血管内皮生长因子及表皮生长因子受体在挫伤兔视网膜中的表达

目的 探讨挫伤兔视网膜中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的变化.方法 健康新西兰兔(普通级)40只,随机分为实验组(36只)和对照组(4只),以自由落体方式,用350 g光滑铅球正面击打正常兔眼,观察对照组和实验组免视网膜伤后不同时间点(伤后2h、1 d、3 d、7 d、14 d、20 d)及EGFR的免疫组织化学变化情况.结果 实验组挫伤兔视网膜中VEGF的表达先轻微下调,再随伤后时间延长而上调,伤后7 d即高于对照组(P＜0.05),20 d时已回落至正常水平,即伤后7 d灰度值为51.05±065,对照组为51.95±0.13(P＜0.05);伤后20 d实验组为51.03±0.69,对照组51.98±0.36(P=0.050 3).EGFR的表达在挫伤后2 h、7 d 2组比较差异无统计学意义.结论 挫伤后,兔视网膜中VEGF表达明显上调,而EGFR变化不大,提示一定强度眼挫伤后,组织细胞以局部修复为主,不出现大范围的细胞增生和分化,也不会产生广泛的新生血管形成.     

bFGF对兔眼视网膜挫伤Müller细胞Vimentin表达的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对兔视网膜挫伤后Müller细胞的影响.方法 26只白兔通过3J能量自由落体的方式制作兔眼挫伤性视网膜病变模型,随机分为bFGF实验组、生理盐水对照组、单纯挫伤组、正常对照组.其中正常对照组2只(4只眼),单纯挫伤组4只(8只眼),bFGF实验组和生理盐水对照组各10只(20只眼).bFGF实验组每2d玻璃体腔内注射bFGF 2μg (10μL),生理盐水对照组注射生理盐水10μL.采用免疫组织化学染色检测视网膜挫伤后3h,1、3、7、14d各时间点Müller细胞波形蛋白(Vimentin)的表达.结果 bFGF实验组视网膜Müller细胞Vimentin的表达高于生理盐水对照组,且呈上升趋势,两组比较各时段差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 bFGF可以增强视网膜Müller细胞Vimentin的阳性表达,加速Müller细胞的活化,促进损伤修复.     

壳聚糖膜在眼眶外伤早期修复中的作用

目的 探讨壳聚糖膜在眼眶损伤的早期修复中对软组织粘连的预防作用及其对视神经组织病理学结构和视功能的影响.方法 采用自身对照方法.取成年家兔10只,右眼为实验组,左眼为对照组.在上直肌与对应眼眶骨膜间人为制造创伤,实验组在创面问植入医用壳聚糖膜,对照组不做任何处理.每只兔眼术前和术后第6天行闪光视觉诱发电位(F-VEP)检查,并分别观察两组兔眼眼眶组织的粘连程度、炎性反应程度、转化生长因子(TGF)-β免疫组织化学染色情况.采用秩和检验和t检验进行统计学分析.结果 F-VEP检查术后P1波平均振幅为(9.847±2.320)mV,平均潜伏期为(71.700±5.144)ms,与术前比较,两者差异均无统计学意义(t=0.974,0.228;P＞0.01).粘连程度评分结果为对照组2分1只眼,3分5只眼,4分4只眼;实验组1分7只眼,2分3只眼,两组比较差异有统计学意义(T=59.00,P＜0.01).炎性反应程度评分结果为对照组1分2只眼,2分4只眼,3分4只眼;实验组1分6只眼,2分4只眼,两组比较差异有统计学意义(T=59.00,P＜0.01).TGF-β免疫组织化学染色结果显示对照组染色呈强阳性,实验组染色呈弱阳性.结论 医用壳聚糖膜可减少胶原纤维合成,在眼眶软组织损伤的早期修复中具有抑制粘连的作用.     

婴幼儿先天性白内障术后视功能评价

目的 综合评价婴幼儿先天性白内障术后的视功能发育情况.方法 为回顾性系列病例研究.将先天性完全白内障患儿41例(62只眼)按年龄分为4组.A组:＜0.5岁,13例(20只眼);B组:≥0.5且＜1岁,11例(16只眼);C组:≥1岁且＜2岁,9例(15只眼);D组:≥2岁,8例(11只眼).均施行白内障吸除及双撕囊联合前段玻璃体切除手术,术后3 d使用Mini刺激器行闪光视觉诱发电位(F-VEP)检查,术后1周用维视顿视功能治疗和检查系统评价视力情况,随后配戴合适框架眼镜,遮盖健眼进行增视训练,12周后再次使用Mini刺激器行F-VEP检查以及视力检查.结果 4组患儿增视功能训练12周后的P100潜伏时分别为(90.28±1.59)、(111.30±1.59)、(125.28±1.97)、(147.87±1.46)ms,与术后3 d[(144.61±2.25)、(150.05±1.92)、(153.89±1.12)、(164.15±1.48)ms]比较明显缩短(t=43.75,32.77,31.61,65.04;P＜0.01).4组患儿增视功能训练12周后P100振幅分别为(12.65±0.25)、(10.56±0.05)、(9.06±0.40)、(8.71±0.02)Μv,与术后3 d[(3.41±0.06)、(4.60 ±0.10)、(4.70±0.27)、(5.00±0.01)Μv]比较明显增加(t=-376.05,-91.64,-507.77,-399.41;P＜0.01).视力检查亦显示,增视功能训练12周后视力(0.471 ±0.021、0.462 ±0.033、0.410±0.027、0.390 ±0.033)较术后1周(0.112±0.0127、0.107 ±0.013、0.117 ±0.014、0.120±0.014)明显提高(t=20.983,10.607,15.036,7.488;P＜0.05),且年龄段越小其视功能恢复越好,以A组患儿视功能恢复情况最好.结论 先天性白内障患者应尽早行手术治疗,术后配戴合适眼镜以及合适的增视功能训练,对于患者视功能的发育及重建具有重要意义.     

