NCAPH基因敲除对胰腺癌细胞增殖迁移及侵袭能力的影响

目的 探究NCAPH基因敲除对胰腺癌PANC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 利用Oncomine数据库分析NCAPH在胰腺癌及其他癌组织中的表达水平;Kaplan-Meier plotter数据库分析NCAPH高低表达与胰腺癌患者预后的相关性;使用CRISPR/Cas9技术构建NCAPH基因敲除慢病毒建立NCAPH基因敲除细胞株;通过CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验及划痕实验检测敲除NCAPH基因对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,Western blotting检测MEK及ERK等蛋白的表达。结果NCAPH在胰腺癌、胃癌、结直肠癌及结肠癌组织中的表达均显著上调。Kaplan-Meierplotter数据库分析显示,NCAPH高表达组胰腺癌患者的预后不良(P<0.05);Western blotting检测结果显示,CRISPR/Cas9基因编辑技术能有效敲除胰腺癌PANC细胞系的NCAPH基因,从而抑制NCAPH蛋白的表达。CCK-8实验及克隆形成实验结果显示,与对照组相比,NCAPH敲除明显抑制了PANC细胞在48、72、96及120 h的增殖能力(0...     

四分子交联体5表达上调对结直肠癌细胞转移能力的促进作用观察

目的研究上调四分子交联体5(Tspan-5)表达对结直肠癌细胞转移能力的影响。方法构建Tspan-5基因真核表达载体Tspan-5/pEGFP-C1,采用基因转染技术上调Tspan-5在低转移潜能结直肠癌细胞株LST-R1中的表达,采用Western blotting和激光共聚焦鉴定转染结果。采用异质黏附实验研究LST-R1黏附性改变,趋化运动实验研究运动性改变,穿膜侵袭实验研究侵袭性改变,裸鼠肝转移模型研究肝转移能力改变。结果 Western blotting结果显示稳定转染重组Tspan-5真核表达载体的LST-R1细胞表达Tspan-5/EGFP重组蛋白,激光共聚焦显微镜观察显示重组蛋白定位于细胞膜。异质黏附和趋化运动实验显示,上调Tspan-5表达可显著增强LST-R1细胞在基底膜主要成分Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、纤连蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)、玻连蛋白(VN)上的黏附性(P0.001)及运动性(P0.001),并可增强LST-R1细胞的侵袭性(P0.001)。体内肝转移模型显示,上调Tspan-5表达可显著促进LST-R1细胞在裸鼠体内的肝转移能力(P0.001)。结论 Tspan-5在结直肠癌细胞的转移中发挥重要作用。     

TIMP-2基因转染在裸鼠胃癌中Ⅳ型胶原酶及Ⅳ型胶原改变的研究

目的：探讨金属蛋白酶抑制剂（ＴＩＭＰ－２）基因体外转染胃癌ＳＧＧ－７９０１细胞系后建立的裸鼠侵袭模型中的Ⅳ型胶原和Ⅳ型胶原酶改变的情况。方法：用ＴＩＭＰ－２基因体外转染的胃癌ＳＧＧ－７９０１细胞系建立裸鼠肿瘤侵袭模型，并应用免疫组化对侵袭部位的组织Ⅳ型胶原和Ⅳ型胶原酶前体（ＭＴ－ＭＭＰ）的改变作了研究。结果：正常肾脏组织Ⅳ型胶原酶反应阳性率为３９．６４％，在种植肿瘤中阳性率为６９．１４％，两者有显     

