不同构建方法对肾阳虚大鼠模型的影响

目的:探讨简便有效的肾阳虚建模方法及对大鼠的影响,为方剂药效学及机制研究奠定基础。方法:用腺嘌呤皮下注射和氢化可的松肌肉注射构建肾阳虚大鼠模型,观察大鼠表现及肾脏睾丸病理变化,测定其脏器指数、自主活动度、游泳时间、血清尿素(SU)、血清肌酐(Cr)、SOD和MDA活力。结果:与空白组相比,两种建模方法均使大鼠自主活动度和游泳时间降低(P0.05),肾脏指数和睾丸指数增高(P0.05);腺嘌呤组大鼠的Cr水平、SOD活力和MDA活力均升高(P0.05);氢化可的松组大鼠的Cr水平和SOD活力降低(P0.05)、MDA活力升高(P0.05);病理变化上,两种建模方法均出现炎性细胞浸润肾间质、睾丸生精小管略萎缩,排列疏松,各级生精细胞排列松散等现象。结论:腺嘌呤与氢化可的松构建肾阳虚模型在虚证表现和肾脏睾丸病变上相似,但腺嘌呤可能是通过损害肾滤过水平、睾丸生理功能等引起Cr、SOD和MDA活力升高,氢化可的松则可能是通过耗散机体能量,减弱机体抵抗能力,影响Cr生成、降低SOD活力和增高MDA活力,具体原因有待进一步探究。     

从"肾主生殖"角度评价腺嘌呤与氢化可的松诱导的肾阳虚模型

目的从“肾主生殖”角度，比较腺嘌呤诱导与氢化可的松诱导的SD大鼠肾阳虚模型的优劣，从而得到在形态学及性腺指标方面更符合中医“肾阳虚”证的动物模型，以供科研、教学使用。方法雄性SD大鼠100只，随机分成正常组、腺嘌呤组及氢化可的松低、中、高剂量组，每组20只。造模4周后通过HE染色，观察模型大鼠睾丸、精囊、前列腺、肾上腺、组织形态变化；放免法检测大鼠睾酮、雌二醇的改变情况。结果腺嘌呤制作的SD大鼠肾阳虚证动物模型在肾上腺、前列腺、精囊、睾丸组织形态改变及睾酮、雌二醇等性腺指标的变化较氢化可的松诱导组明显。结论腺嘌呤诱导的肾阳虚证SD大鼠模型在形态学与性腺指标方面更符合中医肾阳虚形态学表现。     

4种肾阳虚模型的评价

目的对4种肾阳虚模型进行比较,为模型选择提供依据。方法 40只健康雄性大鼠,随机分为空白组、氢化可的松组、腺嘌呤组、他巴唑组、氢化可的松联合腺嘌呤组,通过腿部肌肉注射氢化可的松(25 mg/kg)、灌胃腺嘌呤(200 mg/kg)、灌胃他巴唑(每周灌胃30 mg/kg)、腿部肌肉注射氢化可的松联合灌胃腺嘌呤(25 mg/kg,150 mg/kg)造模21 d,检测各组大鼠体质量、抓力、体温、脏器系数、骨骼强度变化情况评价肾阳虚模型。结果造模21 d后,除空白组外,各组大鼠均出现体质量减轻、抓力下降、体温下降、脏器系数改变以及骨骼强度下降,氢化可的松联合腺嘌呤组症状最为明显,腿部肌肉注射氢化可的松组大鼠症状较明显。结论腿部肌肉注射氢化可的松为较理想的模型,氢化可的松联合腺嘌呤的造模方式初步可行,有待继续探究。     

肝肾阳虚型抑郁症大鼠模型的建立与评价

目的:建立肝肾阳虚型抑郁症大鼠模型。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、应激组、利血平和氢化可的松低剂量组、利血平和氢化可的松中剂量组、利血平和氢化可的松高剂量组。观察造模前后大鼠的证候特征及行为学改变。实验第22天采血,测定血中环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)含量。结果:利血平和氢化可的松各剂量组大鼠表现出行为性抑郁,阳虚大鼠数量和气虚大鼠数量较空白组显著增加,c AMP含量、c AMP/c GMP比值降低。结论:利血平联合氢化可的松注射是建立肝肾阳虚型抑郁症动物模型的可行方法。     