p21WAF1/CIP1在兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变发生和发展中的抑制作用

背景 p21是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂,能阻止细胞从G1期进入S期,抑制细胞增生,研究认为内源性p21表达的动态变化可能与细胞增生性病变有关.外伤性增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是眼部增生性反应相关性疾病,了解PVR过程中p21表达的动态变化可能为PVR的靶向治疗提供依据.目的 检测p21WAFl/CIP1在兔外伤性PVR中的动态变化,探讨其在外伤性PVR发病机制中的作用.方法 选取青紫蓝兔54只,采用随机数字表法将实验兔随机分为正常对照组(6只)和造模后7、14、21和28 d组(每组12只),每只兔任意选取一眼作为实验眼.各模型组兔眼玻璃体腔注射人富含血小板血浆(PRP)0.4 ml,同时于鼻上方角巩膜缘后5 mm处行巩膜外冷冻约5 s,以建立外伤性PVR模型.各组兔眼行眼部B型超声检查以评估建模情况.分别于造模后7、14、21和28 d以过量麻醉法处死实验兔并制备实验眼视网膜组织切片,采用苏木精-伊红染色法检测兔眼视网膜的形态表现,分别采用免疫组织化学染色、Western blot及逆转录PCR(RT-PCR)法检测兔视网膜中p21WAFl/CIP1蛋白及其mRNA的相对表达. 结果 正常对照组兔眼眼前后节均正常,模型组兔造模后1～7 d兔眼玻璃体中增生条索逐渐变粗,可见视网膜皱褶,造模后14d兔眼出现牵引性视网膜脱离,造模后28 d兔眼漏斗状视网膜脱离.视网膜病理组织学检查显示,造模后7d兔眼视网膜表面有增生膜和炎性细胞聚集,造模后28 d可见视网膜呈花瓣形固定皱褶,视网膜结构紊乱.免疫组织化学染色显示,p21WAF1/CIP1蛋白在正常对照组兔眼视网膜神经节细胞层及内核层的细胞核内呈强阳性表达,造模后7、14、21和28 d表达强度减弱,以造模后14d表达量最低.Western blot结果显示,正常对照组和造模后7、14、21和28 d组兔眼视网膜中p21WAF1/CIP1蛋白相对表达量分别为0.74±0.08、0.60±0.05、0.56±0.03、0.74±0.02和0.65±0.04,组间总体比较差异有统计学意义(F=20.55,P=0.00),造模后7d和14d的表达量均明显低于正常对照组和造模后21 d和28 d组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).RT-PCR结果显示,正常对照组和造模后7、14、21和28 d组兔眼视网膜中p21WAF/CIP1 mRNA的相对表达量分别为0.65±0.09、0.57±0.05、0.45±0.04、0.46±0.02和0.47±0.04,总体比较差异有统计学意义(F=18.06,P=0.00),造模后14、21和28 d P21WAF1/C1P1 mRNA的相对表达量均明显低于正常对照组和造模后7d组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 p21WAF1/CIP1在外伤性PVR兔眼视网膜中的动态表达变化与PVR的病程发展过程相吻合,p21可能参与外伤性PVR发生和发展的病理过程,p21WAF1/C1P1表达量的下降与细胞增生的动态变化过程一致,可能促进了PVR的进展.     

氟桂嗪对大鼠视网膜光化学损伤NO水平的影响

目的通过检测氟桂嗪对大鼠视网膜光损伤一氧化氮(nitric oxide,NO)水平的影响来探讨视网膜光损伤的发病机制及药物防护.方法40只S.D(Sprague Dawley)健康大鼠,体重200～220 g,随机分成对照组及实验组、对照组20只平均分配到光照前及光照后24h,6 d,10 d 4个时间点,实验组20只大鼠采取同样的分配方法.光照前12 h对照组大鼠耳缘静脉注入40%聚乙二醇,实验组大鼠耳缘静脉注入氟桂嗪20mg/kg(溶于40%聚乙二醇),光照开始前两组再次分别注入相同剂量的上述两种药物后光照开始,两组共30只大鼠经手术显微镜灯泡连续照射1 h,于光照前及光照后三个时间点急性处死大鼠进行视网膜NO含量的检测.结果对照组视网膜光损伤后NO水平在各时间点均较光照前增高,差异有显著性意义(t=13.17,12.21,11.98,均P＜0.01),实验组视网膜光损伤后各时间点亦较光照前增高,但增高缓慢,光照前24h及6 d差异有显著意义(t=7.03,10.74;均P＜0.01),10 d时差异亦有意义(t=2.90;P＜0.05),实验组与对照组比较,光照前两组差异无意义(t=0.58;P＞0.05),光照后两组间同一时间点比较实验组较对照组NO含量降低,差异有显著意义(t=8.13,5 76,8.88;均P＜0.01).结论氟桂嗪可抑制光化学损伤后NO含量的升高,这对视网膜的光化学损伤可能起到改善作用.     

