神经再生室中神经再生过程和微环境的研究

目的 探讨再生室中神经再生过程、微环境成份及作用。方法 取SD大鼠70只,坐骨神经于股中部切断,用硅胶管套接,神经断端间间距10mm。于术后3d,1、2、3、4、5、6周取材,将10mm再生段由近向远分为S1,S2,S3,S4,S5,共5段,每段2mm,行组织学和电镜观察。结果 术后3d,再生充满棕黄色浑浊液体。术后1周,再生室中央形成条状连接,巨嗜细胞迁移至S3会合。术后2周成纤维细胞、雪旺细胞、内皮细胞迁移到S3会合。有髓神经纤维长入S1,无髓神经纤维长入S3。术后3周无髓纤维通过再生室,有髓纤维长入S3。术后4周有髓纤维通过再生聚集成束。术后5、6周神经纤维数量增多,髓鞘增厚,束膜形成。结论 再生室中再生过程可分为：（1）液体育孕期（1周内）。（2）纤维连接期（1－2周）。（3）神经连接期（2－4周）。（4）神经成熟期（术后4周以上）。神经再生微环境包括再生条件液、纤维基质带和巨嗜细胞、成纤维细胞、雪旺细胞、内皮细胞等成份。     

大鼠坐骨神经损伤后Spastin表达变化的实验研究

目的观察内源性Spastin蛋白在大鼠坐骨神经损伤后再生过程中的表达变化,探讨其在周围神经再生过程中的作用和意义。方法取成年雄性SD大鼠36只,随机分为实验组(n=30)和假手术对照组(n=6),实验组建立坐骨神经挤压损伤模型,对照组仅暴露坐骨神经。实验组分别于术后1、3、7、14、28 d(n=6),假手术组于术后7 d取大鼠坐骨神经相应节段的L4~6脊髓组织,采用实时荧光定量PCR检测Spastin m RNA相对表达量,Western blot检测Spastin蛋白表达;并取损伤远端5 mm处神经组织,通过透射电镜观察坐骨神经远端轴突的超微结构变化。结果两组大鼠L4~6节段脊髓组织中Spastin蛋白表达和基因表达变化趋势基本一致。实验组Spastin蛋白和基因表达量呈先下降后逐渐上升的趋势,于术后7 d降至最低,28 d时达初始水平。其中实验组术后3、7、14 d Spastin蛋白和基因表达量显著低于假手术对照组(P0.05);术后1、28 d与假手术对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。实验组术后3、7、14 d Spastin蛋白和基因表达量显著低于术后1 d和28 d(P0.05),术后1 d和28 d比较差异无统计学意义(P0.05)。透射电镜观察发现实验组术后1、3、7 d,坐骨神经损伤远端髓鞘严重破坏;术后14 d雪旺细胞增生;术后28 d可见大量有髓神经纤维,接近正常形态。结论内源性Spastin蛋白在坐骨神经损伤后再生过程中出现了表达变化,提示Spastin可能在周围神经损伤后的再生过程中起着一定作用。     

大网膜包裹人工神经移植体再血管化及神经再生的研究

目的 探讨大网膜包裹人工神经移植体的早期再血管化，以及增强移植体血供对神经再生的影响。方法 75只大耳白兔制作成左前肢正中神经2．0cm缺损，随机分成3组：A组，带蒂大网膜包裹人工神经移植体移植；B组，人工神经移植体桥接神经缺损；C组，自体神经桥接神经缺损，作为对照组。术后3、7和14d应用伊凡思蓝（evans blue bound to albumin，EBA）毛细血管造影，检测各组移植体的再血管化；术后12周通过电生理、光镜、透射电镜等检测评估神经再生的效果。结果 A、C组术后3d移植神经出现再血管化，7d和14d再血管化程度逐渐增强；B组7d出现再血管化，与A、C组比较，再血管化延迟。术后12周，A组和C组运动神经传导速度、有髓神经纤维密度、神经内纤维组织面积及面积比、髓鞘厚度、髓鞘直径等差异无统计学意义（P〉0．05），但均优于B组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 大网膜包裹人工神经移植体可促进移植体早期再血管化，增强移植体血供，促进神经再生。     

