扶正抗癌方通过逆转HepG2细胞EMT抗肝癌的实验研究

目的:探讨扶正抗癌方对TGF-β1诱导的HepG2细胞EMT的影响及扶正抗癌方抑制肝癌侵袭与转移的机制。方法:建立肝癌HepG2细胞EMT模型并将其分为模型组、顺铂组、扶正抗癌方组、联合用药组,分别加入扶正抗癌方与顺铂含药血清,通过黏附实验、划痕实验、Transwell实验测定细胞的侵袭及转移能力,并检测EMT相关蛋白的表达。结果:各给药组细胞的黏附率、划痕的愈合率、转移的HepG2细胞数均低于模型组(P0.05或P0.01),联合用药组转移的HepG2细胞数低于顺铂组(P0.01);各给药组HepG2细胞中Vimentin表达低于模型组,而E-cadherin表达高于模型组(P0.05或P0.01),联合用药组HepG2细胞中Vimentin表达低于顺铂组,而E-cadherin表达高于顺铂组(P0.01)。结论:扶正抗癌方通过上调上皮标志蛋白E-cadherin的表达,下调间质细胞标记物Vimentin的表达,降低HepG2细胞运动和侵袭性,逆转其EMT进程。     

化痰通瘀解毒方水提取物通过Wnt/β-catenin信号通路抑制人胃癌细胞株MKN-45上皮-间质转化及侵袭迁移

目的:观察化痰通瘀解毒方对人胃癌细胞MKN-45侵袭迁移能力和上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响,并探讨其与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。方法:以转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1) 10 ng/m L诱导MKN-45细胞构建EMT模型;采用Transwell小室实验和划痕愈合实验检测细胞的侵袭、迁移能力;采用Western Blot法检测EMT标志蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:TGF-β1能够明显增强MKN-45细胞侵袭、迁移能力,诱导MKN-45细胞发生EMT:E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达上调;同时,TGF-β1能诱导MKN-45细胞Wnt1和β-catenin蛋白表达上调。化痰通瘀解毒方(10、20、40μg/m L)均可显著抑制TGF-β1诱导的MKN-45细胞侵袭迁移及EMT:E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达下调;同时,化痰通瘀解毒方(10、20、40μg/m L)还可下调Wnt1和β-catenin蛋白表达,且上述结果中化痰通瘀解毒方在10、20、40μg/m L剂量组间存在剂量依赖性; Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939与化痰通瘀解毒方40μg/m L均可明显抑制TGF-β1诱导的MKN-45细胞EMT和侵袭迁移,且XAV939可协同化痰通瘀解毒方40μg/m L抑制TGF-β1诱导的EMT和侵袭迁移。结论:化痰通瘀解毒方能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制TGF-β1诱导的EMT,进而降低MKN-45细胞侵袭迁移能力。     

苦豆碱对三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨苦豆碱(aloperine, Alo)对三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 体外培养人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468,加入不同浓度(50、100、200μmol/L)Alo干预处理,免疫细胞化学法观察三阴性乳腺癌细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达;Real-time qPCR法检测三阴性乳腺癌细胞转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)及EMT相关标志物如：E-cadherin、胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1, ZO-1)、波形蛋白(Vimentin)、间质细胞钙黏蛋白(N-cadherin)和Snail的mRNA水平;Western blot法检测三阴性乳腺癌细胞内TGF-β1、ZO-1、Vimentin、 N-cadherin及Snail的表达;Transwell小室法检测三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。结果 Alo可上调MDA-MB-231和MDA-MB-4...     

基于lncRNA MALAT1/Slug/Smad通路调控上皮间质转化探讨白花蛇舌草抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭

目的 研究白花蛇舌草（HDW）通过lncRNA MALAT1/Slug/Smad通路调控上皮间质转化（EMT）对结肠癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。方法 取对数生长期人结肠癌HCT-116细胞,分为空白组、药物组、病毒组和药物联合病毒组。空白组和药物组加入不含lncRNA MALAT1的空载慢病毒液,病毒组和药物联合病毒组加入含lncRNA MALAT1过表达慢病毒液,获得稳定转染的细胞系。空白组和病毒组用0 mg/mL HDW药液干预,药物组和药物联合病毒组用0.5 mg/mL HDW药液干预,均干预24 h。RT-qPCR法检测细胞lncRNA MALAT1mRNA相对表达水平;MTT法检测细胞活力;划痕实验检测细胞划痕愈合能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞锌指转录因子Slug、锌指转录因子Snail、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的蛋白表达量以及p-Smad/Smad。结...     