糖尿病视网膜病变激光光凝前后多焦视网膜电图及光相干断层扫描结果的比较

目的 观察视网膜激光光凝治疗对糖尿病视网膜病变(DR)黄斑区功能和形态变化的影响.方法 30例重度非增生型DR患者40只眼,在视网膜激光光凝治疗前及治疗后2、7、14 d,分别进行多焦视网膜电图(mfERG)及光相干断层扫描(OCT)检查,采用方差分析及t检验对其检查结果进行统计学分析,对比观察激光光凝治疗前后患者黄斑功能及黄斑中心凹厚度的变化情况.结果 激光光凝治疗后2 d,mfERG P1波反应密度在1、3、5环分别为(131.79±50.92)、(37.50±17.27)、(24.07±11.49),与手术前(212.96±53.75)、(46.70±15.89)、(30.91±10.78)比较,差异有统计学意义(t=7.910,2.174,2.205;P＜0.05);NI波反应密度在1环为(60.39±20.69),与治疗前(107.11±44.63)相比,差异有统计学意义(t=5.375,P＜0.01);P1波潜伏期在4环为(41.83±3.41),与治疗前(39.52±2.64)比较,差异有统计学意义(t=-2.770,P＜0.05).治疗后7 d,黄斑中央5°区域P1波、N1波的反应密度有所同升,至治疗后14 d分别上升至(179.70±47.10)、(81.11±34.18),但仍较治疗前(212.96±53107.11±44.63)有显著降低(t=3.840,2.746;P＜0.05);4环的P1波潜伏期在治疗后7 d时为(41.78±3.57),与治疗前(39.52±2.64)相比,仍有显著延迟(t=-3.144,P＜0.01);至治疗后14 d,与治疗前相比差异无统计学意义(t=-1.809,P＞0.05);1环的N1波潜伏期在治疗后7 d时为(20.67±3.85),与治疗前(18.78±3.29)相比,差异无统计学意义(t=-1.171,P＞0.05).激光光凝治疗前,黄斑中心凹厚度为(224.42±122.88),激光光凝后2 d黄斑中心凹厚度与治疗前相比差异有统计学意义(t=-2.420,P＜0.05),治疗后14 d时黄斑中心凹厚度与治疗前相比差异无统计学意义(t=-0.578,P＞0.05).黄斑中央5°区域P1波反应密度与黄斑中心凹厚度在激光光凝前和激光光凝后7 d呈显著负相关(r=-0.755,-0.594;P＜0.05).结论 DR视网膜激光光凝后,黄斑功能出现一定程度的降低,黄斑区视网膜功能与黄斑区组织形态的改变关系密切;mfERG和OCT联合应用可更加全面地对黄斑功能及黄斑断面的组织形态结构进行客观的评价.     

