Smad1、Smad5在肾阳虚不育大鼠睾丸中表达的研究

目的: 观察Smad1、Smad5在腺嘌呤诱导的肾阳虚不育大鼠睾丸中的表达,探讨肾阳虚不育的病理机制,为防治男性不育提供可靠的实验依据。　方法: 60d雄性SD大鼠 48只,随机分为 6组(肾阳虚 7、14、21d组;正常对照7、14、21d组),每组 8只。以腺嘌呤 300mg/kg给大鼠灌胃,诱导肾阳虚不育大鼠模型,于灌胃第 7、14、21d,用免疫组化SABC法测定Smad1、Smad5在其睾丸中的表达。　结果: Smad1表达见于所有正常对照组及模型组大鼠睾丸各级生精细胞的胞质内,支持细胞及间质细胞未见表达;灌胃第 7、14d与正常对照组相比差异无显著性(P>0. 05),第 21d的表达较正常对照组及第 7、14d明显减弱(P<0. 05)。Smad5表达见于正常对照组及腺嘌呤灌胃第 7d大鼠睾丸的初级精母细胞及精原细胞的胞核内,两组比较差异无显著性(P>0. 05),其余各级生精细胞、支持细胞及间质细胞均未见表达;灌胃第 14、21d大鼠睾丸中未见Smad5表达。　结论: 肾阳虚大鼠睾丸中Smad1表达的减弱及Smad5的无表达,可能是导致其不育的病理机制之一。     

Ces5a基因在大鼠睾丸中的表达

目的:分析羧酸酯酶5a (Ces5a)基因在大鼠睾丸发育过程中的表达情况。方法:选取3组不同窝别出生后2、4、6、8、10、12、14、15、16、20、25、29、30、31、35、40、45、50、55、60、65 d 21个时间点的大鼠,采用RT-PCR、Western印迹、免疫组化、HE染色分别检测大鼠睾丸组织中Ces5a基因在mRNA转录水平和蛋白表达量及定位。结果:①Ces5a mRNA在大鼠出生后的第2～65天均有表达,大鼠出生后2～12 d Ces5a mRNA的表达量较低;与2～12 d相比,14～16 d的表达量下降至最低水平(P0.05);与14～16 d相比,20～35 d该表达量有显著升高(P0.05);与20～35 d相比,40～65 d的表达量有显著升高,达到高峰(P0.05)。②Ces5a蛋白在大鼠出生后第2～65天均有表达,在大鼠出生后2～12 d Ces5a蛋白的表达量较低;与2～12 d相比,14～16 d Ces5a蛋白的表达量无显著变化(P0.05);与14～16 d相比,20～35 d的表达量有显著升高(P0.05);与20～35 d相比,40～65 d的表达量无显著变化(P0.05)。③Ces5a蛋白表达于精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞。结论:①Ces5a基因可能参与了大鼠精原细胞增殖过程及减数分裂过程;②Ces5a基因可能在圆形精子发生和精子变形过程中发挥特殊的作用。     

TGF-β1、Smad7在甲状腺癌中的表达和意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其相关蛋白Smad7在甲状腺乳头状癌及滤泡状癌中的表达及临床病理意义。方法采用免疫组化SP法,对79例甲状腺癌及癌旁组织中TGF-β1、Smad7蛋白的表达进行检测。结果TGF-β1、Smad7蛋白表达率在癌旁组织分别为20%、16%,在甲状腺癌中为68.35%、72.15%,两者差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、组织类型的甲状腺癌中二者表达差异无统计学意义,而在外膜侵犯、淋巴结转移、术后复发组均显著高于对应阴性组(P<0.05),并且差异有统计学意义(P<0.01)。结论TGF-β1、Smad7蛋白的表达在甲状腺癌的发生、发展中有一定作用,同时还与甲状腺癌的生物学行为密切相关,可以作为甲状腺癌诊断的辅助指标,并可能为其治疗方法的选择提供部分依据。     

卵巢切除大鼠椎体松质骨中IL-1β、IL-6免疫组织化学研究

卵巢切除大鼠椎体松质骨中ＩＬ－１β、ＩＬ－６免疫组织化学研究韩利华，王全平，刘建，朱潇玲绝经后骨质疏松症的发病机制目前尚不清楚，研究发现ＩＬ－１、ＩＬ－６等细胞因子参与骨代谢调节。细胞因子主要通过自分泌与旁分泌的方式参与调控骨的吸收与形成，而对骨质疏...     