姜黄素对结直肠癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响及作用机制

目的：探究姜黄素对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭以及上皮间质转化的影响。方法：取结直肠癌HCT116细胞系,随机分为对照组和观察组,观察组细胞使用姜黄素50 μg/mL处理,对照组给予等量二甲基亚砜处理;采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹法（Western Blotting）检测细胞中上皮性钙黏蛋白（E-cadherin）、神经性钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、磷酸化Jagged 1蛋白（p-JAG1）、磷酸化Notch受体1蛋白（p-Notch1）以及磷酸化Notch受体2蛋白（p-Notch2）表达水平。结果：MTT法检测显示,姜黄素可显著抑制HCT116细胞增殖。划痕愈合实验以及Transwell实验显示姜黄素可显著抑制HCT116细胞迁移及侵袭。Western Blotting实验显示姜黄素可增加E-cadherin蛋白表达水平,降低N-cadherin和Vimentin蛋白以及p-JAG1、p-Notch1、p-Notch2等蛋白的表达水平（均P<0.05）。结论：姜黄素可显著抑制结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、侵袭以及上皮间质转化,其机制可能与JAG1/Notch2通路失活有关。     

理冲汤加减联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的影响

目的:探讨理冲汤加减联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化(EMT)的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测理冲汤加减及5-FU单独和联合使用对HepG2细胞生长影响;应用中效原理进行统计分析,确定联合用药时的药物效应-合用指数的关系,判定药物间的相互作用,确定后续实验给药浓度及时间;划痕实验检测理冲汤加减联合5-FU对HepG2细胞迁移能力的影响;细胞侵袭实验(transwell小室)检测理冲汤加减联合5-FU对HepG2细胞侵袭能力的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测理冲汤加减联合5-FU作用HepG2细胞24 h后对EMT相关基因上皮型钙黏蛋白(E-cadherin),神经型钙黏蛋白(N-cadherin),锌指转录因子(Snail,Twist) mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测理冲汤加减联合5-FU作用HepG2细胞24 h后EMT相关蛋白E-cadherin,N-cadherin,Snail,波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:MTT比色法结果显示,随着药物浓度增加,理冲汤加减,5-FU单药或联合用药对HepG2细胞生长的抑制效应也增加;应用中效原理进行统计分析显示,两药在低剂量合用24 h后对HepG2细胞可以产生较好的协同效应,故选用理冲汤加减,5-FU作用HepG2细胞24 h的25%抑制浓度(IC25)即800 mg·L-1理冲汤加减,3. 125 mg·L-15-FU;设空白组,5-FU组,理冲汤加减+5-FU组,理冲汤加减组进行后续实验;划痕和侵袭实验显示,理冲汤加减,5-FU单独及联合均能抑制HepG2细胞迁移侵袭能力(P 0. 05,P 0. 01),与5-FU组比较,理冲汤加减+5-FU组抑制能力更强(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,5-FU组,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin mRNA表达上调,N-cadherin,Snail,Twist mRNA表达下调(P 0. 05,P 0. 01);与5-FU组比较,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin mRNA表达上调,N-cadherin,Snail,Twist mRNA表达下调(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,5-FU组,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Vimentin蛋白表达下调(P 0. 05,P 0. 01);与5-FU组比较,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Vimentin蛋白表达下调(P 0. 05,P 0. 01)。结论:理冲汤加减方与5-FU在低剂量合用24 h后对HepG2细胞可以产生较好的协同效应,并且能明显抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力,上调肝癌细胞内EMT相关标志物E-cadherin的表达,下调N-cadherin,Snail,Vimentin,Twist的表达,据此推测,抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT相关mRNA的表达,从而增强化疗药物的疗效,可能是理冲汤加减方联合5-FU协同作用的机制之一。     