脾肾阳虚泄泻大鼠模型造模方法研究

脾肾阳虚泄泻是中医常见病症。迄今为止,还没有理想的脾肾阳虚泄泻大鼠模型可供研究。该文通过比较单因素(造模方法Ⅰ,注射氢化可的松+灌胃番泻叶)和复合因素(造模方法Ⅱ,灌胃腺嘌呤+饮食失节+劳倦过度+灌胃番泻叶)2种造模方法,以期建立符合中医证候的脾肾阳虚泄泻大鼠模型。该研究选取大鼠的腹泻指数、尿D-木糖排泄率、NOS/cGMP信号传导系统、脏器指数和病理组织学检查等指标,分别对2个模型组大鼠进行比较评价。结果表明,与正常组相比,造模Ⅰ组、Ⅱ组大鼠的所有考察指标均有显著性差异(P<0.01,P<0.05),且造模Ⅱ组在腹泻指数、NOS/cGMP信号通路、肾脏、睾丸和胸腺的脏器指数及病理组织检查等指标表征上与造模Ⅰ组相比有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。综合以上研究,以腺嘌呤致肾阳虚,饮食失节、劳倦过度同灌胃番泻叶致脾阳虚复合因素的造模方法,更符合脾肾阳虚泄泻模型的症候。因此该研究为在此动物模型基础上研究温肾暖脾,涩肠止泻方药的作用提供基础。     

氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠尿液代谢组学研究

目的:运用代谢组学方法研究氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠尿液代谢表型的经时轨迹变化,鉴定与肾阳虚相关的代谢标志物来探讨肾阳虚相关代谢途径.方法:利用核磁共振氢谱(1H-NMR)技术建立大鼠尿液的代谢指纹谱,应用主成分分析和正交偏最小二乘判别分析研究肾阳虚大鼠尿液代谢表型的经时轨迹变化,应用正交偏最小二乘判别分析研究对照组和模型组之间的代谢物谱差异,并通过变量重要性投影(VIP)在尿液中选取生物标志物.结果:氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠尿液代谢表型呈现明显的轨迹变化,在尿液中鉴定了与肾阳虚相关的13种生物标志物.肾阳虚大鼠机体能量代谢紊乱、肠道菌群受到扰动、甲基转移反应被抑制、氨转运功能受阻,同时,伴随一定程度的肾损伤.结论:该研究为探讨肾阳虚证的发生、发展及其病理机制、诊断的客观化和补肾阳中药的药效评价提供了一种新方法.     

肾阳虚模型对甘氨酸受体mRNA表达的影响

目的探讨肾阳虚简易有效的建模方法和对甘氨酸受体(GlycR)mRNA表达的影响。方法用腺嘌呤皮下注射构建肾阳虚大鼠模型,观察大鼠行为变化,测定其自主活动度、脏器指数和体重,做肾脏切片,并运用Real-time RT-PCR测定中枢神经GlycR mRNA的相对表达量。结果造模后,大鼠肾脏、睾丸指数增大;肾皮质固缩,与髓质界限模糊,有灰褐色沉积物;与正常组相比,大鼠自主活动度降低(P0.05),GlycR mRNA的相对表达明显增高(P0.05)。结论用腺嘌呤建立肾阳虚大鼠模型方法可靠方便,可能会增强GlycR mRNA的表达。     

