样增生病变中上皮细胞向间质细胞转化的不稳定性

目的探讨上皮细胞向间质细胞转分化(EMT)与外伤继发假上皮瘤样增生(PEH)损害之间的关系。方法收集11例创伤后继发PEH病变的标本及其边缘正常皮肤(PEH-N),采用组织病理学和间接免疫荧光双标记方法观察Ⅰ／Ⅲ型胶原(CoⅡ／Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vim)、结蛋白(Des)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体(TGFRI)、广谱角蛋白(CKp)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)在PEH异常分化的上皮细胞中的表达水平和分布特征。结果组织学观察发现,与PEH—N组相比,PEH呈现鳞状上皮不典型增生．上皮基底部细胞顶一基极性紊乱、结构崩溃,细胞向间质迁移,在该部位的表皮基底细胞和部分附件上皮细胞中可检测到CoⅡ／Ⅲ、α-SMA、Vim和Des等间质细胞物,但这些上皮细胞CKp、ColⅣ、TGF-β1和TGFRI表达水平明显减弱甚至消失,并且在深层间质内发现大量游离的CKp阳性上皮细胞。结论PEH病变存在不稳定性EMT现象,上皮细胞去分化后再分化以及TGF-β1信号通路作用微弱可能赋予了PEH病变肉芽组织化而非形成增生性瘢痕的病理特征。     

鞘鞍醇激酶-2在转化生长因子-β1诱导心脏成纤维细胞增殖与活化过程中作用

目的探讨鞘鞍醇激酶-2(SPHK2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导心脏成纤维细胞增殖与活化中的作用。方法分离乳鼠心脏成纤维细胞并体外培养。利用慢病毒分别将对照或SPHK2小分子干扰RNA(siRNA)转染心脏成纤维细胞。采用Western blot检测siRNA对SPHK2蛋白的干扰效率;采用酶联免疫吸附法检测心脏成纤维细胞1-磷酸鞘鞍醇(S1P)水平;采用TGF-β1处理诱导对照组和SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞增殖与活化后,CCK8法检测心脏成纤维细胞增殖能力,Western blot检测心脏成纤维细胞活化的标记蛋白α-平滑肌激动蛋白(α-SMA)的表达,q-PCR检测心脏成纤维细胞胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(ColⅢ)的mRNA水平。结果慢病毒转染SPHK2 siRNA后,心脏成纤维细胞SPHK2蛋白表达水平显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞S1P水平显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。给予TGF-β1处理后,SPHK2 siRNA组心脏成纤维细胞增殖能力、α-SMA蛋白和mRNA表达、ColⅠ和ColⅢ的mRNA表达显著低于对照组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调SPHK2表达可抑制TGF-β1诱导心脏成纤维细胞的增殖与活化。     

细胞凋亡的调控与增生性瘢痕的防治

瘢痕形成是高等哺乳动物创伤愈合的自然结局 ,但瘢痕异常增生则产生病理性瘢痕 ,通常包括增生性瘢痕 (ｈｙｐｅｒ ｔｒｏｐｈｉｃｓｃａｒ)和瘢痕疙瘩 (ｋｅｌｏｉｄ)。增生性瘢痕是因愈合瘢痕高出创面数毫米至数十毫米而得名 (区别于正常愈合瘢痕 ) ,但一般不超过创缘 (区别于瘢痕疙瘩 )。增生性瘢痕的形成机制尚不清楚 ,一般认为 ,它是由于各种原因引起成纤维细胞异常增殖 ,胶原大量合成 ,导致细胞外基质中胶原过度沉积所致 ,故临床上多采用抑制细胞增殖和 (或 )调控胶原代谢的策略来进行防治。但是 ,大量临床实践表明 ,采用如此策略来防…     