天龙咳喘灵提取物对A549细胞上皮间质转化的影响及机制研究北大核心CSCD

目的探讨天龙咳喘灵提取物能否抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的A549细胞上皮-间质转化(EMT)及其作用机制。方法 1.用TGF-β1刺激体外培养的A549细胞发生EMT,观察天龙咳喘灵提取物干预后细胞形态的改变,Real-time PCR和Western blot检测上皮标志E-cadherin和间质标志Fibronectin的表达情况。2.检测不同时间点TGF-β1和天龙咳喘灵提取物对Notch1、Jagged1和Hey1表达的影响。3.转染Jagged1si RNA并用TGF-β1刺激细胞,检测E-cadherin和Fibronectin的蛋白表达情况。结果 1.与空白对照组比较,TGF-β1组细胞发生间质细胞形态变化,E-cadherin的m RNA和蛋白表达下调,Fibronectin表达上调;与TGF-β1组相比,天龙咳喘灵提取物组细胞恢复上皮细胞形态,E-cadherin的m RNA和蛋白表达上调,Fibronectin表达下调。2.TGF-β1刺激后,Jagged1、Hey1的表达量随着时间上调,而Notch1表达量无明显变化;天龙咳喘灵提取物可使Notch1、Jagged1、Hey1的表达量均随着时间下调。3.转染Jagged1 si RNA成功敲除Jagged1基因后,TGF-β1诱导的E-cadherin表达下调和Fibronectin表达上调受到抑制。结论天龙咳喘灵提取物通过下调Notch信号通路抑制TGF-β1诱导的上皮间质转化。     

天龙咳喘灵提取物对A549细胞上皮间质转化的影响及机制研究

目的探讨天龙咳喘灵提取物能否抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的A549细胞上皮-间质转化(EMT)及其作用机制。方法 1.用TGF-β1刺激体外培养的A549细胞发生EMT,观察天龙咳喘灵提取物干预后细胞形态的改变,Real-time PCR和Western blot检测上皮标志E-cadherin和间质标志Fibronectin的表达情况。2.检测不同时间点TGF-β1和天龙咳喘灵提取物对Notch1、Jagged1和Hey1表达的影响。3.转染Jagged1si RNA并用TGF-β1刺激细胞,检测E-cadherin和Fibronectin的蛋白表达情况。结果 1.与空白对照组比较,TGF-β1组细胞发生间质细胞形态变化,E-cadherin的m RNA和蛋白表达下调,Fibronectin表达上调;与TGF-β1组相比,天龙咳喘灵提取物组细胞恢复上皮细胞形态,E-cadherin的m RNA和蛋白表达上调,Fibronectin表达下调。2.TGF-β1刺激后,Jagged1、Hey1的表达量随着时间上调,而Notch1表达量无明显变化;天龙咳喘灵提取物可使Notch1、Jagged1、Hey1的表达量均随着时间下调。3.转染Jagged1 si RNA成功敲除Jagged1基因后,TGF-β1诱导的E-cadherin表达下调和Fibronectin表达上调受到抑制。结论天龙咳喘灵提取物通过下调Notch信号通路抑制TGF-β1诱导的上皮间质转化。     

积雪草酸对前列腺癌细胞增殖及转化生长因子 β1 诱导的上皮间质转化的影响

目的观察积雪草酸对前列腺癌细胞DU145 和PC-3 增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其对上皮间质转 化（EMT）的影响和潜在调控机制。方法体外培养DU145 和PC-3 细胞,以不同浓度积雪草酸干预后,采用 MTT 法检测其对细胞活力的影响;通过克隆形成实验检测其对细胞克隆形成能力的影响;通过细胞划痕实 验、Transwell 迁移及侵袭实验观察低浓度积雪草酸（10、20 μmol·L-1）对转化生长因子β1（TGF-β1,5 ng·mL-1） 诱导后DU145 和PC-3 细胞迁移、侵袭的影响;采用Western Blot 法检测DU145 细胞的血管内皮生长因子A （VEGFA）和EMT 相关纤维连接蛋白（Fibronectin）、波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏蛋白（N-Cadherin）、Snail 及 E-钙黏蛋白（E-Cadherin）的表达情况。结果积雪草酸可浓度及时间依赖性地抑制DU145 和PC-3 细胞增殖, 干预24、48、72 h 后的IC50 值分别为29.10、17.52、11.53 μmol·L-1 和27.91、21.43、14.82 μmol·L-1。积雪草 酸（10、20 μmol·L-1）能够明显抑制DU145 及PC-3 细胞克隆形成能力。与空白组比较,TGF-β1 能够明显促进 DU145 和PC-3 细胞的划痕愈合（P＜0.01）,促进DU145 细胞的侵袭（P＜0.05）,上调DU145 细胞内VEGFA 蛋 白和间质指标Fibronectin、Vimentin、N-Cadherin、Snail 蛋白的表达（P＜0.05,P＜0.01）,下调上皮指标 E-Cadherin 蛋白表达（P＜0.05）,进而诱导细胞EMT 进程。与TGF-β1 组比较,10、20 μmol·L-1 浓度的积雪草 酸能明显抑制TGF-β1 诱导后的DU145、PC-3 细胞划痕愈合及Transwell 细胞迁移、侵袭（P＜0.05,P＜ 0.01）,且呈现浓度依赖性;10 μmol·L- 1 浓度的积雪草酸能明显下调TGF-β1 诱导的DU145 细胞内的 VEGFA、Fibronectin、Vimentin、N-Cadherin、Snail 蛋白表达（P＜0.05）, 上调E-Cadherin 蛋白表达（P＜ 0.05）,进而逆转TGF-β1 诱导的EMT 进程。结论积雪草酸可抑制前列腺癌细胞DU145 和PC-3 增殖,并逆 转TGF-β1 诱导的前列腺癌细胞DU145 的EMT 进程,从而发挥其抗前列腺癌细胞侵袭、转移的作用。     

