血管内皮细胞生长因子对A系小鼠胚腭突细胞增殖代谢的影响

目的 研究不同剂量血管内皮细胞生长因子(VEGF)对A系小鼠胚腭突细胞增殖和DNA、蛋白质及PGE2合成的影响。方法 实验分为9组，每组设平行4孔(瓶)，分别加入VEGF，使其终浓度为0．005ng／ml、0．01ng／ml、0．05ng／ml、0．1ng/ml、0．5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng／ml。每组均设空白对照。在实验后第1、3、5天分别检测细胞的OD值、DNA、蛋白质和PGE2的含量。结果 随着培养时间的增长，VEGF促进DNA及蛋白质合成，明显刺激A系小鼠胚腭突细胞的分裂增殖。VEGF对腭突细胞PGE2的合成具有双重效应，即加入VEGF后，培养早期促进PGE2的合成；而在VEGF作用后期，则抑制腭突细胞PGE2的合成。结论 VEGF促进腭突细胞的增殖，与其他生长因子一起，共同调节腭突的发育。     

转化生长因子α对A系小鼠胚腭突细胞增殖代谢的影响

目的　研究不同剂量转化生长因子α(TGFα)对A系小鼠胚腭突细胞增殖和DNA、蛋白质及PGE2合成的影响。方法　实验分为 9组 ,每组设平行 4孔 (瓶 ) ,分别加入TGFα使其终浓度为 0 .0 0 5ng/ml,0 .0 1ng/ml,0 .0 5ng/ml,0 .1ng/ml,0 .5ng/ml,1ng/ml,5ng/ml,10ng/ml,5 0ng/ml。每组均设空白对照。在实验后第 1、3、5天分别检测细胞的OD值、DNA、蛋白质和PGE2 的含量。结果　TGFα可显著增加腭突细胞的OD值 ,促进DNA及蛋白质合成 ,在培养早期TGFα促进腭突细胞PGE2 的合成 ,而在培养后期则表现为抑制作用。在含量 0 .0 0 5～ 10ng/ml,TGFα促细胞增殖作用呈剂量依赖性 ,10ng/ml时TGFα的作用最强。 结论　TGFα显著促进腭突细胞的增殖代谢 ,其作用与表皮生长因子 (EGF)相类似 ,可能与EGF及其他生长因子共同调节腭发育。     

地塞米松对A系小鼠胚腭突间充质细胞增殖代谢的影响

目的研究不同剂量地塞米松(DEX)对A系小鼠胚腭突间充质细胞增殖和DNA、蛋白质及PGB合成的影响。方法实验分为9组，每组设平行4孔(瓶)，每组分别加入DEX使其终浓度为0．05ng／ml，0.1ng／ml．0．5ng／ml，1ng／ml，5ng／ml，10ng／ml，50ng／ml，100ng／ml，1000ng／ml，每组均设空白对照，在实验后第1、3、5天分别检测细胞的OD值及PGE2的含量，并在第3天时检测DNA、蛋白质的含量。结果DEX可显著增加腭突间充质细胞的OD值，促进DNA及蛋白质合成，在含量0．5ng／ml时DEX的促进生长作用最强。在培养早期DEX轻度降低腭突间充质细胞PGE2的合成，而在培养后期则表现为显著抑制作用。结论DEX显著促进腭突间充质细胞的增殖代谢，可能干扰腭突间充质细胞的正常生长代谢而影响了腭发育。     

表皮生长因子对A系小鼠胚腭突细胞增殖代谢的影响

目的:研究不同剂量表皮生长因子(EGF)对A系小鼠胚腭突细胞增殖和DNA、蛋白质及PGE2合成的影响。方法:实验分为9组,以平行4孔(瓶)为一组,在每组腭突细胞中分别加入EGF使其终浓度为01005 ng/ml,01010 ng/ml,01050 ng/ml,01100 ng/ml,01500 ng/ml,11000 ng/ml,51000 ng/ml,101000 ng/ml,501000 ng/ml,每组均设空白对照,在加入EGF并培养第1、3、5天后分别检测细胞的OD值,DNA、蛋白质和PGE2的含量。结果:EGF可显著增加腭突细胞的OD值,促进DNA和PGE2合成,增大了细胞指数。EGF含量在01005~101000 ng/ml浓度范围内,呈剂量依赖性,101000 ng/ml时EGF对腭突细胞增殖的作用最强。结论:EGF显著刺激了A系小鼠胚腭突细胞分裂代谢,促进腭突细胞的增殖分化。     

