DNMT1与UHRF1基因在胃癌细胞系中的表达特点及其与癌细胞DNA甲基化的关系

[目的]探讨DNMT1和UHRF1在胃癌的形成和转化中的表达特点和可能的生物学作用。[方法]提取CIMP型H（High）的胃癌细胞系HGC-27和CIMP型为L（10w）的胃癌细胞系MGC803,BGC823及AGS的核酸样品进行UHRF1和DNMT1表达的分析。[结果]DNMT1在MGC823和HGC-27表达水平明显高于其他胃癌细胞系（P〈0．01）;UHRF1在HGC-27中有表达水平高于其他3个胃癌细胞系（P〈0．01）。[结论]胃癌细胞DNA的甲基化不但和DNMT1有关而且和UHRF1也有着密切关系。     

过表达TLR4基因对胃癌细胞自噬的抑制作用及其机制

目的 采用慢病毒过表达胃癌细胞中Toll样受体4（TLR4）基因,探讨其对胃癌细胞自噬的作用,并阐明其作用机制。 方法 处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞分为未感染组、阴性对照病毒组和基因过表达组,分别给予无慢病毒感染、空载体慢病毒和过表达TLR4慢病毒稳定感染。采用Western blotting法检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞及胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法分别检测各组细胞中TLR4、Beclin1和微管相关蛋白轻链3（LC3）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）、磷酸化PI3K／磷酸化Akt（p-PI3K／p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）信号通路相关蛋白及细胞自噬相关蛋白（LC3、Beclin1和p62）蛋白表达水平。 结果 BGC-823细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平高于胃黏膜上皮GES-1细胞。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞增殖活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,BGC-823细胞中Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）,SGC-7901细胞中LC3和Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中LC3和Beclin1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 过表达TLR4基因可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路明显抑制胃癌细胞的自噬活性。     

环状RNA hsa_circ_0079557在胃癌中的表达及其临床意义

目的: 探讨hsa_circ_0079557在胃癌中的表达水平和临床价值。方法： 收集5对胃癌组织及癌旁组织,高通量测序技术检测后结合circbase等数据库中胃癌数据分析,锁定差异表达的部分环状RNA。用qRT-PCR检测62对胃癌标本中hsa_circ_0079557表达,分析其与临床病理特征的关系;检测并分析hsa_circ_0079557在胃癌细胞（SGC-7901、BGC-823、HGC-27和MGC-803）和胃黏膜上皮GES-1细胞、胃癌患者和健康体检者血清中表达差异。siRNA敲减hsa_circ_0079557后,用细胞克隆形成实验、平板划痕实验、细胞周期流式实验分别检测胃癌细胞（HGC-27和MGC-803）增殖和迁移能力及细胞周期改变,蛋白印迹测定细胞周期蛋白依赖激酶3（cyclin dependent kinase 3,CDK3）表达水平。结果： qRT-PCR结果显示,hsa_circ_0079557在胃癌组织中表达水平明显高于癌旁组织,且其表达水平与肿瘤TMN分期相关（P均<0.05）;hsa_circ_0079557在胃癌细胞中表达水平明显高于胃黏膜上皮细胞（P＜0.05）;hsa_circ_0079557在胃癌患者血清中水平明显高于健康体检者（P＜0.05）且术前明显高于术后（P＜0.01）;hsa_circ_0079557敲减后HGC-27和MGC-803细胞增殖、MGC-803细胞迁移能力下降,HGC-27和MGC-803细胞CDK3表达水平下降（P＜0.05）。胃癌细胞株中hsa_circ_0079557敲减使细胞多阻滞于G₀-G₁期。结论： hsa_circ_0079557在胃癌组织中呈高表达,其可作为胃癌潜在的早期诊断及预后生物标志物。     

