大鼠脑缺血再灌注后热休克蛋白70的表达及与细胞的凋亡

热休克蛋白 70 (Hsp70 )为细胞受到缺血损害的一个敏感指标 ,又与缺血耐受有关〔1〕。但 Hsp70与细胞凋亡在局灶性脑缺血再灌注后的时间表达却鲜有报道。本实验通过测定MCAO再灌后不同时间 Hsp70表达和 TUNEL阳性细胞以探讨缺血半暗带区神经细胞的动态变化。1　材料与方法1.1　 动物　成年 Wistar雄性大鼠 30只 ,体重 2 5 0～ 30 0 g(山东省医科院提供 )。随机分为再灌注后 2 h,6 h,12 h,2 4h,48h,72 h组 ,每组 5只 ,随机抽取 2只作为假手术组。1.2 　 实验方法1.2 .1　 MCAO模型建立　用 Zea- longa〔2〕颈外动脉线栓法 :3.5 %水和…     

川芎嗪对脑缺血—再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响

研究了大鼠脑缺血－再灌注时热休克蛋白７０表达及川芎嗪对ＨＳＰ７０表达的影响。方法 采用大鼠左侧叫动脉并滴注生理盐水脑ＣＩＲＩ模型，以免疫细胞化学法检测２４只鼠脑ＣＩＲＩ及川芎嗪干预ＣＩＲＩ脑组织ＨＳＰ７０表达，并与病理组织这改变进行对照研究。     

川芎嗪对脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注（ＣＩＲＩ）时热休克蛋白（ＨＳＰ）７０表达及川芎嗪对ＨＳＰ７０表达的影响。方法采用大鼠左侧颈总动脉结扎并滴注生理盐水脑ＣＩＲＩ模型，以免疫细胞化学法检测２４只鼠脑ＣＩＲＩ及川芎嗪干预ＣＩＲＩ脑组织ＨＳＰ７０表达，并与病理组织学改变进行对照研究。结果（１）非缺血侧脑组织无ＨＳＰ７０表达，缺血３０分钟缺血侧大脑皮层可见ＨＳＰ７０表达；再灌注３０分钟组仅１只大鼠（１／６）缺血侧大脑皮层有ＨＳＰ７０表达。（２）与单纯缺血大鼠相比，川芎嗪干预组缺血侧大脑皮层ＨＳＰ７０表达明显增强，计算机辅助图像半定量分析，ＨＳＰ７０免疫阳性细胞数，分别为平均４３６±１２５个／片和８５０±１６７个／片，两组间差异非常显著（Ｐ＜０００１）。（３）缺血侧皮层神经细胞呈现轻度缺血改变，部分细胞核固缩深染，细胞缩小，细胞周围间隙增大；川芎嗪干预大鼠缺血损伤程度有减轻，细胞核固缩减轻，细胞无缩小。结论脑缺血时可诱导缺血脑细胞部分ＨＳＰ７０表达，川芎嗪干预可使缺血大脑皮层ＨＳＰ７０表达明显增强，皮层神经细胞的缺血损伤减轻。     

大鼠脑缺血再灌注损伤中星形胶质细胞活化与热休克蛋白70表达上调的关系

业已证实 ,脑缺血性损伤可诱导热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达上调。HSP70作为分子伴侣参与了细胞修复过程 ,在脑缺血损伤中具有神经保护作用。以往认为 ,HSP70主要由神经元及小胶质细胞产生 ,近年来研究发现 ,脑缺血时 ,活化的星形胶质细胞也可表达HSP70。但有关二者关系的报道极少 ,我们观察了可逆性大脑中动脉阻塞后再灌注不同时点HSP70与星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达变化 ,初步探讨二者在脑缺血再灌注损伤中的关系及意义。　　一、材料和方法　　 1 动物分组 :健康雄性Sprague Dawley大鼠共 4 2只 ,体重 2 …     

银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响

目的探讨银杏叶提取物对大鼠缺血再灌注损伤热休克蛋白70表达的影响。方法42只大鼠随机分为3组:假手术组、单纯缺血再灌注组、缺血再灌注+银杏叶提取物组,每组14只。通过免疫组织化学方法和原位末端标记法(TUNEL)检测热休克蛋白70表达及凋亡细胞数,TTC染色观察梗死体积。结果3组均可检测到热休克蛋白70的表达,单纯缺血再灌注组热休克蛋白70的表达较假手术组增强(P<0.01),缺血再灌注+银杏叶提取物组较缺血再灌注组表达增强(P<0.05)。缺血再灌注+银杏叶提取物组梗死体积及凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组(P<0.01)。结论银杏叶提取物可能通过上调缺血缺氧后热休克蛋白70的表达减少神经细胞凋亡。     

