镉恶化转化16HBE细胞中核苷酸切除修复基因的表达

目的 探讨氯化镉恶性转化人支气管上皮(16HBE)细胞过程中核苷酸切除修复基因ERCC1和ERCC2基因的mRNA和蛋白动态变化规律.方法 用反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学(SP法)检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞不同阶段(第5、15、35代细胞及成瘤细胞)ERCC1和ERCC2基因的mRNA和蛋白的表达情况.结果 随着转化代数的增加,ERCC1基因mRNA和蛋白的表达逐渐降低,到第35代细胞后表达明显下降(P＜0.01);而ERCC2基因的mRNA和蛋白表达水平在氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中差异无统计学意义(P＞0.05).结论 镉化物的致癌机制可能与ERCC1基因表达水平下调有关.     

汽油添加剂甲基叔丁基醚对DNA聚合酶β低表达的16HBE细胞所致DNA损伤分析

目的探讨汽油添加剂甲基叔丁基醚(methyl tert-butyl ether,MTBE)对人DNA聚合酶β低表达细胞的DNA损伤情况。方法运用RNA干扰技术构建人支气管上皮细胞(HBE)DNA聚合酶β(polβ)低表达细胞株HBE-polβ^-;常规培养HBE-polβ^-、pEGFP-C1空载体细胞及HBE细胞至对数生长期,分别以终浓度为0、2、4、8和16μmol/L的MTBE染毒培养48 h;以单细胞凝胶电泳(SCGE)检测各组细胞的DNA损伤情况。结果 HBE-polβ^-细胞中polβ表达仅相当于正常HBE细胞的18.38%;当MTBE染毒浓度为2、4、8和16μmol/L时,各组细胞均出现明显的彗星拖尾现象,且HBE-polβ^-组细胞DNA彗星Olive尾矩与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 polβ的异常表达对MTBE所致DNA损伤可能易感。     

DNMT1 mRNA、miR-221及miR-152在镍化合物诱导16HBE细胞转化中的表达变化

目的探讨DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1, DNMT1) mRNA,miR-221及miR-152在镍化合物诱导细胞恶性转化过程中的表达变化。方法运用体外常规染毒培养方法,以2.00μg/cm²染毒培养人支气管上皮细胞(16HBE)至第36代,构建镍化合物转化的16HBE细胞;以软琼脂糖实验及裸鼠成瘤实验分析细胞转化情况;运用qRT-PCR方法分析染毒培养的第0代,20代和转化细胞(第36代)中DNMT1 mRNA,miR-221及miR-152的表达变化,并分析其作用及机制。结果在镍化合物染毒培养第36代的转化细胞中DNMT1 mRNA及miR-221表达水平明显高于第0代和20代细胞;而miR-152表达水平明显低于第0代和20代细胞。结论镍化合物诱导细胞恶性转化与DNMT1 mRNA、miR-221及miR-152的异常表达有关。     

纳米二氧化硅对凝血系统的影响及研究进展

正纳米颗粒(nanoparticles)指空气动力学直径在100 nm以下的颗粒,在环境和职业卫生学中也称超细颗粒(ultrafine particles,UFPs)[1]。纳米颗粒物的理化特性(粒径大小、比表面积、化学组成等)不同,其生物学活性以及对机体的健康效应也不同。纳米材料尺寸很小,结构特殊,具有一些不同于一般化学物的物理化     

纳米雄黄混悬液对人宫颈癌细胞RCAS1表达的影响

目的:研究RCAS1在纳米雄黄混悬液诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的表达,探讨其在细胞凋亡中的作用.方法:HeLa细胞经不同浓度纳米雄黄混悬液作用一定时间后,MTT法检测细胞生长、增殖状态,光镜及透射电镜下观察细胞形态及凋亡情况,ELlSA检测RCAS1蛋白量的表达,并进行图像分析.结果:纳米雄黄混悬液对HeLa细胞生长增殖有时间剂量依赖性抑制作用;25～50mg·L-1纳米雄黄混悬液作用48～72 h后,HeLa细胞出现凋亡细胞的形态学改变;ELISA检测表明HeLa细胞高表达RCAS1蛋白,A值为(1.47±0.05),空白对照A值(0.139±0.015);25～50 mg·L-1纳米雄黄混悬液作用48 h后,RCAS1蛋白的表达量A值分别降低为(0.423±0.021)和(0.146±0.018)(P<0.01).结论:纳米雄黄混悬液可抑制HeLa细胞的生长、增殖和诱导凋亡,并使RCAS1蛋白表达下降.     