肾阳虚型围绝经模型大鼠构建及其下丘脑-垂体-性腺轴激素水平研究

目的:探讨氢化可的松诱导的肾阳虚型围绝经模型大鼠及其性腺轴相关性激素水平表现。方法:以氢化可的松肌注模型组构建肾阳虚型围绝经期模型大鼠,另行青年组、老年组及围绝经期模型大鼠造模。造模成功后随机选取各组大鼠各10只,检测血清c AMP、c GMP、Gn RH、LH、FSH、E2、P水平。结果:与青年对照组比较,模型组c AMP、c AMP/c GMP水平均较低(P0.01);Gn RH及E2水平均较高(P0.01、P0.05),P水平较低(P0.05)。与老年对照组比较,模型组Gn RH、LH、E2水平均较高(P0.05或P0.01)。与模型对照组比较,模型组c AMP、c AMP/c GMP水平均较低(P0.05);E2水平较高(P0.05)。结论:氢化可的松诱导的肾阳虚型围绝经期模型大鼠症状表现符合肾阳虚证,细胞调节第二信使c AMP、AMP/c GMP下降。下丘脑-垂体-卵巢生殖轴相关性激素均符合围绝经期表现。     

肾阳虚致高脂血症大鼠中FAS蛋白对甘油三酯的调控作用及机制研究

目的:通过肾阳虚制作高脂血症模型,观察右归丸对模型大鼠FAS蛋白及其上游LXRα等因子表达的影响,以探讨肾阳虚对模型大鼠甘油三酯(TG)的影响机制。方法:利用大剂量肌注氢化可的松制作肾阳虚高脂血症大鼠模型,给予右归丸进行干预,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测实验大鼠肝组织FAS蛋白、LXRα和SREBP-1c表达,通过免疫组化检测实验大鼠肝组织FAS蛋白的表达。结果:大剂量肌注氢化可的松成功复制出了肾阳虚高脂血症的模型大鼠,与正常组比较,右归丸组和模型组肾阳虚高脂血症大鼠肝内LXRα、SREBP-1c和FAS蛋白表达增加(P<0.05),与模型组比较,右归丸组大鼠肝内LXRα、SREBP-1c和FAS蛋白表达减少(P<0.05);结论:肌注氢化可的松制造的肾阳虚高脂血症模型可能是上调了LXRα、SREBP-1c和FAS的蛋白的表达而影响了血液中TG的代谢,右归丸可能通过抑制LXRα、SREBP-1c和FAS蛋白的表达来降低模型大鼠TG的含量。     

巴戟天补肾阳作用的血清代谢组学研究

目的:运用代谢组学方法研究氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠血清代谢组变化及巴戟天补肾阳作用的机制。方法:通过核磁共振氢谱(1H-NMR)技术分析氢化可的松及巴戟天作用下的大鼠血清代谢物谱。应用正交偏最小二乘判别分析法研究对照组和模型组之间的代谢物谱差异,并通过变量重要性投影(VIP)在血清中发现了12种潜在生物标志物。采用主成分分析法研究巴戟天对大鼠肾阳虚证的干预效果。通过比较潜在生物标志物的含量差异,探讨巴戟天补肾阳作用的机制。结果:氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠机体能量代谢、氨基酸代谢和肠道菌群都受到不同程度的影响,甲基转移反应被抑制。巴戟天可增强阳虚机体甲基转移反应、改善能量代谢和逆转氨基酸代谢紊乱,但对肠道菌群无明显作用。结论:代谢组学研究能较全面地反应生物体的生理及代谢状态,为中医"证"的本质研究及药物药效评价提供了一种新方法。     

益智仁盐炙前后对肾阳虚多尿大鼠肾脏改善作用研究

目的比较益智仁盐炙前后对肾阳虚多尿模型大鼠脏器指数和肾脏病理变化的影响,初步探讨益智仁温肾缩尿机制。方法采用腺嘌呤致大鼠肾阳虚多尿模型,比较益智仁盐炙前后石油醚部位对大鼠尿量,肾上腺、肾脏、脾脏、胸腺指数及肾脏病理变化的影响。结果与模型组相比,益智仁生品和盐炙品组有显著缩尿作用(P<0.05);脏器指数除肾上腺外,各给药组肾、脾、胸腺指数与模型组比较均显著改善作用(P<0.05);模型组大鼠肾脏肾小球萎缩、代偿性肥大,肾小管有萎缩变小或扩张等病理改变,给药各组与模型组相比均有不同程度的改善。结论益智仁盐炙前后对腺嘌呤所致肾阳虚多尿模型大鼠肾脏指数和病理变化均具较好改善作用,但盐炙后作用明显增强。     