维甲酸诱导小鼠腭裂发病机制的实验研究

目的 观察维甲酸（retinoic acid,RA)诱导胚鼠腭突发育的形态学变化，探讨胚鼠腭部转化生长因子（transforming growth factor,TGF)β1、TGFβ3、表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF)及BCL2的表达在RA诱导腭裂发病机制中的意义。方法 采用显微镜观察胚腭的发育过程，原位杂交和免疫组化检测TGFβ1、TGFβ3、EGF及BCL2基因在胚腭中的表达。结果 RA引起双侧腭突的形成，使双侧腭突不能接触或接触后不能融合形成中嵴上皮带，以及可调控TGFβ1、TGFβ3、EGF及BCL2在鼠胚腭部的表达。结论 RA抑制中嵴上皮细胞（MEPM）增殖，引起双侧腭突的形成，诱导MEE细胞殿堂分化，使双侧腭突不能接触融合，而最终导致腭裂形成及TGFβ1、TGFβ3、EGF在鼠胚腭部表达的变化与RA诱导腭裂的形成密切相关。     

地塞米松对A系小鼠胚腭突间充质细胞表皮生长因子基因表达的影响

目的:研究地塞米松(DEX)对A系小鼠胚腭突间充质细胞表皮生长因子(EGF)基因mRNA表达的影响。方法：将DEX(10ng/ml)加入培养的A系小鼠胚腭突间充质细胞，并在培养第1、3、5天时收集细胞，提取RNA，应用RT-PCR技术半定量检测腭突问充质细胞EGF基因mRNA的表达水平。结果：DEX可显著促进腭突间充质细胞EGF mRNA的表达，并在加入DEX培养第3天时，这种促进EGF mRNA表达的作用最强。结论：DEX显著促进腭突间充质细胞EGF基因的表达，可能干扰腭突间充质细胞EGF基因的表达而影响了腭发育。     

rhIL—1β及TGF—β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

目的：探讨rhIL-1β及TGF－β对髁状突软骨细胞增殖的影响。方法：以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL-1β及TGF－β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果：MTT检测，rhIL-1β（10，20ng/ml）处理软骨细胞48h后，可明显抑制软骨细胞增殖，经统计学检验，处理3－6d有显著性差异（P＜0．01,t检验）；加入TGF－β（10，20ng/ml)可明显拮抗rhIL-1β对软骨细胞增殖的抑制作用，并且浓度愈高对rhIL-1β的抑制作用愈强。PCNA检测，rhIL-1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低，随rhIL-1β的刺激浓度增加，阳性率明显降低；加入外源性TGF－β可以使PCNA的阳性率提高。结论：rhIL-1β对髁状突软骨细胞增殖具有报制作用，外源性TGF－β对该作用具有明显的拮抗效应。     

A系小鼠胚腭突细胞培养及生物学特性的研究

目的:研究A系小鼠胚愕突上皮与间充质细胞在DMEM/F-12培养基中进行原代和传代联合培养及其生物学特性。方法:采用机械分离及胰蛋白酶消化法，简便、准确、快速地获得高成活率的A系小鼠胚愕突细胞，并通过流式细胞仪、相差显微镜、光镜等观察其DNA及蛋白质合成、细胞骨架及其结构。结果:联合培养的A系小鼠胚鳄突细胞中，愕突上皮及间充质细胞均能较好地生长，光镜下观察见上皮型细胞呈多角型，单层铺路石状排列，细胞骨架为栅栏型或巢穴型;间充质细胞呈梭型，单层漩涡状排列，细胞骨架呈梭型、多平行排列的纤维。流式细胞仪检测见细胞DNA及蛋白质含量较丰富，细胞增殖活跃。结论:A系小鼠胚愕突上皮与间充质细胞联合培养模型能较好地保持体内胚愕突的上皮细胞及间充质细胞细胞成分的基本特征。     

转化生长因子对成骨细胞增殖及其受体信号表达的影响

目的:研究转化生长因子βⅠ对小鼠成骨细胞增殖的调节作用,及其受体表达的变化,初步了解TGFβⅠ促成骨细胞增殖的分子机制.方法:以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为TGFβⅠ检测的细胞模型.10ng/ml TGFβⅠ作用MC3T3-E1细胞后,采用3H-TdR细胞增殖试验,检测成骨样细胞增殖改变,采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGFβⅠ,TGFβⅡ受体mRNA的表达.结果:(1)在10ng/mL浓度时,TGFβⅠ对MC3T3-E1细胞有明显的增殖促进作用,使MC3T3-E1成骨样细胞在24小时内成倍增殖.含转化生长因子组TGFβⅠ受体,TGFβⅡ受体的mRNA表达的水平高于空白对照组.(3)10ng/mLTGFβⅠ具有维持MC3T3-E1细胞活力的作用.(4)TGFβⅠ可能,通过MC3T3-E1细胞表面TGFβⅠ受体,TGFβⅡ受体途径表达,传递信号.     