硫酸肝素复合胶原蛋白支架材料桥接大鼠坐骨神经的形态学研究

目的以形态学方法观测硫酸肝素复合胶原蛋白支架材料桥接大鼠坐骨神经10mm缺损的疗效。方法以硫酸肝素复合胶原蛋白经冷冻干燥技术制备新型神经组织支架材料,并用此材料桥接修复SD大鼠坐骨神经缺损10mm,术后36周分别以辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪,HE、甲苯氨蓝和镀银染色法,S100、生长相关蛋白43(GAP-43)、神经丝蛋白(NF)免疫组化染色法、MBP免疫荧光染色法及透射电镜等形态学方法观测其引导神经再生的疗效。结果硫酸肝素复合胶原蛋白支架材料在移植术后36周已神经化。除再生有髓神经纤维的密度低于自体移植,有髓神经纤维的面积和髓鞘厚度与自体移植组无明显差异。结论以硫酸肝素复合胶原蛋白制备的神经组织工程支架材料,可以引导神经再生。     

白细胞介素1促进外周神经再生作用的形态学研究

目的 从形态学角度了解白细胞介素1局部应用对外周神经损伤后神经再生的作用。并通过对脊髓前角神经元的研究，初步探讨其有关机制。方法 用昆明小鼠单侧坐骨神经切割伤后一期端端缝合为损伤模型。按是否给予白细胞介素1分为实验组和对照组，分别在术后28d和42d切取坐骨神经和相应脊髓节段，测定神经纤维面数密度比，神经纤维断面面积，髓鞘厚度及脊髓前角神经元计数，脊髓前角神经元等效圆直径，等效圆面积，作定量比较。结果 术后28d，神经纤维面数密度比，神经纤维断面面积实验组均优于对照组，髓鞘厚度无显著性；术后42d，除近端神经纤维断面面积两组差异无显著性外，余各指标实验组均优于对照组。损伤侧脊髓前角神经元计数。等效圆直径，等效圆面积在28d和42d，实验组均优于对照组。结论 外周神经损伤局部应用白细胞介素1能促进神经再生，保护脊髓前角神经元。     

体神经-内脏神经吻合后神经纤维再生过程的光镜电镜观察

目的：观察大鼠体神经-内脏神经吻合后神经纤维的再生。方法：人工建立体神经-内脏神经反射弧大鼠模型，用电镜配合光镜观察12只大鼠术后1、4、8、24周神经变性与再生。结果：术后8、24周大体观察见神经吻合口位置稍许膨大，光镜观察发现术后8周吻合口位置可见新生的轴突，电镜观察见术后1周吻合口及其远近段神经纤维发生Waller变性，术后4周吻合口部位有再生的有髓和无髓纤维，术后8周新生的髓鞘进一步增厚，板层结构清晰可见，术后24周，髓鞘成熟，轴浆富含微管、微丝、线粒体。结论：体神经运动纤维能够再生长入并替代内脏神经节前纤维；再生的神经纤维具备基本正常的周围神经超微结构。     

经颅磁刺激和局部电刺激促进周围神经再生的组织学研究

目的　研究和比较经颅磁刺激和局部电刺激促进周围神经再生的组织学变化。方法　建立 2 0只大鼠坐骨神经损伤模型后 ,分别用经颅磁刺激动物头颅正上方 2cm处 (相当于运动皮层 ,为经颅磁刺激组 ) ,和直流点送电刺激坐骨神经缝合口近端 (局部电刺激组 )。刺激 2 0min·d-1× 2 0d ;每组 10只大鼠。术后 2 0d取材 ,观察 2组新生神经的形态学变化和有髓神经纤维数目。结果　电刺激组可见许多新生有髓神经纤维 ,但同时可见到有神经纤维髓鞘的退变现象。磁刺激组则有大量新生有髓神经纤维 ,髓鞘较薄但结构完整 ,板层清晰。经颅磁刺激组再生神经纤维的数目明显多于电刺激组 (P <0 0 5 )。结论　经颅磁刺激促进受损周围神经再生和恢复传导功能的作用优于局部电刺激。     

