RTCA法用于医疗器械体外细胞毒性试验的研究

目的了解RTCA法是否适用于医疗器械体外细胞毒性的评价。方法采用L929细胞,对RTCA法的线性范围、精密度和重复性进行考察,并与MTT比色法进行结果比较。结果接种14个浓度的细胞后,2 h时细胞数量和细胞指数的相关性最好。线性范围为98~2.5×10~4个/ml;高、中、低3个质控浓度的相对标准偏差(RSD)均15%,日内、日间变异均15%,符合样品分析要求;连续接种中浓度的细胞悬液测定的RSD值15%,重复性良好;同时采用常规细胞毒性检测法MTT比色法,对8种医疗器械产品进行检测,两种方法结果的相关较高(R=0.994)。结论 RTCA法方便快捷、结果准确可靠,适用于医疗器械体外细胞毒性评价。     

RTCA法用于医疗器械体外细胞毒性试验的研究北大核心CSCD

目的了解RTCA法是否适用于医疗器械体外细胞毒性的评价。方法采用L929细胞,对RTCA法的线性范围、精密度和重复性进行考察,并与MTT比色法进行结果比较。结果接种14个浓度的细胞后,2 h时细胞数量和细胞指数的相关性最好。线性范围为98~2.5×10~4个/ml;高、中、低3个质控浓度的相对标准偏差（RSD）均〈15%,日内、日间变异均〈15%,符合样品分析要求;连续接种中浓度的细胞悬液测定的RSD值〈15%,重复性良好;同时采用常规细胞毒性检测法MTT比色法,对8种医疗器械产品进行检测,两种方法结果的相关较高（R=0.994）。结论 RTCA法方便快捷、结果准确可靠,适用于医疗器械体外细胞毒性评价。     

应用中国仓鼠卵巢细胞法检测百日咳毒素毒性方法的建立及初步验证

目的  建立用中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）细胞检测百日咳毒素（PT）毒性的方法,并对其适用性进行初步验证。方法  根据PT能特异地使CHO细胞簇集的特性,以国家PT标准品为参考品,取多批脱毒后PT进行检测,摸索适宜的孵育时间、细胞悬液浓度等实验条件,建立PT毒性的体外检测方法。对PT参考品进行倍比系列稀释,确定本法的检测限。对5批脱毒后PT进行重复检测,验证本法的重复性。结果  利用不同浓度CHO细胞对脱毒PT进行测定,确定最佳细胞浓度为5×104/ml,并通过最佳浓度细胞确定簇集结果的最佳判定时间为PT接种后48 h。本法对PT标准品的检测限定为125~500 pg/ml。用本法重复测定5批脱毒PT的残余毒性,变异系数为0.0%~34.6%,说明该法重复性良好。结论  建立的CHO细胞检测法快捷、简便,能灵敏、准确地检测脱毒PT的残余毒性,可用于相关疫苗产品的质量控制。     

吡柔比星在骨肉瘤细胞放射增敏中的作用研究

目的研究吡柔比星在骨肉瘤细胞MG-63的放射增敏中的作用。方法用MTF法检测不同浓度吡柔比星对对数生长期的MG-63细胞的抑制作用,确定IC10的数值,作为实验的药物浓度。用克隆形成分析法测定MG-63细胞在IC10浓度吡柔比星作用24h后给予不同剂量（0、2、4、6、8Gy）照射以及IC10浓度紫杉醇作用不同时间（12、24、36h）后给予一定剂量射线照射的存活分数（SF）,拟合细胞生存曲线并计算放射增敏比,分析吡柔比星作用于MG．63细胞不同时间（12、24、36h）后细胞生存率的变化。结果不同浓度吡柔比星作用24h后,MG-63细胞抑制率逐渐增高（P〈0．01）,其药物毒性呈浓度依赖性,IC10为0．004μg／ml。ICIO浓度吡柔比星增敏比分别1．49（DO比）、1．06（Dq比）和1．04（SF2比）,MG石3细胞a／13值为2．23,IC10浓度吡柔比星作用后为0．27。ICIO浓度吡柔比星作用于MG-63细胞不同时间后再进行照射,细胞存活分数随时间延长逐渐降低（P〈0．01）。结论吡柔比星对MG-63细胞有放射增敏作用,在一定时间内与药物作用时间呈正相关。     