阿霉素联合氢化可的松诱导慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的建立与评价及真武汤干预机制研究＊

目的 探索应用阿霉素联合氢化可的松诱导建立慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型的方法与评价及真武汤干预的机制。方法 采用阿霉素联合氢化可的松注射诱导建立慢性肾脏病肾阳虚证大鼠模型。52只SPF级雄性6-8周龄SD大鼠，随机分为正常组10只，模型组42只。大鼠适应性饲养2周，模型组大鼠阿霉素3 mg·kg^-1尾静脉注射，第4周4 mg·kg^-1剂量第2次注射，模型成功后随机分为阿霉素组，氢化可的松组与真武汤组。第12周，氢化可的松组与真武汤组进行氢化可的松10 mg·kg^-1肌肉注射，真武汤组按照每日5.39 g/kg进行真武汤干预。在实验中记录一般情况，称取体质量，采取BCA法检测24 h尿蛋白定量，采取红外体温计测量体温，采取游泳耐力法检测体力耐力。实验第24周取材，摘取肾脏，脾脏，睾丸称量并计算脏器指数；大鼠肾组织HE、Masson染色分析病理形态学变化；大鼠血清采用比色法检测Scr、BUN、UA、TC、TG、TP、ALB、SOD；采用酶联免疫吸附法检测CORT、T3、T4、TSH、FSH、LH、T、E2水平。结果 与正常组比较，氢化可的松组大鼠一般情况出现弓背、戗毛、蜷缩、喜卧懒动，精神不振等肾阳虚表现；24 h尿蛋白大量增加（P < 0.01）；与氢化可的松模型相比，真武汤组肾阳虚表现出现好转，24 h尿蛋白降低（P < 0.05），体温升高（P < 0.05）；HE结果显示氢化可的松组肾小球发生球囊壁粘连，系膜区增宽，肾小管扩张或萎缩，大量蛋白管型，肾间质炎性细胞浸润；Masson结果显示氢化可的松组肾小球节段性硬化，肾小管与肾间质发生纤维化；真武汤组HE结果显示蛋白管型减少，球囊壁粘连减轻，肾间质炎性细胞浸润减少，Masson结果显示肾小球纤维化减轻，肾小管与肾间质纤维化减轻；与正常组相比，氢化可的松肾功能异常，血脂升高，蛋白显著降低；CORT降低，T3、T4降低（P < 0.05，P < 0.01），TSH明显升高（P < 0.01）；SOD明显降低（P < 0.01）；T明显降低，FSH、LH、E2显著降低（P < 0.05，P < 0.01）；与氢化可的松组相比，真武汤组血肌酐与尿酸下降，血清蛋白上升（P < 0.05）；CORT上升，T3明显升高（P < 0.05）、T4升高、TSH下降，SOD显著升高（P < 0.01）、T、E2、FSH、LH出现升高。结论 阿霉素联合氢化可的松可以成功建立慢性肾脏病肾阳虚证动物模型。真武汤可能通过改善肾功能、作用于下丘脑肾上腺轴、甲状腺轴和性腺轴对慢性肾脏病肾阳虚证起到很好的干预作用。     

