氧化槐果碱对胃癌MGC80-3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察氧化槐果碱对胃癌MGC80-3细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 采用CCK-8、Hoechest 33342染色、倒置显微镜和流式细胞术测定氧化槐果碱干预后对细胞的增殖、凋亡的影响,qRT-PCR检测胃癌MGC80-3细胞中Bcl-2、Bax mRNA水平,Western blot法检测胃癌MGC80-3细胞中Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白水平。结果 氧化槐果碱能抑制胃癌MGC80-3细胞增殖（P<0.05）,并具有时间和浓度依赖性。0.48,0.95,1.91 mmol·L^-1氧化槐果碱能诱导细胞凋亡（P<0.05）,凋亡抑制剂Z-DEVD-FMK能逆转氧化槐果碱的凋亡诱导作用,0.95,1.91 mmol·L^-1氧化槐果碱能上调Bax的mRNA水平,下调Bcl-2的mRNA水平,差异均有统计学意义（P<0.05）。0.95,1.91 mmol·L^-1氧化槐果碱能上调Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的蛋白水平,下调Bcl-2蛋白水平,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。凋亡抑制剂Z-DEVD-FMK能逆转氧化槐果碱对Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白的影响。结论 氧化槐果碱能通过调节Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的表达水平,抑制胃癌MGC80-3细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

黄芩茎叶总黄酮对结肠癌HCT116细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 研究黄芩茎叶总黄酮（SBTF）对结肠癌HCT116细胞凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 采用CCK8法检测SBTF（5、10、20、50、100、200、400、600 μg·mL^-1）对HCT116细胞增殖的影响;Annexin V/PI双染法检测SBTF （80、120、160 μg·mL^-1）对HCT116细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测SBTF对细胞线粒体膜电位的影响;Transwell小室迁移和侵袭实验检测SBTF对细胞迁移和侵袭的影响;Western blotting法检测SBTF对细胞凋亡、迁移和侵袭相关蛋白表达的影响。结果 与对照组比较,SBTF可明显抑制HCT116细胞增殖,干预24、48 h后的半数抑制浓度（IC₅₀）值分别为156.50、98.59 μg·mL^-1;SBTF显著提高HCT116细胞凋亡率（P＜0.05、0.01）;SBTF明显促进HCT116细胞线粒体膜电位改变;SBTF显著降低HCT116细胞迁移和侵袭率（P＜0.05、0.01）;SBTF显著上调HCT116细胞的Bax/Bcl-2值和cleaved Caspase-3蛋白表达（P＜0.05、0.01）,显著下调MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05、0.01）。结论 SBTF可通过诱导HCT116细胞凋亡和抑制细胞迁移、侵袭发挥抗结肠癌作用。     

木香内酯对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨木香内酯（micheliolide，MCL）对结肠癌细胞增殖和凋亡的作用及潜在机制。方法 通过腹腔注射致癌剂氧化偶氮甲烷（azoxymethane，AOM）和饮用致炎剂葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate，DSS）构建AOM/DSS小鼠结肠癌模型，分别给予尾静脉注射2.5 mg·kg^-1顺铂、MCL 0，10，20，50 mg·kg^-1，连续30 d记录小鼠存活率。取肿瘤组织，称肿瘤质量。免疫组化检验小鼠肿瘤组织Ki67和胱天蛋白酶3（caspase-3）蛋白表达水平，Western blotting检测小鼠肿瘤组织PTEN蛋白表达量；结肠癌细胞系SW620分别用含10 μmol·L^-1顺铂、MCL 0，2.5，5，10 μmol·L^-1培养基培养，或转染siPTEN后在MCL 0和10 μmol·L^-1培养基培养。BrdU细胞增殖试验检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blotting检测细胞增殖抗原（Ki67、PCNA）、细胞凋亡相关蛋白（cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax）及PTEN蛋白表达量。结果 与模型组相比，MCL增加小鼠生存率，减轻肿瘤质量，增加抑瘤率，上调PTEN蛋白表达，减少Ki67阳性细胞，增加caspase-3阳性细胞（P<0.05或P<0.01）；与对照组相比，MCL降低结肠癌细胞BrdU阳性细胞百分比，下调Ki67和PCNA的表达量，增加细胞凋亡率，下调Bcl-2的表达量，上调Bax、cleaved caspase-3和PTEN的表达（P<0.05或P<0.01）；抑制PTEN表达能逆转MCL对SW620细胞增殖和凋亡的作用（P<0.01）。结论 MCL抑制结直肠癌细胞增殖并诱导细胞凋亡，这与上调PTEN表达有关。     