影响卷烟烟气总粒相物细胞毒性测试的因素

目的建立卷烟烟气总粒相物(TPM)的中性红细胞毒性测试方法。方法采用体外培养细胞的中性红摄取试验,优化影响卷烟烟气TPM细胞毒性测试的几个因素(稀释培养液血清浓度、卷烟烟气TPM染毒时间和测试细胞)。结果高浓度的血清含量将导致卷烟烟气TPM的毒性效应被低估;染毒24 h能更好地区分不同卷烟样品TPM的细胞毒性;中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)较人肺癌细胞系A549细胞对卷烟烟气TPM的细胞毒性作用敏感。结论通过比较不同因素,选择CHO细胞作为测试细胞,使用5%胎牛血清浓度的稀释培养液对卷烟烟气TPM母液进行稀释,染毒24 h,进行中性红摄取试验。     

补骨脂酚对HepG2的细胞毒性及BSEP、NTCP、FXR、CYP7A1的影响

目的 观察补骨脂酚对体外HepG2细胞的毒性和对胆汁酸转运体的影响。方法 用MTT法检测不同浓度补骨脂酚作用于HepG2细胞2、6和24 h对细胞增殖的影响,计算相应IC50值,并检测细胞培养基中AST和ALP活性。用实时定量PCR检测BSEP、NTCP、FXR和CYP7A1的mRNA。结果 HepG2细胞的存活率与补骨脂酚终浓度和作用时间呈负相关,在62.5~187.5μmol/L之间有良好的量效关系。补骨脂酚作用HepG2细胞6 h的IC50=177.9μmol/L,24 h的IC50=41.6μmol/L。补骨脂酚作用24 h的细胞毒性明显,细胞培养基中的AST和ALP活性显著升高,而60μmol/L的环孢菌素A(CsA)几乎可以完全对抗补骨脂酚对HepG2细胞的抑制作用。实时定量PCR检测表明,补骨脂酚作用于HepG2细胞2 h时BSEP被抑制,而24 h时BSEP、NTCP、FXR和CYP7A1的mRNA增加。结论 补骨脂酚对HepG2细胞的细胞毒性可能需要通过线粒体,并可能与其影响肝细胞胆汁酸转运有关。     

胆碱能M受体调控细胞周期蛋白依赖性激酶5及其在敌敌畏诱导SH-SY5Y细胞毒性损伤中的作用

目的研究胆碱能M受体(主要为M1受体)参与SH-SY5Y细胞周期依赖性蛋白激酶5(Cdk5)调控及其在敌敌畏(DDVP)诱导SH-SY5Y细胞毒性损伤中的作用。方法①应用免疫荧光结合共聚焦显微镜检测胆碱能M1受体及Cdk5在SH-SY5Y细胞中的分布和表达。②细胞对照组、氧化震颤素(Oxo-M)组(1×10~(-4)mol·L~(-1)作用48 h)、罗考唯亭(Rosc)组(培养结束前1 h加入Rosc 1×10~(-4)mol·L~(-1))、Rosc+Oxo-M组(Rosc 1×10~(-4)mol·L~(-1)预处理1 h后,再加入Oxo-M 1×10~(-4)mol·L~(-1)作用至48 h),应用MTT比色法检测细胞存活率,Western印迹法检测Cdk5表达。③细胞对照组、DDVP组(1×10~(-5)mol·L~(-1)作用48 h)、Rosc组(培养结束前1 h加入1×10~(-4)mol·L~(-1))、Rosc+DDVP组(Rosc 1×10~(-4)mol·L~(-1)预处理1 h后,再加入DDVP1×10~(-5)mol·L~(-1)作用至48 h),用MTT比色法检测细胞存活率,Western印迹法检测Cdk5表达,流式细胞术膜联蛋白Ⅴ-碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡。结果①激光共聚焦显微镜结果表明,SH-SY5Y细胞中M1受体与Cdk5均有分布和表达。②Oxo-M 1×10~(-4)mol·L~(-1)处理SH-SYSY细胞48 h,细胞存活率为(59.1±7.3)%,与细胞对照组相比显著降低(P<0.05),Cdk5表达显著升高(P<0.05);Rosc 1×10~(-4)mol·L~(-1)处理SH-SYSY细胞1 h,Cdk5表达显著降低(P<0.05);Rosc+Oxo-M组细胞存活率为(84.5±20.9)%,与Oxo-M组相比明显升高(P<0.05),Cdk5表达明显降低(P<0.05)。③DDVP1×10~(-5)mol·L~(-1)处理SH-SYSY细胞48 h,细胞存活率为(68.6±4.1)%,与细胞对照组相比显著降低(P<0.05),Cdk5表达显著升高(P<0.05);Rosc+DDVP细胞存活率为(84.4±8.8)%,与DDVP组相比显著升高,Cdk5表达显著降低(P<0.05)。流式细胞术结合TUNEL染色结果显示,DDVP处理SH-SYSY细胞48 h,细胞凋亡率为(64.1±8.4)%,与细胞对照组相比明显升高(P<0.05),TUNEL阳性细胞增多;而Rosc+DDVP组细胞凋亡率为(34.4±9.5)%,与DDVP组相比明显降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞减少。结论 Oxo-M和DDVP可通过增强Cdk5活性引起SH-SY5Y细胞损伤,提示抑制Cdk5活性可显著降低由Oxo-M和DDVP引发的细胞毒作用。     

