脂蟾毒配基对人胃癌BGC-823细胞系细胞生长的干预效应

目的:观察中药蟾酥主要成分之一——脂蟾毒配基对体外培养人胃癌BGC-823细胞系细胞生长的干预及其与细胞色素C和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活化的关系。方法:实验于2004-09/2005-12在北京大学医学部细胞生物学系实验室完成。体外培养人胃癌BGC-823细胞系,脂蟾毒配基各组加入不同浓度的脂蟾毒配基(先用二甲基亚砜溶解,再经RPMI-1640培养液稀释至终浓度。细胞增殖及增殖抑制实验、细胞核形态观察及核DNA含量测定实验中脂蟾毒配基浓度分别为0.1,1,10μmol/L;细胞周期分布实验、细胞凋亡率实验、线粒体膜电位实验中脂蟾毒配基浓度分别为0,1,2.5,5μmol/L)。空白对照组加入RPMI-1640培养液。盐酸阿克拉霉素组加入5μmol/L盐酸阿克拉霉素。采用酸性磷酸酶法检测细胞增殖抑制作用;细胞荧光分光光度仪观察细胞核形态及核DNA含量测定;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及其线粒体膜电位变化;Westernblot检测与细胞凋亡相关基因蛋白表达的变化。结果:①经0.1,1,10μmol/L脂蟾毒配基分别作用24,48,72h后,细胞生长显著抑制,脂蟾毒配基对癌细胞的生长抑制百分率与剂量、时间呈正相关,其IC50分别为3.9,2.0,1.5μmol/L。②随脂蟾毒配基作用浓度和时间的延长,癌细胞核荧光强度减弱,细胞核DNA含量明显降低。③0.1,1μmol/L脂蟾毒配基作用24～48h后癌细胞阻滞在S期,5μmol/L脂蟾毒配基作用72h时,细胞阻滞在G2 M期;盐酸阿克拉霉素与癌细胞作用24～48h,细胞阻滞在S期,作用72h时细胞阻滞在G2 M期。④脂蟾毒配基作用后,细胞凋亡率明显高于对照组。⑤脂蟾毒配基引起细胞线粒体膜电位下降,释放入胞质中的细胞色素C增多,促进半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白活化,抑制Bcl-2蛋白表达,诱导细胞凋亡。结论:体外实验条件下,脂蟾毒配基抑制人胃癌BGC-823细胞生长并诱导细胞发生凋亡,其诱导凋亡作用机制与线粒体通路有关。     

脂蟾毒配基对人胃癌BGC-823细胞系细胞生长的干预效应

目的：观察中药蟾酥主要成分之一——脂蟾毒配基对体外培养人胃癌BGC-823细胞系细胞生长的干预及其与细胞色素C和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活化的关系。 方法：实验于2004—09／2005—12在北京大学医学部细胞生物学系实验室完成。体外培养人胃癌BGC-823细胞系，脂蟾毒配基各组加入不同浓度的脂蟾毒配基（先用二甲基亚砜溶解，再经RPMI-1640培养液稀释至终浓度。细胞增殖及增殖抑制实验、细胞核形态观察及核DNA含量测定实验中脂蟾毒配基浓度分别为0．1，1，10μmol／L；细胞周期分布实验、细胞凋亡率实验、线粒体膜电位实验中脂蟾毒配基浓度分别为0，1,2．5，5μmol／L）。空白对照组加入RPMI-1640培养液。盐酸阿克拉霉素组加入5μmoL／L盐酸阿克拉霉素。采用酸性磷酸酶法检测细胞增殖抑制作用；细胞荧光分光光度仪观察细胞核形态及核DNA含量测定；流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及其线粒体膜电位变化；Western blot检测与细胞凋亡相关基因蛋白表达的变化。 结果：①经0．1，1，10μmol／L脂蟾毒配基分别作用24，48，72h后，细胞生长显著抑制，脂蟾毒配基对癌细胞的生长抑制百分率与剂量、时间呈正相关，其IC50分别为3．9，2．0，1．5μmol／L。②随脂蟾毒配基作用浓度和时间的延长，癌细胞核荧光强度减弱，细胞核DNA含量明显降低。③0．1，1μmol／L脂螗毒配基作用24～48h后癌细胞阻滞在S期，5μmol／L脂蟾毒配基作用72h时，细胞阻滞在G2＋M期；盐酸阿克拉霉素与癌细胞作用24～48h，细胞阻滞在S期，作用72h时细胞阻滞在G2＋M期。④脂蟾毒配基作用后，细胞凋亡率明显高于对照组。⑤脂蟾毒配基引起细胞线粒体膜电位下降，释放人胞质中的细胞色素C增多，促进半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白活化，抑制Bel-2蚤白表达，诱导细胞凋亡。 结论：体外实验条件下，脂蟾毒配基抑制人胃癌BGC-823细胞生长并诱导细胞发生凋亡，其诱导凋亡作用机制与线粒体通路有关。     