S-3(-三氟甲基)-6，7-双[4(-三氟甲基)苯基]-3，4-二氢喹啉-2(1H)-酮下调STAT3信号通路抑制人结直肠癌细胞生长的作用研究

目的 基于信号转导和转录活化因子3（STAT3）信号通路探讨三氟甲基化二氢喹喔啉酮类化合物S-3-（三氟甲基）-6,7-双［4-（三氟甲基）苯基］-3,4-二氢喹啉-2（1H）-酮（2o）对人结直肠癌细胞生长的抑制作用。方法 采用 MTT法检测三氟甲基化二氢喹喔啉酮类化合物 2b、2e、2f、2g、2k、2l、2m、2o、2q（20 μmo·L^-1）作 用 48 h 对 人 结 直 肠 癌 细 胞DLD-1 存活率的影响,检测化合物2o（0.5、1.0、2.0、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5 μmo·L^-1）作用48 h对人结直肠癌细胞HCT116、RKO和DLD-1存活率的影响;克隆形成实验检测化合物2o（2.5、5.0、10.0 μmo·L^-1）对RKO、DLD-1、HCT116细胞增殖的影响;流式细胞术和 Hoechst染色检测化合物 2o 对细胞凋亡的影响;细胞划痕实验检测化合物 2o 对 DLD-1 和RKO 细胞迁移率的影响;Western blotting 法检测化合物 2o 对 RKO 细胞 p-STAT3、STAT3、骨髓白血病细胞分化蛋白（MCL）-1、生存素（Survivin）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平的影响,检测化合物2o对白细胞介素-6（IL-6）刺激下p-STAT3、STAT3蛋白表达水平的影响。结果 化合物2o对DLD-1细胞的杀伤能力较其他化 合 物 强 ; 化 合 物 2o 对 HCT116、 RKO 和 DLD-1 细 胞 的 半 数 抑 制 浓 度 （IC₅₀） 分 别 为 （3.573±0.172）、（8.056±0.458）、（6.226±0.458）μmo·L^-1。与对照组比较,化合物2o明显降低了HCT116、RKO和DLD-1细胞的集落形成能力;显著降低DLD-1和RKO细胞迁移率（P＜0.01、0.001）;明显增加RKO、DLD-1细胞凋亡率;明显增加HCT116和RKO细胞核亮染比例;明显降低p-STAT3、MCL-1、Survivin、Bcl-2蛋白表达,明显升高Bax蛋白表达,对STAT3蛋白表达无明显影响。与对照组比较,IL-6刺激的模型组p-STAT3蛋白表达明显升高,STAT3蛋白表达无明显变化;与模型组比较,随着化合物2o浓度的升高,p-STAT3蛋白表达明显降低,STAT3蛋白表达无明显变化。结论 化合物2o可能通过下调STAT3信号通路发挥抗人结直肠癌作用。     

基于结肠癌HCT116细胞三维培养模型的灵芝水提物抗肿瘤活性研究

目的 采用结肠癌HCT116细胞的二维（2D）和三维（3D）培养模型研究灵芝水提物（Ganoderma lucidum water extract，GLWE）的抗肿瘤作用。方法 采用紫外-可见光分光光度法测定GLWE中灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharides，GLP）、三萜和甾醇的含量，HPLC分析GLP中水溶性单糖的组成和比例；以Matrigel基质胶为基质材料建立体外HCT116细胞3D培养模型，评价GLWE的抗肿瘤及辅助抗肿瘤活性；CCK-8法检测细胞活力；Real-time PCR检测细胞mRNA表达水平；Western blotting检测细胞蛋白表达水平。结果 GLWE中GLP和三萜及甾醇的含量分别为20.92%和7.18%，其中GLP主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、D-木糖、L-岩藻糖组成；GLWE和5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）作用48 h可呈浓度依赖性抑制2D和3D培养的HCT116细胞增殖；与2D培养相比，3D培养的HCT116细胞中整合素β1（Integrin β1）和钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA的表达显著升高，并对GLWE和5-FU的敏感性降低；在HCT116细胞3D培养模型中，GLWE既可降低CDK2、CDK4和Bcl-2蛋白的表达，升高p21、p27、cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白的表达，还可显著降低Integrin β1和E-cadherin mRNA的表达，并加强5-FU的抗肿瘤活性。结论 GLWE通过抑制细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制3D培养的HCT116细胞增殖，并通过抑制Integrin β1和E-cadherin mRNA的表达增强5-FU的抗肿瘤活性。     

芍药苷对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的 探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法 分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80 μmol·L^-1 PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C (cytochrome C,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca²⁺浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果 细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25 μmol·L^-1染毒24 h;PF剂量为20,40,80 μmol·L-1可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40 μmol·L^-1 PF组和80 μmol·L^-1 PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca²⁺浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20 μmol·L^-1PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论 PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。     