纳米二氧化硅对BEAS-2B细胞的毒性研究

目的 评价纳米二氧化硅颗粒物对人正常支气管上皮细胞(BEAS-2B)的毒性作用及可能机制。方法(1)扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscope,SEM)观察经100μg/ml的20 nm二氧化硅和结晶型二氧化硅(MinU-Sil 5)暴露24~72 h后的BEAS-2B细胞形态变化;(2)应用3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)比色法检测实验组(纳米二氧化硅处理组)、阳性对照组(Min-U-Sil 5处理组)的细胞活力变化,分别测定不同实验条件下的还原型谷胱甘肽(GSH)、细胞内活性氧(ROS)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;(3)流式细胞仪分析经暴露不同浓度20 nm二氧化硅后的细胞周期变化。结果 (1)经20 nm二氧化硅刺激24 h后BEAS-2B细胞体积增大,胞浆疏松,细胞数量减少,并随刺激时间延长而加重,阳性对照组上述变化不明显;(2)BEAS-2B细胞活力随暴露浓度和暴露时间的增加而下降,暴露浓度>50μg/ml时20 nm二氧化硅组的细胞活力下降与阳性对照组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),暴露浓度为100和200μg/ml时20 nm组与50 nm组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。100μg/ml浓度暴露24 h后,20 nm二氧化硅组细胞活力下降情况与阳性对照组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),暴露72 h后各组间细胞活力下降差异均有统计学意义(P<0.05)。BEAS-2B细胞培养基中的细胞内活性氧(ROS)升高、还原型谷胱甘肽(GSH)下降和乳酸脱氢酶(LDH)升高,并随暴露时间延长和二氧化硅粒径减小而变化;(3)纳米二氧化硅可使G2/M期停滞和G1期细胞增多,并呈现浓度效应。结论 纳米二氧化硅造成BEAS-2B细胞的细胞毒性作用强于结晶型二氧化硅(Min-U-Sil 5),纳米二氧化硅对BEAS-2B细胞的细胞毒性作用,具有浓度-效应、时间-效应和粒径-效应现象,细胞毒性作用并最终引起细胞氧化损伤。     

普鲁卡因对鼻咽癌细胞p16蛋白表达的影响

目的探讨普鲁卡因(procaine,PCA)对人鼻咽癌细胞CNE-2Zp16蛋白表达的影响。方法应用MTT法检测不同浓度PCA对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的影响,应用免疫组化法测定鼻咽癌细胞p16蛋白的表达。结果PCA能显著抑制CNE-2Z细胞增殖,该作用呈剂量-效应和时间依赖关系。PCA组CNE-2Z细胞p16蛋白表达明显高于对照组。结论PCA对CNE-2Z细胞增殖有抑制作用,它能上调CNE-2Z细胞p16蛋白的表达,推测这可能是PCA抑制CNE-2Z细胞增殖的重要分子机制之一。     

红霉素对支气管哮喘大鼠Clara细胞及CC16表达的影响

目的探讨红霉素对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型肺组织Clara细胞数量和Clara细胞分泌蛋白-16(CC16)表达的影响。方法用卵白蛋白(OVA)致敏、激发建立大鼠哮喘模型,随机分为正常对照组、哮喘组、红霉素组、地塞米松组。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类,光镜下观察肺组织病理学变化;ELISA方法检测BALF中CC16含量,用免疫组化的方法检测肺组织中Clara细胞表达变化。结果与正常对照组相比,哮喘组大鼠支气管及血管周围、肺间质内有嗜酸性粒细胞(EOS)及其他炎性细胞浸润,黏液腺增生,黏膜皱折增多,黏膜上皮细胞脱落,可见气道黏液栓,而红霉素组和地塞米松组上述现象明显减轻。肺组织Clara细胞计数显示,哮喘组大鼠终末及呼吸性细支气管上皮Clara细胞数明显少于正常对照组,而红霉素组和地塞米松组较哮喘组均有所增加(P<0.05)。哮喘组EOS百分比(EOS%)显著高于对照组(P<0.01),红霉素组和地塞米松组的EOS%均低于哮喘组(P<0.01)。BALF中CC16含量,哮喘组明显低于正常对照组(P<0.01),而红霉素组和地塞米松组均高于哮喘组(P<0.05)。结论哮喘时肺组织中Clara细胞及CC16的表达减少,红霉素可通过上调肺组织中Clara细胞及CC16的表达来发挥抗炎作用。     