异体神经段皮下包埋对坐骨神经再生影响的研究

目的　探讨异体周围神经段皮下包埋对坐骨神经再生的影响。　方法　 Wistar大鼠 30只 ,雄性。 6只为供体 (C组 ) ,余随机分为两组。实验组 (A组 ) 12只 ,于右大腿后侧皮下行异体坐骨神经 (15 mm)包埋 ,2周后取出 ,修整为 10 mm的片段移植于左侧新鲜的坐骨神经缺损处 (10 m m)。对照组 (B组 ) 12只 ,于右腿相应部位皮肤切口直接缝合 ,左侧新鲜坐骨神经 (10 mm)原位吻合。术后 2、4、8和 14周行组织学观察 ,14周作电生理测定和电镜观察。　结果　术后 2周 ,A组炎性反应稍重于 B组 ;至 4周时两组的炎性反应程度相似 ,近端少许胶原纤维增生 ;8周时两组的炎性反应基本停止 ,胶原纤维增生稍明显 ;14周时两组神经外膜构成完整 ,束膜、内膜结构无明显差异。再生大量的有髓神经纤维及少量的无髓神经纤维。髓鞘结构完整。再生轴突数目、面积差异无统计学意义 ,束膜厚度、分布及范围相似。运动神经传导速度、峰值及潜伏期差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。　结论　皮下包埋的异体周围神经段虽有一定的炎性反应 ,但仍具有与自体神经移植相似的神经再生引导作用。     

大鼠周围神经移植修复马尾神经损伤的早期形态学观察

目的：探讨坐骨神经移植修复马尾神经损伤的可行性,观察马尾神经再生情况。方法：将30只雌性Wistar大鼠分为三组,实验组：将20只大鼠马尾在L2水平行半侧切除,将对侧坐骨神经移植到马尾切除侧,近端接马民行断端,移植的坐骨神经远端与马尾切除侧坐骨神经吻合,分别于术后4、6、8周在光镜及电镜下观察马尾再生情况。实验对照组：5只大鼠,仅切除部分马尾。正常对照组：5只大鼠,不做处理。结果：实验对照组坐骨神经的轴突及髓鞘均崩解,无再生轴突形成。实验组术后4周HE及固蓝染色偶见髓鞘及轴突形成,雪旺细胞数目少,有世噬细胞吞噬现象;术后6周较4周再生髓鞘及神经轴突数目增多,雪旺细胞大量增生,巨噬细胞吞噬现象减少;术后8周高倍镜下可见再生的典型形式,即胶质基质中的退变纤维中有大量簇状细小的有髓神经纤维,电镜下可见含较多细的有髓和无髓神经纤维,内含较多线粒体等管状结构,雪旺细胞核大而明显,胞浆丰富,粗面内质网及高尔基体、线粒体增加明显。结论：周围神经移植修复马尾神经是可能的,马尾神经损伤后有再生的可能性。     

雪旺细胞的培养和种植与神经移植

雪旺细胞是周围神经纤维的重要组成成份 ,在神经再生中起非常重要作用。有髓纤维中雪旺细胞形成髓鞘包绕轴突 ,无髓纤维则无。包绕神经纤维的雪旺细胞包绕一基底膜层 ,基底膜层连续无间断〔1〕。神经纤维受损伤发生瓦氏变性后 ,处于静止期的雪旺细胞激活 ,自身分泌或促进神经再生所需的各种营养成分汇聚 ,如神经生长因子 (ＧＮＦ)、脑源性神经营养因子 (ＢＤＮＦ)、胰岛素样生长因子 (ＩＧＦ)等 ,为轴突再生提供一个合适的微环境。同时雪旺细胞也能产生基底膜组分 ,如ＩＶ型胶原及层粘素。基底膜对轴突再生的方向性起重要的引导作用〔2 ,3〕…     