紫草素抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导人结肠癌SW480细胞凋亡和自噬的作用研究

目的 探讨紫草素对人结肠癌SW480细胞凋亡和自噬的影响及其机制。方法 取对数生长期人结肠癌SW480细胞,设对照组（DMSO）、紫草素（0.3、0.5、0.7 μg/mL）和LY294002（PI3K特异性抑制剂,5 μg/mL）组。药物干预48 h后,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测SW480细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC流式细胞术分析细胞凋亡状况,蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax、LC3蛋白表达并计算Bax/Bcl-2和LC3-II/LC3-I值。结果 与对照组比较,经紫草素0.3、0.5、0.7 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够显著提高人结肠癌SW480细胞增殖抑制率和凋亡率（P<0.01）;经紫草素0.5、0.7 μg/mL或LY294002 5 μg/mL干预能够显著下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达,并上调Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达（P<0.05、0.01）,提高Bax/Bcl-2和LC3-II/LC3-I值（P<0.01）。与LY294002组比较,经紫草素0.7 μg/mL干预能够显著提高SW480细胞增殖抑制率和凋亡率（P<0.05、0.01）,下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达并上调Caspase-3、cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达（P<0.05、0.01）,提高Bax/Bcl-2和LC3-II/LC3-I值（P<0.01）。结论 紫草素能够促进人结肠癌SW480细胞凋亡和自噬,作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化有关。     

乌骨藤中C21甾体苷诱导SACC-83和SACC-LM细胞凋亡的作用及其机制研究

目的 研究乌骨藤提取物C₂₁甾体苷对唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinomacv,SACC）低侵袭细胞株（salivary adenoid cystic carcinoma-83,SACC-83）和肺高转移细胞株（SACC-LM）增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法 用不同浓度（5,10,20,40,60,80,100 μmol·L^-1） C₂₁甾体苷处理SACC-83和SACC-LM细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,并计算药物的IC₂₀和IC₅₀;细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测SACC-83及SACC-LM细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR和Western blot检测SACC-83和SACC-LM细胞Bcl-2、Bax、caspase 3的mRNA和蛋白的表达。结果 不同浓度的C₂₁甾体苷降低SACC-83和SACC-LM细胞活力,抑制细胞增殖,并且作用于SACC-83细胞C₂₁甾体苷的IC₂₀浓度为7.49 μmol·L^-1,IC₅₀浓度为38.34 μmol·L^-1;作用于SACC-LM细胞的C₂₁甾体苷IC₂₀浓度为9.30 μmol·L^-1,IC₅₀浓度为46.04 μmol·L^-1;细胞克隆集落形成明显减少。C₂₁甾体苷IC₂₀浓度分别促进SACC-83及SACC-LM细胞凋亡,且随着给药时间延长,凋亡率增加,具有显著性差异（P<0.05,P<0.01）。经7.49,9.30 μmol·L^-1 C₂₁甾体苷分别处理SACC-83及SACC-LM细胞后,Bcl-2的mRNA及蛋白水平显著降低（P<0.01）,而Bax、Caspase 3的mRNA和蛋白水平显著升高（P<0.05）。结论 乌骨藤C₂₁甾体苷抑制SACC-83及SACC-LM细胞增殖、促进凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2、Bax和Caspase 3表达有关。     

鼓槌石斛体外抗血小板聚集活性研究

目的 对鼓槌石斛提取物进行抗血小板聚集活性的药效筛选,并初步探讨其抗血栓作用。方法 将15只大鼠按体质量随机分为鼓槌石斛提取物1（gc1）组、鼓槌石斛提取物2（gc2）组、鼓槌石斛提取物3（gc3）组、鼓槌石斛提取物4（gc4）组及阳性对照（阿司匹林）组,每组3只;将15只豚鼠按体质量同法随机分为5组,每组3只。大鼠组和豚鼠组分别采用二磷酸腺苷（adenosine diphosphate,ADP）和花生四烯酸（arachidonic acid,AA）诱导体外血小板聚集实验,分别检测空白对照管与不同浓度的鼓槌石斛提取物及阿司匹林给药管的富血小板血浆在5 min内的最大聚集率,并计算血小板聚集的抑制率和各受试物的半数抑制浓度（IC₅₀）。结果 与空白对照组相比,gc1（5.318 mmol·L^-1）、gc2（1.708 mmol·L^-1）、gc3（2.925 mmol·L^-1）、gc4（3.152,1.576,0.394 mmol·L^-1）对ADP诱导的血小板最大聚集率显著降低（P<0.05或P<0.01）。与空白组相比,gc1（0.083,0.166 mmol·L^-1）、gc2（0.106,0.214 mmol·L^-1）、gc3（0.023 mmol·L^-1）、gc4（0.049,0.099,0.197,0.394 mmol·L^-1）对AA诱导的血小板最大聚集率显著降低（P<0.05或P<0.01）。结论 鼓槌石斛多种成分具有抗血小板聚集作用,在血栓性疾病中具有一定的积极作用。     

