基于化学计量学结合超高效液相色谱指纹图谱评价中药材防己质量

目的建立中药材防己超高效液相色谱指纹图谱,结合化学计量学方法评价其质量。方法采用UPLC法建立中药材防己指纹图谱,以全谱图色谱峰峰面积及共有峰峰面积为变量,利用SIMCA-P(11.5)等软件进行相似度分析、主成分分析和聚类分析,并测定粉防己碱和防己诺林碱的含量。结果防己药材指纹图谱共生成8个共有峰,指认出2个色谱峰,相似度介于0.706~0.997;主成分分析、聚类分析和相似度分析结果之间互相验证,很好地体现了不同样品之间的内在质量差异;防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量在4.874 7~20.226 6、4.240 7~9.544 0 mg/g之间。结论超高效液相指纹图谱结合化学计量学方法可适用于不同防己药材之间的内在质量评价。     

防己药材近红外光谱快速无损检测的研究

目的采用近红外光谱技术建立快速测定防己药材有效成分含量及水分含量的方法。方法采用2015版《中国药典》防己项下相应方法测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱总量及水分含量,运用偏最小二乘法(PLS)建立其含量与NIR光谱之间的多元校正模型,采用相关系数(r)、校正均方根误差(RMSEC)、内部交叉验证均方根误差(RMSECV)和外部预测均方根误差(RMSEP)对校正模型进行优化和评价。利用校正模型对未知样品中粉防己碱和防己诺林碱总量及水分含量进行预测,检验模型的准确度。采用二阶导数法对光谱进行预处理,粉防己碱和防己诺林碱最佳建模波段在7891~3960 cm-1,水分最佳建模波段在8975~4032 cm-1。结果选择前8个主成分建立最优校正模型,粉防己碱和防己诺林碱总量的校正模型的r为0.9965,RMSEC为0.0347,RMSECV为0.136;而水分含量校正模型的r为0.9950,RMSEC为0.0458,RMSECV为0.263。经外部验证,粉防己碱和防己诺林碱校正模型的RMSEP和平均回收率分别为0.0964和100.8.%。而水分的分别为0.178和99.82%。结论所建方法具有简便快速、结果准确、无损样品的特点,可以应用于防己中粉防己碱和防己诺林碱总量及水分含量的快速测定。     

防己饮片标准汤剂质量标准研究

目的建立防己饮片标准汤剂质量评价方法,对防己标准汤剂进行质量标准研究。方法采用HPLC测定12批防己饮片及标准汤剂中防己诺林碱和粉防己碱的含量,计算转移率、出膏率;采用高效液相色谱法建立标准汤剂指纹图谱,并进行相关性分析。结果 12批防己标准汤剂中防己诺林碱和粉防己碱分别为0.14%～0.36%和0.33%～0.60%,饮片中防己诺林碱和粉防己碱分别为0.37%～0.77%和0.95%～1.56%。防己诺林碱转移率为22.31～88.12%,平均(45.47±19.1)%;粉防己碱转移率为21.08%～54.98%,平均(42.57±10.3)%;出膏率为12.2%～16.7%,平均(14.26±0.85)%。防己标准汤剂指纹图谱分别有6个共有峰,其中指认了两个色谱峰。结论 12批防己标准汤剂的化学成分基本一致,建立的质量评价方法可为防己标准汤剂及防己相关产品的质量控制提供参考。     

HPLC法同时测定防己药材中防己诺林碱和粉防己碱

防己为防己科粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根,粉防己根中含有粉防己碱、防己诺林碱、轮环藤酚碱等成分,具有解热镇痛、风湿止痛、利尿消肿之功效.其中粉防己碱（TET）和防己诺林碱（FAN）是其主要活性成分,TET能够有效抑制由胶原、凝血酶、肾上腺素等引起的血小板聚集,FAN能够在体外抑制组胺的释放.因此,以粉防己碱和防己诺林碱的量来作为防己药材的质量控制指标具有十分重要的意义.     

小续命汤有效成分组中防己诺林碱和粉防己碱在大鼠体内药动学研究

目的:对防己诺林碱与粉防己碱两种化合物在大鼠体内的药动学及复方给药的影响进行研究.方法:采用高效液相色谱-质谱联用技术,建立了防己诺林碱与粉防己碱的血药浓度检测方法,并对单体给药与小续命汤有效成分组给药两种情况下两个化合物的药动学参数进行对比.结果:与有效成分组给药相比,单体给药防己诺林碱与粉防己碱的T_(max)显著延长,其余参数没有大的差异.结论:有效成分组中其他成分减慢了二者在体内的吸收速度,与单体给药相比,有效成分组给药时防己诺林碱与粉防己碱的生物利用度不变.     