OCT4基因在胃癌细胞系中的表达及其意义

【摘要】 目的 检测八聚体结合蛋白-4（octamer-binding protein-4,OCT4）基因在不同分化程度的胃癌细胞株（MKN-28、SGC-7901、BGC-823）及正常胃黏膜细胞株GES-1中的表达情况,研究OCT4基因表达水平与胃癌细胞分化程度和侵袭力的相关性。方法 RT-PCR确定GES-1、MKN-28、SGC-7901、BGC-823中OCT4基因的表达水平,OCT4 siRNA转染BGC-823细胞,分别通过荧光定量PCR和Western blot检测干扰OCT4基因表达的效果,并利用Transwell小室法研究OCT4在BGC-823细胞侵袭力中的作用。结果 正常人胃黏膜细胞中未检测到OCT4的表达,人胃癌细胞系分化程度越低,OCT4基因表达量越高,低分化人胃癌细胞系BGC-823中OCT4基因表达最高,转染OCT4 siRNA的BGC-823细胞内的OCT4 mRNA和OCT4蛋白表达量明显下降（P＜0．05）。干扰胃癌细胞BG-823中OCT4基因的表达,穿膜细胞数量减少（P＜0．05）,侵袭力下降。结论 OCT4基因表达量与胃癌细胞的分化程度有关,OCT4基因可能在胃癌细胞的分化中起重要作用,影响胃癌细胞的侵袭能力,其表达程度有望成为胃癌患者恶性度预测的参考指标之一。     

RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的:探讨中期因子(midkine,MK)基因小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:培养人胃癌BGC-823、HGC-27、MGC-803及SGC-7901细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测中期因子基因mRNA表达;筛选出中期因子表达最高者.采用中期因子基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Boyden方法检测癌细胞侵袭力.结果:4株胃癌细胞中,中期因子均有不同程度的表达,以胃癌BGC-823细胞最高;以MK siRNA转染胃癌BGC-823细胞后,癌细胞中期因子基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降.结论:中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力.     

趋化因子受体7在胃癌组织及细胞中的表达及意义

目的探讨趋化因子受体7（CXCR7）在胃癌组织及细胞中的表达及意义。方法收集35例胃癌患者的癌组织和癌旁组织,
采用RT-PCR及免疫组化分别检测CXCR7 mRNA和蛋白的表达水平,并结合临床资料进行分析;体外培养5种不同分化程度的
胃癌细胞系（HGC-27未分化腺癌;MGC-803低分化粘液腺癌;BGC-823低分化腺癌;SGC-7901中分化腺癌;MKN-28高分化腺
癌）,采用免疫荧光检测各细胞系中CXCR7的表达水平。结果（1）胃癌组织中CXCR7 的mRNA和蛋白表达均明显高于癌旁
组织（均为P<0.01）;（2）胃癌组织中CXCR7的表达与患者的性别、年龄、吸烟史、Hp感染、肿瘤部位及病理类型等均无明显关
系,但有饮酒史的胃癌患者CXCR7的表达高于无饮酒史的患者（P<0.05）;（3）CXCR7在5种不同胃癌细胞系表达程度不一,与
分化程度无明显关系,其在中分化胃腺癌细胞系SGC-7901表达程度最高。结论CXCR7在胃癌组织中呈高表达,在胃癌细胞
系中表达程度不一,推测其可能在胃癌的发生发展中具有重要的作用。
     

沉默PHLDA1基因表达抑制胃癌细胞增殖

目的: 明确普列克底物蛋白同源样结构域家族A成员1蛋白(PHLDA1)在各胃癌细胞系中的表达,探讨其对胃癌细胞生物学特性的影响。方法: 先采用蛋白质印迹和qRT-PCR法检测MGC-803、BGC-823、MKN45、SGC-7901和HGC-27共5种胃癌细胞系中PHLDA1蛋白和mRNA的表达;再将MGC-803细胞分为对照组(转染乱序RNA)和干扰组(转染靶向干扰PHLDA1的siRNA),蛋白质印迹法检测2组细胞中PHLDA1蛋白的表达;CCK8实验检测细胞增殖率;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;蛋白质印迹检测各组细胞中Bax、Caspase-8、Cleaved-caspase-8、Caspase-3、Cleaved-caspase-3、Caspase-9和Cleaved-caspase-9凋亡相关蛋白的表达。结果： PHLDA1在5种胃癌细胞中呈不同程度高表达,在MGC-803细胞中表达量最高;与对照组比较,干扰组PHLDA1表达量显著降低(P＜0.01),细胞增殖率明显减慢,克隆形成数显著减少、单个克隆的细胞数明显减少(P均＜0.05),Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-3、Caspase-9和Cleaved-caspase-9蛋白表达明显升高(P均＜0.05）。 结论： PHLDA1在胃癌细胞系中呈高表达,沉默其表达可抑制胃癌细胞增殖。     