基于Wnt/β-catenin和AMPK信号通路探讨小槐花黄酮抑制结肠癌细胞增殖和转移作用

目的 研究小槐花Desmodium caudatum抑制肿瘤细胞增殖和转移的作用,并探讨其对Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路的调控作用。方法 采用不同条件制备8种小槐花提取物,MTT法检测小槐花提取物1～8对HCT-116、SW480细胞增殖的影响;结晶紫染色检测小槐花提取物2、3对结肠癌HCT-116、SW480细胞集落形成的影响;划痕实验检测小槐花提取物2、3对HCT-116、SW480细胞迁移的影响;从活性较高的提取物2中提取分离出5个黄酮类化合物（1～5）,MTT法检测化合物1～5对HCT-116、SW480、HepG2、RAW264.7、LX-2细胞增殖的影响;结晶紫染色检测化合物1 （8-异戊烯基槲皮素,0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μmol· L^-1）对HCT-116和SW480细胞集落形成的影响,划痕实验检测8-异戊烯基槲皮素对HCT-116和SW480细胞转移的影响。Western blotting实验检测8-异戊烯基槲皮素对HCT-116和SW480细胞中AMPK和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响;荧光素酶报告基因检测实验观察8-异戊烯基槲皮素对β-catenin与T细胞因子（TCF）结合能力的影响。结果 与对照组比较,小槐花根茎提取物2和3以及8-异戊烯基槲皮素能显著抑制结肠癌细胞的增殖和迁移（P<0.05、0.01、0.001）。与对照组比较,8-异戊烯基槲皮素能够显著上调p-AMPK蛋白的表达（P<0.05、0.001）,显著下调AMPK、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A （CPT-1A）和脂肪酸合成酶（FAS）蛋白的表达（P<0.05、0.01、0.001）,表明其能够促进癌细胞AMPK信号通路的激活。与对照组比较,8-异戊烯基槲皮素显著下调β-catenin以及其下游糖原合酶激酶3β（GSK-3β）、核内原癌基因（c-Myc）和G₁/S-特异性周期蛋白-D1 （Cyclin D1）的蛋白表达（P<0.05、0.01、0.001）,同时显著降低TCF报告基因结合位点（野生型）和荧光素酶开放阅读框TOPflash（pGL3-OT）活性（P<0.05、0.01）,但不影响FOPflash（含突变位点）活性,表明其抑制β-catenin的表达和β-catenin/TCF复合物的结合。结论 小槐花黄酮8-异戊烯基槲皮素通过调控Wnt/β-catenin和AMPK信号通路抑制结肠癌细胞增殖和转移。     

AGGF1通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进结直肠癌发生发展

目的 研究G补缀FHA域血管新生因子1（angiogenic factor with G-patch and FHA domain 1，AGGF1）调控Wnt/β-catenin信号通路对结直肠癌细胞（colorectal cancer，CRC）增殖、侵袭和上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的可能机制。方法 通过裸鼠荷瘤免疫组化法检测AGGF1在正常组织和癌组织中的表达。qRT-PCR和Western blotting检测NCM460、SW620、HT29、HCT116、SW480中AGGF1的mRNA和蛋白表达水平。于HCT116细胞中过表达AGGF1，分为Vector组和AGGF1组；于SW620细胞中敲减AGGF1，分为shControl组和shAGGF1组。CCK-8法和克隆形成试验测定细胞活性和细胞克隆数目。划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭情况。免疫荧光检测细胞E-cadherin、N-cadherin的表达。Western blotting检测细胞E-cadherin、N-cadherin、AGGF1、β-catenin、糖原合酶激酶-3β （glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）、p-GSK-3β蛋白表达水平。结果 AGGF1蛋白表达在CRC组织中明显增高。AGGF1 mRNA和蛋白表达水平在HCT116细胞中最低，在SW620细胞中最高。CCK-8法、克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验结果显示，在HCT116细胞中，与Vector组比较，AGGF1组48，72，96 h细胞活性、克隆细胞数目、相对迁移距离、侵袭细胞数显著增加（P<0.05或P<0.01）；而在SW620细胞中，与shControl组比较，shAGGF1组结果相反（P<0.05或P<0.01）。免疫荧光和Western blotting检测结果显示，与Vector组比较，AGGF1组E-cadherin荧光表达和蛋白表达水平降低（P<0.01），N-cadherin增强（P<0.05或P<0.01），同时上调AGGF1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达（P<0.01）；与shControl组比较，shAGGF1组E-cadherin荧光表达和蛋白表达水平显著升高（P<0.01），N-cadherin显著降低（P<0.05或P<0.01），同时下调AGGF1、β-catenin、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达（P<0.05或P<0.01）。结论 AGGF1可通过激活Wnt/β-catenin信号通路异常表达，上调β-catenin、p-GSK-3β、N-cadherin表达，下调E-cadherin表达，促进CRC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT，从而促进CRC发生发展。     