莫诺苷抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡

目的 研究莫诺苷抑制过氧化氢诱导的神经细胞凋亡作用和机制.方法 培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入莫诺苷1 μmol/L、10/μmol/L、100 μmol/L预孵育24 h,加入H2O2 300～500μmol/L作用18 h,检测神经细胞丙二醛(MDA)、线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡.结果 1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L莫诺苷显著抑制丙二醛增加,降低细胞膜电位,抑制细胞凋亡.结论 莫诺苷能够通过抑制H2O2诱导的SH-SY5Y神经细胞脂质过氧化,降低细胞膜电位来抑制细胞凋亡.     

过氧化氢对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响

目的 观察过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y细胞损伤后对线粒体膜电位的影响.方法 向培养的SH-SY5Y细胞加入H2O2 100、200、500 μmol/L作用24 h诱导产生氧化损伤,应用MTT比色法检测细胞存活率,测定培养液中一氧化氮(NO)含量;并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及线粒体膜电位.结果 与空白对照组...     

亚硒酸钠和三氧化二砷诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡机制的比较

为比较亚硒酸钠（Na2SeO3）和三氧化二砷（As2O3）诱导NB4细胞凋亡的作用机制，本研究应用MTT实验、DNA琼脂糖电泳，细胞内DNA含量检测研究细胞生长抑制和细胞凋亡，用化学发光法，化学比色法检测细胞内活性氧和还原型谷胱甘肽，用流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位，结果显示：5μmol/L亚硒酸钠和1μmol/L三氧化二砷作用24小时后均能诱导NB4细胞凋亡。在诱导细胞凋亡的过程中，亚硒酸钠和三氧化二砷组均伴有细胞内活性氧水平的提高和线粒体膜电位下降，但在亚硒酸钠组还伴有细胞内还原型谷胱甘肽下降，用N乙酰半胱氨酸提高细胞内还原型谷胱甘肽后，增强了硒诱导NB4细胞细胞和氧化应激的作用，但是抑制了砷诱导细胞凋亡和氧化应激的作用。结论：亚硒酸钠和三氧化二砷同样可以诱导NB4细胞的凋亡，但是二的作用机制可能存在差异。     

异土木香内酯通过caspase依赖凋亡途径抑制K562/A02细胞增殖

目的:探讨异土木香内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:选用异土木香内酯0、6.25、12.5、25、50和100μmol/L分别处理K562/A02细胞12、24和48 h,用CCK-8法测定异土木香内酯对K562/A02细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测异土木香内酯对K562/A02细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)、活性氧(reactive oxygen species)及细胞凋亡(apoptosis)的影响;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:异土木香内酯能够明显抑制K562/A02细胞增殖,其作用24 h的IC_(50)值约为(15±1.42)μmol/L(P0.05);流式细胞术检测结果显示,0、10、15、20μmol/L异土木香内酯作用24 h后,细胞凋亡率分别为(1.35±0.52)%、(18.07±4.03)%、(27.53±3.01)%和(34.99±4.91)%(P0.05),同时线粒体膜电位逐渐降低,分别为(96.42±3.59)%、(74.25±6.91)%、(60.97±5.69)%和(31.28±4.95)%;此外,也伴随着细胞内活性氧的增加,分别为(5.03±1.43)%、(17.55±3.85)%、(32.09±3.23)%和(44.38±5.92)%。异土木香内酯能够明显下调BCL-2的表达,上调BAX、cytochrome C、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP的表达。结论:异土木香内酯对K562/A02细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用可能是通过caspase依赖的线粒体途径诱导细胞凋亡而实现的。     