Fed-batch培养中补料及接种密度对RABV-G蛋白表达量的影响

目的 研究流加(Fed-batch)培养中补料及接种密度对狂犬病毒糖蛋白G(RABV-G)蛋白表达量的影响,初步建立RABV-G蛋白在重组中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中Fed-batch培养的较优工艺方案。方法 复苏培养1支能够稳定表达狂犬病毒RABV-G蛋白的重组CHO细胞,传代扩增后进行6种方案Fed-batch培养,从Fed-batch培养的第3天开始监测培养上清中目的蛋白表达量和细胞生长参数,第14天结束培养,分析比较不同策略所产生的目的蛋白表达量。结果 本研究方案6中5%的Feed1补料及0.5×10⁶cells/ml的起始接种密度在Fed-batch培养第14天,糖蛋白表达量达150 mg/L,显著高于其余5种方案,确立为优选方案。结论 本研究建立了RABV-G蛋白在重组CHO细胞中流加(Fed-batch)培养的较优工艺方案,为重组狂犬病毒疫苗生产工艺研究提供基础。     

实时细胞分析法建立小肠上皮细胞生长实验模型

目的利用实时细胞分析仪,并以表皮生长因子(EGF)为促进细胞生长的工具药,观察EGF在不同培养条件下对细胞生长的影响,为建立IEC-6细胞生长(增殖)药理实验模型提供参考。方法以1×10~4/孔的密度将细胞接种于E-Plate 16板,并以含10%血清DMEM培养24 h,换成无血清DMEM培养(即血清饥饿)20 h后,观察不同培养条件对细胞生长的影响及EGF的药效。结果 (1)10%血清时,EGF组(1、10、100μg·L^-1)给药24、48、72 h后,细胞生长指数与空白组比较均P>0.05,提示含10%血清培养不能反映EGF的药效;(2)0%血清时,EGF(1、10μg·L^-1)对无血清培养所致的细胞生长抑制有改善作用,但不能使其恢复正常水平(给药24、48、72 h后,EGF组与5%血清空白组比较均P<0.01),提示无血清培养不能反映EGF的药效;(3)0%、0.5%、1%血清可对细胞生长产生不同影响,其中0.5%血清既不会对细胞生长产生明显抑制,也不会由于促进细胞生长时间较长而不利于反映EGF药效;(4)0.5%血清时,EGF各剂量组给药24、48、72 h后,均能促进细胞生长(细胞指数与空白组比较均P<0.01),提示0.5%血清培养条件下可较好反映EGF药效;(5)重复验证了0.5%血清时EGF(10μg·L^-1)促进细胞生长的药效。结论在实时细胞分析仪建立IEC-6细胞生长(增殖)药理实验模型的参考方案:细胞以含10%血清DMEM培养24 h,再以无血清DMEM培养(即血清饥饿)20 h,然后加受试药,并以含0.5%血清培养48~72 h,可观察其对细胞生长(增殖)影响的药效。     

