单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用的研究

HFRS病毒陈株100LD_(50)腹腔感染新生乳鼠后24小时,腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb,观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发现,有5株McAb保护率为100％,1株McAb保护率为17％,另有7株McAb可使感染乳鼠的发病死亡时间推迟。取有明显保护作用的5株McAb分别接种感染后不同时间的乳鼠,结果在48小时内接种保护率均达100％;但随接种时间推后,保护率逐渐下降,感染后10天接种几乎无保护作用。此5株McAb保护作用均优于多克隆的免疫血清。应用不同稀释的McAb 3D8进行保护试验,发现保护效果与接种剂量密切相关。采用固定抗体,稀释病毒方法测得McAb 3D8对HFRS病毒陈株感染乳鼠的保护指数为5.8。     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳鼠保护作用的研究

HFRS病毒：陈株100LD50腹腔感染新生乳鼠后24小时，腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb，观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发现，有5株McAb保护率为100％，1株McAb保护率为17％，并有7株McAb可使感染乳鼠的发病死亡时间推迟。取有明显保护作用的5株McAb分别接神感染后不同时间的乳鼠，结果在48小时内接种保护率均连100％；但随接种时间推后，保护率逐渐下降，感染后10天接种几乎无保护作用。此5株McAb保护作用均优于多克隆的免疫血清。应用不同稀释的McAb 3D8进行保护试验，发现保护效果与接神剂量密切相关。采用固定抗体，稀释病毒方法测得McAb 3D8对HFRS病毒陈株感染乳鼠的保护指数为5．8。     

产毒性大肠杆菌菌毛(F_(41))单克隆抗体体内被动传递保护作用的研究

产毒性大肠杆菌(ETEC)F_(41)~ 菌株20 LD_(50)喂饲感染BALB/c新生乳鼠,在感染前、后3h,给母鼠尾静脉注射1∶10或1∶100稀释的抗F_(41)单克隆抗体(McAb),观察McAb对感染新生乳鼠的传递被动保护作用。结果发现,感染前McAb 1∶10的保护率为100％,1∶100的保护率为11.5％;感染后McAb 1∶10的保护率为51.7％,1∶100的保护率为4.1％。这表明传递被动保护作用是有效果的,保护效果与McAb的注射剂量和注射时间密切相关。     

产毒性大肠杆菌菌毛（F41）单克隆抗体体内被动传递保护作用的研究

产毒性大肠杆菌(ETEC)F41^ 菌株20LD50喂饲感染BALB／c新生乳鼠，在感染前、后3h，给母鼠尾静脉注射1：10或1：100稀释的抗F41单克隆抗体(McAb)，观察McAb对感染新生乳鼠的传递被动保护作用。结果发现，感染前McAb 1：10的保护率为100％，1：100的保护率为11．5％；感染后McAb1：10的保护率为51．7%，1：100的保护率为4．1％。这表明传递被动保护作用是有效果的，保护效果与McAb的注射剂量和注射时间密切相关。     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

本文建立了检测HFRS病毒抗原的双McAb ELISA间接夹心法。用该法和IFAT分别观察感染细胞培养上清中或细胞中HFRS病毒抗原的动态变化,结果IFAT检出细胞内病毒抗原的高峰在感染后第8天,而FLISA检测感染上清中病毒抗原则在第14天才达高峰。另外,检测179份人工感染HFRS病毒的乳鼠脑、肺组织标本,结果ELISA和IFAT的阳性检出率分别为72.1％和68.2％,前者略高于后者(配对资料X~2检验,P<0.05)。买验结果表明,双McAb ELISA间接夹心法是一种特异、敏感、简便的方法,不仅可用于HFRS病原学研究中检测可溶性抗原,也适用于流行病学调查中检测大量鼠肺标本。     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳属保护作用的研究

本文进一步观察了自制的24株抗HFRS病毒血凝素McAbs对感染HFRS病毒新生乳鼠的保护作用。将HFRS病毒陈株100LD_(50)腹腔感染昆明种小鼠的新生乳鼠后24h,腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb,观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发     

