干细胞动员对梗死心肌结构及功能的影响

目的探讨干细胞动员对心肌梗死后心肌基本结构和心功能的影响。方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死(AMI)模型66只,随机分动员组33只和对照组33只,动员组应用基因重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)10μg·kg-1·d-1皮下注射共7 d,对照组皮下注射生理盐水7 d。建模后两组分别在24 h、2周和4周杀死大鼠,取出心脏,HE染色观察细胞形态特征、结构,梗死面积和心肌组织CD34阳性表达,并检测术后4周时动员组和对照组大鼠的血流动力学指标、心功能参数。结果动员组梗死区可见大量CD34浸润,梗死面积明显减小;梗死程度较对照组减轻,术后4周,动员组缺血心肌的基本结构得到保护,组织结构排列基本处于有序状态,左心功能恢复明显优于对照组,表现在SBP、DBP、LVSP、LV±dp／dtmax均高于对照组(P<0．05),LVEDP明显低于对照组(P<0．05)。结论干细胞动员能促进干细胞归巢梗死心肌并分化为心肌细胞样细胞,保护缺血心肌的基本结构,明显改善大鼠心肌梗死后的心脏功能。     

CD34+细胞在急性心肌梗死周边区表达的研究

目的探讨动员骨髓干细胞后CD34 细胞在急性心肌梗死微环境周边区中的表达。方法制备大鼠心肌梗死模型,通过心肌病理组织学及免疫组织化学检测,评价动员的骨髓干细胞对心肌梗死后24h、7d及14d的治疗作用,并对其机制进行探讨。结果24h及7d动员组检测CD34 阳性心肌细胞(个/HP)与对照组相比,分别为(2.90±0.87比1.10±0.88;8.30±1.83比1.40±0.51,P<0.05),且动员组CD34 细胞数7d与24h比较(个/HP)(8.30±1.83比2.90±0.87,P<0.05)明显增加;7d时,动员组与对照组缺血周边区均有B r-dU免疫阳性细胞,与对照组比(个/HP),B rdU标记阳性细胞数明显增多(7.90±1.37比1.30±0.67,P<0.05);14d时,对照组可见大量心肌瘢痕组织;而动员组瘢痕组织面积明显小于对照组,部分血管壁上可见小核深染的细胞附着,并沿血管壁移行,14d时CD34 细胞均变为阴性反应。结论动员的骨髓干细胞对大鼠缺血心肌有治疗作用,其机制可能是在心肌微环境中,动员的骨髓干细胞(包括CD34 细胞)有向心肌细胞、血管内皮细胞分化的潜能。     

辛伐他汀对急性心肌梗死大鼠微血管新生的影响

目的观察辛伐他汀(降血脂药)是否动员干细胞、促进急性心梗大鼠微血管新生。方法SD大鼠随机分为实验组、对照组和假手术组;结扎大鼠前降支,造成心梗模型;实验组,予辛伐他汀灌胃(50 mg·kg·d~(-1));假手术组与对照组,予同等量生理盐水灌胃,于2、4周,行心脏彩超、血流动力学及肺湿干比测定;免疫组化检测外周血、梗死区CD34细胞、vWF、VEGF。结果实验组LVSP、 dp/dt、-dp/dt及(左室射血分数)LVEF均高于对照组(P <0.05);而LVEDP及肺湿干比均低于对照组(P<0.05),梗死区的CD34~ 细胞、vWF阳性微血管密度及VEGF的A分别高于对照组(P<0.05)。结论辛伐他汀能动员内皮祖细胞归巢于梗死区,促进微血管形成。上调血管内皮生长因子表达,增加心肌微血管密度,从而改善急性心梗的心功能。     