杨黄总黄酮对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:研究杨黄总黄酮对人肝癌Hep G2细胞凋亡的影响。方法:制备杨黄总黄酮并进行定性、定量分析。以5-氟尿嘧啶(50μg/ml)与不同质量浓度杨黄总黄酮(10、20、40、80、100μg/ml)作用于Hep G2细胞24 h后,采用MTT法测定细胞活力以计算抑制率与半数抑制浓度(IC50)。以不同质量浓度杨黄总黄酮(40、80、100μg/ml)作用于Hep G2细胞72 h后,采用流式细胞仪测定细胞凋亡情况与细胞周期分布情况。结果:杨黄总黄酮含量为464.5 mg/g。10、20、40、80、100μg/ml杨黄总黄酮对细胞的抑制率分别为(6.46±1.74)%、(8.19±1.08)%、(23.19±2.77)%、(42.09±1.46)%和(58.18±1.89)%,抑制率与其质量浓度呈正相关,IC50为93.9μg/ml。40、80、100μg/ml杨黄总黄酮作用于细胞72 h后细胞凋亡率增加,并与质量浓度呈正相关。随着杨黄总黄酮质量浓度增加,S+G2期细胞比例增加。结论:杨黄总黄酮可诱导Hep G2细胞凋亡,其机制可能与将细胞阻滞于S+G2期有关。     

生产抗Tim3单抗CHO细胞N-1灌流高密度培养工艺研究

通过开发高表达量、高效率重组人源化靶向Tim3的单克隆抗体细胞培养工艺,来显著降低Tim3抗体生产成本,提升药品市场可及性。本研究对CHO细胞N-1种子灌流培养工艺和生产抗Tim3单抗CHO细胞高密度培养工艺进行小试工艺开发,实现了高效细胞培养抗体生产。结论：基于交替切向流动过滤(ATF)的灌注过程,N-1种子细胞密度可达53×10⁶ cells/mL;接种至终反应器后进行超高接种密度(uHSD)的补料分批生产,细胞跳过适应期直接进行对数增殖,2 d后细胞便进入稳定期进行蛋白高效表达。对比常规补料分批式生产,细胞周期由14 d缩短为8 d,产品表达量由3.51 g/L提升至5.68 g/L,产品关键质量参数与原始工艺高度类似,生产效率提升3倍左右。研究初步表明,采用对CHO细胞N-1种子灌流培养工艺对抗Tim3单抗CHO细胞高密度培养工艺进行小试工艺开发,实现了高效细胞培养抗体生产。     

人肾小管上皮细胞及正常肝细胞在药物毒性器官选择中的应用

目的：探讨人肾小管上皮细胞（HK－2）及人正常肝细胞（L－02）在药物毒性器官选择中的应用。方法以肾毒性药物庆大霉素、顺铂、环孢素A及肝毒性药物硫唑嘌呤作用于HK－2及L－02细胞24 h,考察并比较药物对2种细胞的形态、存活、凋亡及酶学指标变化的影响。结果肾毒性药物在较低浓度下即可引起HK－2细胞的形态、存活、凋亡及酶学指标的显著性变化,肝毒性药物则在较低浓度下即可引起L－02细胞相关指标的显著性变化;比较4种药物的IC10值发现：3种肾毒性药物对HK－2的IC10值均小于对L－02的IC10值;而肝毒性药物硫唑嘌呤的IC10值则HK－2大于L－02。结论基于HK－2及L－02细胞评价药物的毒性器官选择性是可行性的。     

人U87-MG脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植模型的建立

目的应用不同数量U87-MG细胞接种裸鼠脑内,建立裸鼠脑胶质瘤模型,观察其生长特性。方法采用立体定向技术,分别将3.0×10~(10)·L~(-1)、4.0×10~(10)·L~(-1)、5.0×10~(10)·L~(-1)浓度的人脑胶质瘤细胞U87-MG单细胞悬液,接种于18只♂裸鼠的右侧尾状核区,每只接种体积为5μL,另取6只裸鼠作为对照,接种同体积Hanks液。观察不同接种量实验鼠的生存状态、成瘤情况及脏器转移灶、带瘤生存期,测量肿瘤的最大径,计算肿瘤体积,将获取的全脑标本制作病理切片,行HE染色和免疫组化检查。结果各接种量的实验组成瘤率均为100%,未见颅外转移病灶,3组裸鼠的平均生存时间分别为(46.50±3.27)d、(38.50±3.28)d、(30.67±3.51)d;病理学检查符合人脑胶质瘤细胞的形态学特征和免疫表型;免疫组化GFAP和S-100蛋白呈阳性表达。结论立体定向脑内定量注射U87-MG细胞制备的人脑胶质瘤裸鼠原位移植模型成瘤率高、颅内生长稳定、颅外远隔部位转移率低,与人脑胶质瘤病理学及形态学特征相似,能为研究胶质瘤的发生、发病机制、生物学特性以及探寻有效的治疗措施提供可靠的动物模型。     