血管紧张素Ⅱ受体在增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成中的作用

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1)和2型受体(AT2)在人增生性瘢痕成纤维细胞中的表达,并初步探讨这两种受体在成纤维细胞胶原合成中的作用。方法采用免疫组织化学和放射性配体受体结合测定法观察人增生性瘢痕组织中成纤维细胞AngⅡ受体AT1和AT2的表达,并用体外细胞培养技术探讨AngⅡ受体在人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成中的作用。结果在增生性瘢痕的成纤维细胞中可见AT1和AT2受体表达,阳性染色信号较强。放射性配体受体结合测定法显示培养的增生性瘢痕成纤维细胞AT1和AT2受体密度分别为10·69±2·15和4·9±1·05fmol/106个细胞。在培养的人增生性瘢痕成纤维细胞中,AngⅡ可显著促进成纤维细胞胶原的合成,AT1受体阻断剂Valsartan明显抑制该作用,而AT2受体拮抗剂PD123319则明显增强该作用。结论增生性瘢痕的成纤维细胞表达AT1和AT2受体,AngⅡ通过激活AT1和AT2受体对成纤维细胞胶原的合成产生相反的作用,AngⅡ及其受体表达的变化可能影响瘢痕的形成和成熟。     

中药治疗皮肤瘢痕增生的现代研究进展

皮肤瘢痕增生在临床上分为两种类型,增生性瘢痕与瘢痕疙瘩。两者均表现为瘢痕组织过度增生、凸出皮面;前者瘢痕局限于原发损伤处,后者瘢痕呈侵袭性生长,累及周围正常皮肤。成纤维细胞的过度增殖、凋亡抑制、合成胞外基质的功能增强,以及胞外基质中胶原的合成与降解失衡均可导致胶原纤维的过量沉积,这些构成了皮肤瘢痕增生的生物学基础。祖国医学对瘢痕增生的治疗历史悠久,并积累了丰富的经验。     

CTGF表达在大鼠放射性肺纤维化中的作用

目的本研究结合体内外实验探讨CTGF在放射性肺纤维化(RPF)发生过程中的作用及与α-SMA之间的相互关系。方法应用MTT比色法检测^60Coγ射线照射对人肺成纤维细胞(HLF)的促增殖作用，用Western blot法观察CTGF和α-SMA在HLF中的表达，苦味酸-天狼星红偏振光显微镜法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的增减变化，免疫组织化学图像分析观察CTGF和α-SMA在RPF过程中的表达变化。结果体外实验显示，5Gy^60Coγ射线照射能促进HLF增殖，并转化成肌成纤维细胞(MFb)；CTGF蛋白合成增加，12h达高峰；α-SMA蛋白合成增加，48h处于高峰状态。体内实验显示，照射后1-3个月大鼠肺组织有少量胶原产生，以Ⅲ型胶原为主；6个月肺组织大量胶原产生。以Ⅰ型胶原为主；CTGF于照后1周在增生的大鼠肺Fb中开始合成，随照后时间延长而逐渐增强．3个月时最明显。照后1周可见增生的MFb中有α-SMA表达，随照后时间延长逐渐增多，3个月时达高峰。结论照射能诱导CTGF表达增高，后者能促进肺Fb向MFb转化，增强合成和分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原的能力，参与了放射性肺纤维化的发生发展。     