人参总皂苷促进血管新生改善急性心肌梗死大鼠心功能

目的探讨人参总皂苷(total ginsenosides,TG)对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)模型血管新生及心功能的影响。方法结扎♂SD大鼠冠状动脉前降支,制备AMI模型,随机分为模型组、TG低剂量和高剂量组(腹腔注射给予TG 20、40 mg·kg~(-1)·d~(-1)),假手术组与模型组给予等量生理盐水;彩色多普勒超声检测大鼠心功能;HE染色、Masson染色和免疫组化染色后观察心肌病理组织学变化和微血管密度;real-time PCR检测心肌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA水平。结果 TG治疗35 d后,与模型组比较,TG高和低剂量组均能明显缩小左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径、舒张末期左室容积和收缩末期左室容积(P<0.05),明显增加左室射血分数、左室短轴缩短率(P<0.01)。TG组心肌梗死面积和纤维化改变明显减小,心室壁较厚;梗死区及其周边心肌组织CD31阳性细胞组成的微血管密度较模型组增高(P<0.05);缺血区心肌组织中VEGF和bFGF mRNA表达明显高于模型组(P<0.01)。结论 TG可明显促进急性心肌梗死大鼠心脏功能恢复和改善心室重构及梗死区心肌血液供应,作用机制与上调心肌组织VEGF和bFGF基因表达、促进血管新生而增加血液供应有关。     

雌激素对心肌梗死大鼠外周血干细胞及血管生成的影响

目的探讨雌激素对急性心肌梗死大鼠外周血干细胞和心肌血管生成的影响。方法结扎去卵巢SD大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死模型,给予苯甲酸雌二醇干预治疗,分别于急性心肌梗死24h后免疫组化法检测归巢心肌的CD34+细胞数量;于d1、3、7流式细胞术测定外周血CD34+细胞数,免疫组化法测定心肌中基质细胞衍生因子(stromalcell-derivedfactor,SDF-1)的表达,分析心梗4wk后心肌组织中毛细血管密度判断血管新生情况。结果与卵巢完整大鼠相比,去卵巢大鼠心梗后外周血和心肌组织中CD34+细胞数、SDF-1的表达和4wk后毛细血管密度明显降低,雌激素干预各组上述指标明显升高,其中,雌激素替代组最高。结论雌激素可促进大鼠心肌梗死后外周血骨髓干细胞的动员和归巢,增加毛细血管密度,改善预后,其机制可能与提高心肌SDF-1表达有关。且采用心肌梗死前雌激素替代疗效优于心肌梗死后雌激素治疗     

大鼠急性心肌梗死的组织病理学变化及干细胞治疗

目的 动态观察大鼠急性心肌梗死(AMI)的组织病理学变化,针对性的探讨骨髓干细胞(BMSC)治疗AMI的最佳时机和定位.方法 结扎冠状动脉制作AMI模型,对术后1、2、4、6、8、10d大鼠心脏切片行HE染色,进行动态的对比观察,对心肌细胞变性坏死、急慢性炎症等病理现象做出半定量的评估.结果 AMI后的细胞浸润主要集中在梗死周围区.AMI后4d内,中性粒细胞在梗死周围区的浸润显著.AMI后4d起,梗死周围区出现大量的新生毛细血管.缺血区域的心内膜下和血管周围,AMI后可以先后观察到液化性细胞溶解和残存心肌细胞存活的现象.各切片心肌组织中均未见波纹纤维.结论 大鼠心脏在AMI后发生的组织病理学变化具有明显的时间和区域变化规律.AMI后的4d内,中性粒细胞显著浸润,此时的心肌局部微环境可能不适合干细胞治疗.而具有显著炎症细胞浸润和血管增生的梗死周围区,对BMSC治疗可能有特殊重要的意义.     

粒细胞集落刺激因子对心肌梗死大鼠心肌T细胞亚群的影响

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对心肌梗死大鼠心肌T淋巴细胞亚群的影响。方法:29只大鼠随机分为干细胞动员组(GAMI,n=9)、心肌梗死对照组(AMI,n=10)和假手术组(SO,n=10)。GAMI组和AMI组结扎左冠状动脉造成心肌梗死,SO组行相似的手术操作但不结扎冠状动脉。GAMI组给予rhG-CSF(50μg·kg-1·d-1),皮下注射,共7d。AMI组及SO组则每日皮下注射同等体积的生理盐水,共7d。心肌梗死后4周,通过免疫组化染色检测心肌CD3 、CD4 和CD8 细胞计数并计算CD4 /CD8 比率。结果:AMI组大鼠有3只分别于术后第3、7、8天死亡,GAMI组与SO组大鼠至观察结束无一只死亡。与AMI组相比较,GAMI组CD3 和CD8 细胞计数降低(均P<0.01),CD4 细胞计数无明显变化(P>0.05),CD4 /CD8 比率升高(P<0.01)。结论:G-CSF可降低心肌梗死后大鼠心肌CD3 和CD8 T淋巴细胞计数、升高CD4 /CD8 比率,提示G-CSF可减轻心肌梗死后的免疫损伤。     