地塞米松对小鼠胚胎腭胚胎腭突间充质细胞增殖的细胞

目的 探讨地塞米松对小鼠胚胎腭突间充质（EPM）细胞增殖的影响。方法 在显微镜下解剖妊娠第13d的鼠胚腭突，用0．25％胰蛋白酶刊物消化获得游离分散的EPM细胞，在DEMF培养基中进行培养，并采用反复贴壁纯化EPM细胞。在培养基中加入10^-6M地塞米松，采用AgNOR染色、Feulen染色及透射电子量显微镜观察，检测地塞米松对EPM细胞增殖功能力的影响。结果 地塞米松处理的EPM细胞银梁颗粒数减少（P＜0．01），核面积比及DNA合成能力下降（P＜0．01），胞浆内线粒体数目减少，粗面内质网肿胀。结论 地塞米松对EPM细胞的增殖及生物合成有明显的抑制作用，影响腭突的正常发育，是腭裂发生的机制之一。     

胚鼠腭突细胞转化生长因子β3基因的RNA干扰及对TGFβ-Smad信号通路的影响

目的 探讨在胚鼠腭突培养细胞中应用StealthTM RNAi转染有效沉默转化生长因子β3(TGFβ3)基因的可行性.方法 采用Bal b/c近交系小鼠在交配后第14天取胚鼠腭突,离散后进行细胞培养,应用相差显微、MTT法观察传代细胞的形态和生物学特性.采用化学合成的StealthTM RNAi抑制原代胚鼠腭突上皮细胞...     

TGF-β1影响钛表面成骨细胞增殖分化的体外研究

目的动态观测TGF—β1和钛片表面微形态对胎鼠成骨细胞增殖分化的影响以及两者之间的相关关系。方法将传代后的成骨细胞接种于不同处理（机械打磨、喷砂处理TPS）钛片表面，加入外源性TGF-β1（浓度为10ng／ml）后MTT法检测细胞增殖，并检测细胞内ALP和细胞外OC的合成分泌状况；设置玻片对照组。结果外源性TGF—β1后对各组钛片表面的成骨细胞增殖均有不同程度的抑制作用，细胞接种后期抑制作用更明显。细胞接种早期，ALP活性和OC分泌量各实验组和对照组与未加因子相比有明显增加（P〈0．05）。细胞接种后期，成骨细胞ALP合成在机械组与未加因子相比明显减少（P〈0.05），喷砂组和TPS组则仍然增加；OC分泌量在机械组和对照组变化不明显，而喷砂组和TPS组OC分泌与未加因子相比明显增加（P〈0．05）。结论浓度为10ng／ml的外源性TGF—β1对不同钛片表面成骨细胞增殖有一定抑制作用。外源性TGF-β1和粗糙钛片表面对成骨细胞分化有一定协同促进作用。     

rhIL-1β及TGF-β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

目的 :探讨rhIL 1β及TGF β对髁状突软骨细胞增殖的影响。 方法 :以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL 1β及TGF β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果 :MTT检测 ,rhIL 1β( 10、2 0ng/ml)处理软骨细胞 4 8h后 ,可明显抑制软骨细胞增殖 ,经统计学检验 ,处理 3～ 6d有显著性差异 (P <0 .0 1,t检验 ) ;加入TGF β( 10、2 0ng/ml)可明显拮抗rhIL 1β对软骨细胞增殖的抑制作用 ,并且浓度愈高对rhIL 1β的抑制作用愈强。PCNA检测 ,rhIL 1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低 ,随rhIL 1β的刺激浓度增加 ,阳性率明显降低 ;加入外源性TGF β可以使PCNA的阳性率提高。 结论 :rhIL 1β对髁状突软骨细胞增殖具有抑制作用 ,外源性TGF β对该作用具有明显的拮抗效应     

前列腺素E2、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β不同组合对培养骨器官钙代谢的作用

目的：观察不同浓度组合的前列腺素E2（PGE2）、肿瘤坏死因子α（TNF－2）、白细胞介素1β（IL－1β）对培养骨组织钙代谢的作用。方法：原子吸收分光光度计检测骨组织培养上清液中Ca^2 浓度。结果：①PGE2＋IL－1β：在0．01－1．0ng／ml浓度组合时，有促进钙吸收的作用，此作用随组合浓度的加大而减弱。②PGE2＋TNF－α：0．01－0．1ng／ml浓度时，有钙吸收作用，而在1．0ng／ml浓度组合时，有明显的钙释放作用。③IL－1β＋TNF－α：0．01ng／ml浓度组合时，有钙吸收作用。0．1ng／ml浓度组合时，钙吸收、释放作用不明显。1．0ng／ml浓度组合时，强刺激脱钙。④PGE2＋TNF－α＋IL－1β：0．01－1．0ng／ml浓度组合时显示钙吸收作用，且随剂量增加而增加。结论：3种细胞因子不同组合后，有交互作用、拮抗作用和协同作用。PGE2主要表现为协同因子而发挥作用。     