早期肺纤维化在极重度骨髓型放射病中启动机制的探讨

目的 探讨极重度骨髓型放射病早期肺纤维化发生机制，以及与照射剂量和存活时间的关系。方法 从两例尸检病例取材制片，进行HE、免疫组化包括TGFβ、α-SMA、Ⅳ型前胶原、MMP-9和天狼猩红染色。结果 107病例TGFβ信号位于肺泡巨噬细胞，α-SMA信号出现于肺平滑肌和巨噬细胞，少数Ⅱ型上皮可见微弱的Ⅳ型前胶原和MMP-9阳性信号；而在108病例，增生的成纤维细胞TGFβ信号阳性，肌成纤维细胞α-SMA阳性，肺泡间隔出现较多的Ⅰ、Ⅲ型胶原，Ⅱ型上皮可见较强的Ⅳ型前胶原和MMP-9信号。结论 极重度骨髓型放射病人肺内可表达TGF-β，促进成纤维细胞转化，产生Ⅰ、Ⅲ型胶原；其程度与照射剂量成反比，与存活时间成正比。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔耳增生性瘢痕形成的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF )对兔耳增生性瘢痕形成的影响。　方法　复制 96个兔耳增生性瘢痕模型 ,将其随机分为bFGF实验组与磷酸盐缓冲液 (PBS)对照组 ,观察 3个月。通过愈合时间、瘢痕体积、组织学改变及原位杂交 ,检测整合素 β1mRNA表达反映bFGF对瘢痕形成的影响。　结果　 (1)bFGF组与对照组愈合时间分别为 (18.4± 1.6 )和 (2 1.3± 1.4 )d。 (2 )观察 3个月 ,bFGF组瘢痕体积明显小于对照组。 (3)与对照组比较 ,bFGF组在愈合期炎症反应、血管形成及成纤维细胞增殖更明显。但在愈合后的瘢痕组织中胶原纤细排列较规则。(4)bFGF组整合素 β1mRNA表达在愈合期均高于对照组。随后各组随时间推移表达逐渐减弱 ,bF GF组减弱更快。　结论　bFGF具有既促进愈合又改善瘢痕形成的作用     

不同糖浓度对体外培养小鼠成纤维细胞增殖、分化的影响

目的 研究不同糖浓度下成纤维细胞的生长情况.方法 采用体外模型,观察不同糖浓度的培养液下成纤维细胞的生长情况,对细胞增殖和Ⅰ型胶原合成情况进行研究.结果 当培养液糖浓度低于40mmol/L时,成纤维细胞的增殖并未发现受到太多抑制,随着糖浓度的升高,成纤维细胞的增殖随之抑制(P<0.01);成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原的量与糖浓度无明显相关(P>0.05).随着糖浓度的升高,成纤维细胞产生肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的量增加.结论 应激状态下,当培养液糖浓度在一定范围内(25-40mmol/L),并不影响创面的愈合,当高于这个范围,创面的愈合将得到抑制.成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原的量与糖浓度无直接关系;当糖浓度升高时,成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的发生率随之升高.     

瘢痕组织中微血管数和血管生成因子表达的研究

目的 :研究不同的瘢痕组织中血管内皮细胞生长因子 (VEGF)mRNA及其受体fms样酪氨酸激酶 - 1(Flt- 1)的表达 ,微血管 (MV)计数及其意义。方法 :应用原位分子杂交方法研究VEGFmRNA的表达 ,应用免疫组化方法研究Flt- 1表达及MV的计数。结果 :增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中MV数目多于正常皮肤和扁平瘢痕组织中的MV数目。VEGFm RNA、Flt- 1在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中表达阳性率高于正常皮肤和扁平瘢痕组织中的表达 (P <0 0 5 ) ,VEGFmRNA表达阳性病例组的MV计数显著高于VEGFmRNA表达阴性病例组的MV计数 (P <0 0 5 )。结论 :血管内皮细胞过度增殖可能是瘢痕过度增生的重要因素之一     

P物质对病理性瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 探讨P物质(SP)对病理性瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响。方法 体外培养瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞．采用细胞爬片免疫组织化学方法检测在SP及SP受体拮抗剂Spantide作用下不同成纤维细胞PCNA、bcl-2、bax的表达。结果 SP可促进不同成纤维细胞PCNA、bcl-2的表达．同时抑制其bax的表达。在SP作用下．瘢痕疙瘩成纤维细胞PCNA、bcl-2表达的增强程度及bax表达的受抑程度显著强于增生性癜痕成纤维细胞和正常成纤维细胞．而增生性癜痕成纤维细胞又强于正常成纤维细胞。Spantide可以完全或部分拮抗SP对不同成纤维细胞的作用,结论 SP通过调控成纤维细胞凋亡相关基因的表达参与病理性瘢痕形成,该作用由SP受体介导。     