2-甲氧基雌二醇诱导急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡和P53基因表达的研究

目的:研究2-甲氧基雌二醇(2-ME2)诱导急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡及其机制。方法:采用MTT法检测2-ME2对CEM细胞增殖的影响;DNA Ladder法检测2-ME2对CEM细胞凋亡的影响;RT-PCR法和Western blot法分别检测2-ME2对CEM细胞P53基因mRNA和蛋白表达的影响。结果:2-ME2能明显抑制CEM细胞增殖,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为2μmol/L;2μmol/L 2-ME2作用CEM细胞24,48和72 h后,DNA Ladder法检测出DNA密度梯度片段;2μmol/L 2-ME2处理细胞24,48和72 h后,CEM细胞P53基因和蛋白表达均下降,并呈时间依赖关系。结论:2-ME2抗白血病作用主要通过诱导细胞凋亡实现的,其机制与下调P53基因及蛋白表达有关。     

刺参酸性黏多糖对宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表达的影响

目的:研究刺参酸性黏多糖(SJAMP)对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法:体外培养HeLa细胞:采用Hoechst 33258荧光染色检测SJAMP作用前后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测sJAMP作用HeLa细胞后线粒体膜电位(△ψm)的变化,Western Blot检测SJAMP对HeLa细胞作用后凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达.结果:荧光显微镜下可观察到细胞凋亡的形态学改变;与对照组比,各SJAMP浓度组均能降低HeLa细胞的线粒体膜电位;随着SJAMP作用浓度的增加,Bcl-2的表达减少,而Bax基因的表达增加.结论:SJAMP在体外可诱导HeLa细胞凋亡,其凋亡分子机制可能是因为对Bax、Bcl-2表达调控,改变线粒体跨膜电位诱导其凋亡.     

大黄素衍生物对伯基特淋巴瘤细胞株周期、凋亡、NF-κB通路的作用研究

目的:探讨新型大黄素衍生物YX-18对伯基特淋巴瘤(BL)细胞的作用和机制。方法:不同浓度YX-18分别作用BL细胞株CA46和Raji细胞,MTT法检测YX-18对BL细胞株CA46和Raji增殖的影响,Annexin V-PE/7-AAD双染法检测YX-18对CA46和Raji细胞凋亡的影响,PI/RNase染色法检测YX-18对CA46和Raji细胞周期的影响,JC-1法检测YX-18作用后细胞线粒体膜电位的变化及DAPI染色检测细胞凋亡形态,Western blot检测YX-18对NF-κB通路蛋白(P65、P-P65、IκB、P-IκB)在胞浆和胞细胞核中的分布变化,细胞周期相关蛋白P21、CDK2、P-CDK2、Cycling D1、Cycling E1以及凋亡、增殖相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、C-MYC、BCL-2的表达变化,实时荧光定量PCR技术检测YX-18对CA46、Raji细胞的C-MYC、Ki-67的m RNA和Raji(EBV⁺)细胞EBV的EBEA-1、EBER的m RNA表达的影响。结果:大黄素衍生物YX-18能有效抑制BL细胞株CA46和Raji的增殖并呈时间依赖效应(24,48和72 h分别r_CA46=0.89、0.75和0.75,r_Raji=0.87、0.73和0.64)。作用两种细胞24 h的IC50分别为1.77±0.04和1.97±0.22μmol/L。YX-182.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h均出现明显凋亡,与药物浓度呈正相关(r_CA46=0.99,r_Raji=0.92),且两种细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9不同程度被活化。YX-181.0、2.0μmol/L作用CA46细胞24 h及0.5、1μmol/L作用Raji细胞24 h后,两种细胞均明显阻滞在G0/G1期(P<0.01);经过不同浓度YX-18处理两种细胞的周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1、CDK2、P-CDK2表达水平均下降,p21^Waf1/Cip1与对照组相比,表达水平上升。以YX-182.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h后,线粒体膜电位下降(r_CA46=-0.96,r_Raji=-0.99);且DAPI染色可见经YX-18处理后的CA46细胞核固缩、裂解。YX-181.0、2.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h后,随着该药物作用浓度的增高,2株细胞内胞浆和胞核P65均明显降低,细胞内IκB升高,P-IκB、P-P65均明显降低,肿瘤增殖蛋白C-MYC、BCL-2表达水平明显降低。YX-181.0、2.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h,细胞内C-MYC、Ki-67基因m RNA表达水平均明显降低,Raji(EBV⁺)细胞EBNA-1基因m RNA表达水平也明显降低。结论:新型大黄素衍生物YX-18可以显著抑制BL细胞的增殖,同时诱导细胞凋亡并引起细胞周期阻滞。YX-18的作用可能与影响Caspase-分子和C-MYC、Ki-67等增殖凋亡相关分子,抑制NF-κB通路等有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人宫颈癌细胞生长抑制作用及作用途径的探讨