脑缺血大鼠脑组织热休克蛋白70的表达

目的　研究脑缺血时大鼠脑组织热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达及不同脑缺血时间对HSP70表达的影响。方法　选取雄性SD大鼠 4 0只 (体重约 2 0 0g)随机分为 4组 ,每组 10只。其中一组为正常对照组 ,一组为脑缺血 2min组 ,一组为脑缺血 6min组和脑缺血 12min。实验后取大鼠脑组织匀浆并用WesternBlot法测HSP70的表达。结果　脑缺血组脑组织HSP70的表达明显增高 ,其中脑缺血 6min和 12min组与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 5) ;脑缺血 12min与6min相比亦有显著性差异 (P <0 0 5)。结论　HSP70在脑缺血时的脑组织存在高表达 ,脑缺血时间越长 ,HSP70的表达越高。     

热休克蛋白70表达对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用

本实验旨在观察腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素 (NE)诱导大鼠心肌细胞中热休克蛋白 (HSP)的表达及其对缺血再灌注损伤 (I R)心肌的影响。一、材料和方法1 实验对象及分组 :3月龄Sprague Dawley大鼠2 4只 (由华中科技大学同济医学院动物中心提供 ) ,雌雄不拘 ,体重 2 5 0～ 32 0g ,随机分为 3组 :对照组、E12h组和E2 4h组 ,每组各 8只。2 实验方法 :( 1)对照组 :腹腔注射 0 4ml生理盐水 2 4h后取大鼠建立Langendorff灌注模型 ,平衡灌注 2 0min ,夹闭灌注管全心停灌 4 5min ,再灌注 1h ,其中再灌注 15min时取冠状窦流出液 2ml,冷冻储存…     

开窍醒脑汤对脑缺血再灌注大鼠脑内热休克蛋白70表达的影响

健康雄性Wistar大鼠30只,分为空白对照组、造模组、中药治疗组,每组10只.空白对照组与造模组室温下常规饲养,中药组按5 g/（kg·d）生药量,每日灌服1 ml中药开窍醒脑汤制剂,共10 d.取相关组织制作免疫组化及普通病理标本对照观察.结果 对照组大鼠脑内镜下神经元形态正常,脑内未见HSP70免疫反应阳性细胞;造模组大鼠海马区散在出现受损神经元,发现少量HSP70免疫反应阳性神经元;中药组大鼠海马区零星分布受损神经元,与造模组比较,免疫组化染色阳性强度增强,阳性细胞数增多.认为中药开窍醒脑汤可增强脑缺血再灌注损伤大鼠脑内热休克蛋白的表达,对神经元功能的恢复具有良性作用.     

热休克蛋白70与心肌缺血再灌注损伤大鼠心房颤动及心肌纤维化的关联

目的探讨热休克蛋白(HSP)70与心肌缺血再灌注损伤大鼠心房颤动(房颤)及心肌纤维化的关联。方法 48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、缺血30 min组、再灌注60 min和再灌注120 min组,每组12只。采用大鼠左冠状动脉前降支结扎法建立心肌缺血再灌注模型。各组均采用24 h动态心电图监测房颤持续时间,直至实验结束。测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)活性。分别用免疫印迹和酶联免疫吸附试验检测心肌和血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达。采用免疫印迹法检测心肌组织中HSP70蛋白表达。结果与正常对照组相比,缺血30 min组房颤持续时间显著增加(P0.05);与缺血30 min组相比,再灌注各组房颤持续时间显著增加,至再灌注120 min达到高峰(P0.05)。与正常对照组相比,心肌组织中SOD活性于缺血30 min开始降低至再灌注120 min达到最低值。与正常对照组相比,心肌组织中MDA活性于缺血30 min开始升高至再灌注120 min达到最大值。与正常对照组相比,缺血30 min组心肌和血清中TNF-α表达量显著增加(P0.05);与缺血30 min组相比,再灌注各组心肌和血清中TNF-α表达量显著增加,至再灌注120 min达到高峰(P0.05)。与正常对照组相比,缺血30 min组心肌组织中HSP70蛋白表达显著增加,再灌注各组与缺血30 min组相比HSP70蛋白表达也明显增加(P0.05)。结论心肌缺血再灌注损伤会导致大鼠房颤,并通过加重炎症反应导致房颤和心肌纤维化。同时,心肌细胞内HSP70的表达水平变化与心肌缺血再灌注大鼠的房颤及心肌纤维化相关,是心肌缺血再灌注损伤发展和恶化的重要标志。     