至宝三鞭丸对腺嘌呤诱导的肾阳虚证大鼠模型的改善作用研究

目的：以腺嘌呤诱导大鼠肾阳虚证模型为研究对象，观察至宝三鞭丸对肾阳虚证大鼠的改善作用。方法：选取SD大鼠，在末次给药2 h后，测定各组大鼠体质量，检测大鼠睾丸系数、附睾系数、精囊腺系数等；显微观察大鼠精子数目，形态和活力；酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定血清中雌二醇(E2)、睾酮(T)、促卵泡素(FSH)、黄体生成素(LH)、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）水平；苏木精-伊红(HE)染色法观察肾脏、睾丸和附睾组织病理形态变化；Masson染色法观察肾脏组织的纤维化水平。结果：与正常组比较，至宝三鞭组大鼠肾阳虚症状改善，大鼠体质量、睾丸系数、附睾系数，精囊腺系数增加；大鼠精子数目增多；精子畸形率降低，精子活力增强；肾脏、睾丸、附睾等生殖器官的病理改变减少；肾脏的纤维化水平降低；并且至宝三鞭丸能够使E2、FSH、LH、DA、NE和5-HT等含量降低；同时还能够使T含量升高。结论：至宝三鞭丸可基于对下丘脑-垂体-性腺轴的调控改善腺嘌呤致肾阳虚证模型大鼠的肾阳虚症状，呈现出良好的补肾助阳功效。     

保肾1号巴布剂治疗大鼠慢性肾衰竭肾阳虚证的机理研究

目的 探讨保肾1号巴布剂治疗大鼠慢性肾衰竭(CRF)肾阳虚证的机理.方法 用腺嘌呤灌胃造成大鼠CRF肾阳虚证模型.全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿酸(UA),酶标免疫法检测血浆睾酮(T),硝酸还原酶法检测血清一氧化氮(NO),光学显微镜观察肾脏病理改变.结果 保肾1号巴布剂具有显著降低...     

右归胶囊对肾阳虚大鼠TLR4影响的实验研究

目的：通过检测TLR4在肾阳虚大鼠肾内的表达,为探讨右归胶囊在治疗肾阳虚中可能的免疫学机制奠定基础。方法：健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、干预组,模型组和干预组肌肉注射氢化可的松建立肾阳虚大鼠模型,对照组和模型纽给予生理盐水灌胃,干预纽给予右归胶囊混悬液灌胃。大鼠肾组织常规切片,免疫组化法检测TLR4的在肾脏的表达,Real—timePCR法测定TLR4mRNA的表达。结果：模型组和干预组TLR4蛋白和基因的表达较对照组明显减少,差异有统计学意义（P〈0．05）;干预组和模型组比较,干预组TLR4的蛋白和基因的表达明显高于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）;结论：右归胶囊可能通过调节TLR4的表达,影响机体的免疫功能从而发挥改善机体肾阳虚状态的作用。     

LXRα靶基因对肾阳虚实验大鼠血脂中胆固醇的调控机制研究

目的通过肾阳虚高脂血症模型,观察右归丸对模型大鼠LXRα靶基因ABCA1和CETP表达的影响,以探讨LXRα靶基因在肾阳虚引起高脂血症中的表达及其意义。方法利用大剂量肌注氢化可的松制作肾阳虚高脂血症大鼠模型,给予右归丸进行干预,检测实验大鼠肝脏的肝指数及肝组织病理变化,通过蛋白免疫印迹检测外周血中ABCA1和CETP蛋白表达,通过RTPCR检测各组实验大鼠外周血ABCA1和CETPmRNA的表达。结果肌注氢化可的松模型组大鼠肝脏肉眼观察颜色变黄、肥腻,肝脏出现明显的脂肪变性;右归丸组大鼠肝脏脂肪变明显较模型组大鼠轻,肝湿重也小于模型组(P0.05);与正常组比较,右归丸组和模型组肾阳虚高脂血症大鼠外周血ABCA1和CETP蛋白和基因表达增加(P0.05),与模型组比较,右归丸组大鼠外周血ABCA1和CETP基因表达减少(P0.05)。结论模型组大鼠具有高脂血症性脂肪肝的特征,其机制可能是通过上调LXRα靶基因ABCA1和CETP表达;右归丸可能通过抑制LXRα靶基因的表达来降低模型大鼠胆固醇的含量。     

