阿帕替尼联合大剂量丹参酮IIA对肺腺癌A549细胞株凋亡及Bim异构体的影响

目的:观察阿帕替尼与丹参酮IIA单药及不同时序联合用药方案对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响，并探究其作用机制。方法:培养肺癌A549细胞，用梯度浓度的阿帕替尼(0、5、10、20、40、80 μmol/L)及丹参酮IIA(0、5、10、20、40、80 μmol/L)分别处理A549细胞，应用CCK8法检测其对细胞增殖的抑制作用；流式细胞技术（Annexin V/PI 双染法）检测不同用药组作用48 h后的细胞凋亡率；半定量RT-PCR检测凋亡相关基因Bim异构体的表达情况。结果:阿帕替尼及丹参酮IIA单药对A549细胞的增殖均有抑制作用，且呈现浓度依赖性。两种药物联合使用时，联合用药组增殖抑制和凋亡率优于单药组和改变药物顺序的序贯组。结论:阿帕替尼与丹参酮IIA单药以及联合用药均可抑制A549细胞的增殖并促进凋亡；最佳联合方案为阿帕替尼联合丹参酮IIA同时使用，细胞凋亡率最高；其作用机制之一可能是联合用药通过转录和mRNA选择性剪接来上调Bim L基因的表达,从而促进细胞凋亡。     

阿帕替尼对胃癌HGC-27细胞放射敏感性的影响及其作用机制

目的 探讨阿帕替尼对胃癌HGC-27细胞放射敏感性的影响及可能的作用机制。方法 以不同浓度阿帕替尼（5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L、20 μmol/L）以及不同照射剂量（2 Gy、4 Gy、6 Gy、10 Gy、20 Gy）分别处理HGC-27细胞,再选取2 Gy和6 Gy单独照射或联合10 μmol/L阿帕替尼处理HGC-27细胞;采用ELISA法检测细胞中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达情况,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,免疫荧光染色技术检测γ-H2AX的表达情况。结果 阿帕替尼呈浓度及时间依赖性抑制胃癌HGC-27细胞增殖（均P<0.05）;不同剂量照射可促进细胞VEGF表达释放,且呈时间及剂量依赖性（均P<0.01）。10 μmol/L阿帕替尼分别联合2 Gy和6 Gy照射后,HGC-27细胞增殖抑制作用、细胞凋亡率及G2/M期的细胞比例均较单照组升高（均P<0.01）,且6 Gy联合组的作用强度大于2 Gy联合组（均P<0.01）。6 Gy联合组细胞核内γ-H2AX焦点淬灭较6 Gy单照组延迟。结论 阿帕替尼通过抑制细胞增殖,促进细胞凋亡并诱导细胞周期再分布增强胃癌HGC-27细胞放射敏感性,其作用机制可能与延迟γ-H2AX表达而干扰DNA双链断裂修复有关。     

阿帕替尼通过抑制糖酵解途径对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制及凋亡的作用

 目的 探讨阿帕替尼体外水平抗乳腺癌作用及其机制。方法 采用CCK-8法检测阿帕替尼对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用；采用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测阿帕替尼对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响；采用乳酸含量检测试剂盒检测阿帕替尼对乳腺癌MDA-MB-231细胞内乳酸产量的影响；采用糖酵解压力试剂盒检测阿帕替尼对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞外酸化速率的影响。结果 阿帕替尼可浓度依赖性地抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖（P<0.05），作用48 h的半数抑制浓度IC₅₀为1.56 μmol/L；阿帕替尼可浓度依赖性地诱导MDA-MB-231细胞凋亡（P<0.05）；阿帕替尼可浓度依赖性地抑制MDA-MB-231细胞内乳酸产量（P<0.05）；阿帕替尼干预可抑制MDA-MB-231细胞的糖酵解能力值及糖酵解保留值，降低MDA-MB-231细胞外酸化速率（P<0.05）。结论 阿帕替尼可能通过抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的有氧糖酵解效应，进而诱导其凋亡。     