家鼠型肾综合征出血热病毒单克隆抗体的制备与鉴定

以家鼠型HFRS病毒R22株免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0-Ag14融合,获得了23株能稳定分泌HFRS病毒特异性McAb的杂交瘤细胞系。以18株不同型别的HFRS病毒株进行分析,结果表明上述McAb中有些为HFRS病毒组特异性的,有些为家鼠型特异性的。有2株McAb对家鼠型HFRS病毒株具有较高的中和活性,对HFRS病毒R22株感染乳鼠也有明显的保护作用。     

抗兔出血症病毒单克隆抗体的研究

本文利用兔出血症病毒(RHDV)感染发病兔肝组织液,经高速离心提取病毒抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合,接种24孔板融合率为100％,96孔板融合率为42％,经ELISA试验测定分泌抗体阳性率分别为35％和10％,选其一株进行3次克隆并连续传代2月余,经酶联检测分泌McAb性能稳定。杂交瘤细胞培养上清液滴度为1:40～1:80,小鼠腹水单抗为1:1600～1:3200,Sp2/0细胞培养上清液,正常鼠血清对照为阴性。同时利用腹水McAb     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharosc 4B偶联的免疫吸附柱,获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性。用SDS-PAGE和Western-blot技术分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或童叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一蛋白上。以上结果表明,该50K血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

应用McAb和免疫血清对不同HFRS病毒株感染乳鼠保护作用的比较

HFRS病毒陈茱、76-118株和R22株100LD_(50)分别感染新生乳鼠。感染后24h,经腹腔分别接种McAb(3D8、3G1、8F8、8G3和8G2)和免疫血清(陈株、76-118株和R22株),结果发现,这5株McAb对陈林和76-118株感染乳鼠100％保护,而对R22株感染乳鼠只有McAb8F8有25％保护,而其佘McAb均无保护。免疫血清的保护实验也表明,陈株和76-118株可以交互保护。上述结果提示,陈株与76-118株保护性抗原较一致,但R22株与前两株差别较大。     

McAbs接种孕鼠体内对HFRS病毒感染新生子代乳鼠的被动保护作用

选BALB/c纯系小白鼠孕鼠于产前5d和3d,皮下接种抗HFRS病毒血凝素McAbs和多克隆免疫鼠血清,待其子鼠产后第3天,腹腔接种100LD_(50)HFRS病毒陈株攻击感染子代乳鼠。结果表明,接种孕鼠体内的该McAbs,可经胎盘进入子鼠体内,能被动地保护新生子代乳氧免于HFRS病毒致死性感染。孕鼠产前5d和3d,皮下接种该McAbs可100％保护新生子代乳鼠,而孕鼠产前4d接种多克隆免疫鼠血清,保护率只有42.9％,但感染对照组新生子代乳鼠则全部死亡。     

肾综合征出血热病毒结构蛋白的纯化及免疫学特性分析

应用从肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者血清中提取的ＩｇＧ与活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，制备亲和层析柱，用此亲和层析柱从ＨＦＲＳＶ感染的小白鼠乳鼠鼠脑中提取出２种分子量为６７０００和５５０００的病毒结构蛋白。经ＥＬＩＳＡ证明，此病毒结构蛋白能与ＨＦＲＳ患者血清ＩｇＧ及抗ＨＦＲＳ病毒的ＭｃＡｂ反应，效价为１６０。与６株抗ＨＦＲＳＶＭｃＡｈ试验表明，此病毒结构蛋白能与Ｈ７株反应。血凝试验证明，此病毒蛋白不能凝集鹅红细胞、鸽血球和人＂Ｏ＂型血红细胞。将纯化的病毒结构蛋白免疫家兔，证明其有较强的免疫原性，可刺激家兔产生特异性抗体；微量中和试验及乳鼠中和试验证明，中和效价为２５６，说明纯化的病毒结构蛋白具有中和抗原位点；免疫血清对感染乳鼠有一定保护作用。     