苯并[a]芘恶性转化细胞T-16HBE-C1与非转化细胞16HBE基因表达谱差异分析CSCD

目的比较苯并[a]芘(BaP)恶性转化细胞T-16HBE-C1与非转化细胞16HBE全基因组表达谱差异,为进一步阐明BaP致癌机制和筛选BaP致癌生物学标志提供线索。方法选择BaP恶性转化细胞T-16HBE-C1与非转化细胞16HBE作为BaP致癌机制研究模型,利用人全基因组表达谱芯片Human mRNA OneArray?HOA v7 Microarrays筛选细胞间差异表达基因。继而对差异表达基因进行生物信息学分析,包括利用DAVID数据库对差异表达基因进行GO分析和KEGG通路分析。结果人全基因组表达谱芯片共发现689个基因在T-16HBE-C1和16HBE细胞中表达差异在2倍以上(P<0.05),其中339个基因在T-16HBE-C1细胞中的表达高于16HBE细胞,350个基因在T-16HBE-C1细胞中的表达低于16HBE细胞。差异表达基因涉及多种生物学改变,主要包括肿瘤信号转导、细胞增殖与凋亡、细胞代谢和细胞黏附等。结论人支气管上皮16HBE细胞经BaP恶性转化后基因表达谱发生明显改变,差异表达基因可能在BaP致癌中发挥作用,并可能作为BaP致癌的潜在生物学标志。     

纳米二氧化硅粉尘对小鼠免疫功能的影响

目的研究纳米二氧化硅粉尘(nm-SiO2)对小鼠免疫功能的影响。方法 45只雄性昆明小鼠随机分3组(nm-SiO2粉尘高、低剂量组和对照组),除对照组外,纳米组的动物每天染毒1h,连续染毒14d。测定各组小鼠脾脏、胸腺系数和病理形态改变,淋巴细胞增殖功能、腹腔巨噬细胞吞噬功能和血清中的IgA、IgG和IgM的含量。结果①纳米各剂量组小鼠胸腺系数均高于对照组,差异无统计学意义(P0.05);纳米高剂量组小鼠脾脏系数高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。②T淋巴细胞增殖功能均下降,差异无统计学意义(P0.05)。③与对照组相比,纳米高、低剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能呈下降趋势,差异有统计学意义(P0.05)。④与对照组相比,纳米高、低剂量组小鼠血清中IgG的含量高于对照组(P0.05),IgA的含量低于对照组(P0.05),纳米高剂量组小鼠血清中IgM的含量低于对照组(P0.05),纳米低剂量组小鼠血清中IgM的含量高于对照组(P0.05);随着染毒剂量的增加,IgG的含量呈现增高趋势,IgA的含量呈现降低趋势(P0.05)。⑤nm-SiO2各染毒组小鼠胸腺皮质内淋巴细胞边界清楚,细胞结构完整。各剂量组显微镜下所见与对照组比较无改变。纳米染尘组脾脏肉眼可见体积增大,包膜紧张,显微镜下可见淋巴细胞明显增生,白髓所占比例增大。结论在本试验条件下,nm-SiO2粉尘可对小鼠免疫系统产生有害影响,并且这种有害作用存在剂量反应关系。     

氢醌处理人支气管上皮细胞(16HBE)对其miR-221及抑癌基因PTEN mRNA表达的影响

目的探讨苯的活性代谢物氢醌(HQ)对16HBE细胞的毒性作用,对其miR-221及抑癌基因PTEN mRNA表达的影响。方法运用常规细胞传代培养方法培养16HBE细胞至第25代,每代细胞均以20μmol/L的HQ进行染毒;光学显微镜下观察每代细胞的细胞形态学特征,CCK-8法绘制细胞生长曲线;qRT-PCR法分析每代细胞miR-221及其靶分子PTEN mRNA的表达。结果 HQ处理对各代活细胞的形态学影响无明显差异,可见部分活细胞发生皱缩,死亡细胞悬浮于培养基中;各代细胞的生长曲线无明显差异;miR-221表达在第25代时明显增强;PTEN mRNA在第5代表达增强,随后逐代降低。结论 HQ可诱导miR-221表达增强,抑癌基因PTEN mRNA表达先增强后抑制。     