Ku70乙酰化修饰介导曲古霉素A（TSA）促结肠癌细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨Ku70乙酰化修饰介导曲古霉素A（TSA）促结肠癌细胞凋亡的作用和机制。方法:选取结肠癌HCT116细胞和SW620细胞，体外培养并采用浓度梯度TSA处理。MTT法观察TSA对细胞的IC50和活力的影响；Western blot和免疫荧光染色观察TSA对结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中Ku70、acetyl-Ku70蛋白水平及胞内分布的影响；流式细胞术检测TSA对结肠癌HCT116细胞和SW620细胞凋亡的影响；Western blot检测TSA对结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax和Bcl-2表达的影响。结果:MTT结果显示TSA可浓度依赖性抑制结肠癌HCT116细胞和SW620细胞活力且其IC50值分别为1.023 μmol/L和1.076 μmol/L（P<0.05）；Western blot和免疫荧光染色结果显示TSA可显著上调结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中acetyl-Ku70的蛋白水平并促进其核转入（P<0.05）；流式细胞术结果表明TSA可促进结肠癌HCT116细胞和SW620细胞凋亡（P<0.05）；此外，Western blot结果显示TSA可明显上调结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达，下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（P<0.05）。结论:结肠癌HCT116细胞和SW620细胞中，TSA可能通过增强Ku70乙酰化并促进其核转入，发挥促凋亡作用，为以Ku70翻译后修饰调控为靶点的肿瘤治疗提供新策略和理论依据。     

青藤碱对肠癌细胞的抑制作用

目的:观察青藤碱对肠癌细胞的抑制作用。方法:选取HCT116细胞分3组，分别用DMSO（对照组）、20 μmol/L和40 μmol/L的青藤碱以及6 μmol/L的5氟尿嘧啶（5-FU）处理细胞。MTT检测不同浓度药物对HCT116细胞增殖的影响。PI染色技术和JC-1染色分别检测药物对细胞周期和凋亡的作用。通过Western blot检测青藤碱对HCT116细胞中Cyclin D1和bcl-2的影响。Transwell实验检测青藤碱对HCT116细胞迁移的影响。通过Western blot检测青藤碱对HCT116细胞中MMP2的影响。结果:与DMSO相比，20 μmol/L和40 μmol/L的青藤碱以及6 μmol/L的5-FU作用于HCT116细胞24 h后对细胞的抑制率分别为:(33.16±6.01)%、(47.48±2.32)%和(62.31±3.26)%。青藤碱抑制G1-S期转化，促进细胞凋亡。Western blot结果显示，青藤碱抑制Cyclin D1、bcl-2和MMP2在HCT116细胞中的表达。结论:青藤碱抑制HCT116细胞的生长和迁移。     

Tspan8基因敲除联合安罗替尼对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨Tspan8基因敲除联合安罗替尼对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 采用CRISPR/Cas9技术构建质粒并敲除SW480细胞的Tspan8基因,Western blot法检测敲除效果。采用MTT法计算安罗替尼的半数抑制浓度（IC₅₀）。实验分为对照组、安罗替尼组、Tspan8敲除组和联合组。采用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室法和流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡情况;Western blot法检测安罗替尼对SW480细胞中Tspan8表达水平的影响。结果 在Tspan8敲除组中,SW480-KO-Ⅲ细胞的敲除效率最高,用于后续实验。不同浓度的安罗替尼在不同作用时间均能抑制SW480细胞的增殖（P<0.01）,且呈浓度依赖性和时间依赖性（P<0.01）,根据IC50选择14 μmol/L为后续实验浓度。与对照组相比,安罗替尼组、Tspan8敲除组和联合组的细胞增殖、迁移及侵袭能力显著降低,细胞凋亡水平明显提高（P<0.05）,且联合组的上述变化较安罗替尼组或Tspan8敲除组更为显著（P<0.05）。与对照组相比,安罗替尼组SW480细胞的Tspan8表达水平明显下降（P<0.01）。结论 Tspan8基因敲除联合安罗替尼能协同抑制SW480细胞增殖、迁移、侵袭,并促进其凋亡。     