健脾消癌方对转化生长因子-β1诱导的SW620细胞上皮间质转化的影响

目的观察健脾消癌方对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的SW620细胞上皮间质转化的影响,探讨其防治结直肠癌的可能机制。方法体外培养结直肠癌细胞SW620。CCK-8法和Transwell小室实验测定细胞增殖、侵袭及迁移能力,qRT-PCR和Western blot检测E-cadherin和Vimentin的基因和蛋白表达。结果健脾消癌方药物血清能抑制SW620细胞体外增殖、迁移和侵袭能力;与空白组比较,TGF-β1诱导组细胞E-cadherin表达水平下降,Vimentin表达水平升高(P0.05);与TGF-β1诱导组比较,健脾消癌方+TGF-β1组细胞E-cadherin表达水平升高,Vimentin表达水平下降(P0.05)。结论健脾消癌方可通过调控TGF-β1诱导的SW620细胞上皮间质转化过程,抑制结肠癌的生长、侵袭和迁移能力,达到防止结直肠癌复发和转移的目的。     

益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究

目的:观察益气除痰方是否能通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)。方法:通过暴露于TGF-β_1环境中,诱导肺腺癌细胞株A549发生EMT,并以益气除痰方含药血清进行干预,相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测各组细胞EMT相关蛋白及TGF-β信号通路蛋白Smad2/3的表达。结果:镜下可见经TGF-β_1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清作用24 h后细胞A549细胞出现凋亡且间质化程度较低;划痕实验结果显示:与空白血清组比较,TGF-β_1+空白血清组A549细胞迁移及侵袭能力显著升高,益气除痰方可降低TGF-β_1所升高的细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测显示TGF-β_1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,而益气除痰方含药血清可抑制该过程。结论:益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移。     

北沙参石油醚部位抑制TGF-β1诱导的A549细胞上皮间质转化

探讨北沙参石油醚部位对TGF-β1诱导的肺癌Ⅱ型上皮细胞A549上皮间质转化的抑制作用及其可能机制。以A549细胞为研究对象,采用5μg·L~(-1)TGF-β1诱导的上皮间质转化模型进行实验。设置空白对照组、模型组、北沙参石油醚组。MTT法检测北沙参石油醚部位对A549细胞存活率的影响;Real-time PCR分析北沙参石油醚部位对诱导后A549细胞ColⅠ,E-cadherin,Vimentin,α-SMA mRNA表达水平的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测北沙参石油醚部位对诱导后细胞羟脯氨酸(HYP)分泌水平影响。细胞划痕检测北沙参石油醚部位对细胞运动能力的影响。从实验结果可以看出,北沙参石油醚部位能抑制A549细胞生长且呈药物浓度依赖关系。与模型组相比,北沙参石油醚部位能有效抑制上皮间质转化的标志性蛋白ColⅠ,Vimentin,α-SMA基因的表达,促进E-cadherin基因的表达。降低细胞内羟脯氨酸含量,同时降低细胞的运动能力。由此表明,北沙参石油醚部位能有效抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞发生上皮间质转化,是特发性肺纤维化的潜在治疗药物。其机制可能通过调控ColⅠ,Vimentin,α-SMA,E-cadherin而实现。     