肾综合征出血热病毒感染小鼠的抗体介导早死的进一步研究

继被动输入抗病毒血清后感染肾综合征出血热(HFRS)病毒的小鼠导致早死的报道后,报道进一步的研究结果。实验用4～6周龄昆明系小鼠。用A-16、76-118和R22株病毒分别免疫小鼠,制备免疫血清。小鼠腋内感染均用A-16株病毒,在感染前后用环磷酰胺处理。实验结果表明:(1)小鼠在感染病毒后24、48小时iv输入少量免疫血清仍可导致动物早死。(2)感染前24小时输入少量免疫血清的小鼠不但早死而且病死率也高于对照组,然而,输入较大量免疫血清的小鼠则其病死率低于对照组。(3)抗体介导的早死具有HFRS病毒的型特异性。     

Pathogenesis of haemagglutinating encephalomyelitis virus (HEV) in mice experimentally infected by different routes

Three-day-old suckling mice inoculated intracerebrally (i.c.) with the 67N strain of haemagglutinating encephalomyelitis virus (HEV) showed nervous signs and died. The virus was passaged 10 times in suckling mice and was designated the MB-67N strain. The pathogenesis of MB-67N was studied with various ages of mice and inoculation routes. All mice inoculated i.c. with a large dose of virus died regardless of age, although a smaller dose caused fatal infection only in suckling mice. By intranasal, intraperitoneal and subcutaneous inoculation, the virus also killed suckling mice under 16 days old, but not older mice, even with a large dose. The susceptibility of mice for the MB-67N strain was influenced by age and inoculation routes. High titres of virus were re-isolated from the brain of diseased mice after inoculation by any route, but not from other organs. Histologically, numerous areas of severe focal necrosis were produced in the cerebral cortex. Specific immuno-fluorescence and numerous viral particles were found in the cytoplasm of nerve cells by immuno-fluorescence staining and electron microscopy. These findings indicate that the MB-67N propagates mainly in the central nervous system and nerve cells serve as a main target of virus replication.     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

综综合征出血热病毒血凝素纯化及免疫学性状分析

应用高压液相色谱法对粗制肾综合征出血热病毒血凝素分离化获得具有血凝活性的蛋白，效价１８０，分子量为５６６００。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蔗糖密度梯度超速离心原决定簇，免疫小鼠可产生特异性抗－ＨＦＲＳＶ抗体，其中和效价４０，血凝抑制效价６４。     

肾综合征出血热病毒感染小鼠的抗体介导早死现象

本文报道被动输入免疫血清后感染ＨＦＲＳ病毒的成龄昆明系小鼠出现早死现象。每次实验将小鼠分为若干组，分别于感染前０．５，２４和４８小时ｉｖ注入不同量的兔或鼠抗ＨＦＲＳ病毒血清。对照组小鼠注入兔或鼠同量的正常血清。随后每只小鼠脑内感染１０５ＬＤ５０（０．０３ｍｌ）的Ａ－１６株病毒悬液。小鼠在感染前１天和感染后第１、２和４天，ｉｐ注射环磷酰胺，每次５０ｍｇ／ｋｇ。结果表明，注入免疫血清的实验组小鼠，其发病和死亡时间均早于对照组小鼠，尤以感染前２４小时注入免疫血清组为最，两者差异显著（Ｐ＜０．００１）。此外，实验组小鼠的脾脏肿大，脑髓的血管外周炎症病变较对照组严重。     

肾综合征出血热患者软腭粘膜对乳鼠致病性的研究

目的探讨肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）的发病机理。方法２～３天的近交系Ｂａｌｂ／Ｃ乳鼠,脑内接种早期ＨＦＲＳ重症患者软腭粘膜出血点组织悬液,用套式聚合酶链式反应检测乳鼠脑、肺及肾组织中的ＨＦＲＳ病毒ＲＮＡ。结果接种乳鼠发病死亡,剖检显示,发病乳鼠各器官呈现明显微血管系统和实质组织病变,乳鼠脑、肺及肾组织中ＨＦＲＳ病毒ＲＮＡ阳性。结论早期ＨＦＲＳ患者软腭粘膜出血点组织中含有ＨＦＲＳ病毒。