防己配方颗粒质量标准研究

目的:健全防己配方颗粒质量标准评价体系,保证产品质量稳定可行。方法:采用薄层色谱法对防己配方颗粒进行定性鉴别;采用HPLC建立防己配方颗粒特征图谱,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)软件对特征图谱进行分析,并通过对比共有峰的保留时间对色谱峰进行指认。结果:防己配方颗粒薄层色谱斑点清晰,分离度好;防己配方颗粒特征图谱分析方法有较好的重复性,共检出4个共有峰,并指认粉防己碱、防己诺林碱2个化学成分。结论:建立的薄层色谱和特征图谱方法具有专属性强、承载信息量大、操作简便等优点,可用于防己配方颗粒质量标准研究。     

防己关节丸质量标准研究

目的:建立防己关节丸的质量控制标准。方法:采用薄层色谱法鉴别防己关节丸中的白术、党参、肉桂、甘草;采用薄层色谱法进行防己关节丸乌头碱的限量测定;并采用高效液相色谱法测定该药中防己诺林碱和粉防己碱的含量。结果:白术、党参、肉桂、甘草的薄层色谱鉴别专属性强;乌头碱符合限量要求;防己诺林碱在16.25～260μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,粉防己碱在33.75～540μg/mL范围内与峰面积能呈良好的线性关系,r=0.9997;防己诺林碱和粉防己碱的平均回收率分别为100.08%,99.69%(RSD为1.72%,0.93%)。结论:本法操作简便、快速、准确,可用来控制样品的质量。     

玉夏胶囊质量标准研究

目的:建立医疗机构制剂玉夏胶囊的质量控制标准。方法:采用薄层色谱(TLC)法对玉夏胶囊中防己、莱菔子进行定性鉴别研究;采用高效液相色谱(HPLC)法对玉夏胶囊中的粉防己碱和防己诺林碱进行定量研究。结果:薄层色谱中阴性样品均无干扰,专属性强;防己诺林碱在24~84μg/m L范围内峰面积与浓度呈现良好的线性关系,r=0.9992,平均回收率为102.3%,RSD=2.57%;粉防己碱在34.5~207.0μg/m L范围内峰面积与浓度呈现良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为102.3%,RSD=2.57%。结论:本实验建立的方法简便、快捷、准确、重现性好,可用于玉夏胶囊的质量控制。     

粉防己根的化学成分研究

目的：研究粉防己根的化学成分。方法：采用大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、ODS柱色谱等方法对粉防己根的70%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果：从粉防己根中分离得到11个化合物,分别鉴定为：(-)-oblongine(1)、fordianoside(2)、乌药碱(3)、荷包牡丹碱(4)、木兰花碱(5)、N,N-dimethyllindcarpine(6)、防己菲碱(7)、N-trans-feruloyl tyramine(8)、4-羟基苯乙醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、粉防己碱(10)、防己诺林碱(11)。结论：其中,化合物2、3、6、8、9为首次从粉防己中分离得到。     

HPLC法测定豨莶风湿片中粉防己碱及防己诺林碱的含量

目的 建立豨莶风湿片中粉防己碱及防己诺林碱的HPLC测定方法.方法 色谱柱为C<,18>柱(4.6mm×l50 mm,5 μm);流动相为乙腈-水-三乙胺(70:30:0.01),流速为1.0 mL/min,检测波长为280nm.结果 粉防己碱及防已诺林碱的进样量分别在0.344 μg～1.72 μg(r=0.999 ...     

基于1H-NMR和主成分分析法分类鉴别秦艽药材

目的:以多基原药材秦艽为研究对象,应用核磁共振氢谱(1H-NMR)和主成分分析方法(PCA)鉴别不同来源秦艽药材。方法:将5种不同秦艽药材在相同条件下进行溶剂提取,采用核磁共振波谱仪进行检测,图谱进行数据处理、聚类分析和PCA。结果:通过聚类分析可很好地区分5种秦艽药材;在PCA中提取了6个主成分,累计贡献率达98.9%,前2个主成分累积贡献率达76.9%,能解释原变量信息的76.9%,在以主成分1和主成分2为横纵坐标的得分散点图上实现了不同基原秦艽药材的区分。结论:1H-NMR结合PCA是一种有效的药材资源鉴别研究方法,能全面反映不同基原药材的全成分且前处理方便,可作为分类鉴别不同来源药材的手段之一。     