常春藤皂苷元对肠癌SW480细胞上皮-间质转化(EMT)及侵袭的影响

目的:探讨常春藤皂苷元(HG)通过调控上皮-间质转化(EMT)途径抑制大肠癌侵袭转移的机制。方法:以肠癌细胞SW480细胞为研究对象,不同质量浓度HG干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的SW480细胞,作用24 h后噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力。转移小室(Transwell)实验检测细胞侵袭能力。实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin),蜗牛同源物1(果蝇)样1蛋白(Snail)及侵袭转移标志分子信号传导蛋白和转录激活物(STAT3),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),MMP~(-1)4,伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达变化。结果:HG可抑制TGF-β1诱导的肠癌SW480细胞增殖、干预EMT和降低侵袭能力,降低EMT标志分子N-cadherin,Vimentin,Snail及侵袭转移标志分子STAT3,MMP-9,MMP~(-1)4表达,增强E-cadherin,RECK的表达,与TGF-β1组比较均具有统计学差异(P0.05)。结论:HG可通过抑制EMT途径影响大肠癌细胞SW480侵袭转移。     

姜黄素对缺氧诱导的人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响

目的 探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响及其可能机制。方法 将HepG2细胞分3组：正常对照组、氯化钴（CoCl2）组和CoCl2加10 μmol/L姜黄素组。采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Real-time RT-PCR检测缺氧诱导因子－1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白、E-钙黏蛋白（epithelial-cadherin,E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。结果 HepG2细胞被CoCl2诱导缺氧后,细胞增殖及迁移能力增强,HIF-1α蛋白表达上调,上皮标志蛋白E-cadherin表达下降而间质标志蛋白Vimentin表达上调,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。姜黄素干预缺氧HepG2细胞后,其增殖与迁移能力被明显抑制,同时HIF-1α蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下降,与CoCl2组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。3组HIF-1α mRNA表达比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 缺氧诱导肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力的增强可被姜黄素逆转,可能与姜黄素抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白上调和上皮细胞间充质转化有关。     

莲子心新碱对转化生长因子β1 诱导的H1299 细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制

目的构建转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC） H1299 细胞上皮-间充质转化（EMT）模型,并探讨莲子心新碱（Neoliensine,NeoL）对其侵袭和迁移能力的抑制 作用及潜在机制。方法用5、10、15 ng·mL-1 的TGF-β1 诱导H1299 细胞构建EMT 模型;以15 ng·mL-1 的 TGF-β1 诱导H1299 细胞作为EMT 模型组,以法舒地尔（Fas）为阳性药,设置1、2、3 μmol·L-1 的莲子心新碱 实验组。采用倒置荧光显微镜观察诱导后的细胞形态;用CCK-8 法检测莲子心新碱对H1299 细胞的抑制率; Western Blot 法检测细胞黏附因子E-钙黏蛋白（E-cadherin）以及间充质标记物N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形 蛋白（Vimentin）以及ROCK 1 与P-Smad 2/3 蛋白的表达;Transwell 法检测莲子心新碱对TGF-β1 诱导的H1299 细胞侵袭、迁移的抑制作用;免疫荧光法检测H1299 细胞内ROCK 1 蛋白的表达及分布。结果TGF-β1 诱导 后H1299 细胞形态呈现间充质特性。与对照组比较,随着TGF-β1 浓度的升高,E-cadherin 表达明显降 低（P＜0.05,P＜0.01）,N-cadherin 与Vimentin 表达明显升高（P＜0.01,P＜0.001）,并且ROCK 1 蛋白的表达 也在这一过程中升高（P < 0.05）。莲子心新碱可以抑制H1299 细胞的活力,IC50 为5.04 μmol·L-1;同时与模型 组比较,莲子心新碱抑制了TGF-β1 促进的H1299 细胞EMT 过程及侵袭迁移作用（P＜0.001）,中、高剂 量组明显增加E-cadherin 蛋白的表达（P＜0.05）,明显减少N-cadherin 和Vimentin 蛋白的表达（P＜0.001）,还 明显降低了H1299 细胞内因TGF-β1 诱导而升高的ROCK 1（P＜0.001）和P-Smad2/3（P＜0.001）蛋白的水平。 免疫荧光结果显示莲子心新碱可以抑制TGF-β1 诱导的H1299 细胞胞质中ROCK 1 蛋白的表达及分布。 结论TGF-β1 可以诱导H1299 细胞发生EMT,莲子心新碱可以有效抑制这一过程,其机制可能是抑制了 TGF-β1/Smad/RhoA/ROCK 通路。     