CXCR7在胃癌细胞中的表达及对SGC-7901细胞迁移及侵袭的影响

目的 探讨趋化因子受体7(CXCR7)在不同分化程度的胃癌细胞系中的表达以及siRNA沉默CXCR7后对胃癌SGC-7901细胞迁移及侵袭能力的影响。方法 体外培养5种人胃癌细胞系:未分化腺癌HGC-27、低分化黏液腺癌MGC-803、低分化腺癌BGC-823、中分化腺癌SGC-7901和高分化腺癌MKN-28。采用Western blot及RT-PCR法分别检测CXCR7的蛋白及mRNA表达。应用脂质体转染siRNA的方法沉默SGC-7901细胞CXCR7的表达,并采用其配体基质细胞衍生因子-1（SDF-1）干预,实验分为4组:阴性对照siRNA(NC siRNA组), NC siRNA+SDF-1组,CXCR7 siRNA组和CXCR7 siRNA+SDF-1组。应用Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力。结果 CXCR7在不同人胃癌细胞系中表达程度不一,其中高分化MKN-28几乎不表达,中分化SGC-7901细胞表达程度最高。与 NC siRNA组相比,NC siRNA＋SDF-1组的迁移细胞数和侵袭细胞数增加（P CXCR7 siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P CXCR7 siRNA＋SDF-1组的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P CXCR7 siRNA抑制。     

长链非编码RNA MEG3对胃癌细胞增殖的影响研究

目的:探讨长链非编码RNA MEG3在胃癌组织及细胞系中的表达水平,以及过表达MEG3对胃癌细胞增殖能力的影响,并探索其可能的作用机制。方法:用定量PCR（qRT-PCR）技术检测胃癌组织及细胞系中MEG3的表达水平;通过转染pCDNA-MEG3上调MEG3的表达水平,并通过qRT-PCR检测转染效率。用MTT和克隆形成实验检测上调MEG3的水平对BGC-823细胞和MGC-803细胞的增殖能力的影响,用Western blot实验检测这两种细胞中上调MEG3的水平对p53蛋白的表达水平的影响。结果:相比正常胃组织及细胞,在胃癌组织和细胞中MEG3的表达出现显著下调,SGC7901、MGC-803和BGC-823细胞中MEG3的表达水平分别是正常胃上皮细胞GES-1中的73.6 %、42.0 %和27.1 % （p<0.05）。BGC-823细胞和MGC-803细胞中转染pCDNA-MEG3能显著上调MEG3的表达,MEG3的表达水平分别为对照组的252倍和311倍（p<0.05）;MTT和克隆形成实验显示,上调MEG3的表达能降低BGC-823细胞和MGC-803细胞的增殖能力。Western blot实验显示,转染了pCDNA-MEG3的MGC-803和BGC-823细胞中p53的表达相较对照组中显著增加。结论:胃癌组织及细胞中MEG3的表达下调,且这可能通过抑制p53蛋白的激活从而促进胃癌细胞增殖,影响胃癌的发生和发展。     

酪氨酸激酶受体RON在胃癌中的表达及意义

目的探讨酪氨酸激酶受体RON在胃癌组织中的表达及与预后的关系。方法采用免疫组化Envision法检测98例胃癌组织、29例癌旁组织和10例正常胃黏膜的RON表达及用Western-blot方法检测19例新鲜胃癌组织、癌旁组织、转移的淋巴结和10例正常胃黏膜中RON的表达情况,检测正常胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞株HGC．27、SGC-7901、BGC．803和BGC。823的RON蛋白表达。对所有胃癌术后患者进行随访,随访期为3—89（中位时间22）个月,生存率的比较用Kaplan—Meier法估计生存曲线。结果（1）98例胃癌组织RON阳性表达率为56．1％（55／98）,29例癌旁组织RON阳性表达率为27．6％（8／29）,两者比较差异有统计学意义（P=0．007）;正常胃黏膜不表达RON;（2）RON表达与胃癌细胞浸润深度、有否伴淋巴结转移和临床病理分期有关（P〈0．05或P〈0．01）,而与Borrmann分型、组织学类型及是否伴远处转移无关（P〉0．05）;（3）RON阳性表达组与阴性组术后生存率差异无统计学意义（P=0．195）;（4）胃癌新鲜组织,相应癌旁组织和伴有胃癌转移的淋巴结中RON变异体（RONA165）均呈强表达,而正常胃黏膜和正常淋巴结未见RON变异体表达;（5）正常人胎儿胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞株SGC-7901、BGC-803、BGC-823均有不同程度的RON蛋白表达,而未分化胃癌细胞株HGC-27未发现有RON蛋白表达。结论RON主要表达于胃癌组织而不表达于正常胃黏膜,并且与胃癌的浸润深度、是否伴有淋巴结转移和胃癌临床病理分期有关,提示RON在人胃癌发生、发展和浸润转移方面发挥重要作用。