补肾中药血清对成骨细胞中Smad1/5信号转导蛋白活性的影响

目的研究补肾中药血清对离体SD大鼠成骨细胞中Smad1/5活性的变化。方法采用多次胶原酶消化法获取新生SD大鼠颅盖骨中的成骨细胞进行体外培养,并应用Gomori改良钙钴法对其进行碱性磷酸酶表达的鉴定;随机将实验用大鼠分为正常组、补肾中药组(补肾组)、骨疏康颗粒对照组(骨疏康组)、补中益气颗粒对照组(补脾组);对实验大鼠给药干预8d后,通过血清药理学的方法使用各组大鼠血清培养成骨细胞48h;应用免疫组化SABC方法检测成骨细胞中Smad1/5的活性表达。结果补肾中药血清作用于体外培养的成骨细胞48h后对于成骨细胞的增殖具有明显的促进作用,其效果优于正常组(P<0.01);成骨细胞中Smad1/5的活性表达,与正常组相比有所降低。结论成骨细胞中存在Smad1/5的表达,表明Smad1/5可能有促进成骨细胞分化、增殖的功能,对成骨细胞保持自身功能、维持骨密度的作用上发挥重要的作用。②具有益肾填精壮骨的补肾中药可以影响Smad1/5在成骨细胞中的表达,对于促进和维持成骨细胞的特性及功能具有重要作用,这可能是防治骨质疏松症的机理之一。     

大鼠睾丸中1，25－双羟维生素D＿3受体的免疫组织化学定位

用抗１，２５－（ＯＨ）２Ｄ３受体单克隆抗体（９Ａ７），以免疫组化法对正常大鼠睾丸行１，２５－（ＯＨ）２Ｄ３受体定位研究。成年雄性大鼠在苯巴比妥腹腔注射麻醉下，用生理盐水对心脏灌注放血致死，取睾丸置Ｂｏｕｎ＇ｓ液中固定２４小时，用振荡切片机制备５０μｍ厚切片，以ＡＢＣ法进行免疫反应，ＤＡＢ显色。在普通光镜下观察，发现睾丸曲精管内，特别是基底部的细胞有明显免疫反应。这表明雄性动物睾丸组织可能是１，２５－（ＯＨ）２Ｄ３的靶器官。     

大鼠睾丸中1，25－双羟维生素D＿3受体的免疫组织化学定位

用抗１，２５－（ＯＨ）２Ｄ３受体单克隆抗体（９Ａ７），以免疫组化法对正常大鼠睾丸行１，２５－（ＯＨ）２Ｄ３受体定位研究。成年雄性大鼠在苯巴比妥腹腔注射麻醉下，用生理盐水对心脏灌注放血致死，取睾丸置Ｂｏｕｎ＇ｓ液中固定２４小时，用振荡切片机制备５０μｍ厚切片，以ＡＢＣ法进行免疫反应，ＤＡＢ显色。在普通光镜下观察，发现睾丸曲精管内，特别是基底部的细胞有明显免疫反应。这表明雄性动物睾丸组织可能是１，２５－（ＯＨ）２Ｄ３的靶器官。     

Attractin蛋白在大鼠睾丸和附睾中的免疫组织化学定位

目的 :探讨Attractin蛋白在成熟大鼠睾丸和附睾组织中的分布。　方法 :健康成年雄性SD大鼠 2 0只 ,灌流取睾丸和附睾组织固定 ,石蜡包埋和冰冻切片。用免疫组化法和间接免疫荧光方法检测Attractin蛋白在成熟大鼠睾丸和附睾组织中的表达。　结果 :睾丸组织间质细胞、睾丸精曲小管管周肌样细胞和各级生精细胞 (精原细胞、初级精母细胞和精子细胞 )、支持细胞呈阳性反应 ,主要表达于胞膜及胞质。睾丸间质细胞表达略强于生精细胞。附睾头、体、尾均未见表达。　结论 :Attractin蛋白在成熟大鼠睾丸组织间质细胞和生精细胞中有较强的表达 ,其生理功能尚有待进一步探讨。     

雌激素α、β受体在大鼠椎间盘组织中的免疫组织化学定位

[目的]探讨雌激素α、β受体(ERα、ERβ)在大鼠椎间盘组织的定位和分布.进一步探讨ER与椎间盘退变的关系,对早期预防和治疗椎间盘退变提供一定的理论依据.[方法]用免疫组织化学染色法(Elivison二步法)检测大鼠关节软骨,椎体终板及椎间盘组织中ER-α,ER-β的表达及分布情况.[结果]免疫组织化学染色见ER-α,ER-β在椎体骨组织中表达明显,在终板软骨组织表达较为明显,在髓核组织中均有表达,在纤维环中未见表达.[结论]在大鼠的髓核组织中的髓核细胞(类软骨细胞)中存在ER.     