黄芪血清对衰老细胞抗氧化作用及p16表达影响的研究

目的:观察黄芪血清对HDF细胞SOD 活性,MDA含量及p16mRNA表达的影响.方法:以黄芪水煎剂灌胃家兔获得含药血清,以含黄芪血清的DMEM培养基培养HDF细胞,同时以不含黄芪的家兔血清作空白对照,比色法测定HDF细胞的SOD 活性及MDA含量,RT-PCR检测p16 mRNA表达.结果:含黄芪血清培养基培养的HDF细胞与空白血清培养的HDF细胞比较SOD 活性增加,p16表达减少.结论:含黄芪血清的培养基通过增加HDF细胞SOD活性,减少MDA含量及p16表达而起到抗衰老作用.     

甲基叔丁基醚对16HBE细胞增殖的毒物兴奋效应及其意义

目的 研究甲基叔丁基醚(MTBE)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)产生细胞增殖的毒物兴奋效应(hormesis)的剂量范围及其毒理学意义.方法 采用MTF法检测MTBE对16HBE细胞增殖的影响及其剂量-效应关系;采用SCGE试验检测MTBE在能诱导细胞增殖hormesis的剂量下对细胞DNA的损伤效应;采用相同剂量...     

结晶型硫化镍及反式-BPDE恶性转化16HBE细胞hMSH2基因甲基化的研究

目的 对结晶型硫化镍(NiS)和反式二氢二醇环氧苯并芘(anti-7,8,-dihydrodiol-9,10-epoxide benzo(a)pyrene,BPDE)恶性转化及接种裸鼠成瘤的人支气管上皮细胞(16HBE)hMSH2基因启动子甲基化状况进行研究,探讨镍及反式-BPDE的表遗传致癌机制.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)法、荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测结晶型NiS和反式-BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因肩动子甲基化状况及其mRNA和蛋白表达,并用去甲基化因子5-Azac(5-Aza-2'-deoxycytidine)处理有异常甲基化的细胞.结果结晶型NiS和反式-BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因启动子区存在CpG岛的高甲基化;与非转化16HBE细胞比较,转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因mRNA和蛋白表达下降;有异常甲基化的细胞经去甲基化处理后甲基化消失.结论结晶型NiS和反式-BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因启动子区CpG岛的高甲基化使其mRNA表达下降,并可能导致hMSH2基因表达抑制,这可能是结晶型NiS及反式-BPDE诱导16HBE细胞转化和成瘤的一种表遗传致癌机制.甲基化的可逆性对今后研究其表型逆转以及药物治疗提供了重要线索.     

HPV-16感染对喉咽鳞癌组织及FaDu细胞miRNA表达的影响

目的探讨HPV-16感染对喉咽鳞癌组织及Fa Fu细胞miRNA表达的调控。方法收集28例人喉咽鳞癌新鲜组织标本,PCR-反向点杂交法检测标本中HPV DNA的存在情况并进行分型。稳定培养整合HPV-16 E6-E7D的人喉咽鳞癌FaDu细胞,利用q RT-PCR对各组标本及细胞中的miR-363、miR-15a及iR-155的表达水平进行检测。结果 28例喉咽鳞癌标本中HPV阳性者检出7例,其中HPV-18型1例,HPV-52型1例,HPV-16,33混合型1例,HPV-16,52混合型1例。q RT-PCR检测结果显示:HPV-16阳性喉咽鳞癌组织和细胞miR-363和miR-15a表达均显著上调,而miR-155表达水平均则没有显著变化。结论 HPV-16感染能够影响人喉咽鳞癌组织及Fa Du细胞miRNA表达水平。     