miR-182调控RECK信号通路在非小细胞肺癌进展中的作用

目的探讨miR-182在非小细胞肺癌(NSCLC)发展中的作用及其相关机制。方法采用实时定量PCR检测NSCLC细胞系以及30组配对的NSCLC患者癌组织和癌旁组织样本中miR-182的表达水平。在NSCLC细胞株A549和H1299中过表达miR-182后,测定细胞增殖活性及侵袭转移能力。利用荧光素酶活性实验鉴定miR-182的预测靶基因(RECK)。采用qRT-PCR和Western blotting分别检测转染miR-182类似物和miR-182抑制物后RECK mRNA和蛋白的表达水平。结果miR-182在NSCLC细胞系和癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,在伴淋巴结转移的肺癌患者癌组织中的表达水平明显高于不伴淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.01)。过表达miR-182可增强NSCLC细胞株A549和H1299的增殖、侵袭和迁移能力。双荧光素酶实验结果表明,RECK的翻译水平受miR-182直接调控。qRT-PCR和Western blotting 检测结果表明,转染miR-182类似物后,RECK表达水平降低,转染miR-182抑制物后,RECK表达水平升高。结论miR-182可调控RECK的表达,促进NSCLC的进展。     

p54nrb基因沉默对人脐静脉内皮细胞迁移及体外血管生成的影响

目的 观察p54nrb基因沉默对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移及体外血管生成的影响,探讨p54nrb基因在血管新生中作用.方法 用含有靶向人p54nrb基因shRNA的慢病毒感染HUVEC 24h后,用嘌呤霉素进行筛选,Western blotting检测HUVEC中p54nrb蛋白的表达,确定p54nrb基因沉默效率,建立稳定的p54nrb基因沉默的HUVEC细胞系.CCK-8法检测p54nrb基因沉默对HUVEC细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell迁移实验检测p54nrb基因沉默对HUVEC细胞迁移的影响;体外血管生成实验检测p54nrb基因沉默对HUVEC体外血管生成能力的影响.结果 Western blotting结果显示,p54nrb基因沉默的HUVEC细胞中p54nrb蛋白表达显著减少,表明建立了稳定的p54nrb基因沉默的HUVEC细胞系.CCK-8实验结果显示,p54nrb基因沉默轻度地促进了HUVEC细胞增殖;划痕实验和Transwell迁移实验结果显示,p54nrb基因沉默后HUVEC细胞迁移能力明显下降;体外血管生成实验结果显示,p54nrb基因沉默明显抑制了HUVEC的体外血管生成能力.结论 p54nrb具有促进HUVEC细胞迁移及体外血管生成的作用,可能是一个新的参与血管生成的调控蛋白.     

近红外二区成像中通过靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖- 3早期诊断肝癌转移实验研究

【摘要】 目的 探讨靶向肝癌磷脂酰肌醇蛋白聚糖(GPC)-3的纳米探针Ag2S@BSA-TJ12P1在近红外二区（NIR-Ⅱ）成像早期诊断肝癌转移灶中的优势。方法 制备硫化银纳米探针Ag2S@BSA-TJ12P1。通过体外细胞实验验证GPC-3表达,检测各肝癌细胞系转移能力。采用激光共聚焦成像验证硫化银纳米探针选择性摄取至肝癌细胞系情况。采用肝癌高转移细胞系建立裸鼠肝癌原位转移模型,通过NIR-Ⅱ在体成像观察微小转移灶。结果 Ag2S@BSA-TJ12P1被激发后,可在1 080 nm处发出NIR-Ⅱ荧光。细胞实验显示,肝癌GPC-3在肝癌细胞系中均有高表达,Ag2S@BSA-TJ12P1可被HepG2、MHCC97-H、HCC-LM3细胞特异性摄取。NIR-Ⅱ成像系统对裸鼠微小转移灶作出早期诊断。 结论 Ag2S@BSA-TJ12P1可通过在体靶向肝癌GPC-3对肝癌微小转移灶成像,对肝癌微小转移灶早期诊断具有一定意义。     