川芎嗪在脑缺血再灌注损伤中的保护作用

<正>川芎嗪(AMP)又名天然四甲基吡嗪,为中药川芎的主要有效成分,传统用于活血行气祛瘀〔1,2〕。TMP对缺血性脑疾病的治疗效果已经在临床实验中得到验证〔3〕。其作用机制比较复杂,尤其在脑缺血引起的缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制方面。本文对TMP在脑缺血再灌注损伤中的保护作用机制及给药方式进行综述,为缺血性脑疾病的临床治疗中提供更有价值的资料。1抑制兴奋性氨基酸释放谷氨酸(GLu)中枢神经系统作用最强、含量最高、分布最     

银杏叶提取物对大鼠心肌缺血再灌注损伤热休克蛋白表达的影响

目的:观察热休克蛋白70(HSP70)在心肌缺血再灌注损伤过程中的表达规律及银杏叶提取物(EGB)干预后的变化.方法:65只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组.试验前30 min,治疗组大鼠腹腔注射银杏叶提取物50 mg/kg,结扎左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌缺血再灌注损伤模型.于再灌注不同时间点(1、3、6、12、24、48 h)取出心脏左前降支支配区的全层心肌组织,用免疫组织化学和Western Blot方法观察心肌HSP70的表达.结果:心肌缺血再灌注损伤时HSP70主要表达在心肌细胞和微血管上,表达水平随再灌注时间延长而增加,24 h时达高峰;与模型组相比,治疗组心肌组织HSP70表达水平明显上调,表达时间明显延长.结论:EGB促进HSP70在心肌表达增强和延长,可能与其提高心肌对缺血再灌注损伤的耐受性有关.     

肢体缺血预处理诱导大鼠缺血再灌注海马HSP70表达

目的探讨肢体缺血预处理(limb ischemic preconditioning,LIP)对大鼠缺血再灌注海马HSP70表达的影响。方法将66只凝闭椎动脉大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和LIP+脑缺血组,后两组根据脑缺血后再灌流时间不同进一步分为1、62、4、72和120 h组。采用免疫组织化学方法检测海马HSP 70的变化。结果假手术组海马各区未见明显的HSP70表达。脑缺血组海马CA1区未见明显着色,但在CA3区及齿状回颗粒细胞中可见HSP70着色,以再灌注后24 h最明显。在LIP+脑缺血组,海马CA1区于再灌注1 h未见明显的HSP70表达;再灌注6 h HSP70表达明显增强,与假手术组和脑缺血6 h组比较,阳性细胞数明显增加(P<0.01);再灌注24 h HSP70表达达高峰;再灌注72 h HSP70表达有所下降;至再灌注120 h HSP70表达明显下降。结论损伤性脑缺血前给予LIP,可明显增加CA1区HSP70的阳性表达,诱导CA1区锥体细胞耐受缺血损伤。     

氟桂利嗪对高血压大鼠脑缺血再灌注后HSP70表达的影响

目的探讨高血压大鼠急性脑缺血再灌注后氟桂利嗪对热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法将大鼠用双肾动脉狭窄术制成高血压大鼠模型,喂养2个月.随机分为氟桂利嗪组、缺血再灌注组和假手术组.除假手术组大鼠外,其他大鼠均制成大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,MCAO时间均为2小时,再灌注时间为1天.经免疫组化染色后用病理图像分析仪测出HSP70阳性细胞数,并计算阳性细胞率.比较三组HSP70阳性细胞率.结果氟桂利嗪组HSP70表达高于缺血再灌注组(P＜0.05).结论氟桂利嗪能促进HSP70表达,对缺血再灌注引起的受损脑组织起保护作用.     