内皮祖细胞在大鼠外伤性视神经损伤中作用的研究

目的 探讨内皮祖细胞(EPC)在大鼠外伤性视神经损伤中的作用.方法 实验研究.采用液压冲击颅脑损伤仪制作外伤性视神经损伤动物模型,108只大鼠(108只眼)采用随机数字表法随机分为视神经损伤组和假手术对照组,每组54只;两组按照损伤前24h及损伤后3、12、24、48、72 h、1、2、3周时间点随机分为9个亚组,每个亚组6只.测定各组上述时间点外周血EPC数量并观察视神经HE染色、血管内皮标志物CD31免疫组织化学染色及闪光视觉诱发电位(F-VEP)变化.视神经损伤组与假手术对照组同一时间点的比较采用独立样本t检验;不同检测项目间的相关性分析采用Pearson积差相关检验.结果 正常大鼠外周血EPC数量为(46 ～52)个/200 000单个核细胞,大鼠外伤性视神经损伤后3、12、24、48、72 h及1、2、3周外周血EPC计数分别为(34±4、34±5、69±9、76±6、107±9、69±7、58 ±6、56±4)个/200 000单个核细胞,视神经损伤组与假手术对照组比较,3、12、24、48、72 h、1、2周时间点差异有统计学意义(t=5.29,2.90,-4.30,-7.61,- 14.17,-5.74,-2.79;P ＜0.05).正常大鼠视神经及周围组织CD31+细胞数为(7～9)个/5个高倍视野,视神经损伤后创伤区CD31+细胞计数分别为(8.36±1.52、7.17±1.10、10.41±1.92、11.43 ±1.58、14.29±2.03、17.33±1.47、17.86±1.22、18.13±1.40)个/5个高倍视野,视神经损伤组与假手术对照组比较,48、72 h、1、2、3周时间点差异均有统计学意义(t=4.31,-7.61,-8.17,- 10.08,- 10.79;P＜0.05).正常大鼠视神经及周围组织微血管数量为(6～9)个/5个高倍视野,视神经损伤后损伤区微血管数量分别为(7.54±2.01、8.52±2.21、11.02±1.62、15.40±2.04、18.39±1.96、23.21±1.50、22.78±2.40、24.13 ±2.51)个/5个高倍视野,视神经损伤组与假手术对照组比较,48、72 h、1、2、3周时间点差异均有统计学意义(t=4.25,-7.74,-8.26,- 10.28,-11.49;P＜0.05).视神经损伤后F-VEP中P波潜伏期于损伤后3h降低,24h反弹增高到正常水平以上,并趋于稳定,视神经损伤组与假手术对照组相比,3、12、24、48、72 h、1、2、3周差异均有统计学意义(=4.15,3.74,5.84,6.08,6.40,6.52,6.53,6.61;P ＜0.05);F-VEP中振幅于3h降低,12 h升高到接近基础水平,24h后逐渐降低至基础水平以下,实验组与对照组比较,3、24、48、72 h、1、2、3周差异有统计学意义(t=3.95,4.14,5.26,5.78,6.49,6.72,6.23;P＜0.05).外周血EPC数量变化与创伤区周围CD31+细胞、微血管及F-VEP变化存在相关性(r=0.43,0.41,0.43;P＜0.01).结论 外伤性视神经损伤后外周血内皮祖细胞明显增加,归巢到创伤区,参与了创伤区血管新生和组织损伤修复.     

高原环境吸氧对兔视网膜脑红蛋白表达的影响

目的 探讨高原环境下吸氧对免视网膜脑红蛋白(neuroglobin,NGB)表达水平的影响.方法 在高原环境下将30只北京青紫蓝兔分为吸氧组(实验组)及非吸氧组(对照组),每组各15只.分别于吸氧后12 h、1 d、3 d、7 d及14 d摘除眼球,40 g·L-1多聚甲醛固定,石蜡包埋切片,免疫组织化学检测2组兔NGB表达水平.结果 实验组兔吸氧后12 h、1 d、3 d、7 d、14 d NCB的平均灰度值分别为175.32±2.82、170.81±1.35、161.89±1.16、157.79±2.57、184.11±1.88,对照组相同时间点分别为168.86±1.57、159.65±2.79、152.13±0.39、139.57±1.83、153.09±0.76.实验组兔在吸氧后12 hNGB的表达与对照组差异无统计学意义,吸氧后1 d、3 d、7 d及14 d NGB的表达较对照组弱,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).各时间点实验组氧饱和度值均高于对照组,吸氧后1 d、3 d、7 d时2组间差异均有统计学意义(均为P＜0.05),3 d时最明显.结论 高原环境下吸氧可降低NGB的表达,促进视网膜缺氧损伤修复.     

外源性小鼠干扰素诱导蛋白-10抑制实验性角膜新生血管的作用机制

背景 干扰素诱导蛋白-10(IP-10)作为趋化因子调节免疫炎症反应方面的作用已被证实,但最近的研究发现其在抑制新生血管生成方面发挥一定的作用.角膜新生血管(CNV)的形成与多种血管新生相关因子有关,IP-10对CNV形成的作用及机制尚不明确. 目的 探讨外源性小鼠IP-10点眼对角膜碱烧伤诱导CNV形成的作用.方法 选用SPF级BALB/c小鼠82只,并按随机数字表法分组.采用浸润1 mol/LNaOH的滤纸贴附于左眼角膜中央40 s的方法制作角膜碱烧伤小鼠模型,角膜碱烧伤后1d及7d开始局部应用IP-10共7d分别作早期点眼组10只眼和中晚期点眼组5只眼,各自的模型对照组均给予质量分数0.2％透明质酸钠(HA)点眼(分别为11只眼和6只眼).早期点眼组于造模后2周,中晚期点眼组于造模后3周取角膜组织以CD31免疫荧光标记法比较模型对照组及实验组的CNV面积.收集早期IP-10碱烧伤后2d及4d小鼠的角膜组织,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并比较各组小鼠角膜组织中趋化因子受体3(CXCR3)、血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达情况.所有实验动物的使用、饲养及处死均按照视觉及眼科学研究协会的有关规定及苏州大学的《实验动物管理及使用指南》进行.结果 模型对照组小鼠CNV占角膜面积的比例为(88.67±10.22)％,IP-10早期点眼1周组小鼠CNV占角膜面积的(70.06±12.21)％,差异有统计学意义(t=3.77,P=0.00).角膜碱烧伤后21 d,模型对照组小鼠CNV占角膜面积的比例为(87.33±13.47)％,IP-10中晚期点眼1周组CNV占角膜面积的(86.56±12.47)％,差异无统计学意义(t=1.260,P＞0.05).IP-10早期点眼2d和4d的小鼠角膜组织中CXCR3的表达较模型对照组同期值明显升高(t=3.13、3.07,P＜0.05)、VEGF表达降低(t=5.99、6.27,P＜0.01)、TGF-β1表达降低(t=8.50,P＜0.01;t=4.53,P＜0.05).结论 角膜碱烧伤后外源性IP-10蛋白早期干预可通过上调CXCR3和下调VEGF及TGF-β1的表达抑制CNV的形成,中晚期干预不能减少角膜碱烧伤诱导的CNV.     