基于高内涵细胞成像系统研究黄芩苷对人肺癌A549 细胞上皮间质转化模型的影响

目的基于高内涵细胞成像系统（HCS）探讨黄芩苷（Baicalin）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人肺癌 A549 细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法体外培养人肺癌A549 细胞,用TGF-β1 诱导A549 细胞发生上 皮间质转化,设立空白对照组（TGF-β1 0 ng·mL-1）、TGF-β1 模型组（TGF-β1 5 ng·mL-1）和黄芩苷干预组 （TGF-β1 5 ng·mL-1 +黄芩苷5、10、20 μmol·L-1）。采用MTT 法检测黄芩苷对A549 细胞活性的影响;以 TGF-β1 诱导人肺癌A549 细胞发生上皮间质转化,并加入不同浓度黄芩苷干预,采用HCS 分析细胞肌动蛋白 应激纤维（F-actin）纹理强度、细胞面积、细胞圆度和细胞长度等形态学变化,以及细胞黏附能力和运动迁移能 力变化;RT-qPCR 法检测上皮间质转化相关标志基因Collagen I、FN1、Vimentin 和E-cadherin 的相对表达 量。结果黄芩苷干预A549 细胞48 h 后半数抑制浓度（IC50）为22.59 μmol·L-1。HCS 分析结果显示,与空白对 照组比较,TGF-β1 模型组细胞形态呈间质细胞样（纺锤形）变化,F-actin 纹理强度增强（P＜0.01）,细胞长度 和细胞面积增大（P＜0.01）,细胞圆度减小（P＜0.01）,黏附率降低（P＜0.01）,迁移率和迁移速度升高（P＜ 0.01）;与TGF-β1 模型组比较,黄芩苷干预组细胞形态呈上皮细胞样（不规则多边形）变化,F-actin 纹理强度 减弱（P＜0.05,P＜0.01）,细胞长度和细胞面积减小（P＜0.01）,细胞圆度增大（P＜0.01）,黏附率升高（P＜ 0.01）,迁移率和迁移速度降低（P＜0.05,P＜0.01）。RT-qPCR 结果表明,与空白对照组比较,TGF-β1 模型组 Collagen Ⅰ、FN1 和Vimentin 的mRNA 相对表达量升高（P＜0.01）,E-cadherin 的mRNA 相对表达量降低（P＜ 0.01）;与TGF-β1 模型组比较,黄芩苷干预组Collagen I、FN1 和Vimentin 的mRNA 相对表达量降低（P＜ 0.05,P＜0.01）,E-cadherin 的mRNA 相对表达量升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论黄芩苷能够有效阻止 TGF-β1 诱导的人肺癌A549 细胞上皮间质转化进程,提示HCS 是一种多参数系统分析细胞上皮间质转化的有 效工具。     

桂皮醛通过PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β1诱导的结肠癌细胞LoVo上皮间质转化

目的:探讨桂皮醛对转化生长因子-β_1(Transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)诱导的结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其与磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的关系。方法:通过TGF-β_1诱导结肠癌细胞株LoVo发生上皮间质转化,使用桂皮醛(0,20,40,80 mg·L-1)干预由TGF-β_1诱导的LoVo细胞的增殖,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测桂皮醛对TGF-β_1诱导的细胞增殖能力的影响。转移小室(transwell)侵袭实验检测细胞侵袭能力变化。蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)及PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达。采用PI3K/Akt抑制剂LY290004来验证桂皮醛通过PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β_1诱导的EMT。结果:与空白组比较,桂皮醛能有效抑制TGF-β_1诱导的增殖及侵袭能力(P0.01),显著增加E-cadherin的表达,抑制N-cadherin,Vimentin及TGF-β_1刺激的p-Akt和p85的表达(P0.01);同时通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活逆转TGF-β_1诱导的EMT(P0.01)。结论:桂皮醛可通过调节PI3K/Akt信号通路抑制TGF-β_1诱导的结肠癌细胞LoVo的上皮间质转化,降低其侵袭能力。     