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人乳头瘤病毒(HPV)呈阳性表达的宫颈癌CaSki细胞与HeLa细胞的生长抑制作用及其作用途径。方法在CaSki细胞与HeLa细胞的培养液中添加EGCG后,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测两种宫颈癌细胞的生长曲线;4’,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)荧光标记法观察细胞凋亡的形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测病毒致癌基因E6(HPV E6)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、芳香化酶等蛋白的表达水平。结果 MTT法显示,培养液内添加EGCG能明显抑制CaSki细胞与HeLa细胞的生长,并且呈浓度和时间依赖性;DAPI荧光标记法显示,25μmol/L EGCG作用CaSki细胞和50μmol/L EGCG作用HeLa细胞24h后均呈典型的细胞凋亡形态学改变;Western blot法显示,25μmol/L EGCG作用CaSki细胞和50μmol/L EGCG作用HeLa细胞12、24、48h后,HPVE6、ERα、芳香化酶的蛋白表达量逐渐减低,ERβ的蛋白表达量增加,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。结论 EGCG在体外能有效抑制人宫颈癌CaSki细胞与HeLa细胞的生长与增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调HPVE6、ERα、芳香化酶蛋白的表达量、上调ERβ的蛋白表达量有关。     

Human mononuclear cell modulation of endothelial cell proliferation

Endothelial cell proliferation is a histologic characteristic of several forms of nephritis characterized by infiltration of the glomerulus with mononuclear cells. To investigate the mechanism mediating this event, human endothelial cells isolated from umbilical veins and cultured in vitro were incubated with supernatants of cultured human mononuclear cells. Supernatants from mononuclear cells exerted a dose-dependent stimulatory effect on endothelial cell proliferation. The stimulatory effect of supernatant was almost entirely removed by prior depletion of mononuclear cells of monocytes by adherence, suggesting that a monocyte product was responsible for the activity. To investigate the nature of the ligand responsible, partially purified human interleukin I added to endothelial cell cultures was found to stimulate cellular proliferation.     

胰岛细胞移植过程中细胞受损的提示

背景:胰岛移植后可能发生有害的组织不相容性反应,影响细胞的存活及功能.目的:探讨胰岛细胞移植中早期胰岛细胞的损害程度及原因.方法:采用脑死亡自愿捐赠器官供者的胰腺,采用胶原酶P进行消化分离胰岛细胞,测定不同冷缺血时间下胰岛细胞损害程度.将胰岛细胞与血液进行分组培养,HLA匹配组:受者全血+胰岛细胞,受者全血+胰岛细胞+肝素:错配组:受者全血+胰岛细胞,受者全血+胰岛细胞+肝素;对照组:受者伞血+RPMI1640.观察移植早期可能出现的胰岛细胞损害.结果与结论:胰腺切取顺利,在冷缺血5 h以内胰岛细胞活性率都在80%以上,超过8 h活性胰岛细胞数量只有19%甚至更低.人胰岛暴露于未经抗凝的人血液中,胰岛将诱发一个迅速血细胞消耗.血小板、中性粒细胞和单核细胞计数显示,无论HLA错配还是匹配与对照组相比较血细胞都发牛明显的消耗:加入肝素后HLA错配组及HLA匹配组血细胞消耗反应明显减轻;HLA匹配组胰岛细胞体外培养24 h活性胰岛细胞数量高丁HLA错配组(P<0.05),说明良好组织相容性有利于胰岛细胞存活.结果提示冷缺血时间对胰岛细胞活性的影响很大,在冷缺血时间小于5 h的情况下获取的胰腺可以用于临床胰岛细胞移植的胰腺获取;移植到血液的胰岛细胞会有普遍性的炎症性损害及HLA相关性损害.     

Clear cell renal cell carcinoma

Clear cell RCC is the most common type of RCC that occurs in adults. It has the worst prognosis among the common epithelial tumors of the kidney. Histologically, a wide range of morphologic patterns can be encountered. Those cases with a multi-locular cystic architecture are considered to be a distinct subtype because of the clinicopathologic features.     