骨髓间充质干细胞移植改善缺血心脏功能

目的 探讨骨髓间充质干细胞移植改善缺血心脏功能的机制.方法 以近交系F344大鼠为研究对象,结扎冠状动脉制作大鼠心肌梗死模型,1周后将BrdU标记的骨髓间充质干细胞移植于心梗缺血区,4周后缺血心肌切片,通过免疫组织化学染色检测BrdU、闰盘连接蛋白(connexin 43,Cx 43)、肌球蛋白重链β(MHC)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,了解移植细胞的分化情况,并应用超声检测大鼠心脏功能的变化.结果 超声检查显示治疗组心功能明显改善,心脏射血分数(EF)值增加了(27.85±4.00)%,而对照组减少了(1.98±2.87)%,差异有统计学意义.心肌缺血区内可见到BrdU标记的移植细胞,相当一部分移植细胞已分化为MHC和Cx 43染色阳性的心肌样细胞.同时,治疗组功能血管密度较对照组明显增加.结论 骨髓间充质干细胞移植于缺血心肌后可分化为心肌样细胞,参与改善缺血心脏的功能.     

骨髓基质细胞移植抑制缺血心肌纤维化

目的探讨骨髓基质细胞移植改善缺血心脏功能的机制。方法制作F344大鼠心肌梗死模型,将分离培养的骨髓基质细胞移植于心梗周边区（治疗组）,取1、3、5、7、9、15d后缺血心肌切片,通过免疫组织化学染色及免疫荧光染色检测波形蛋白的表达,了解梗死心肌纤维化程度,并应用血液动力学在术后各时间点检测大鼠心脏功能的变化。结果治疗组心功能较同期对照组明显改善。术后7、9、15d治疗组缺血心肌纤维化程度较同期对照组明显减轻。结论骨髓基质细胞移植于缺血心肌后明显改善缺血心脏功能。其机制之一可能是抑制缺血心肌的纤维化,延缓心室重构。     

人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织c-Fos蛋白表达的影响

目的:探讨人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织c-Fos表达的影响。方法:分别给大鼠注射人参皂甙Rg1 10、20、40 mg.kg-1,然后采用大脑中动脉闭塞方法建立脑缺血再灌注模型,应用免疫组化法检测脑组织缺血再灌注24h后c-Fos的表达。结果:与单纯缺血再灌注组相比,人参皂甙Rg1各组c-Fos表达明显降低(P<0.05)。结论:人参皂甙Rg1防治大鼠脑缺血再灌注损伤机制可能与抑制脑组织c-Fos表达有关,且以高剂量效果较好。     

Effects of G-CSF on cardiac remodeling and arterial hyperplasia in rats

Although granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) has been shown to prevent cardiac remodeling after acute myocardial infarction, the mechanism and safety of G-CSF treatment acute myocardial infarction remain controversial. The purpose of the present study was to investigate in a rat model the mechanisms underlying the beneficial effect of G-CSF in acute myocardial infarction and to determine whether G-CSF treatment aggravates vascular remodeling of injured artery after acute myocardial infarction. Sprague-Dawley rats received transplanted bone marrow cells from green fluorescent protein (GFP) transgenic rats. Acute myocardial infarction was induced by ligation of the left coronary artery. After 24 h, the right carotid artery was injured with a balloon catheter. G-CSF (100 microg/kg/day) or saline was injected subcutaneously for 5 consecutive days after induction of acute myocardial infarction. G-CSF treatment significantly improved left ventricle function and reduced infarct size in rats with acute myocardial infarction. Expression of mRNA for the angiogenic cytokines was significantly higher in the infarction border area in the G-CSF group than in the control group. The surviving cardiomyocytes in infarction area were more in the G-CSF group. GFP-positive cells were gathered in the infarction border area in both groups; G-CSF did not increase cardiac homing of GFP-positive bone marrow cells in contrast to control group. Most GFP-positive cells were CD68-positive (macrophages). It was difficult to find bone marrow-derived cardiomyocytes in the infarcted area. G-CSF treatment inhibited neointima formation and increased reendothelialization of the injured artery. GFP-positive cells were identified most in the adventitia of the injured artery. A few cells in the neointima and reendothelialization were GFP positive. In conclusion, administration of G-CSF appears to be effective for treatment of left ventricular remodeling after acute myocardial infarction and does not aggravate vascular remodeling. The effect of G-CSF on cardiac and vascular remodeling may occur mainly through a direct action on the heart and arteries.     