重组核心蛋白多糖对人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞增及生物学活性的影响

目的　观察重组核心蛋白多糖 (Decorin)对人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞体外增殖和生物学活性的影响 ,以探讨Decorin在增生性瘢痕形成和成熟中的作用。　方法　分离培养人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞 ,分别加入不同质量浓度 (0 .0 1,0 .1,2 ,10 μg/ml)的重组Decorin ;培养 12 ,2 4 ,4 8h用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐 (MTT)法测定细胞增殖速度 ;培养 4 8h用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡 ;收集细胞培养上清 ,ELISA法检测TGF - β1蛋白水平 ,放射免疫方法检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白 (PCⅠ、PCⅢ )含量。　结果　 2 ,10 μg/ml的Decorin可有效抑制正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的增殖 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,明显增加两种细胞处于G1期的百分比(P <0 .0 1) ;并抑制细胞分泌转化生长因子 (TGF) - β1和PCⅠ、PCⅢ ,下调PCⅠ /PCⅢ比值。实验组和对照组 (未加重组Decorin)均未检测到终末期凋亡细胞。　结论　Decorin可抑制正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及其生物学活性 ,可能在预防增生性瘢痕形成和促进瘢痕成熟中起一定的作用。     

敲低MKL1通过激活自噬流抑制心肌成纤维细胞活化与纤维化表型的作用研究

目的 探究敲低巨核细胞白血病因子1(MKL1)对心肌成纤维细胞(CFs)活化与纤维化表型的影响及作用机制。方法 选取人CFs,敲低CFs中MKL1表达,检测敲低效果;将CFs分为对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、shNC+AngⅡ组、shMKL1+AngⅡ组,shNC+AngⅡ组与shMKL1+AngⅡ组分别转染shRNA NC、shRNA MKL1,AngⅡ组、shNC+AngⅡ组及shMKL1+AngⅡ组CFs再使用AngⅡ刺激建立心肌纤维化模型;处理结束后,检测各组CFs增殖活性,测定各组CFs细胞培养上清液中Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)水平,观察各组CFs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,检测各组CFs中α-SMA、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达水平。观察各组CFs自噬流,检测各组CFs中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白比值、Beclin1蛋白表达水平。结果 转染shMKL1的CFs中MKL1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均低于未转染的CFs和转染shNC的CFs(P<0.05);与对照组比较,AngⅡ组同一时间下CFs增殖活性升高(P<0.0...     

异种无细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后细胞外基质的变化

目的观察异种无细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后细胞外基质的动态变化。方法以SD大鼠为动物模型,在其背部造成4 cm×5 cm的全层皮肤缺损。大鼠分为薄自体皮移植组和猪无细胞真皮基质+薄自体皮移植组,分别于移植后1,2,3,4,8,12,16周取标本,检测羟脯氨酸含量、Ⅰ/Ⅲ型前胶原mRNA的表达、透明质酸含量及纤维连接蛋白的变化。结果猪无细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后,各时相点羟脯氨酸含量、Ⅰ型前胶原mRNA的表达均低于薄自体皮移植组(P<0.05);Ⅲ型前胶原mRNA的表达与薄自体皮移植组差异无统计学意义(P>0.05);透明质酸含量高于薄自体皮移植组(P<0.05);而纤维连接蛋白的表达在早期高于薄自体皮移植组,后期则低于薄自体皮移植组(P<0.05)。结论猪无细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后能够减少胶原合成和Ⅰ型前胶原mRNA的表达,增加皮肤中透明质酸含量,从而减轻瘢痕增生。纤维连接蛋白早期表达增高有利于创面愈合及基底膜的重塑,而后期表达降低有助于减轻瘢痕增生。     

长链非编码RNA SNHG1对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因1(lncRNA SNHG1)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响.方法 纳入2019－2021年在宁夏医科大学总医院烧伤整形外科接受手术治疗的22例增生性瘢痕患者,收集其增生性瘢痕组织与瘢痕旁正常皮肤组织(瘢痕旁3 cm以内),从中分离培养成纤维细胞.采用qRT-PCR从组...