神经高位端端与低位端侧或侧侧缝合相结合提高神经修复能力的实验研究

目的对无缺损的周围神经高位损伤，提出高位端端与低位端侧或侧侧缝合相结合的新方法，观察神经再生和靶器官的恢复情况。方法SD大鼠80只，高位切断左侧胫神经。随机分为5组：A组：胫神经两断端行端端缝合，远端于膝关节水平与腓神经干行侧侧缝合。B组：断端处理同A组，远端移植正中神经作胫腓神经干之间的端侧桥接缝合。C组：单纯作断端的端端吻合。D组：胫神经干近端结扎并固定，远端与腓神经干行侧侧缝合。E组：近端处理同D组，远端切除部分神经段后，与腓神经干行端侧缝合。术后行肌电图检查及组织学观察并作统计学分析。结果术后早期（4周）D、E组有神经再生，术后12周A、B组的神经再生、传导功能及靶肌肉和运动终板的恢复情况均优于C、D、E组。结论高位端端与低位端侧或侧侧缝合相结合的方法，可尽早恢复对靶组织的营养和神经再支配，为高位缝合处高质量神经的长入赢得时间，提高了有效功能的恢复。     

人羊膜上皮细胞对大鼠坐骨神经再生影响的实验研究

目的 通过实验研究了解人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,HAECs)对大鼠坐骨神经再生的促进作用.方法 取60只SD大鼠随机分为两组,羊膜细胞组和对照组,各组再分为2周和4周组,每组15只.制作大鼠周围神经损伤再生室模型,HAECs组局部应用培养的HAECs,对照组局部使用等量的生理盐水.术后分别于2周、4周检测神经传导功能和HE染色观察神经纤维形态学变化.结果 术后2周两组的神经电生理及组织学检测比较差异无统计学意义;4周HAECs组的大鼠坐骨神经传导功能明显恢复,HE染色显示术后坐骨神经手术部位出现大量炎性肉芽组织,呈现纤维性修复,吻合口以远HAECs组神经纤维形态结构较对照组完整,神经纤维与髓鞘直径均较对照组大.结论 HAECs移植可加速大鼠坐骨神经损伤后神经传导功能恢复,有助于有髓神经纤维损伤后的轴突与髓鞘的再生修复.

Abstract：

Objective To study the effects of human amniotc epithelial cells (HAECs) on regeneration of rat sciatic nerve. Methods Sixty SD rats were randomly divided into two groups, the HAECs group and control group. Each group was further divided into two week group and four week group, with 15 rats each. The sciatic nerve was cut and the regeneration chamber was created. The HAECs were implanted into the regeneration chamber in the HAECs group and normal saline was injected into the regeneration chamber in the control group.Electro-physiological and the histological study was done at two weeks and four weeks after the surgery. The results of nerve conduction study and HE staining of regenerating nerve fibers were analyzed statistically.Results There were no statistically significant differences between the two groups at two weeks post-operatively.At four weeks, the experimental group showed significantly higher nerve conduction velocity and amplitude of evoked potentials comparing to those of the control group. Nerve fibers and inflammatory granulation tissue was seen near the lesion site by HE staining in the control group, whereas the HAECs group showed more integrated nerve fihers and mature myelination distal to the lesion site. Conclusion The application of human amniotic epithelial cells may enhance nerve regeneration in rats.     

神经再生室与微环境研究的新模型

目的建立神经再生室与微环境研究模型,并介绍操作要点,对其科学性、可行性进行评估.方法将大鼠的坐骨神经于股中部切断,推剥神经外膜于远近端,使近远端的神经束露出2mm将其切除,使断端的神经束回缩至外膜内,间断缝合外膜,使断伤的神经束间留有2mm～3mm微小间室.结果术后4周见再生的神经通过微小间室,吻合处神经束排列规律连续,没有神经瘤形成.结论神经外膜再生室模型是一个自由自然的神经再生内环境,符合神经生长规律,是对以往外设的"再生室"研究神经再生的一个改进,对传统的神经吻合方法是一个完善,具有实用性和重复性.     