经5-氮胞苷诱导的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的实验研究

目的观察经5-氮胞苷(5-Aza)能否诱导骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化成类心肌细胞,并移植入急性心肌梗死组织,观察对大鼠心功能的影响。方法体外分离培养、鉴定骨髓间充质干细胞,经5-Aza诱导,鉴定其表达心肌细胞特有蛋白,体外DAPI标记。SD大鼠随机分为分3组,对照组:于冠状动脉LAD结扎建立急性心肌梗死模型后1 h在梗死周边区用微量注射器分4点注射生理盐水;5-Aza组:造模后于相同部位注射等量经5-Aza诱导的BMMSCs;BMMSCs组:造模后于相同部位注射等量未诱导的BMMSCs。术后3 h,3 d,4 w追踪被移植细胞是否存活于心肌组织中,术后4 w通过测定大鼠左室收缩压、舒张末压、压力变化最大上升与最大下降速率以评价心功能的改变。结果 (1)经5-Aza诱导后,部分BMMSCs形态发生变化,并开始表达β-肌球蛋白重链、肌钙蛋白T等心肌细胞特有蛋白;(2)荧光显微镜观察发现,术后3 h,3 d,4 w,在5-Aza组及BMMSCs组均有DAPI标记的BMMSCs存活在梗死心肌组织中;(3)与BMMSCs组比较,5-Aza组左室收缩压升高(P0.05),舒张末压明显降低(P0.05)、左心室内压最大上升和下降速率显著增快(P0.05)。结论 BMMSCs经5-Aza诱导后可向心肌细胞分化,分化后的类心肌细胞可用来治疗急性心肌梗死(AMI)。     

冠状动脉内注射自体骨髓干细胞改善急性心肌梗死患者的心功能

目的 探讨自体骨髓干细胞冠状动脉内移植对急性心肌梗死患者心功能的影响.方法 因急性心肌梗死住院并行介入治疗的患者38例,按照完全随机分组的原则分为干细胞移植治疗组18例和对照组20例,干细胞移植治疗组患者在心肌梗死发生14 d后进行冠状动脉内注射自体骨髓干细胞治疗.术前1周和术后6个月时,采用99Tcm-MIBI心肌灌注显像、二维超声心动图评价患者心肌灌注、左心室射血分数.结果 干细胞移植治疗组与对照组比较,自体骨髓干细胞移植前2组间心肌灌注（2.1±0.1比2.2±0.2,P=0.76）和左心室射血分数（0.45±0.13比0.41±0.22,P=0.56）差异无统计学意义,术后6个月时干细胞移植治疗组心肌灌注明显好于对照组（1.5±0.2比2.3±0.4,P=0.04）,左心室射血分数高于对照组（0.55±0.12比0.44±0.24,P=0.03）,再梗死发生率、再次血运重建率和病死率2组间差异无统计学意义（P＞0.05）,而心力衰竭的发生率干细胞移植治疗组低于对照组（5.5%比35.0%,P=0.03）.结论 自体骨髓干细胞冠状动脉内移植可以改善急性心肌梗死患者的心功能,减少心力衰竭的发生.     

人牙源性iPSCs分化心肌细胞促进急性心肌梗死小鼠心肌修复的研究

目的 探讨人牙源性诱导性多能干细胞（iPSCs）分化心肌细胞对急性心肌梗死（AMI）小鼠心功能的影响。方法 采用仙台病毒诱导、单克隆挑选和无饲养层体系将人牙根尖乳头干细胞（SCAP）重编程为iPSCs,心肌分化培养基定向诱导。9只BALB/C雄性小鼠按照随机数字表法分为正常组（不干预）、AMI组（AMI造模）和实验组（...     