右美托咪定对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin通路的影响

目的 探究右美托咪定对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路的影响。方法 将Ishikawa、RL95-2细胞分为对照组,右美托咪定1、10、100 nmol/L组,右美托咪定（100 nmol/L）＋LiCl组。CCK-8法和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、β-连环蛋白（β-catenin）、c-Myc基因（c-Myc）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）表达水平。构建子宫内膜癌裸鼠模型,分为对照组、右美托咪定组、右美托咪定＋LiCl组,测量肿瘤质量与体积,苏木精–伊红（HE）染色观察移植瘤组织形态,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、β-catenin蛋白表达。结果 与对照组相比,不同浓度右美托咪定处理后Ishikawa、RL95-2细胞吸光度（A）值、EdU阳性细胞率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达上升（P＜0.05）;与右美托咪定100 nmol/L组相比,右美托咪定＋LiCl组A值、EdU阳性细胞率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax表达下降（P＜0.05）。右美托咪定能抑制移植瘤质量和体积,促进肿瘤凋亡,降低β-catenin、Ki-67蛋白表达（P＜0.05）;LiCl能逆转右美托咪定对移植瘤的抑制作用（P＜0.05）。结论 右美托咪定能抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

基于IL-6/STAT3信号通路探讨山楂酸对小鼠结肠癌CT26细胞增殖、凋亡的影响

目的 从IL-6/STAT3信号通路探讨山楂酸（MA）对小鼠结肠癌CT26细胞增殖、凋亡的影响。方法 体外培养CT26细胞,设置空白组、10、20、30、35、40 µmol•L^-1 MA组。干预24 h后,采用CCK-8法检测山楂酸对细胞活力的影响,采用RT-PCR检测IL-6 mRNA表达水平,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,采用Western blot检测各组细胞中STAT3通路相关蛋白的表达水平。设置空白组、IL-6（20 ng•mL^-1）刺激组、不同浓度MA与IL-6共刺激组,采用Western blot检测各组细胞p-STAT3、STAT3蛋白的表达水平。设置空白组、MA组、磷酸酶抑制剂 (Sodium Orthovanadate) 组和 MA + Sodium Orthovanadate 组,采用Western Blot检测各组细胞p-STAT3、STAT3蛋白的表达水平。结果 与空白组相比,CCK-8结果显示20、30、35、40、45、50 µmol•L^-1 浓度的山楂酸均能显著性降低CT26细胞活力（P<0.05）,IC₅₀=37.32 µmol•L^-1 ;RT-PCR结果显示30、35、40 µmol•L^-1 给药组细胞中IL-6 mRNA 水平显著下降（P<0.05）;流式细胞术结果显示30、35、40 µmol•L^-1 给药组细胞凋亡率显著增加（P<0.05）;Western blot结果显示35、40 µmol•L^-1 给药组细胞中STAT3通路相关蛋白p-STAT3、Bcl-2蛋白表达水平显著下降（P<0.05）,MA+Sodium Orthovanadate 组能显著恢复MA单独给药组中被降低的p-STAT3蛋白水平（P<0.05）。结论 MA可能通过降低IL-6的表达水平,抑制STAT3的磷酸化,从而降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进肿瘤细胞凋亡,抑制其增殖。     