hTERT和Smad4在胰腺癌中的表达及意义

目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白和Smad4蛋白在胰腺癌中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测45例胰腺癌标本和对应的癌旁非癌胰腺组织hTERT蛋白和Smad4蛋白表达的情况。结果45例胰腺癌组织hTERT和Smad4阳性率分别为91.11%(41/45)和42.22%(19/45),对应的癌旁非癌胰腺组织阳性率分别为13.33%(6/45)和88.88%(40/45),二者之间的差异均具有统计学意义(P<0.05);hTERT和Smad4与肿瘤的分化程度和淋巴结转移无相关性(P>0.05);hTERT和Smad4之间无相关关系(P>0.05)。结论胰腺癌组织与正常胰腺组织相比,hTERT表达增加,Smad4表达减少,其改变在胰腺癌的发生发展中可能起重要作用,两者联合检测有助于胰腺癌的早期诊断。     

益肾填精中药对骨质疏松症模型大鼠的骨组织中Smad1/5的表达影响

目的 通过观察去卵巢骨质疏松症模型大鼠股骨中Smad1/5在细胞中的表达,探索肾虚骨质疏松症的发病机理.方法 实验采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,同时应用益肾填精作用的纳米钙补肾中药低、高剂量组,对模型大鼠给药干预12周,用骨疏康颗粒剂、盖天力作为阳性对照组,以及正常对照组、假手术对照组和模型空白组,并与补脾中药补中益气汤作比较;应用双能X线骨密度仪检测离体股骨的骨密度;HE染色光镜下观察股骨形态;免疫组化SABC法检测股骨中的Smad1/5蛋白活性表达.结果 与正常组比较,模空组大鼠股骨头的骨密度显著降低,P<0.01;与模空组比较,用药12周之后各用药组均可提高模型大鼠股骨的骨密度值;HE染色光镜下观察各组大鼠右侧股骨头病理切片,模空组骨髓腔增大,骨小梁断裂,各用药组可见骨髓腔较小,形态结构较完整;与正常组相比较,模空组Smad1/5阳性表达显著下降,P<0.01;用药12周后,与模空组相比较,各用药组均可上调其表达情况,P<0.01.结论 骨组织中Smad1/5阳性表达降低可能是骨质疏松症发生的机制之一,纳米钙补肾填精中药可能通过改善和调控股骨中Smad1/5的表达,而起到防治肾虚骨质疏松症的作用.     

Smad1在青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间质干细胞中的表达及意义

目的:探讨Smad1在青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者骨髓间质干细胞(MSCs)中的表达及其在发病机制中的作用。方法:30例12～18岁志愿者分为两组:AIS组20例,同年龄正常对照组10例。分别从髂前上棘处骨穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。采用密度梯度离心法分离MSCs,体外培养并传至P2代行表型鉴定,分别采用RT-PCR及免疫蛋白印记法检测两组患者MSCs中Smad1的表达情况。结果:AIS组与对照组Smad1mRNA水平的平均表达率分别为4.48±0.58和1.03±0.22,蛋白水平的平均表达率分别为2.62±0.55和0.84±0.22。不论是核酸水平还是蛋白水平AIS组Smad1的表达均高于对照组(P<0.01)。结论:Smad1在AIS患者MSCs中表达强度异常,可能与AIS发病的分子机制相关。     

5-羟色胺1A受体mRNA在大鼠慢传输便秘结肠组织中的表达

为观察慢传输型便秘大鼠结肠组织中5-羟色胺（5-HT）1A受体的rnRNA表达,选取体重（200±20）g的SD大鼠24只,随机分为两组,模型组和对照组各12只,模型组采用大黄灌胃法造模,对照组予相同体积的蒸馏水灌胃。完成造模后处死,测肠道炭末推进长度和推进率,取出标本。用RT—PCR法测各个标本5HT 1A受体的mRNA表达,并进行统计学分析。结果显示,模型组大鼠结肠5HTlA受体的mRNA表达（0．77±0．14）高于对照组（0．6l±0．21）,有统计学意义（P〈0．05）。结果表明,慢传输型便秘大鼠结肠中5-HTlA受体表达量上升,提示5-HT1A是影响慢性便秘的因素。     