樟芝三萜酸A通过Wnt/β-catenin信号抑制人肝癌细胞HepG_2上皮-间质转化的研究

目的:研究樟芝三萜酸A通过Wnt/β-catenin信号抑制人肝癌细胞HepG_2上皮-间质转化的机制。方法:将常规培养的HepG_2细胞分为空白对照组、Sailnomycin(163 nmol/L,IC_(50))阳性组及樟芝三萜酸A低(10 mg/L)、中(50 mg/L)、高(100 mg/L)浓度组。CCK-8法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,光镜下观察细胞形态改变,细胞划痕检测各组细胞迁移能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力和趋化运动能力,Western blot法检测各组细胞中β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平,Elisa法检测Wnt蛋白的含量。结果:樟芝三萜酸A对于HepG_2有显著的增殖抑制作用,但无明显细胞毒性。樟芝三萜酸A可抑制细胞的迁移和侵袭,降低Wnt/β-catenin信号的表达水平,上调上皮-间质化相关N-cadherin、Vimentin蛋白表达,下调E-cadherin蛋白表达。结论:樟芝三萜酸A能通过抑制Wnt/β-catenin信号来逆转HepG_2细胞的上皮-间质转化,这是樟芝三萜酸A抑制肿瘤转移侵袭的机制之一。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨固本解毒方含药血清对肺癌A549细胞EMT的影响

目的：观察固本解毒方对肺癌A549细胞上皮间质转化（EMT）的影响,从磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路探讨其作用机制。方法：制备固本解毒方含药血清,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率并筛选固本解毒方浓度用于后续实验。分为空白组、固本解毒方组（2.5%、5%、10%含药血清）、PI3K/Akt通路激活剂（SC79）组、固本解毒方+SC79组。划痕实验检测细胞迁移力,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化（p）-Akt、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测N-cadherin、Vimentin mRNA表达。结果：与空白组比较,固本解毒方组含药血清（2.5%、5%、10%、20%、40%）A549细胞活力降低（P<0.05）,选择固本解毒方含药血清10%、5%、2.5%作为高、中、低浓度进行后续实验。与空白组比较,固本解毒方组A5...     

健脾化瘀方体外通过外泌体影响肝癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化

目的探讨健脾化瘀方（JHD）通过外泌体对肝癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 利用转化生长因子β1（TGF-β1）刺激MHCC97H 细胞,构建肝癌细胞EMT 模型。根据处理条件,将细胞分为 4 组,①对照组：不进行干预;②模型组：TGF-β1（10 ng·mL-1）;③JHD 低浓度组：TGF-β1（10 ng·mL-1）+健 脾化瘀方（2 mg·mL-1）;④JHD 高浓度组：TGF-β1（10 ng·mL-1）+健脾化瘀方（4 mg·mL-1）。干预48 h 后,采用 超速离心法提取各组细胞培养上清液的外泌体,通过透射电镜（TEM）、纳米颗粒追踪分析（NTA）、Western Blot 法检测外泌体标志蛋白（CD63、CD81、HsP70、CD9）,以及外泌体内吞实验对外泌体进行鉴定。将提取的 4 组外泌体分别与MHCC97H 细胞共培养24 h/48 h 后,分离MHCC97H 细胞,进行划细胞划痕实验、Transwell 细胞侵袭实验及Western Blot 法检测EMT 相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）。结果透射电镜下观 察到外泌体的形态呈囊泡状,分布不一,有单个分布,也有聚集成组,背景清晰,无明显污染物,各组外泌体 形态相近,无明显差异,直径在30~140 nm 之间;纳米颗粒追踪分析仪检测到4 组外泌体粒径的峰值在130~ 150 nm 之间,与电镜观察结果基本一致;各组均可检测到外泌体标志蛋白CD63、CD81、HsP70、CD9 表达。 被PKH26 标记的外泌体可被MHCC97H 细胞重新吸收内化。与对照组比较,模型组的MHCC97H 细胞迁移能 力（24、48 h）及侵袭能力均显著增强（P＜0.01）, E-cadherin 蛋白表达显著下调（P＜0.01）, Vimentin、 N-cadherin 蛋白表达显著上调（P＜0.01）。与模型组比较,JHD 高、低浓度组的MHCC97H 细胞迁移能力（24、 48 h）及侵袭能力显著减弱（P＜0.01）,E-cadherin 蛋白表达显著上调（P＜0.01）,Vimentin、N-cadherin 蛋白表 达显著下调（P＜0.01）。结论健脾化瘀方体外可通过外泌体抑制MHCC97H 细胞的迁移、侵袭及上皮间质 转化。