Caspase-3抑制剂Z-DEVD—FMK对兔外伤性视神经的保护作用

目的观察caspase-3抑制剂Z—DEVD—FMK对兔外伤性视神经损伤后的神经保护作用。方法中国纯种大耳白兔104只,从中随机选取8只兔（16只眼）作为空白对照组（N组,不作任何处理）,其余96只（192只眼）作为实验组,实验组再分为玻璃体腔注射组和眼周注射组．每组48只（96只眼）。玻璃体腔注射组中每只兔的右眼为caspase-3抑制剂注射组（A组）,左眼为玻璃体腔DMSO液注射组（B组）。眼周注射组中每只兔的右眼为球周caspase-3抑制剂注射组（C组）,左眼为球周DMSO液注射组（D组）。又根据给药后不同的观察时间将每组分为1d组、4d组、7d组、10d组、14d组、21d组六个亚组,每个亚组8只眼。应用液压冲击颅脑损伤仪（fluid percussion brain ijury device,FPI）建立免视神经损伤动物模型,分别于术后第1、第4、第7、第10、第14、第21天进行闪光视觉诱发电位（flash—visual evoked potential．F—VEP）、眼眶核磁共振（nuclear magnetic resonance imaging,MRI）检查,并应用TUNEL技术检测视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell,RGC）的凋亡。数据采用SPSS12．0统计软件,行单因素以及析因方差分析。结果①F—VEP：在术后第7、第10、第14和第21天,A组和C组的主波潜伏期逐渐缩短．振幅逐渐升高．与B组和D组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。A组和C组主波潜伏期在术后第4天虽然仍在延长,但与B组和D组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,A组伤后第21天的潜伏期和振幅分别为（65．46±6．97）ms和（6．75±2．75）mV,C组分别为（72．06±6．57）ms和（6．02±1．98）mV．两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。空白对照组潜伏期和振幅与其他各组的相应时间点比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。②MRI：A组和C组的视神经MRI可见,伤后第7天粗大的视神经开始消退,至第14、第21天水肿     

A new and reliable animal model for optic nerve injury

Objective: To create an animal (rat) model of force percussion injury (FPI) to the optic nerve for clinical and experimental research. Methods: Seventy-one healthy female Wister rats, with no ocular disorders, were used in this study. Sixty-six rats were subjected to bilateral blunt trauma to the eyes via FPI; five rats were not subjected to trauma. According to the degree of optic nerve injury, injured eyes were divided into two groups: severe optic nerve injury group, with beat pressures of 699.14 ± 60.79 kPa and mild optic nerve injury group, with beat pressures of 243.18 ± 20.26 kPa. Eight rats were examined using flash visual-evoked potential (F-VEP) monitoring and magnetic resonance imaging (MRI) before, 1 and 3 days, and 1, 2, 4, 6, and 8 weeks after optic nerve injury. Fifty-six rats were examined by histopathology and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) assay for apoptosis at 1 and 3 days, and 1, 2, 4, 6, and 8 weeks after optic nerve injury. Two rats were examined by transmission electron microscopy (TEM) 4 and 8 weeks after optic nerve injury. The presence or absence of optic nerve injury was evaluated in all trauma eyes. Results: Latency was prolonged in the severe injury group compared with controls 1 day after optic nerve injury (p < .05). Amplitude decreased during the first 2 weeks after optic nerve injury (p < .05) and then stabilized (p > .05). Latency was prolonged in the mild optic nerve injury group compared with controls 1 day after optic nerve injury (p < .05) Amplitude decreased during the first 4 weeks (p < .05) following injury and then stabilized (p > .05). As measured by MRI, an abnormally high signal was seen 1 day after injury and remained significantly high 8 weeks after injury. A ruptured capillary was detected in the ganglion cell layer (GCL) 1 day after injury. Acellular regions in the ganglion cell layer were observed 4 weeks after optic nerve injury. TUNEL-positive cells were present in each layer of the retina 3 days after injury. The number of TUNEL-positive cells began to increase 1-2 weeks after injury, and then gradually decreased 4 weeks after injury (p < .05). Conclusion: We successfully created a reproducible experimental animal (rat) model of optic nerve injury using FPI. Optic nerve injury was demonstrated by F-VEP and MRI, and confirmed histologically. Our model is a simple, reliable, reproducible, and stable tool for use in investigations on the mechanism(s) of and treatment for optic nerve injury.     