抗心磷脂抗体导致妊娠丢失的免疫病理机制 及安子合剂的干预作用

目的:探讨抗心磷脂抗体(ACA)导致妊娠丢失与CD4+ CD25+ FOXP3+调节性T( CD4+ CD25+ FOXP3+ Treg)细胞的关系及安子合剂的免疫调节机制.方法:将BALB/c小鼠随机分组:空白组、模型组、安子合剂组(低、中、高剂量组)、阿司匹林组.于妊娠第1天,空白组和模型组以等量蒸馏水灌胃,安于合剂组(低、中、高剂量组分别以37.7,75.4,150.8 g·kg-1·d-1)药液ig,阿司匹林组以0.019 5 g·kg-1·d-1ig,连续给药14 d.于妊娠第8,12天通过给孕鼠腹腔注射抗心磷脂抗体-IgG(ACA-IgG),建立ACA阳性妊娠丢失动物模型.用流式细胞仪测定各组孕鼠外周血CD4+ CD25+ FOXP3 +Treg细胞的比例;用ELISA法测定各组孕鼠外周血ACA的滴度;并观察各组孕鼠胚胎吸收及胎鼠发育情况.结果:模型组CD4+ CD25+ FOXP3+Treg细胞的比例较空白组显著下降(2.67±0.51)％,(9.849±1.774)％,P＜0.01;与模型组相比,安子合剂低、中剂量组均能显著升高CD4+ CD25+ FOXP3 +Treg细胞的比例(9.47±1.26),(7.61±1.07)％,P＜0.01,显著降低ACA的滴度(P＜0.01),安子合剂低剂量组优于中剂量组.安子合剂低剂量组能显著降低胚胎吸收率,显著增加胎鼠和胎盘质量(P＜0.05).结论:ACA导致妊娠丢失的病理机制与免疫调节细胞-CD4+ CD25+ FOXP3+ Treg细胞比例减少有关.安子合剂干预ACA导致妊娠丢失的免疫调节机制是通过增加CD4+ CD25+ FOXP3 +Treg细胞的比例来实现的,其作用的强弱与药物的剂量相关.     

定心方通过上调CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达对PM2.5所致动脉粥样硬化的影响

目的:观察定心方(DXR)在小鼠吸入PM2.5所致动脉粥样硬化(AS)过程中对CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs)表达调控的影响。方法:50只载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠喂食高脂饲料并吸入严重污染的自然空气,随机分为5组,DXR低、中、高剂量组分别灌胃DXR 9.29,18.59,37.18 g·kg~(-1)·d~(-1);辛伐他汀组灌胃辛伐他汀5 mg·kg~(-1)·d~(-1);模型组灌胃等剂量生理盐水;10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料吸入过滤空气设为正常组。16周后检测小鼠血清脂质、酶联免疫吸附测定测定(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素~(-1)0(IL~(-1)0)及转化生长因子-β(TGF-β)水平;流式细胞法检测脾脏CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量;苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉AS斑块形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉AS斑块Foxp3蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠主动脉AS斑块形成,血清脂质,IL-6及TNF-α水平明显升高,IL~(-1)0及TGF-β水平明显降低,CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量明显减少,Foxp3蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,辛伐他汀组,DXR中、高剂量组小鼠AS斑块面积明显减小,血清脂质,IL-6及TNF-α水平明显降低,IL~(-1)0及TGF-β水平明显升高,CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量明显增加,Foxp3蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:DXR可通过上调CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs表达发挥抗PM2.5所致AS功效。     

甲基莲心碱对血管平滑肌α受体引起45Ca外溢与内流的影响

在血管平滑肌，甲基莲心碱能明显减少苯肾上腺素引起的⁴⁵Ca内流量，不影响高钾引起的⁴⁵Ca内流；而硝苯吡啶几乎完全阻断后一种的⁴⁵Ca内流。甲基莲心碱不抑制⁴⁵Ca外溢。     