周围神经端侧动脉套接后神经再生的研究

目的研究周围神经端侧动脉套接后神经再生的可能性及其特点. 方法取SD大鼠75只,在股骨中下段切断腓神经,将近断端逆转90度包埋于肌肉中.随机分为5组.A组:将截取的左颈总动脉套接于右侧正常胫神经侧方与腓总神经远端2 mm距离之间,缝合部胫神经外膜不予切除;B组:在胫神经套接部外膜开窗1.0 mm;C组:腓总神经切断14天后再予动脉套接,余同B组;D组:同B组,且于动脉套接部注入神经生长因子(neural growth factor, NGF)1 ml;E组:将腓总神经远端以端侧缝合形式直接缝合于胫神经的一侧,外膜开窗1.0 mm.术后4、8和12周分别行组织学、电镜和神经纤维计数等检查. 结果 4周时C、D及E组周边区域有神经纤维轴突和髓鞘再生,A组则无神经纤维生长; 8周时C、D及E组再生神经纤维较B组多,E组神经纤维较C、D组多,差异有统计学意义(P<0.05); 12周时C、D及E组神经纤维多于B组,差异有统计学意义(P<0.05);C组及D组有较丰富的神经再生,与神经端侧直接吻合的E组差异无统计学意义(P>0.05). 结论神经端侧2 mm距离动脉套接可作为修复周围神经损伤的一种可行方法.     

Tissue specificity in rat peripheral nerve regeneration through combined skeletal muscle and vein conduit grafts

Diffusible factors from the distal stumps of transected peripheral nerves exert a neurotropic effect on regenerating nerves in vivo (specificity). This morphological study was designed to investigate the existence of tissue specificity in peripheral nerve fiber regeneration through a graft of vein filled with fresh skeletal muscle. This tubulization technique demonstrated experimental and clinical results similar to those obtained with traditional autologous nerve grafts. Specifically, we used Y-shaped grafts to assess the orientation pattern of regenerating axons in the distal stump tissue. Animal models were divided into four experimental groups. The proximal part of the Y-shaped conduit was sutured to a severed tibial nerve in all experiments. The two distal stumps were sutured to different targets: group A to two intact nerves (tibial and peroneal), group B to an intact nerve and an unvascularized tendon, group C to an intact nerve and a vascularized tendon, and group D to a nerve graft and an unvascularized tendon. Morphological evaluation by light and electron microscopy was conducted in the distal forks of the Y-shaped tube. Data showed that almost all regenerating nerve fibers spontaneously oriented towards the nerve tissue (attached or not to the peripheral innervation field), showing a good morphological pattern of regeneration in both the early and late phases of regeneration. When the distal choice was represented by a tendon (vascularized or not), very few nerve fibers were detected in the corresponding distal fork of the Y-shaped graft. These results show that, using the muscle-vein-combined grafting technique, regenerating axons are able to correctly grow and orientate within the basement membranes of the graft guided by the neurotropic lure of the distal nerve stump.     