低温胁迫对裂殖壶菌DHA生物合成及SOD表达的影响

培养温度对裂殖壶菌产油脂中二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)含量以及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)表达水平均有重大影响。细胞干重测定和气相质谱联用法检测了不同温度下裂殖壶菌Schizochytrium sp.FJU-512的生长和脂肪酸组成,荧光定量PCR法比较各温度下SOD mRNA表达量。结果表明,低温有利于DHA的合成,低温胁迫下SOD mRNA表达量最高。探讨裂殖壶菌耐低温胁迫的机制可能是低温增加培养基中溶解氧水平,氧化应激造成SOD的高表达,加快活性氧自由基的清除,促进DHA等不饱和脂肪酸的积累,增强膜的流动性以适应低温环境。其次,从DHA高产菌株裂殖壶菌Schizochytrium sp.FJU-512 EST文库筛选出SOD基因,并应用生物信息学分析该氨基酸序列。     

齐墩果酸诱导Kasumi-1细胞凋亡及对AML1-ETO表达的影响

目的 观察齐墩果酸(OA)诱导入急性髓系白血病M2型细胞株Kasumi-1凋亡及对AML1-ETO表达的影响.方法 用不同浓度OA作用于人急性髓系白血病M2型Kasumi-1细胞株,四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率;Annexin V/PI双染色后,流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测AML1-ETO蛋白表达水平;荧光原位杂交(Fish)检测融合基因AML1-ETO的变化.结果 OA以时间和剂量依赖方式抑制Kasumi-1细胞的增殖,24,48,72 h的IC50分别约为0.58,0.41,0.35 μmol·L-1.不同浓度(0.4,0.6,0.9μmol·L-1)OA作用24h后,细胞凋亡率明显增加,AML1-ETO蛋白表达下调.结论 OA对Kasumi-1细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用可能与AML1-ETO的抑制有关.     

纳米二氧化硅对SD大鼠精子和睾丸组织的影响

目的探讨不同剂量的纳米二氧化硅(nm-SiO2)对SD雄性大鼠精子和睾丸组织的影响。方法采用鼻腔滴注法,将SD大鼠连续暴露于不同剂量nm-SiO_2(浓度分别为10、20和30mg/kg·bw)4周后,在显微镜下观察精子数量、活动度和畸形率,用石蜡病理切片苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠睾丸组织的病理改变,用高效液相色谱串联质谱分析nm-SiO_2对SD大鼠睾丸组织基因组DNA甲基化水平的影响。结果与对照组相比,20和30mg/kg·bw纳米组的精子数量和精子活力均降低(P0.05),精子畸形率增加(P0.05)。暴露于各个剂量组的睾丸组织曲精细管发生不同程度的病理改变。相较于对照组,各个剂量组nm-SiO_2均使睾丸组织基因组DNA甲基化水平降低,且呈现剂量-效应关系。结论nm-SiO_2暴露可导致SD大鼠睾丸组织形态学改变,对精子造成一定的损伤,并且随着nm-SiO_2剂量增加,其对大鼠精子发育损伤逐渐增大。nm-SiO_2暴露可以导致SD大鼠睾丸组织基因组DNA甲基化水平下降。     

厚度与纳米二氧化硅掺杂对义齿基托气孔率的影响

目的:考察厚度与纳米SiO2掺杂对聚甲基丙烯酸甲酯义齿基托气孔率的影响。方法:采用两种材料聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)和纳米二氧化硅/聚甲基丙烯酸甲酯复合材料(PMMA/SiO2)制备长65mm,宽40mm,厚度分别为3mm、5mm、7mm、9mm长方体树脂八组,每组8个,共64个。试件均经过打磨、抛光,干燥至恒重后记数,再放入37℃蒸馏水中浸泡至恒重记数。根据公式计算气孔率。结果:随着厚度的增加,两组材料气孔率均随之增加。在同厚度下,PMMA材料组与PMMA/SiO2复合材料组的气孔率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:厚度对义齿基托气孔率影响较大。添加SiO2纳米颗粒对义齿基托的气孔率没有明显的影响。     

姜黄素对人食管癌细胞BAG-1表达的影响

目的观察姜黄素对人食管癌细胞抗凋亡基因BAG-1表达的影响,并探讨姜黄素抗癌分子机制。方法应用浓度为40～80μmol/L姜黄素处理人食管癌EC-9706细胞株12h后,Western blot检测BAG-1的表达。结果经不同浓度的姜黄素干预后,BAG-1表达随着姜黄素浓度的增加有逐渐减弱的趋势。结论姜黄素能够有效抑制抗凋亡基因BAG-1的高表达。