活化的巨噬细胞在外伤性视神经损伤修复中的作用

　　目的　探讨活化的巨噬细胞在视神经损伤修复中的作用。方法　选取112只健康新西兰大耳白兔作为实验动物,按随机数字表法随机分为实验组和对照组,每组各56只,按照不同观察时间点（1、4、7、10、14、21、28 d）每组分为7个亚组,每亚组8只。用液压冲击颅脑损伤仪（FPI）建立外伤性视神经不完全损伤联合晶体损伤模型作为实验组,外伤性视神经不完全损伤模型作为对照组。应用闪光视觉诱发电位（FVEP）分析并比较实验组、对照组建模前及建模后不同时间点视神经功能变化情况,组织病理学方法观察并比较实验组、对照组建模后视网膜组织中巨噬细胞及神经节细胞变化情况。结果　建模前,实验组FVEP P₁₀₀波潜伏时为（42.74±5.83） ms,振幅为（7.98±2.15）μV。建模后1 d,实验组FVEP P₁₀₀波潜伏时为（103.91±10.89） ms,较建模前延长,差异有统计学意义（t=-8.464,P=0.000）;振幅（6.39±2.19） μV,较建模前降低,差异有统计学意义（t=-2.094,P=0.000）。建模后10 d,实验组P₁₀₀波潜伏时最长,之后逐渐恢复（F=35.894,P=0.000）。建模后7 d,实验组P₁₀₀波振幅最低,之后逐渐回升(F=6.594,P=0.000）。组织病理学检查显示,建模后1 d,实验组视网膜、视神经未见活化的巨噬细胞,之后逐渐增多,10 d时到达高峰（91.25±6.91）,之后又逐渐减少,差异有统计学意义（F=21.277,P=0.000）;建模后1 d,实验组视膜未出现神经节细胞轴突再生,7 d时出现,平均值为6.38±1.85,之后逐渐增多,28 d时到达高峰,平均值为49.63±2.50,差异有统计学意义（F=7.711,P=0.000）。结论　视神经不完全损伤联合晶状体损伤后,视神经可逐渐修复,活化的巨噬细胞在视神经不完全损伤修复中起着重要的作用。      

笃斯越橘对兔眼光损伤前后视网膜电流图及组织结构的影响

目的 探讨笃斯越橘对兔眼光损伤前后视网膜电流图(ERG)及组织结构的影响.方法 对照实验研究.采用随机数字表法将35只青紫蓝兔分为5组,每组7只兔.各组自由进食、摄水,对A、D组兔加用笃斯越橘匀浆.4周后,在光镜下观察D、E组兔视网膜组织学结构变化并测量光感受器细胞外核层(ONL)厚度及凋亡指数(AI);按照国际临床视觉电生理学会标准化方案确立的最大混合反应ERG及振荡电位(Ops)对A、B、C组兔视网膜进行检测.随后进行光损伤照射.照射后A组停用笃斯越橘,C组加用笃斯越橘,B组保持不变.在光照后1 d、1和2周进行ERG检测.检测完毕,取A、B、C组兔视网膜进行组织学分析.对各组兔视网膜ERG潜伏期、振幅、ONL厚度及AI值比较采用双因素及单因素的方差分析,进一步两两比较采用LSD检验法.结果 (1)最大混合反应ERG检测结果:A组饲养4周后,潜伏期:a波(14.079±0.841)ms,b波(35.629±6.865)ms;振幅:a波(83.936±10.807)μV,b波(280.931±27.807)μV.A组光照2周后,潜伏期:a波(15.571±1.087)ms,b波(38.915±7.683)ms;振幅:a波(66.478±9.709)μV,b波(245.887±11.797)μV.B组饲养4周后,潜伏期:a波(15.635±1.661)ms,b波(42.985±3.164)ms;振幅:a波(69.331±12.355)μV,b波(197.331±16.157)μV.B组光照2周后,潜伏期:a波(18.783±1.966)ms,b波(52.322±4.784)ms;振幅:a波(57.562±8.217)μV,b波(159.569±17.859)μV.C组饲养4周后,潜伏期:a波(15.115±0.940)ms,b波(43.242±4.662)ms;振幅:a波(72.812±4.403)μV,b波(207.815±14.373)μV.C组光照2周后,潜伏期:a波(15.957±2.154)ms,b波(44.081±9.506)ms;振幅:a波(66.804±8.755)μV,b波(186.271±29.349)μV.A、B、C组间最大混合反应ERG在饲养4周后及光照2周后差异有统计学意义(潜伏期a波:饲养4周后F=6.057,P＜0.05;光照2周后F=13.296,P＜0.05.潜伏期b波:饲养4周后F=9.949,P＜0.05;光照2周后F=11.145,P＜0.05.振幅a波:饲养4周后F=8.468,P＜0.05;光照2周后F=4.844,P＜0.05.振幅b波:饲养4周后F=70.194,P＜0.05;光照2周后F=62.161,P＜0.05);3组间ΣOPs值振幅差异有统计学意义(饲养4周后F=17.482,P＜0.05;光照2周后F=11.748,P＜0.05).进一步两两比较,显示光照前最大混合反应ERG振幅B组的a、b波及C组的a、b波均低于笃斯越橘饲养4周后的A组(B组的a波、b波振幅与A组比较:P=0.003,0.000;C组的a波、b波振幅与A组比较:P=0.001,0.000);光照1 d、1和2周后,A组的振幅b波较同期B组均明显升高(均P=0.000);光照后随用药时间延长,C组ERG检测值逐渐改善;光照2周后,C组较B组的b波潜伏期缩短,振幅提高(潜伏期P=0.008,振幅P=0.007).(2)视网膜组织学观察结果:光照前在光镜下观察兔视网膜组织,D、E组兔视网膜结构形态正常,光感受器细胞内外节排列整齐规则.B组视网膜结构排列紊乱,有光感受器细胞外节碎解.A、C组视网膜结构改变介于D、E和B组之间.各组间ONL厚度差异有统计学意义(F=330.506,P＜0.05).(3)各组间AI值差异有统计学意义(F=230.126,P＜0.05);B组AI值为(10.960±1.534)%,较各组明显增高(均P=0.000);D组AI值为(1.817±0.203)%,小于E组(P=0.000).结论 笃斯越橘对于暴露于正常昼夜日光交替下的兔视网膜有减少细胞凋亡、减轻光化学损伤的作用;预防性地使用笃斯越橘能明显降低光损伤的程度;光损伤后应用笃斯越橘有助于视网膜组织的修复.     