变应性鼻炎肾阳虚复合豚鼠模型筛选与评价

目的:在卵清蛋白致敏变应性鼻炎豚鼠模型基础上,采用糖皮质激素、羟基脲、腺嘌呤3种不同阳虚诱导剂诱发,建立变应性鼻炎肾阳虚复合模型,以筛选建立理想而稳定的变应性鼻炎(Allergic Rhinitis,AR)病证结合动物模型。方法:采用卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)诱导建立变应性鼻炎豚鼠模型,同时给予糖皮质激素、羟基脲或腺嘌呤建立肾阳虚复合模型,观察动物宏观体征及死亡情况、局部过敏症状,酶联免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)法测血清中s Ig E和组胺含量,苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察肾和睾丸组织形态学改变。结果:糖皮质激素、羟基脲和腺嘌呤3种致肾阳虚药物均可使动物表现出肾阳虚症状及体征、体重下降并具有一定的致死率。与空白组相比,糖皮质激素对肾脏和睾丸组织形态影响较小,羟基脲和腺嘌呤对肾脏和睾丸等形态结构影响较大。结论:对比3个肾阳虚复合模型,羟基脲复合组模型比激素复合组和腺嘌呤复合组模型更稳定,且死亡率较低,较为理想。不过变应性鼻炎病证结合动物模型的指标评价标准尚待进一步研究。     

腺嘌呤致慢性肾功能衰竭大鼠CTGF、FN的实验研究

目的:观察腺嘌呤大鼠肾衰模型中肾功能、肾脏病理改变、肾组织CTGF、FN表达的变化,证明腺嘌呤灌胃可制作理想的慢性肾功能衰竭大鼠模型。方法:随机将40只SD大鼠分为正常组、腺嘌呤组,腺嘌呤组中每只大鼠以200mg/(kg·d)的腺嘌呤灌胃,每日1次,正常组以等量Na Cl溶液灌胃,连续灌胃4周后取肾组织于光镜下观察肾脏病理变化;检测各组大鼠SCr、BUN含量;免疫组化法检测CTGF、FN蛋白表达。结果:腺嘌呤组与正常组比较,SCr、BUN明显升高(P0.01);CTGF、FN表达增强(P0.01)。结论:腺嘌呤灌胃可通过提高CTGF、FN的表达从而成功复制大鼠慢性肾衰竭模型。     

覆盆子盐制前后对肾阳虚多尿大鼠肾脏改善作用研究

目的比较覆盆子盐制前后对肾阳虚多尿模型大鼠血清中CAMP和CGMP的影响及其对肾脏病理变化的改善作用。方法采用腺嘌呤200 mg·kg^-1复制肾阳虚多尿大鼠模型,比较覆盆子盐制前后对大鼠血清cAMP和cGMP及肾脏病理变化的影响。结果与正常组相比,模型组的cAMP显著下降(P<0.05),cGMP显著升高(P<0.01),覆盆子盐制高剂量组与模型组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);且与生品组比较,盐制覆盆子组对升高cAMP,降低cGMP的作用显著增强。同时,模型组大鼠肾脏可见肾小体数量明显减少,肾小管管腔扩大等病理改变。生品低、高剂量组、桂附地黄丸组、盐制覆盆子低高剂量组大鼠肾脏与模型组相比均有不同程度的改善。结论覆盆子对肾阳虚多尿模型大鼠的cAMP及cGMP有一定的调节作用,同时对肾脏病理有一定的改善作用,且以盐制覆盆子效果较佳。     

益肾温经汤对肾阳虚型排卵障碍大鼠一般状况、血清生殖激素及卵巢形态学的影响

目的:观察益肾温经汤对氢化可的松致排卵障碍大鼠相关指标的影响,探讨其治疗肾阳虚型排卵障碍性疾病的作用机制。方法:建立氢化可的松致排卵障碍大鼠模型,分为模型组、低剂量治疗组、高剂量治疗组、金匮肾气丸对照组,并设空白对照组。观察大鼠一般情况,阴道脱落细胞涂片,采用HE染色观察卵巢组织形态学变化,采用放免法检测并用统计软件包SPSS13.0分析血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平。结果:益肾温经汤可改善肾阳虚型排卵障碍大鼠一般状况使其体质量增加,升高血清E2、P水平,改善病理状态下的卵巢的形态结构。结论:提示益肾温经汤可通过提高血清E2、P水平促进卵泡发育。