加味四物汤促进血管新生改善急性心肌梗死大鼠心功能

目的:观察加味四物汤(modified Siwu Tang concentrated solution,mSWT)对急性心肌梗死(acute myocardial infarc-tion,AMI)大鼠血管新生、心室重构及心功能的影响.方法:结扎雄性SD大鼠冠状动脉左前降支制备AMI模型,假手术组(Sham组)、模型组灌...     

不同方案粒细胞集落刺激因子对骨髓干细胞动员效率的临床观察

目的观察不同方案对急性心肌梗死(AMI)患者外周血干细胞动员的效率,旨在寻找最佳的动员方案。方法A组予以粒细胞集落刺激因子(G-CSF)300μg,每日1次,皮下注射,连续5d;B组予以G-CSF300μg,每日2次,皮下注射,连续5d,第6天经美国Baxter公司生产的CS3000Plus血细胞分离机分离外周血干细胞,经流式细胞仪测定CD34+细胞数量。结果两组在用药前及用药后第2、3、4、5、6、7、8天外周血中白细胞计数上无统计学差异;但是,两组在用药后第3、5、6、7天外周血中CD34+细胞数量有统计学差异(P值分别为0.007、0.019、0.011、0.005),B组外周血中CD34+细胞数量要高于A组;在应用两组动员方案后,外周血中白细胞、CD34+细胞数量与动员时间变化曲线均显示峰型曲线,在动员后第5天,且B组曲线要明显高于A组;患者外周血中CD34+细胞数量与白细胞变化呈正相关(r=0.659),与体重变化呈负相关(r=-0.536),与性别、年龄变化及AMI发生时间没有相关性。结论行G-CSF300μg,每日2次组动员的患者,外周血中CD34+细胞数量的动员效率要明显优于300μg,每日1次组。     

参桂活血汤对急性心肌梗死大鼠神经内分泌因子的影响

目的 探讨参桂活血汤对急性心肌梗死(AMI)大鼠神经内分泌因子的影响.方法 通过结扎冠状动脉前降支建立AMI模型大鼠,AMI后24 h存活的36只大鼠随机分为:对照组、模型组和治疗组,每组12只.治疗组每日用参桂活血汤灌胃1次,治疗2周,对照组和模型组灌胃等量的0.9%氯化钠溶液.测量各组神经内分泌因子:去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、肿瘤坏死因子-α(TNT-α)、白介素-6(IL-6)、细胞可溶性凋亡因子(sFas).结果 与对照组比较,模型组NE、AngⅡ、TNT-α、IL-6、sFas含量明显增高(P<0.01);与模型组比较,治疗组NE、AngⅡ、TNT-α、IL-6、sFas含量降低(P<0.01).结论 心肌梗死后,NE、AngⅡ、TNT-α、IL-6、sFas含量明显增高;参桂活血汤有降低NE、AngⅡ、TNT-α、TNT-α、IL-6、sFas含量,增强心肌收缩力、改善心血管生理的作用.     

卡维地洛对急性心肌梗死大鼠左室重构的影响

目的建立大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)模型,观察AMI后卡维地洛早期处理对心梗后左室重构的影响。方法雄性Wistar大鼠60只,随机分为假手术组(n=15)、AMI组(n=15)、低剂量卡维地洛组(n=15)和高剂量卡维地洛组(n=15)。建模后2周心肌组织取材,HE、Masson染色病理学检查;免疫组织化学测定心肌组织中毛细血管及抗凋亡、凋亡蛋白表达;建模前1 d及建模后2周心脏超声检查;采用Elisa法对建模前及建模后2周血浆脑钠肽(BNP)水平测定。结果建模后2周,与AMI组比较,卡维地洛组梗死面积减小,梗死区存活心肌细胞数增加,替代性纤维化面积减小,抗凋亡蛋白bcl-xl表达增强,凋亡蛋白Bax表达降低,P<0.05;梗死区及梗死旁区心肌组织中幼稚毛细血管密度增加,上述改变在高剂量药组明显;心脏超声左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、室间隔厚度(IVS)直线小,心率(HR)减慢,左室射血分数(EF)值增加(P<0.05);血浆BNP水平较AMI组明显降低(P<0.05)。结论大鼠AMI后早期应用卡维地洛处理,可减少心肌细胞的凋亡及丢失,减轻AMI后心肌梗死程度,减轻左心室重构,改善AMI后左室功能,延缓心力衰竭的发生。