不同年龄神经再生组织特异性差异的实验研究

目的　比较不同年龄大鼠坐骨神经切断后神经再生趋化性在组织特异性水平上的差异。方法　SD大鼠40只,按年龄分成幼年组和成年组,每组20只,建立组织特异性模型。右侧坐骨神经切断后,将神经近端接于Y形硅胶管入口端,神经远端和肌腱分别接于Y形管两出口端。术后3、6周采用神经电图和组织学方法检测神经再生情况。结果　术后3、6周,幼年组实验侧运动神经传导速度的恢复率分别为(27.21±6.06)%和(39.33±10.41)%,成年组分别为(38.23±11.46)%和(52.36±8.12)%;两组的差异有显著性和非常显著性意义（F=6.49、10.73,P＜0.05、P<0.01）。幼年组复合肌肉动作电位（CMAP）波幅的恢复率分别为(30.21±17.43)%和(30.42±18.43)%,成年组分别为(35.43±32.13)%和(37.18±16.12)%;两组的差异无显著性意义（F=0.23、0.92,P>0.05）。幼年组神经纤维再生准确率分别为(59.31±13.21)%和(59.39±24.16)%,成年组分别为(78.26±12.41)%和(84.28±9.01)%;两组的差异有非常显著性意义（F=10.75、8.36,P<0.01）。结论　周围神经损伤后,远端神经组织对再生轴索有诱导作用,但幼年大鼠神经再生趋化的组织特异性较成年大鼠差。     

大鼠神经端侧缝合的实验研究

目的：为进一步了解神经端侧缝合后再生的可能性。方法：用大鼠进行研究，实验分五组：Ａ组，将切断的腓神经远端与正常胫神经干行端侧缝合，保留缝合部胫神经外膜；Ｂ组，同Ａ组，缝合部胫神经外膜予以去除（“开窗”）；Ｃ组，将一神经移植段的两端分别与正常胫神经干和切断的腓神经远端神经干行“开窗”的端侧缝合；Ｄ组，将胫神经切断，近端与切断的腓神经远端神经干行“开窗”的端侧缝合。Ｅ组对照：仅切断腓神经。术后不同时期分别行电生理、组织学、神经纤维计数等检查。结果：鼠神经端侧缝合后腓神经远端有不同数量的有髓神经纤维再生。结论：动物鼠类神经端侧缝合能够再生     

Axonal regeneration and growth direction in square-shaped mesothelial chambers

A preformed rectangular mesothelial chamber was used as an experimental model to study possible neurotrophic and chemotactic effects on outgrowing axons. The experiments were performed on rats. The proximal end of a severed sciatic nerve was introduced into one corner of the chamber. In the opposite or the diagonally opposite corner the distal end of the nerve or a nerve transplant was introduced leaving a gap of about 10 mm between the proximal and distal nerve segments. In other series a silicon tube was introduced into a distal corner and some chambers were kept closed distally. After three and six months respectively the contents of the chambers were analysed, using histological and neurophysiological techniques. In all cases there was a preferential growth of regenerating nerve fibres towards and into the distal nerve tissue regardless of the position in the chamber. With a silicon tube or no tissue at all introduced distally the regenerating axons grew only 3-5 mm. These experiments indicate that nerve tissue has a neurotrophic and chemotactic influence on outgrowing axons.     

甲壳质套管桥接周围神经长度极限的研究

目的 通过采用不同间隙套接修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究,探讨甲壳质套管桥接修复周围神经损伤的长度极限.方法 SPF级健康成年雄性SD大鼠24只,于大鼠右侧坐骨神经分叉处以上5 mm建立坐骨神经离断伤模型,部分切除坐骨神经后使用甲壳质套管桥接修复,使神经断端间留有2、5、8和10 mm间隙.8周后常规锇酸染色,镜下观察套管远端有髓神经纤维数目、轴突平均面积、髓鞘平均厚度及腓肠肌平均湿重,并进行定量组织学分析.结果 术后8周显示2 mm小间隙组神经纤维已有80%再生,再生效果最佳,与其他组相比差异有统计学意义(P＜0.01).随着间隙距离逐渐增加,神经纤维再生效果逐渐变差;5 mm间隙组再生约60%,效果优于8 mm间隙组(P＜0.01);8 mm间隙组再生约20%,优于10 mm间隙组(P＜0.01);10 mm间隙组只有1%有髓神经纤维成功长入远端,肌肉湿重降至正常的42.9%.结论 使用甲壳质套管桥接修复大鼠坐骨神经损伤时,2 mm左右小间隙套接修复效果最佳,5 mm间隙是修复后周围神经功能得到恢复的极限间隙,10 mm是神经单靠趋化性、营养作用再生的最大间隙.