基于网络药理学预测三七治疗幽门螺杆菌相关疾病机制及实验验证

目的 基于网络药理学预测三七治疗幽门螺杆菌（Hp）相关疾病机制,研究三七中有效活性成分人参皂苷Rb₃对Hp造成的胃上皮细胞损伤的保护作用及机制。方法 使用Herb数据库收集“三七”的相关预测靶点,使用Gene Cards数据库收集Hp相关疾病的靶点;使用Draw Venn Diagram网站绘制Venn图,得到靶点交集;进行蛋白互作（PPI）网络分析、基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。将GES-1细胞分为对照组、模型组及人参皂苷Rb₃低、中和高浓度（1、5、10 μ mol· L^-1）组,人参皂苷Rb₃组使用相应浓度的人参皂苷Rb₃预处理,培养过夜12 h至融合度为70%～80%。Hp悉尼株1 （SS1）按感染复数（MOI） 100加入细胞中制备损伤模型,人参皂苷Rb₃继续给药,共培养48 h。对照组不加SS1,对照组和模型组不加药。改良吉姆萨染色后通过光学显微镜观察细胞形态;结合Hoechst 33342荧光染色和Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒法检测活性氧（ROS）水平;采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测凋亡相关基因TP53、Bax、Bcl-2表达量;Western blotting法检测P53、p-Akt、cleaved/pro-Caspase 9、Bcl-2、Bax、cleaved/pro-Caspase 3的蛋白表达情况。结果 网络药理学结果表明三七治疗Hp相关疾病的靶点共16个,其PPI网络分析得到按度值大小排名前6位靶点为TP53、CASP3、PTGS2、IL6、TNF、IL1β。GO富集分析与KEGG富集分析结果均显示与凋亡相关。与模型组比较,经人参皂苷Rb₃处理后,GES-1细胞的细胞核染色质致密深染,破裂的细胞逐渐减少;Hoechst 33342荧光染色细胞核强荧光数目明显减少;细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）;ROS水平显著降低（P＜0.05）;TP53与Bax的mRNA水平显著降低,Bcl-2 mRNA水平显著升高（P＜0.05）; p-Akt、Bcl-2蛋白表达显著升高（P＜0.05）,P53、Bax、cleaved/pro-Caspase 9与cleaved/pro-Caspase 3蛋白表达显著降低（P＜0.05）。结论 三七可能通过包括炎症及凋亡在内的多种途径治疗Hp相关疾病,人参皂苷Rb₃对Hp诱导的胃上皮细胞凋亡发挥显著改善作用,其可能机制是降低氧化应激水平,并调节Akt的磷酸化和P53的表达。     

半枝莲总黄酮调控MIIP对人胃腺癌细胞AGS增殖、凋亡和放疗敏感性的作用及机制研究

目的 研究半枝莲总黄酮（TF-SB）对人胃腺癌细胞AGS增殖、凋亡和放疗敏感性的影响和分子机制。方法 采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测TF-SB（0、25、50、100、200 μg·mL⁻¹）作用24 h对AGS细胞存活率的影响。将AGS细胞分为对照组、溶剂对照（含相同浓度的甲醇）组、TF-SB（100 μg·mL⁻¹）组、质粒空载体（pcDNA,200 nmol·L⁻¹）组、迁移侵袭抑制蛋白（MIIP）过表达质粒（pcDNA-MIIP,200 nmol·L⁻¹）组、TF-SB（100 μg·mL⁻¹）＋小干扰RNA对照（si-con,200 nmol·L⁻¹）组、TF-SB（100 μg·mL⁻¹）＋MIIP小干扰RNA（si-MIIP,200 nmol·L⁻¹）组,转染质粒后TF-SB处理24 h,CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting法检测B细胞淋巴瘤-xl（Bcl-xl）、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（cleaved Caspase-3）、MIIP表达;不同照射量X射线（0、2、4、6、8 Gy）照射后,克隆形成实验检测细胞存活率,并绘制单击多靶模型拟合曲线,Western blotting法检测γ-H2AX蛋白表达。结果 与TF-SB 0 μg·mL⁻¹组比较,TFSB 25、50、100、200 μg·mL⁻¹组AGS细胞存活率显著降低（P＜0.05）;与对照组及溶剂对照组比较,TF-SB 100 μg·mL⁻¹组AGS细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,Bcl-xl蛋白表达显著降低（P＜ 0.05）,cleaved Caspase-3和MIIP蛋白表达显著升高（P＜0.05）;放疗后,TF-SB组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,γ-H2AX蛋白表达显著升高（P＜0.05）,放疗敏感性增加。与pcDNA组比较,pcDNA-MIIP组AGS细胞凋亡率显著增加,细胞存活率显著降低,Bcl-xl蛋白表达显著降低,cleavedCaspase-3蛋白表达增加（P＜0.05）;放疗后,pcDNA-MIIP组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,γ-H2AX蛋白表达显著升高（P＜0.05）,敏感性增加。与TF-SB＋si-con组比较,TF-SB＋si-MIIP组AGS细胞凋亡率显著降低,细胞存活率显著增加,Bcl-xl蛋白表达显著增加,cleaved Caspase-3蛋白表达显著降低（P＜0.05）;放疗后,TF-SB＋si-MIIP组细胞存活率显著升高（P＜0.05）,γ-H2AX蛋白表达显著降低（P＜0.05）,敏感性降低。结论 TF-SB通过上调MIIP可抑制AGS细胞增殖,诱导细胞凋亡,提高其放疗敏感性。     