氢饱和生理盐水对视神经挫伤大鼠闪光VEP的影响

【摘要】 目的 探讨氢饱和生理盐水对视神经挫伤大鼠视觉功能的保护作用。设计 实验 性研究。研究对象 健康成年雄性SD大鼠12只。方法 12只SD大鼠随机分为氢饱和生理盐水组和对照 组,每组6只,均选取左眼作为实验眼,右眼作为正常对照。利用压力恒定的无创反向镊在大鼠视 神经球后2 mm处夹持10 s建立视神经挫伤模型。氢饱和生理盐水组大鼠按5 ml/kg/d氢饱和生理盐 水腹腔注射,对照组大鼠按照相同剂量给予生理盐水腹腔注射,连续2周。在夹伤前及夹伤后1、3 、5、7、9、11、14天分别检测大鼠左眼F-VEP,观察P1波的峰时值及振幅的变化。主要指标 F-VEP 的P1波峰时值和振幅。结果  损伤后第1天,P1波峰时值氢饱和生理盐水组和对照组分别为（88.61 ±2.81）ms和（88.33±1.51）ms,与损伤前的（72.45±1.47）ms和（72.44±1.03）ms相比,差 异均有统计学意义（P均＜0.01）。损伤后第3天,氢饱和生理盐水组大鼠的P1波峰时值缩短为 （80.28±1.25）ms,到损伤后14天一直在该水平范围波动,而对照组大鼠的P1波峰时值为（88.61 ±1.20）ms,各时期的氢饱和生理盐水组大鼠与对照组大鼠的P1波峰时值相比明显缩短,差异均有 统计学意义（P均＜0.001）。  结论 氢饱和生理盐水能够改善大鼠视神经挫伤后F-VEP的峰时值延 长,对其视觉传导功能起到一定的保护作用。（眼科, 2012, 21： 409-413）     

超声微泡造影剂介导脑源性神经营养因子联合转染视网膜和视皮质对视神经损伤后视网膜神经节细胞的保护作用

　　目的　观察超声微泡造影剂介导脑源性神经营养因子（BDNF）联合转染大鼠视网膜和视皮质区细胞对视神经损伤后视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用。方法　雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠88只随机分为正常组（A组）、假手术组（B组）、空白对照组（C组）、单纯眼转染组（D组）、单纯脑转染组（E组）、联合转染组（F组）;A组8只大鼠,B～F组每组16只大鼠。建立钳夹视神经损伤模型,将B～F组大鼠随机分为视神经损伤1、2周亚组,各亚组8只大鼠。B、C组玻璃体腔和视皮质区分别注射磷酸盐缓冲液（PBS）,D、E组玻璃体腔和视皮质区分别注射BDNF质粒（pBDNF）微泡造影剂悬液,F组玻璃体腔和视皮质区同时注射pBDNF微泡造影剂悬液。D～F组注射pBDNF微泡微泡造影剂悬液后,立即用超声辐照相应转染部位。视神经损伤后1、2周,各组行逆行荧光金标记RGC计数;半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3）蛋白免疫组织化学染色,观察其阳性表达情况;图形视网膜电流图（PERG）检测,记录N95振幅。结果　荧光金标记RGC结果显示,各组均可见金黄色荧光散布于视网膜定向铺片上。A~F组间RGC计数差异有统计学意义（F=256.30,P＜0.01）;B~F组视神经损伤1、2周亚组间RGC计数差异也有统计学意义（F=6518,P＜0.01）。光学显微镜观察发现,A、B组大鼠视网膜均未见caspase-3蛋白阳性表达;C~F组均可见主要位于神经节细胞层的caspase-3蛋白阳性表达。PERG检测发现,A~F组间N₉₅振幅差异有统计学意义（F=121.56,P＜0.01）;B~F组视神经损伤1、2周亚组间N95振幅差异也有统计学意义（F=8238,P＜0.01）。结论　超声微泡造影剂介导BDNF联合转染视网膜和视皮质区细胞能抑制视神经损伤后RGC凋亡,提高RGC存活数,保护其视功能。      