应用CRISPR/Cas9技术构建MAVS基因敲除的ZR-751乳腺癌细胞株

目的 运用成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/Cas9基因编辑技术,构建线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)基因敲除的ZR-751乳腺癌细胞株,研究MAVS对细胞生长的影响.方法 针对MAVS基因第一外显子设计小向导RNA(sgRNA),构建pX459-sgRNA重组质粒.然后利用嘌呤霉素筛选ZR-751 MAVS基因敲除的阳性克隆,Western印迹检测MAVS基因敲除情况,提取克隆基因组进行测序鉴定.平板克隆实验检测MAVS被敲除后对细胞增殖的影响,再利用MTS实验检测在DFX培养基刺激下,MAVS对细胞死亡的影响.结果 Western印迹结果说明ZR-751细胞株内MAVS已完全敲除;且在凋亡诱导剂DFX刺激下,MAVS被敲除后促进细胞增殖.结论 利用CRISPR/Cas9系统成功构建了MAVS基因敲除的ZR-751乳腺癌细胞株,初步实验提示MAVS抑制乳腺癌细胞生长,为后续研究MAVS在肿瘤中的功能奠定了基础.     

模拟微重力对猕猴肺组织JNK／c－Jun和c－Fos信号通路的影响

目的：探讨模拟微重力对猕猴肺组织结构和JNK／c－Jun和c－Fos信号通路的影响。方法在特殊装置上采用猕猴头低位－10°模型模拟微重力,15只猕猴分为3组,每组5只：对照组（ A组）、模拟微重力组（ B组）、模拟微重力后恢复组（ C组）。 HE染色观察各组猕猴肺组织大体结构,Western blotting检测肺组织JNK、c －Jun、c－Fos及磷酸化表达水平。结果 HE显示,与A组相比,B组和C组猕猴肺组织可见肺泡间隔不同程度的增宽,部分肺泡融合,肺间质内可见炎细胞浸润。 C组病理改变较B组稍减轻。 Western blotting 结果提示,与A组相比,B组和C组JNK、c－Fos和p－c－Fos及p－c－Jun表达增多。结论长期处于微重力状态可引起猕猴肺组织损伤,肺组织中JNK、c－Fos磷酸化和c－Jun磷酸化表达增加,微重力激活JNK／c－Jun和c－Fos信号通路调控其下游特定基因的表达可能是肺损害的机制之一。     

肺鳞癌PD-L1共表达基因及转录调控网络分析

目的 绘制肺鳞癌中细胞程序性死亡配体1(PD-L1)共表达基因关系网络,筛选潜在的PD-L1协同检测生物标志物,寻找可能参与PD-L1调控肿瘤免疫状态的基因及通路.方法 采用TCGA肺鳞癌数据集,利用cBioPortal数据分析平台进行共表达基因集检索,从全基因转录组水平对PD-L1的共表达基因进行Venny分析,筛选目标基因,进行多种类型的聚类和分子关系网络分析,并建立PD-L1调控网络.结果 共获得PD-L1中等程度表达相关基因126个,主要为质膜定位型基因,功能集中在免疫调节过程,其中IRF2/NFKB 1/IRF1三个转录因子参与了对PD-L1基因集30％以上基因的转录调控.经过PD-L1共表达基因集的核心分子筛选,分析网络节点连接度,得到具有最高连接度的前6个节点基因,依次为IFNG、JAK2、STAT1、CTLA4、CD80和CCR5,对这些基因不同表达水平的肺癌患者的生存情况进行分析,结果显示CCR5是一个有意义的预后指标分子.进一步对PD-L1和CCR5的表达谱数据进行相关性分析,结果显示CCR5与PD-L1表达谱水平的Pearson相关系数为0.47(P＜0.05);GO-BP聚类分析显示,CCR5的功能主要聚集在免疫调控、T细胞调控、细胞信号转导等领域,与PD-L1调控网络的功能相符.结论 PD-L1共表达基因集内的主要节点均为免疫相关分子,其中IFNG、CCR5、NFKB1分子对PD-L1共表达基因网络具有最广泛的调控作用,该发现为肺鳞癌免疫治疗的研究和应用奠定了一定基础.     