异丙肾上腺素预处理对大鼠胰腺移植后缺血再灌注损伤的抑制作用

目的:探讨减轻大鼠胰腺移植后缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法:IPC后动态检测大鼠胰腺组织热休克蛋白表达.建立大鼠胰腺移植缺血再灌注模型,选择表达热休克蛋白高峰时段供体大鼠胰腺移植作为实验组,未预处理供体大鼠胰腺移植作为对照组.移植后6 h,采集静脉血及移植胰腺.热休克蛋白70(HSP70)分别用Western blot法及免疫组织化学法检测.免疫组织化学法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达.流式细胞仪检测胰腺细胞凋亡率.碘淀粉比色法检测血淀粉酶水平.结果:IPC后供体大鼠胰腺中HSP70的表达在24 h达到高峰,与其他各时段比较具有显著差异(0.92±0.25 vs 0.24±0.04,0.34±0.06,0.58±0.07,0.62±0.11,0.25±0.09,均P<0.05),IPC后6 h,12 h,24 h,36 h大鼠胰腺中HSP70的表达与未预处理组相应时段比较差异也显著(0.34±0.06 vs 0.28±0.07,0.58±0.07 vs 0.25±0.04.0.92±0.25 vs 0.27±0.05,0.62±0.11vs 0.25±0.06,均P<0.05),48 h恢复到原来水平.而未预处理组各时段间比较差异无统计学意义(P>0.05).HSP70主要表达于胰腺腺泡细胞及血管壁.对照组胰腺组织中TNF-α、细胞凋亡率、中性粒细胞、血淀粉酶的水平明显升高,与假手术组相比差异显著(均P<0.01).实验组降低了胰腺组织中TNF-α、细胞凋亡率、白细胞数、血淀粉酶的水平,与对照组比较差异具有统计学意义(11 929±1220vs46 111±3127,26.7%±4.5%vs 37.4%±4.7%,3 308±531 vs 6668±1506,1057 IU/L±148IU/L vs 1 408 IU/L±195IU/L,均P<0.05).结论:IPC减轻了大鼠胰腺移植后缺血再灌注损伤,IPC保护作用与HSP70的诱导生成有关.     

局灶性脑缺血预处理对大鼠脑红蛋白表达的影响

目的通过观察局灶性脑缺血预处理对血清脑红蛋白的影响,初步探讨其在脑缺血耐受中的意义。方法SD大鼠36只随机分为对照组、脑缺血再灌注组、脑缺血预处理组。每组12只,各组采用Longa等的大脑中动脉线栓法并加以改进,制备缺血预处理及缺血再灌注损伤实验动物模型,比较各组间神经功能缺损评分、病理变化及血清脑红蛋白的变化。结果脑缺血预处理组神经功能缺损评分较脑缺血再灌注组显著降低(P<0．01),病理切片染色显示神经元损伤、坏死也轻于后者,血清脑红蛋白含量高于脑缺血再灌注组及对照组(P<0．01)。结论血清脑红蛋白升高可能是局灶性脑缺血耐受产生的分子机制之一。     

小鼠巨细胞病毒感染诱导热休克蛋白70表达的体外实验研究

目的 研究小鼠胚肺组织感染小鼠巨细胞病毒(murine cylomegalovirus,MCMV)后其细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达情况,为临床病毒感染性疾病的诊断开辟新途径。方法 体外培养小鼠胚肺细胞,加入MCMV(感染组)后4、8、12、16、24、48、72、96小时分别收获细胞;用免疫组织化学方法检测HSP70表达情况并与对照组(不感染病毒)比较。结果 感染组各时相HSP70表达明显增强,其中96小时表达最强,8小时次之,24小时最弱;随HSP70表达增强细胞变性程度加重。结论 MCMV可诱导小鼠胚肺细胞HSP70的高表达;HSP70表达强度与细胞病变程度呈正相关。     

热休克蛋白70在人胃腺癌发展过程中表达的意义

目的 探讨人胃腺癌发展过程中热休克蛋白70（HSP70）的表达与病理分型、浸润深度和淋巴结转移的关系。方法 应用免疫组织化学S-P法检测52例人胃腺癌组织中HSP70的表达。结果 胃腺癌和黏液腺癌的HSP70阳性率分别为64.29%和60.00%；高分化和低分化腺癌的HSP70阳性率分别为67.86%和50.00%；胃腺癌HSP70的阳性率在不同病理分型、不同分化程度的肿瘤之间差别均无显著意义。侵犯深度达浆膜和肌层的胃腺癌HSP70阳性率分别为75.68%和33.33%（P〈0.05）。有淋巴结转移和无淋巴结转移组中HSP70阳性率分别为73.33%和45.45%（P〈0.05）。结论 人胃腺癌HSP70中阳性率与淋巴结转移、侵犯深度有关，与病理分型无关。提示胃腺癌晚期HSP70的表达高于早期胃腺癌，检测核指标可为早期诊断胃腺癌提供理论依据。     

人肝癌细胞膜上HSP70的表达

用流式细胞仪和Cell-ELISA检测了 4株人肝癌细胞膜上HSP70的表达。结果表明正常情况下人肝癌细胞膜上HSP70的表达较低 ,经热处理后表达增加 (P <0 0 1)并显示出细胞之间的差异 (P <0 0 1)。推测其低表达可能与肝癌细胞逃逸机体免疫监视有关 ,对制定肝癌的防治对策有重要的指导意义。