Smad3和Smad7在梗阻性黄疸大鼠肝纤维化形成过程中的表达及意义

目的:研究梗阻性黄疸大鼠肝纤维化形成进程中Smad3与Smad7表达的变化及其对肝纤维化的意义。方法:Wistar大鼠60只,随机分成模型组和对照组。于术后第1天及术后7 d、14 d、28 d及35d 5个时间点模型组和对照组处死大鼠各6只。进行肝组织病理学观察,免疫组织化学法测定肝组织中Smad3、Smad7的表达情况并行半定量分析。结果:与对照组相比,模型组大鼠7、14、28、35 d肝纤维化程度逐渐增强,Smad3明显升高并有统计学意义(P0.001),Smad7明显降低并有统计学意义(P0.001);而且模型组5个时间点比较均有统计学意义(P0.001)。同时,Smad3与Smad7呈负的直线相关(r=-0.951,P001)。结论:随着胆道梗阻时间延长,肝纤维化程度逐渐加重,肝组织中Smad3表达水平显著增加,Smad7表达水平下降,Smad3与Smad7呈负的直线相关。抑制Smad3或增强Smad7的表达可能是防治肝纤维化的新途径。     

转化生长因子β1及其信号转导分子Smad4,Smad7在人脑胶质瘤中的表达及其意义

目的　探讨转化生长因子 β1及其超家族肽类的细胞内转导分子Smad4和Smad7在人脑胶质瘤中的表达及其意义。方法　采用免疫组织化学方法 ,对经过石蜡包埋的 3 0例胶质瘤和8例正常脑组织标本进行定位和定性检测。结果　TGF β1,Smad4和Smad7蛋白在胶质瘤中均有不同程度的表达 ,Smad4的表达水平随着胶质瘤恶性程度的增高而降低 ,且在正常脑组织、低、高级别胶质瘤组中的表达差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;TGF β1,Smad7在正常脑组织中几乎不表达 ,在低级别胶质瘤 (Ⅰ Ⅱ级 )中表达较少 ,在高级别胶质瘤 (Ⅲ Ⅳ级 )中表达较多 ,两者在正常脑组织及高、低级别胶质瘤中的表达两两比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。且TGF β1与Smad7的表达水平呈正相关 (r =0 .78,P <0 .0 1) ;TGF β1与Smad4的表达水平呈负相关(r =-0 .67,P <0 .0 1)。结论　TGF β1,Smad7蛋白的阳性表达与组织学分级密切相关 ,它们参与了在人脑胶质瘤细胞的恶性转化 ,而Smad4对胶质瘤的进展有抑制作用。     

Smad4、Smad7在大鼠慢性前列腺炎前列腺组织中的表达及意义

目的 研究慢性前列腺炎SD大鼠前列腺组织Smad4和Smad7的表达,并初步探讨它对慢性前列腺炎发病机制的意义.方法 将40只6月龄SD大鼠随机分为正常对照组和CP实验组,每组20只.实验组采用去势+高剂量苯甲酸雌二醇肌注方法建模,并以免疫组化和蛋白免疫印迹实验方法检测Smad4、Smad7在前列腺组织中的表达变化.结果 与正常对照组相比,Smad7表达显著下调(P<0.01),Smad4表达亦显著下调(P<0.01);Smad4与Smad7在慢性前列腺炎大鼠前列腺组织中表达无相关性.结论 Smad4、Smad7在慢性前列腺炎前列腺组织中表达异常,提示可能参与CP的病理过程.     

双氢睾酮对LNCaP细胞系Smad3和Smad4转录及表达的影响

目的:探讨双氢睾酮(DHT)对前列腺癌细胞系LNCaP中转化生长因子β(TGFβ)信号通路的下游信号蛋白Smad3、Smad4的基因转录及表达是否有影响,氟他胺对这些影响有无拮抗作用。方法:用含不同浓度DHT(2、10、50nmol/L)和氟他胺(100nmol/L)的RPMI1640培养液培养LNCaP细胞株。RTPCR检测LNCaP细胞中Smad3、Smad4mRNA水平,Western印迹法检测Smad3、Smad4蛋白表达情况。结果:与不含DHT和氟他胺的对照组比较,10、50nmol/LDHT明显增强LNCaP细胞中Smad3mRNA的表达(P<0.05),不同浓度的DHT均使Smad3蛋白的表达增高(P<0.05),氟他胺明显抑制DHT的这种增强作用(P<0.05);10nmol/L浓度的DHT对Smad4mRNA的转录有明显的抑制作用(P<0.05),这种抑制作用受氟他胺的抑制,不同浓度的DHT均可以使Smad4蛋白的表达下降,而且下降程度要比Smad4mRNA下降更为明显(P<0.05),氟他胺能够减轻这种抑制作用。结论:DHT能够增强Smad3mRNA的转录和表达,而对Smad4mRNA的转录和表达有抑制作用,氟他胺可以不同程度地抑制DHT的这些作用。雄激素受体(AR)信号通路和TGFβ信号通路可能在Smads水平上存在交联。