白细胞介素1β对结直肠癌细胞HCT116迁移能力和上皮-间质转化的影响

目的 研究白细胞介素1β（IL-1β）诱导结直肠癌细胞HCT116转移的分子机制。方法 HCT116细胞分为空白对照组（不进行任何处理）,IL-1β处理组（加入200 pmol/L IL-1β处理）,干扰阴性对照+IL-1β处理组（转染阴性干扰对照再加入IL-1β处理）,干扰锌指绑定增强蛋白1（ZEB1）+IL-1β处理组（转染ZEB1干扰RNA）。使用Transwell迁移实验研究各组细胞的迁移能力。荧光定量聚合酶监链式反应（PCR）检测各组细胞中E-cadherin和ZEB1基因的表达。免疫印迹实验检测各组细胞E-cadherin和ZEB1蛋白的表达。结果 空白对照组穿过Transwell小室的细胞数量为（58.3±7.2）个,IL-1β处理组为（129.6±12.1）个,差异有统计学意义（P<0.05）;干扰阴性对照+IL-1β处理组穿过Transwell小室的细胞数量为（108.7±15.9）个,干扰ZEB1+IL-1β处理组为（68.2±11.4）个,差异有统计学意义（P<0.05）。空白对照组HCT116细胞中E-cadherin基因的相对表达量、E-cadherin蛋白相对灰度值均高于IL-1β处理组,差异均有统计学意义（P<0.05）;干扰阴性对照+IL-1β处理组HCT116细胞中E-cadherin基因的相对表达量、E-cadherin蛋白相对灰度值均低于干扰ZEB1+IL-1β处理组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 IL-1β通过诱导ZEB1表达促进结直肠癌细胞HCT116发生EMT转化并提高其迁移能力。     

西红花苷抑制NFATc3活性促进与肿瘤成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞放射敏感性

目的 探究西红花苷对与肿瘤成纤维细胞（CAFs）共培养的结直肠癌细胞放射敏感性的影响,并探究分子机制。方法 通过实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）和蛋白质免疫印记（Western blotting）比较人正常结肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116、LOVO中活化T细胞核因子c3（NFATc3）表达差异。建立CAFs与HCT116细胞共培养体系,西红花苷处理细胞后经不同剂量（0、2、4、6、8 Gy）X射线照射,细胞克隆形成实验分析细胞存活分数（SF）。再将HCT116细胞分为对照组、6 Gy组、CAFs/HCT116＋6 Gy组、CAFs/HCT116＋西红花苷＋6 Gy组,进行对应处理后,MTT法检测各处理组HCT116细胞活性,流式细胞术检测各处理组HCT116细胞凋亡率,Hoechst 33258染色观察各处理组HCT116细胞凋亡形态,qRT-PCR和Western blotting测定各处理组HCT116细胞中NFATc3表达水平。结果 相较于人正常结肠上皮细胞NCM460,人结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116、LOVO中的NFATc3 mRNA和蛋白相对表达量均显著上调（P＜0.05）。与HCT116细胞比较,与CAFs共培养的HCT116细胞经辐射后的SF显著增高（P＜0.05）;与CAFs共培养的HCT116细胞比较,与CAFs共培养的HCT116细胞经西红花苷处理再进行辐射的SF显著降低（P＜0.05）。与6 Gy组比较,CAFs/HCT116＋6 Gy组HCT116细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著下降（P＜0.05）,细胞内染色也较为均匀,未见致密浓染的凋亡状细胞,细胞中NFATc3 mRNA和蛋白相对表达量均显著上调（P＜0.05）;而与CAFs/HCT116＋6 Gy组比较,CAFs/HCT116＋西红花苷＋6 Gy组HCT116细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,细胞中有较多致密浓染、碎裂荧光块,同时,细胞中NFATc3 mRNA和蛋白相对表达量显著下调（P＜0.05）。结论 西红花苷能够明显提高与CAFs共培养的结直肠癌HCT116细胞的放射敏感性,从而促进细胞发生凋亡,该作用可能与抑制NFATc3有关。     