人胃癌裸鼠原位移植瘤P53、c-erbB-2癌基因蛋白免疫组化和超微结构的研究

为探讨胃癌的分子发病机制及为实验治疗提供理想动物模型，采用显微外科原位移植技术，将47例人胃癌标本移植裸鼠胃粘膜层，观察原位移植成瘤、侵袭和转移情况，及P53、c-erbB-2、raSP21癌基因的表达和形态学特征。从47例胃癌标本中筛选出的人胃腺癌、鳞癌、鳞腺癌三株裸鼠原位移植模型，对三种癌蛋白均呈阳性表达，并与肿瘤生长方式、侵袭浓度和淋巴结转移有关，超微结构观察发现移植瘤与来源人胃癌细胞相似。此模型可用于研究胃癌的分子发病机制、侵袭、转移及实验治疗。     

公共数据库GEO分析TGFB1I1在胃癌中表达及临床意义

目的利用在线表达谱芯片数据,探讨转化生长因子-β1诱导转录蛋白1(TGFB1I1)在胃癌中的表达情况与临床病理学参数的关系,评价TGFB1I1对胃癌的预后价值。方法利用GEO数据库的胃癌数据集GSE62254和K-M plotter数据库,分析TGFB1I1表达与临床病理参数的相关性及预后。采用基因集富集分析(GSEA)预测TGFB1I1在胃癌中调控的相关基因。结果 TGFB1I1在GSE62254中的表达与性别、年龄无关;与肿瘤浸润深度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)、肿瘤分期(P<0.01)、Lauren分型(P<0.01)显著相关。TGFB1I1的表达与胃癌患者的复发和死亡显著相关(P<0.01)。K-M plotter数据库进一步验证,TGFB1I1高表达患者生存期更短(P<0.01)。TGFB1I1高表达的肿瘤样本中富集到粘着斑、细胞外基质受体、钙通路及细胞间隙连接等基因通路。结论利用在线数据库,发现TGFB1I1的表达与胃癌的预后不良临床参数显著相关,TGFB1I1高表达的患者预后更差,并且可以调控细胞粘附、转移相关的分子通路。     

14-3-3ζ抑制肺癌细胞转移的实验研究

目的:探讨14-3-3ζ与肺癌转移的关系。方法:以人肺巨细胞癌高低转移细胞株为模型,Western印迹验证14-3-3ζ在高低转移株中的差异表达;随后采用细胞转染技术将1433ζ基因导入人肺巨细胞癌高低转移株,通过研究转染后细胞增殖能力、黏附能力以及迁移能力的变化,探讨14-3-3ζ与肿瘤转移的相关性。结果:Western印迹检测发现14-3-3ζ在低转移株PLA801C中的表达水平显著高于高转移株PLA801D,在此基础上,构建成功正反义表达载体并转染细胞,转染正义载体后细胞的增殖减慢,黏附能力提高,体外迁移能力下降;而转染反义载体后细胞的增殖加快,体外迁移能力提高。结论:1433ζ可能抑制肺癌细胞的转移。     

甲酰肽受体2促进胃癌细胞侵袭及转移作用研究

目的通过体外胃癌细胞实验和体内裸鼠成瘤实验,探讨甲酰肽受体2(FPR2)对胃癌细胞侵袭、转移的作用。方法采用慢病毒转染技术干扰胃癌细胞SGC7901和XN0422中FPR2的表达,通过实时定量逆转录聚合酶链反应和Western blot方法检测干扰效率。利用划痕实验、Transwell实验、体内裸鼠皮下成瘤及腹腔种植实验,观察XN0422-mock、SGC7901-mock组以及XN0422-sh FPR2、SGC7901-sh FPR2组的侵袭转移、皮下成瘤和腹腔转移能力的改变。结果慢病毒感染XN0422、SGC7901细胞,FPR2表达量下降>80%。XN0422-sh FPR2组、SGC7901-sh FPR2组中侵袭、转移能力,皮下成瘤能力和腹腔转移能力均低于XN0422-mock组和SGC7901-mock组,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FPR2可同时促进体外胃癌细胞的侵袭转移能力、体内皮下成瘤和腹腔转移能力。     

趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨趋化因子受体CXCR4在人乳腺癌中的表达及其与乳腺癌预后相关因素的关系.方法 收集2004年9月-2006年1月手术切除的乳腺癌标本44例,采用RT-PCR检测CXCR4 mRNA的表达,Western blotting检测CXCR4蛋白的表达,免疫组化检测CXCR4、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及人类表皮生长因子受体2(HER2,又称C-erbB-2)的表达,并观察相应的临床病理指标如年龄、月经状况、淋巴结转移数目、肿瘤大小、组织学分级等.结果 免疫组化显示CXCR4主要在胞质表达,很少在细胞核表达.44例乳腺癌标本中均有不同程度的CXCR4 mRNA及蛋白表达,且其表达水平随腋窝淋巴结转移增多而增高(P<0.05).与腋窝淋巴结转移阴性者比较,腋窝淋巴结转移≥4个及1～3个者CXCR4 mRNA及蛋白表达水平显著增高(P<0.05).C-erbB-2( / )组与C-erbB-2(-/+)组比较,CXCR4 mRNA及蛋白表达水平亦显著增高(P<0.05).CXCR4 mRNA及蛋白表达水平与患者年龄、月经状况、肿瘤大小、组织学分级、ER、PR无相关性(P>0.05).结论 CXCR4可能对促进乳腺癌转移有重要作用.     

GSDMD基因敲除对内毒素所致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨GSDMD基因对内毒素所致小鼠急性肺损伤(ALI)的作用。方法 20只野生型C57BL/6小鼠和20只GSDMD基因敲除C57BL/6小鼠随机分为野生型对照组(WT-sham组)、野生型ALI组(WT-ALI组)、基因敲除型对照组(KO-sham组)及基因敲除型ALI组(KO-ALI组),每组10只。ALI组经气管滴入1 mg/kg脂多糖(LPS)制备小鼠ALI模型,对照组气管滴入等体积的PBS溶液。造模成功后取肺组织和肺泡灌洗液(BALF)。肺组织行HE染色,光镜下完成肺损伤半定量评分,并测量肺组织湿/干重比(W/D);采用BCA法检测BALF中总蛋白含量,ELISA法检测BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6水平;Western blotting检测BALF和肺组织中焦亡相关蛋白的表达。结果与WT-ALI组相比,KO-ALI组小鼠肺损伤半定量评分及肺组织W/D均明显降低(P<0.01),BALF中总蛋白含量以及TNF-α、IL-1β、IL-6水平亦明显降低(P<0.05或P<0.01)。基因敲除型小鼠未见GSDMD蛋白的表达和活化。野生型小鼠和基因敲除...     

阻断PI3K信号通路显著抑制成骨前体细胞MC3T3-E1的分化

目的：研究PI3K信号通路对成骨前体细胞MC3T3-E1分化的调控作用。方法：首先通过Western印迹试验检测到PI3K信号通路参与成骨细胞分化的调控。应用PI3K激酶的特异性抑制剂LY294002药物阻断PI3K信号通路的活化，通过碱性磷酸酶(ALP)和von Kossa染色观察成骨前体细胞MC3T3-E1分化的改变。结果：Western印迹试验显示，成骨细胞分化过程中PI3K信号通路明显活化。阻断该信号通路的活化显著抑制成骨细胞碱性磷酸酶的活性，同时降低成骨细胞体外形成骨结节结构的能力。结论：PI3K信号通路参与了成骨细胞分化的调控，而这种调控作用是成骨细胞分化所必需的。     