急性高眼压模型兔眼不同眼压状态下视神经轴浆运输的改变

目的 观察急性高眼压模型兔眼不同眼压状态下视神经轴浆运输的改变。方法 成年新西兰大白兔24只,分为眼压20、30、40 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)组和眼压为10～15 mm Hg的对照组,每组均为6只兔。采用前房穿刺灌注法联合压力持续监测法建立急性高眼压模型。实验开始时,兔眼玻璃体腔中注射罗丹明异硫氰酸(RITC)标记轴浆运输。持续3h高眼压后,过量麻醉处死兔后取下视神经。荧光显微镜下观察视神经轴浆运输情况的改变。采用德国Leica公司Q500IW图像分析软件对RITC进行灰度定量分析,并对各眼压组平均灰度值和筛板前、筛板区、筛板后350 μm区域灰度值进行统计学分析处理。结果 RITC在视神经中心呈顺行标记染色。不同眼压组轴浆运输情况不同,随着眼压升高,轴浆运输能力减弱,差异有统计学意义(F=159.3,P＜0.05)。筛板前区,各眼压组间灰度值比较,差异无统计学意义(F=0.2545,P＞0.05)。40 mm Hg组灰度值与对照组灰度值比较,在筛板区（t=5.684）和筛板后350 μm区域（t=5.124）差异均有统计学意义(P＜0.05);20、30 mm Hg组灰度值与对照组灰度值比较,差异无统计学意义(t=1.747,P＞0.05)。结论 眼压40 mm Hg持续3h将导致视神经轴浆运输改变,轴浆运输障碍部位以筛板区及以后的区域为主。     

大鼠视神经损伤后视网膜小胶质细胞表达的初步观察

目的 研究大鼠视神经损伤后视网膜中小胶质细胞的表达情况.方法 实验研究.选取30只成年雌性健康SD大鼠,按照随机数字表法分为实验组和对照组各15只,分别用于细胞计数、免疫组织化学及免疫印迹实验.实验组在眼球后约1.5 ～2.0 mm处行右眼视神经鞘内切断术,术后5d于视神经断端处用荧光金逆行标记视网膜节细胞,手术后7d处死取材.对照组小鼠右眼行视神经切断术并标记,2d后处死取材.视网膜做铺片用于计数.用免疫组织化学法于视网膜切片上行小胶质细胞的表面标记物Iba-1染色,观察小胶质细胞的形态及数量,同时应用免疫印迹法检测视网膜内Iba-1蛋白含量的变化.两组间比较采用非配对student t-检验进行统计学分析.结果 对照组视网膜中有少量小胶质(Iba-1阳性)细胞表达,并呈非活化状态.视神经切断7d后小胶质细胞明显增多且呈半活化状态,免疫印迹结果显示损伤后Iba-1蛋白表达量明显增加到对照组的2.3倍(t=7.669,P=0.001).视视神经切断7d后节细胞数量为(1182±64)个/mm2,明显减少至对照组的51％(t=23.850,P＜0.01).结论 大鼠视神经损伤后小胶质细胞表达增多且呈部分激活状态,可能是视网膜受损后自我保护的表现之一.     

樟柳碱联合地塞米松治疗对大鼠视神经挫伤后F-VEP和ERG的影响

目的:观察SD大鼠视神经挫伤后樟柳碱(anisodine,AT3)联合地塞米松(dexamethasone,Dex)治疗对闪光视觉诱发电位(flash visual evoked potential,F-VEP)和视网膜电图(electroretinogram,ERG)的影响。方法:成年雌性SD大鼠30只,均以左眼为实验眼,采用随机数字法分为A,B,C共3组,利用压力恒定的无创反向镊夹持大鼠视神经6s建立视神经挫伤模型,A组建立模型前1d开始每日给予尾静脉注射0.25mL(0.5mg)Dex,同时左眼球后注射0.25mLAT-3;B组尾静脉注射同A组,但球后注射生理盐水;C组静脉及球后均给予生理盐水。记录并比较3组大鼠建模前及建模后0.5,1,7,14d的F-VEP的P1波和ERG的b波振幅和峰潜时变化。结果:C组视神经损伤0.5d后,F-VEP振幅值降低与正常相比有显著性差异,峰潜时在1d后与正常相比有统计学意义,并且在观察时间内随时间其峰潜时和波幅呈进行性下降。B组在7d后F-VEP振幅值明显高于与对照组(P=0.031),峰潜时短于对照组(P=0.012),C组在7d后F-VEP振幅值明显高于对照组(P=0.042),峰潜时短于对照组(P=0.019)。结论:AT3联合Dex对大鼠视神经挫伤后神经传导功能的恢复较单纯应用Dex明显。