染料木素抗大鼠心肌肥厚作用及其与ATPase活性的关系

目的:观察染料木素(Gen)对异丙肾上腺素(iso)所致大鼠心肌肥厚的保护作用及其对心肌组织Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活性及羟脯氨酸含量的影响。方法:0.2 g·L-1的iso 5 mL·kg-1·d-1,背部皮下注射,连续10 d,建立大鼠心肌肥厚模型。造模第2天开始给予不同浓度的染料木素、二甲基亚砜或NS,连续14 d,末次给药后禁食12 h,称体重,麻醉,取心脏,称全心及左心室质量,计算全心质量指数及左心室质量指数,测定心肌组织Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活性及羟脯氨酸(Hyp)含量。结果:模型组全心质量指数及左心室质量指数分别为(3.30±0.24),(2.55±0.14)mg·kg-1,与正常对照组相比显著升高(P<0.001);心肌组织Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活力为(1.81±0.25),(1.00±0.22)U·mg-1,与正常对照组相比活性显著降低(P<0.01);Hyp含量为(0.80±0.05)mg·g-1,与正常对照组相比含量显著升高(P<0.001)。与模型组相比,染料木素高、低剂量组(0.3,0.1μmol.kg-1)全心质量指数分别为(2.83±0.22),(2.97±0.19)mg·kg-1;左心室质量指数分别为(2.32±0.16),(2.34±0.13)mg·kg-1均显著降低(P<0.01或P<0.05);高剂量组心肌组织Na+-K+-ATPase(2.58±0.40)U·mg-1及Ca2+-Mg2+-ATPase(1.35±0.22)U·mg-1活性升高(P<0.01或P<0.05),染料木素高、低剂量组心肌组织Hyp含量分别为(0.48±0.11),(0.57±0.14)mg·g-1显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论:染料木素可通过提高Na+-K+-ATPase及Ca2+-Mg2+-ATPase的活性,降低Hyp含量,从而抑制心脏纤维化,起抗心肌肥厚作用。     

旋覆代赭汤对RE模型大鼠食管黏膜Na+-K+-ATP酶及 Ca2+-Mg2+-ATP酶的影响

目的: 观察旋覆代赭汤对反流性食管炎(RE)模型大鼠食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性的影响,探讨RE食管黏膜细胞能量代谢障碍与黏膜损伤的关系以及旋覆代赭汤治疗RE的作用机制。方法: 将96只雄性Wistar大鼠随机分成6组,即假手术组、模型组、旋覆代赭汤组高、中、低剂量组(24,12,6 g·kg^-1)及西药对照组(奥美拉唑10 mg·kg^-1+2 mg·kg^-1莫沙必利),每组16只。采用"食管-十二指肠端侧吻合术"制备胃及十二指肠液混合RE模型。从术后第3天开始,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,药物治疗组分别给予旋覆代赭汤高、中、低剂量、西药(奥美拉唑10 mg·kg^-1+莫沙必利2 mg·kg^-1)灌胃,连续7天,记录大鼠体重变化及死亡情况,于第8天处死大鼠留取标本,观察食管下段黏膜大体及病理组织学变化;化学法检测食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性。结果: 与假手术组比,模型组大鼠体重明显减轻(P<0.05),食管黏膜肉眼及镜下病理改变明显,评分增高(P<0.05);食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.05);与模型组及西药组比,旋覆代赭汤高、中剂量组大鼠死亡率明显降低(P<0.05):与模型组比,旋覆代赭汤高、中剂量组、西药组肉眼及病理评分显著降低(P<0.05);食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性明显提高(P<0.05)。结论: 旋覆代赭汤能明显提高RE大鼠食管黏膜细胞膜Na⁺-K⁺-ATP 酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性, 从而保持食管黏膜细胞完整性,减轻黏膜损伤。     

左归丸对大鼠血清代谢物质组影响的研究

目的: 分析左归丸含药血清物质组的代谢特征. 方法: 采用核磁共振技术(NMR) 获得左归丸大鼠含药血清样本中代谢物指纹图谱的数据,应用正交偏最小二乘判别分析法研究左归丸含药血清与空白血清之间的代谢物谱差异,通过变量重要性投影(VIP)和t检验在血清中发现潜在生物代谢物. 结果: 给左归丸药物后大鼠血清中的丙酮酸,乳酸,低密度脂蛋白和乙酸乙酯等物质对比空白血清有显著差异. 结论: 给左归丸药物后大鼠血清中的丙酮酸,乳酸,低密度脂蛋白和乙酸乙酯等物质的变化,可使能量代谢途径发生变化,并引起机体代谢机能提高.     