14-3-3ξ抑制肺癌细胞转移的实验研究

目的：探讨14-3-3ξ与肺癌转移的关系。方法：以人肺巨细胞癌高低转移细胞株为模型，Western印迹验证14-3-3ξ在高低转移株中的差异表达；随后采用细胞转染技术将14-3-3ξ基因导入人肺巨细胞癌高低转移株，通过研究转染后细胞增殖能力、黏附能力以及迁移能力的变化，探讨14-3-3ξ与肿瘤转移的相关性。结果：Western印迹检测发现14-3-3ξ在低转移株PLA-801C中的表达水平显著高于高转移株PLA-801D，在此基础上，构建成功正反义表达栽体并转染细胞，转染正义栽体后细胞的增殖减慢，黏附能力提高，体外迁移能力下降；而转染反义栽体后细胞的增殖加快，体外迁移能力提高。结论：14-3-3ξ可能抑制肺癌细胞的转移。     

RNA干扰沉默cyclin D1基因表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭力的影响

 目的 利用RNA干扰技术下调cyclin D1基因表达,探讨其对乳腺癌细胞体外侵袭和迁移能力的影响,了解cyclin D1在肿瘤细胞转移的作用.方法 设计cyclin D1基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段siRNA51和siRNA52,脂质体介导转染入乳腺癌MDA-MB-231细胞株.应用Western印迹法检测转染前后cyclin D1表达水平;通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化,Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭力.结果 乳腺癌MDA-MB-231细胞株转染cyclin D1的siRNA后,cyclin D1蛋白水平明显下调,细胞的迁移及侵袭能力明显减弱.结论 利用RNA干扰技术能够特异阻断cyclin D1基因表达;cyclin D1基因表达下调能够明显抑制乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力.     

基于生物信息学的系统性红斑狼疮枢纽基因及治疗药物的分析

目的 通过生物信息学的方法分析系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）的差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）并进行药物预测,为探索SLE的病理机制、寻找潜在靶向药物提供方向。方法 从GEO数据库中下载GSE185047、GSE88884和GSE72509的基因表达数据,使用R语言limma包筛选出各个数据库DEGs并取交集,利用DAVID、STRING等数据库对DEGs富集分析并识别枢纽基因,此外,GSE50635被用来验证枢纽基因。进一步利用miRTarbase数据库识别调控枢纽基因的miRNA并构建miRNA-mRNA调控网络,最后使用DSigDB数据库筛选潜在治疗药物。结果 最终得到76个共同DEGs。GO富集分析表明DEGs主要涉及了病毒相关反应及Ⅰ型干扰素信号通路等生物学过程。KEGG富集到了甲型流感病毒、新型冠状病毒（COVID-19）及NOD样受体等信号通路。筛选获得了20个枢纽基因（STAT1、RSAD2、IFIT3、IFIH1、ISG15、DDX58、MX1、IFI44L、IF...     

活体荧光成像技术评价X射线对小鼠乳腺癌移植瘤的治疗效果

目的 建立荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞爪垫淋巴结转移模型,监测肿瘤早期淋巴结转移,并用荧光成像评价X射线局部治疗效果。方法 将表达荧光素酶的小鼠乳腺癌细胞系4T1-Luc接种至裸鼠爪垫皮下,建立爪垫皮下淋巴结转移模型。通过裸鼠活体荧光成像系统连续观察肿瘤细胞在淋巴结中的转移情况,并将有早期淋巴转移的荷瘤裸鼠按随机数字表法分为对照组和治疗组,活体荧光成像系统观察治疗效果,HE染色观察评价病理形态学变化。结果 成功建立了小鼠乳腺癌淋巴结转移模型,爪垫原发灶肿瘤体积与荧光光子数呈正相关性（r=0.958,P<0.001）,在肿瘤接种的第24天,治疗组爪垫肿瘤和腘窝处肿瘤部位的荧光光子数较对照组呈显著性降低（t=32.58,P<0.05）;用荧光光子数计算抑瘤率高达85%以上。HE染色观察到治疗组较对照组移植瘤坏死明显。结论 运用活体生物发光成像技术能够动态、客观、灵敏、可视化地评估X射线对小鼠乳腺癌肿瘤的抑瘤效应。