Tumor cell growth and cell kinetics

Cancer cells differ from normal cells in many ways, but most importantly by not responding to normal growth-control mechanisms. Whereas the growth and division of normal cells is carefully regulated to meet the needs of the body, tumor cells proliferate autonomously and continually, eventually interfering with and destroying the functions of normal tissue. Knowledge of molecular cell biology has grown exponentially over the last decade. Yet much remains to be understood before there can be a significant impact on our ability to design more effective therapeutic strategies for cancer patients, thereby decreasing mortality.     

急性白血病细胞粘附分子的表达

目的：探讨细胞粘附分子基因在急性白血病的发生和髓外浸润中的作用。方法：运用基因芯片和逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测了25例急性白血病神经细胞粘附分子（NCAM）基因、细胞间粘附分子－1（ICAM－1）基因、血管细胞粘附分子－1（VCAM－1）基因的表达。结果：NCAM、ICAM－1、VCAM－1基因在急性白血病表达显著增高，并且有白血病细胞浸润患者粘附分子的基因表达高于无浸润患者，基因芯片检测结果与RT－PCR结果相同。结论：基因芯片能够为急性白血病的相关基因分析提供特异和可靠的数据。急性白血病的发病和浸润机制可能与骨髓细胞中粘附分子表达升高有关。     

嗅鞘细胞诱导树突状细胞成熟的作用研究

目的体外研究嗅鞘细胞(OEC)调节树突状细胞(DC)成熟的作用。方法从流产人胚胎和健康志愿者外周血浓缩白细胞中分别培养OEC和DC。使用DMEM/F-12(5%FBS)培养基,在24孔板中进行10~3OEC、10~3OEC+10~5DC共培养、10~3OEC/10~5DC分室培养、10~5DC或者10~5DC+1μg/mL LPS。在37℃,5%CO_2条件下孵育,48 h后,分别收集培养上清液和DC,用ELISA试剂检测上清中的TNF-α和IL-12p40的含量,流式细胞仪检测DC成熟的表面标志物CD40、CD80、CD86和HLA-DR的表达水平。结果经过10~(-5)mol/L的阿糖胞苷筛选培养12 d,NGFRp75免疫荧光检测表明OEC纯度达到90%以上,RT-PCR检测OEC表达NGF、BDNF、GDNF。OEC作用于DC能够增强DC分泌TNF-α和IL-12p40的表达,DC成熟表面标志物CD40、CD80、CD86和HLA-DR表达增加;同时,细胞因子和成熟表面标志物在分室培养中表达量增加更为显著。结论 OEC体外可诱导DC的成熟,且这种作用为非细胞接触的作用而是OEC通过分泌的可溶性分子作用结果。     

Basal cell and squamous cell carcinoma

OBJECTIVES: To describe the clinical and histologic subtypes, pathophysiology, recognition, and treatment options for basal cell and squamous cell carcinoma, and the molecular biology of sunlight-induced carcinogenesis. DATA SOURCES: Journal and review articles, research studies, textbooks, and clinical practice. CONCLUSIONS: Basal cell and squamous cell carcinoma will occur in more than one million cases annually in the United States, and are highly curable when detected and treated early. During the last decade, significant progress has been made in elucidating the molecular basis of skin carcinogenesis and in identifying newer approaches for the management and treatment of these keratinocyte cancers. IMPLICATIONS FOR NURSING PRACTICE: Nurses can play crucial roles in decreasing the morbidity and mortality from the skin cancer epidemic by identifying and referring patients with lesions suspicious for basal cell and squamous cell carcinomas.     

White cell related red cell antibodies

Occasional sera react weakly with a few red cells in the antiglobulin phase but without a recognizable pattern. We sought to identify the nature of such antibodies in 27 samples referred to our HLA laboratory for lymphocytotoxin testing. All samples were tested against a panel of 15 red cells by a capillary tube antiglobulin technique developed to conserve sera. This technique correlates well with tube antiglobulin tests, and can be performed with either fresh or thawed red cells. Of 27 sera, 14 contained anti-HLA B7, B17, or A28, since they reacted only with red cells from donors whose lymphocytes were B7, B17, or A28. Eight further sera probably contained anti-B7, -B17, or -A28, but reacted with one or two additional red cells. Two samples agglutinated all panel red cells so the presence of anti-B7, B17, or A28 could not be determined. In three additional sera, lymphocytotoxin testing suggested that specificity other than anti-B7, B17, or A28 was present. Of 27 sera containing weak unidentified red cell antibodies, 22 (81%) contain definite or probable anti-B7, -B17, or -A28. The identity of these troublesome antibodies can be determined by maintaining red cell panels of donors whose HLA phenotypes are known.