吉西他滨的体内外抗肝癌作用研究

目的:研究吉西他滨的体内外抗肝癌作用。方法:取5、10、20、30、50、70、90μmol/L的吉西他滨水溶液作用于人乳腺癌MCF-7细胞和人肝癌Hep G2细胞,采用MTT法(450 nm)测定作用24、48、72 h后细胞的吸光度,计算细胞抑制率和半数抑制浓度(IC50)。在小鼠右前腋皮下接种0.2 ml肝癌H22细胞株(2×1010个/L)建立荷瘤小鼠,将其随机分为对照组(生理盐水)与吉西他滨组(40 mg/kg),每组5只,每隔2 d尾iv药物1次,共给药3次,记录体质量变化和计算抑瘤率。结果:吉西他滨对MCF-7细胞和Hep G2细胞均有抑制作用,其24 h的IC50分别为30、>90μmol/L;48、72 h的IC50均<5μmol/L。两组荷瘤小鼠的体质量差异无统计学意义,吉西他滨对小鼠H22瘤的抑制率为75.76%。结论:吉西他滨体内外均有较好的抗肝癌作用。     

鱼藤酮对小鼠小胶质细胞 BV-2存活率及一氧化氮含量的影响

目的：研究鱼藤酮对小鼠小胶质细胞BV-2存活率及一氧化氮含量的影响。方法 BV-2细胞以5×10^7/L密度接种到细胞培养板中,分别加入鱼藤酮0、1×10^-11、1×10^-10、1×10^-9、1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5 mol/L后0、6、12、24、48、72 h等测定细胞存活率。另以1×10^-8 mol/L鱼藤酮干预BV-2细胞48 h,测定上清液中超氧化物歧化酶、过氧化物酶、总巯基、超氧阴离子和NO含量并与未给予鱼藤酮干预的对照组比较。结果5×10^7/L BV-2细胞于0、6、12、24、48、72 h细胞增殖活力分别为0．035±0．001、0．132±0．006、0．334±0．017、1．073±0．044、2．272±0．172、0．776±0．032,可见48 h达到细胞生长曲线的峰值。鱼藤酮（1×10^-6 mol/L ）干预 BV-2细胞24、48、72 h 细胞存活率分别降低至（63．4±10．1）％、（51．7±12．2）％、（33．9±11．2）％;鱼藤酮（1×10^-7 mol/L）干预BV-2细胞72 h细胞存活率降低至（50．8±2．9）％。1×10^-8 mol/L 鱼藤酮干预48 h 后 BV-2细胞上清液一氧化氮水平达（27．6±6．2）μmol/L,明显高于对照组的（13．3±2．5）μmol/L （t＝-2．135, P＝0．044）。结论鱼藤酮在一定浓度范围内可激活小胶质细胞,但是超出此浓度范围时则可能导致小胶质细胞存活率降低。     

吗啡对体外培养人体子宫平滑肌细胞的影响

目的：观察吗啡对体外培养正常人体子宫平滑肌细胞增殖的影响。方法：制备不同浓度的吗啡及其拈抗剂纳络酮，作用于培养的子宫平滑肌细胞上，通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTr法）检测吗啡对其的影响。结果：不同浓度的吗啡组与对照组测定的490nm吸光值（OD490值）相比，P〈0．05；1×10^-7 %、1×10^-6％、1×10^-5％和1×10^-4%啡组的细胞增殖速度依次降低；而吗啡（1×10^5％）＋纳络酮（1×10^-5％）组与对照组OD490值相比差异不明显。结论：外源性阿片类药物吗啡可直接抑制人体子宫平滑肌细胞的增殖。     

细胞工厂培养原代地鼠肾细胞工艺的建立及优化

 目的  采用40层细胞工厂(40-layer cell factory, CF40)工艺培养原代地鼠肾(primary hamster kidney, PHK)细胞,优化乙脑减毒活疫苗的生产工艺。 方法  用不同浓度新生牛血清培养不同接种密度PHK细胞,比较各组PHK细胞数量,确定CF40工艺的PHK细胞接种密度和新生牛血清浓度。通过对比CF40和15 L转瓶采用不同新生牛血清的PHK细胞培养情况,比较两种工艺对新生牛血清的选择性。对4个厂家CF40培养的PHK细胞数量进行单因素方差分析,判定对CF40的选择性。结果  CF40工艺的最有条件为PHK细胞接种密度为6.1×10⁵ ml^-1、新生牛血清浓度6%。CF40工艺对新生牛血清的选择性较低,能比转瓶工艺更稳定地培养更多的PHK细胞。4个厂家CF40培养的PHK细胞数量之间的差异无统计学意义（F=0.23,P＞0.05）,对CF40选择性低。 结论  采用CF40可以制备出满足乙脑减毒活疫苗生产要求的PHK细胞。     