E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响

目的 探讨E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响及作用机制。方法 HCT116/L细胞分为HCT116/L+E2F1组、HCT116/L+NC组和HCT116/L组，HCT116/L+E2F1组和HCT116/L+NC组分别转染E2F1过表达重组慢病毒载体（pCMA-E2F1-HA）及其阴性对照慢病毒载体（pCMA-HA）。Western blot检测E2F1蛋白的表达水平；MTT法检测各组对化疗药物（阿霉素、5-FU和顺铂）的敏感性；流式细胞仪检测各组细胞内阿霉素的泵出率和细胞凋亡情况；细胞划痕实验检测细胞迁移情况。Western blot进一步检测耐药相关基因MDR1蛋白的表达水平。结果 HCT116/L+E2F1组的E2F1蛋白表达水平明显高于HCT116/L+NC组和HCT116/L组（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组对阿霉素、5-FU和顺铂的IC₅₀值分别为（1.61±0.21） μg/mL﹑（5.22±0.12） μg/mL﹑（3.52±0.15） μg/mL，高于HCT116/L+NC组的（0.61±0.11） μg/mL、（3.93±0.54） μg/mL、（2.31±0.45） μg/mL和HCT116/L组的（0.69±0.13） μg/mL、（4.19±0.51） μg/mL、（2.51±0.42） μg/mL（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组阿霉素的泵出率为（22.51±0.12）%，亦高于HCT116/L+NC组的（10.92±0.09）%和HCT116/L组的（8.45±0.11）%（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组细胞凋亡率为（6.42±0.52）%，低于HCT116/L+NC组的（12.81±0.69）%和HCT116/L组的（11.45±0.31）%（P＜0.05），HCT116/L+E2F1组能增强细胞迁移能力（P＜0.05），并阻滞细胞于S期。HCT116/L+E2F1组中MDR1蛋白表达量为0.41±0.08，高于HCT116/L+NC组的0.19±0.08和HCT116/L组的0.15±0.07（P＜0.05）。结论 E2F1 基因过表达可降低人结肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L 对化疗药物的敏感性，上调MDR1基因表达，使化疗药物在结肠癌细胞内的蓄积浓度降低，从而增强人结肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L的多药耐药性。     

阿帕替尼联合曲妥珠单抗对胃癌细胞的协同增敏作用

目的观察阿帕替尼联合曲妥珠单抗杀伤胃癌NCI-N87细胞的协同增敏作用并探讨可能作用机制。方法CCK-8法检测空白对照组、曲妥珠单抗组(0.1、1、10μg/ml)、阿帕替尼组(1μmol/L)及曲妥珠单抗(0.1、1、10μg/ml)+阿帕替尼(1μmol/L)组对NCI-N87细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测NCI-N87细胞凋亡,Western blotting检测HER-2、VEGFR2、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果CCK-8检测提示曲妥珠单抗、阿帕替尼能够抑制NCI-N87细胞增殖,在一定浓度范围内作用呈浓度依赖性和时间依赖性(P<0.01);q值计算提示曲妥珠单抗与阿帕替尼具有协同抑制NCI-N87细胞增殖的作用。流式细胞术检测显示联合组NCI-N87胃癌细胞凋亡较单药组明显升高(P<0.05),其中空白对照组、阿帕替尼组(1μmol/L)、曲妥珠单抗(0.1μg/ml)组及曲妥珠单抗(0.1μg/ml)+阿帕替尼(1μmol/L)组的凋亡率分别为(3.0±1.28)%、(5.8±1.63)%、(8.0±3.92)%和(21.6±6.85)%。曲妥珠单抗+阿帕替尼组与空白对照组、曲妥珠单抗及阿帕替尼单药组比较,HER-2蛋白表达显著下调(P<0.05);曲妥珠单抗+阿帕替尼组与空白对照组比较,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01)。结论阿帕替尼联合曲妥珠单抗可能通过下调HER-2蛋白及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,协同抑制NCI-N87细胞增殖和促进细胞凋亡。     