红景天药材的1H-NMR指纹图谱研究

建立红景天药材的核磁共振(¹H-NMR)指纹图谱,为判别不同来源的药材及其质量提供依据。利用水峰抑制脉冲序列采集样品溶液的¹H-NMR谱,测定温度298 K,观测频率400.13 MHz, NMR数据经分段积分处理后分别进行相似度法和主成分分析(PCA)法评价。相似度分析结果显示其中9批红景天药材的相关系数均在0.95以上;PCA法成功区分了10批不同来源的红景天药材,其中3批药材与标准药材差异较大,变量筛选结果进一步提示红景天苷、酪醇、马来酸和丙氨酸是鉴定红景天药材质量的主要差异性成分。结果提示PCA评价方法比相似度计算法的灵敏性更高,并且可提供具体的差异成分信息。¹H-NMR指纹图谱结合PCA评价的方法为中药材的质量评价提供了一种新的辅助方法。     

温经化瘀止痛法治疗原发性痛经的临床疗效及其对T细胞亚群的调控机制

目的:观察温经化瘀止痛法对寒凝血瘀证原发性痛经(primary dysmenorrhea,PD)的临床疗效,探讨温经化瘀止痛法治疗PD的免疫机制。方法:收集寒凝血瘀证PD患者108例,按随机数字表随机分为中药组、布洛芬组和安慰剂组,每组各36例。所有患者均于月经来潮前3 d开始给药,中药组给予中药和布洛芬缓释胶囊模拟剂治疗,布洛芬组给予布洛芬缓释胶囊和中药模拟剂治疗,安慰剂组给予中药模拟剂和布洛芬缓释胶囊模拟剂治疗,连续治疗6 d,共治疗3个月经周期,停药后随访3个月经周期。观察记录各月经期间的视觉模拟评分(visual analogue score,VAS),腹痛累计时间及中医症状,流式细胞术检测患者治疗前后外周血CD3+,CD4+,CD8+水平及CD4+/CD8+。结果:治疗3个月经周期后,中药组和布洛芬组在降低VAS和减少腹痛累计时间方面均优于安慰剂组(P0.01);停药后随访远期疗效,中药组显著优于布洛芬组(P0.01)。中药组降低中医症状积分总有效率为91.43%(32/35),布洛芬组总有效率为66.67%(22/33),安慰剂组总有效率为30.30%(10/33),中药组疗效优于布洛芬组(χ2=-2.971,P0.01),布洛芬组优于安慰剂组(χ2=-2.371,P0.05)。与本组治疗前比较,治疗后中药组CD3+,CD4+水平及CD4+/CD8+显著升高,CD8+水平显著降低(P0.01);与布洛芬组和安慰剂组治疗后比较,治疗后中药组CD4+水平及CD4+/CD8+升高(P0.05,P0.01),CD8+水平降低(P0.01)。结论:温经化瘀止痛法能够显著减少PD患者的VAS评分和腹痛累计时间,改善痛经症状,逆转T细胞亚群失调可能是其治疗寒凝血瘀证PD的作用机制之一。     

H NMR-based metabonomic analysis of the effect of optimized rhubarb aglycone on the plasma and urine metabolic fingerprints of focal cerebral ischemia–reperfusion rats

Ethnopharmacological relevance

The ischemia cerebrovascular disease is one of leading causes of death and long-term disability in modern society. Rhubarb is one of the common traditional Chinese medicine with many effects, and the main pharmacodynamic ingredients are aloe-emodin, rhein, emodin, chrysophanol and physcion. The five components are also known as rhubarb aglycone. Rhubarb aglycone has been confirmed to play a remarkable curative effect on cerebral ischemia, but the mechanism is not clear. In this study, ¹H NMR-based metabonomics approach has been used to investigate the protective effect of the optimized rhubarb aglycone on rats of cerebral ischemia–reperfusion.

Materials and methods

Male Wistar rats were divided into four groups: sham operation group, model group, Nimodipine group and the optimized rhubarb aglycone group. Based on ¹H-NMR spectra of plasma and urine, principal component analyses were performed to identify different metabolic markers and explore the changes of associated biochemical pathways. Behavior research and brain histopathology examinations were also performed.

Results

It was showed that the optimized rhubarb aglycone treatment improved neurological deficits, cerebral infarction and neuronal apoptosis. Principal component analysis scores plots demonstrated that the cluster of model rats was separated from those of sham operation group; rats of the optimized rhubarb aglycone group were classified from model group, but the optimized rhubarb aglycone group closed to the sham operation group. Optimized rhubarb aglycone regulated the associated amino acid, energy and lipid metabolisms disturbed in model rats.

Conclusion

Our results suggested that the optimized rhubarb aglycone had protective effect on rats of cerebral ischemia–reperfusion and explored the metabolic regulation mechanism. This work showed that the NMR-based metabonomics approach might be a promising approach to study mechanisms of traditional Chinese medicines.