基于MDCKⅡ细胞的中药成分体外肾毒性评价

目的用狗肾近端小管上皮(MDCKⅡ)细胞系研究中药成分的肾毒性,探讨其作为评价中药成分肾毒性体内动物实验替代方法的可能性。方法以氯化汞(HgCl2)为阳性对照,研究已知有肾毒性的马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)和马兜铃酸Ⅱ(AAⅡ),以及未见肾毒性报道的苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚对MDCKⅡ细胞的毒性作用。用MTT法检测细胞存活;倒置显微镜观察细胞形态改变;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡,用Hoechst 33258染色法观察凋亡细胞形态变化。结果AAⅠ和AAⅡ分别与MDCKⅡ细胞作用24,48和72h细胞存活均被明显抑制,AAⅠ的IC50值分别为(63.4±6.6),(44.8±6.0)和(37.3±4.6)μmol·L-1,AAⅡ的IC50值分别为(125.7±6.2),(106.7±20.4)和(94.2±9.7)μmo·lL-1;在5~300μmol·L-1时AAⅠ和AAⅡ分别与MDCKⅡ细胞作用24h,LDH的释放率明显增高;AAⅠ(75μmol·L-1)和AAⅡ(150μmol·L-1)分别与MDCKⅡ细胞作用24h,倒置显微镜下可见细胞收缩变圆,部分细胞破裂脱落;用流式细胞仪和Ho-echst 33258染色法观察亦发现,AAⅠ和AAⅡ均可使细胞周期S期阻滞,诱导MDCKⅡ细胞发生凋亡。苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚在2~10mmol·L-1浓度范围内分别与MDCKⅡ细胞作用24h,对上述指标均无明显影响。结论MDCKⅡ细胞系对有肾毒性的AAⅠ和AAⅡ和未见肾毒性报道的苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚的反应不同,可用于中药成分体外肾毒性评价。     

细胞工厂培养原代地鼠肾细胞工艺的建立及优化

 目的  采用40层细胞工厂(40-layer cell factory, CF40)工艺培养原代地鼠肾(primary hamster kidney, PHK)细胞,优化乙脑减毒活疫苗的生产工艺。 方法  用不同浓度新生牛血清培养不同接种密度PHK细胞,比较各组PHK细胞数量,确定CF40工艺的PHK细胞接种密度和新生牛血清浓度。通过对比CF40和15 L转瓶采用不同新生牛血清的PHK细胞培养情况,比较两种工艺对新生牛血清的选择性。对4个厂家CF40培养的PHK细胞数量进行单因素方差分析,判定对CF40的选择性。结果  CF40工艺的最有条件为PHK细胞接种密度为6.1×10⁵ ml^-1、新生牛血清浓度6%。CF40工艺对新生牛血清的选择性较低,能比转瓶工艺更稳定地培养更多的PHK细胞。4个厂家CF40培养的PHK细胞数量之间的差异无统计学意义（F=0.23,P＞0.05）,对CF40选择性低。 结论  采用CF40可以制备出满足乙脑减毒活疫苗生产要求的PHK细胞。     

氨茶碱对体外不同密度嗜酸细胞凋亡和白介素5受体αmRNA表达的影响

目的观察氨茶碱(抗哮喘药)对哮喘豚鼠体外不同密度嗜酸细胞 (Eos)凋亡及白介素5受体α(IL-5Rα)mRNA表达的影响。方法制备卵蛋白激发哮喘豚鼠动物模型,48 h后,行支气管肺泡灌洗,分离低密度及正常密度Eos(HEos,NEos),HEos及NEos分别与(1×10-6-1×10-3mol· L-1)氨茶碱共培养24 h;以原位杂交方法检测不同Eos的IL-5Rα mRNA表达,在3’末端脱氧核苷转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端,标记法检测细胞凋亡。结果氨茶碱干预24 h后,可见Eos细胞凋亡增加,不同密度 Eos IL-5Rα mRNA表达也增加,且与氨茶碱浓度呈剂量依赖关系,IL-5Rα表达与Eos凋亡呈正相关(P<0．05)。结论氨茶碱可促进不同密度Eos表达IL-5Rα,抑制其细胞因子活动,促进Eos凋亡。