多肽A28增强顺铂对结肠癌细胞株HCT-116的杀伤作用

目的：探讨计算机辅助药物设计合成研发的特异性多肽A28增强顺铂对结肠癌细胞的杀伤效应。方法：以结肠癌细胞HCT116和人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVEC）为实验对象,设定A28浓度为20 μmol/L,顺铂的浓度为10、30及90 μmol/L。MTT法检测A28联合顺铂对HCT116细胞和HUVEC细胞生长的影响,流式细胞术检测A28联合顺铂对HCT116细胞凋亡的影响。结果：顺铂浓度依赖性地抑制HCT116细胞的增殖,A28显著增强顺铂对HCT116细胞增殖的抑制及致凋亡作用。A28联合10 μmol/L顺铂对HCT116细胞增殖的抑制率为(43.3±0.03)%,显著高于单用顺铂组的（15.6±0.10)% (P<0.01);进一步提高联合用药的顺铂浓度（30、90 μmol/L）时,对HCT116细胞增殖抑制率与10 μmol/L顺铂时没有显著差别(P>0.05)。A28联合1.1、3.3、10、30或90 μmol/L顺铂时,HCT116细胞的凋亡率\[(6.0±0.07)%、(14.5±0.03)%、(34.7±0.07)%、(37.3±0.08)%、(40.6±0.02)%\]高于单用顺铂组\[(5.1±0.06)%、(8.3±0.02)%、(14.6±0.08)%、(19.8±0.07)%、(32.6±0.02)%\]（P<0.01）。10 μmol/L顺铂联合20 μmol/LA28可以有效杀伤HCT116细胞,且对HUVEC的毒性作用较小。结论：多肽A28可提高顺铂对结肠癌细胞株HCT116的杀伤效果,减轻对正常HUVEC的毒性作用。     

抑制EGFR、IGFR-1β活性对结肠癌细胞周期和凋亡的影响

目的:采用EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼与IGFR-1酪氨酸激酶抑制剂AG1024单独或联合作用于结肠癌细胞,探讨抑制EGFR、IGFR-1β活性对细胞周期和凋亡的影响.方法:以流式细胞术检测结肠癌细胞的细胞周期和凋亡,以AnnexinⅤ-FITC/PI双标检测细胞凋亡率.结果:与对照组比较,Lovo细胞G1期阻滞在吉非替尼组和联合用药组较显著(P＜0.05),而二者之间差异不明显(P＞0.05);AG1024组与对照组比较无差异(P＞0.05).HT29细胞G1期阻滞在联合用药组较显著(P＜0.05),吉非替尼组和AG1024组均不显著(P＞0.05).HCT116细胞G1期阻滞在AG1024组和联合用药组较显著(P＜0.05),而二者之间差异不明显(P＞0.05);吉非替尼组与对照组比较无差异(P＞0.05).Lovo细胞凋亡率增加在吉非替尼组和联合用药组较显著(P＜0.05),而二者之间差异不明显(P＞0.05);AG1024组的凋亡率无明显增加.HT29细胞凋亡率增加在联合用药组较显著(P＜0.05),吉非替尼组和AG1024组均不明显.HCT116细胞凋亡率增加在AG1024组和联合用药组较显著(P＜0.05),而二者之间差异不明显(P＞0.05);吉非替尼组的凋亡率无明显增加.结论:抑制Lovo细胞的EGFR活性以及抑制HCT116细胞的IGFR-1β活性可分别引起细胞G1期阻滞及诱导凋亡增加,在HT29细胞中产生这种抑制效应则需要同时抑制EGFR、IGFR-1β的活性.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。