藏红花素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞协同抑制作用的研究

目的 探索藏红花素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞的协同抑制作用及相关调控机制。方法 取对数生长期人宫颈癌HeLa细胞,设置空白对照组（DMSO）、藏红花素组（400 μg·mL^-1）、顺铂组（5 μg·mL^-1）、联合组（藏红花素400 μg·mL^-1+顺铂5 μg·mL^-1）。干预48 h后,CCK-8检测HeLa细胞增殖抑制率,采用CompuSyn软件计算藏红花素与顺铂的联合指数（CI）,Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting检测激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞周期素D1（Cyclin D1）、周期蛋白依赖激酶2（CDK2）的表达。结果 与顺铂组比较,联合组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,CI为0.68,具有中度协同效应;细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,G₀/G₁期细胞比例显著升高（P<0.05）,而G₂/M期比例显著降低（P<0.01）,Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高（P<0.05）,Cyclin D1、CDK2蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。与空白对照组比较,藏红花素组G₀/G₁期细胞比例显著升高而G₂/M期比例显著降低（P<0.01）,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高（P<0.01）,Cyclin D1、CDK2表达水平显著降低（P<0.05）。结论 藏红花素联合顺铂可协同抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖和生长,其作用机制可能与调控凋亡相关蛋白的表达从而促进细胞凋亡、阻滞细胞周期进程有关。     

氧化苦参碱介导细胞自噬减轻溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜氧化性损伤的作用机制研究

目的 探讨氧化苦参碱介导细胞自噬减轻溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）小鼠结肠黏膜氧化性损伤的作用机制。方法 采用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠复制小鼠UC模型,将造模成功小鼠按体质量随机分为模型组、氧化苦参碱组（50 mg·kg^-1·d^-1,ig）、羟基氯喹组（50 mg·kg^-1·d^-1,ig）、氧化苦参碱+羟基氯喹组,另设正常组,每组10只。治疗1周后测定各组小鼠疾病活动度（disease activity,DAI）、结肠质量系数及病理形态;MitoSOX Red法测定结肠ROS含量,ELISA法测定结肠组织SOD、MDA、MPO、GSH-PX含量;透射电镜结合免疫荧光观测结肠细胞自噬程度,Western blot测定Atg5和Beclin-1蛋白表达。结果 与模型组和羟基氯喹组比较,氧化苦参碱组小鼠DAI和结肠质量系数均有显著减小（P<0.01）,结肠病理损伤明显减轻;ROS、MDA和MPO含量极显著降低（P<0.01）,SOD和GSH-PX含量极显著增加（P<0.01）;结肠黏膜细胞自噬,程度显著增强,Atg5和Beclin-1蛋白表达极显著上调（P<0.01）。结论 氧化苦参碱可促进UC小鼠细胞自噬,减轻小鼠结肠黏膜氧化性损伤。     

基于Keap1/Nrf2/HO-1通路汉黄芩素7-O-β-D-乙基葡萄糖醛酸苷体外抗氧化应激作用研究

目的 探讨汉黄芩素 7-O-β-D-乙基葡萄糖醛酸苷（WODE）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞（RAW264.7）的抗氧化应激作用及机制。方法 MTS法检测WODE（2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 μmol·L^-1）对RAW264.7细胞活力的影响；体外培养RAW264.7细胞，WODE（10、20、40 μmol·L^-1）或地塞米松（1 μmol·L^-1，阳性药）预处理1 h，再给予LPS刺激24 h（造模过程不再加药），对照组不加 LPS 和受试物，模型组只给予 LPS 刺激；荧光探针检测胞内活性氧（ROS）水平；Griess反应测定细胞上清液中 NO 生成量；ELISA 检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的分泌；实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）法检测细胞内诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2）、白细胞介素-1β（IL-1β）、醌氧化还原酶1（NQO-1）、超氧化物歧化酶-1（SOD-1）的mRNA表达水平；Western blotting法检测细胞核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素加氧酶-（1 HO-1）蛋白表达水平；免疫荧光染色法检测细胞内Kelch ECH相关蛋白（1 Keap1）表达水平。结果 与对照组比较，WODE浓度小于40 μmol·L^-1时，细胞存活率没有明显变化；浓度大于80 μmol·L^-1时，细胞存活率下降，但未见统计学差异。与模型组比较，WODE 10、20、40 μmol·L^-1组 ROS水平显著降低（P＜0.01）；20、40 μmol·L^-1 组 NO 释放显著降低（P＜0.05、0.01）；40 μmol·L^-1 组 iNOS mRNA 表 达 水 平 显 著 降 低（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1 组 COX-2 和20、40 μmol·L^-1组IL-1β mRNA表达水平显著降低（P＜0.05、0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组TNF-α和IL-6的释放受到显著抑制（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组NQO-1 mRNA表达水平显著升高（P＜0.01），40 μmol·L^-1组SOD-1 mRNA表达水平显著升高（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组Keap1蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）；10、20、40 μmol·L^-1组HO-1蛋白和mRNA表达水平显著提高（P＜0.05、0.01）；20、40 μmol·L^-1 组 Nrf2 蛋白和 40 μmol·L^-1 组 Nrf2 mRNA 表达水平显著增加（P＜0.01）。结论 WODE 对 LPS 诱导的RAW264.7细胞的氧化应激具有抑制作用，其作用机制可能与调控Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关。