TGF-β1对人年轻恒牙牙髓细胞的增殖效应

目的:探讨转化生长因子(transforminggrowthfactor,TGFβ1)对培养人牙髓细胞的增殖效应。方法:应用MTT、3H-TdR渗入法观察TGFβ1对人牙髓细胞的增殖效应。结果:TGFβ1浓度在0.1ng/ml～100ng/ml时均可显著促进牙髓细胞的增殖,增殖效应呈现出浓度依赖性。结论:TGFβ1可能通过促进牙髓细胞的增殖参与牙本质—牙髓复合体的修复过程。     

地塞米松对小鼠胚胎腭突间充质细胞增殖的影响

目的　探讨地塞米松对小鼠胚胎腭突间充质 (EPM )细胞增殖的影响。方法　在显微镜下解剖妊娠第 13d的鼠胚腭突 ,用 0 .2 5 %胰蛋白酶进行消化获得游离分散的EPM细胞 ,在DMEM培养基中进行培养 ,并采用反复贴壁法纯化EPM细胞。在培养基中加入 10 6M地塞米松 ,采用AgNOR染色、Feulgen染色及透射电子显微镜观察 ,检测地塞米松对EPM细胞增殖能力的影响。结果　地塞米松处理的EPM细胞银染颗粒数减少 (P <0 .0 1) ,核面积比及DNA合成能力下降 (P <0 .0 1) ,胞浆内线粒体数目减少 ,粗面内质网肿胀。结论　地塞米松对EPM细胞的增殖及生物合成有明显的抑制作用 ,影响腭突的正常发育 ,是腭裂发生的机制之一     

TGF-β2诱导小鼠腭突细胞成软骨分化的研究

目的 探讨转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGFβ2)诱导小鼠腭突细胞成软骨分化的作用.方法 取胎龄13.5天的小鼠分离培养腭突细胞,并分别加入不同的细胞因子进行成软骨诱导培养.A组为空白对照组,B组为TGFBR1(转化生长因子受体1)抑制剂-SD208组,C组为加入TGF-β2组,D组SD208+TGF-β2组.通过比较蛋白聚糖、蛋白聚糖半定量,以及软骨标志基因的表达水平,评价各组细胞因子诱导腭突细胞成软骨能力大小及作用.结果 在TGF-β2作用下腭突细胞向软骨细胞分化,TGF-β2组蛋白聚糖及软骨相关基因表达量最高,显著高于A、B、D组(P<0.01).B、D组蛋白聚糖及软骨相关基因的表达量较A组明显降低(P<001).结论 腭突细胞在TGF-β2诱导下具有成软骨分化能力.     

P21~(cipl/wafl)基因在C57BL/6N系小鼠腭突发育中对细胞增殖周期的调控作用

目的：探讨腭裂形成过程中腭突间充质细胞的增殖周期的变化及其调节基因Ｐ２１ｃｉｐｌ／ｗａｆｌ基因表达的意义。方法：用原位杂交、ＴＵＮＥＬ染色检测两组小鼠腭突间充质细胞增殖周期调控基因Ｐ２１ｃｉｐｌ／ｗａｆｌ基因的表达及细胞程序性死亡的发生。结果：在腭突发育的垂直生长期、上抬期,实验组中ＴＵＮＥＬ阳性指数明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。同时,Ｐ２１ｃｉｐｌ／ｗａｆｌ基因ｍＲＮＡ的转录水平也比同期对照组腭突间质细胞中Ｐ２１ｃｉｐｌ／ｗａｆｌ基因的表达增高（Ｐ＜０．０５）。结论：在腭突发育时期,实验组小鼠腭突间充质未分化细胞增殖周期抑制。Ｐ２１ｃｉｐｌ／ｗａｆｌ基因表达升高提示可能参与了细胞增殖周期抑制过程     

白血病抑制因子对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖和分化的影响

目的：探讨白血病抑制因子LIF对小鼠下颌突外胚间充质细胞增殖和分化的影响。方法：用含10^6u／L LIF的DMEM／F12培养小鼠下颌突外胚间充质细胞，MTT法、Brdu检测、流式细胞仪分析进行增殖及生长曲线测定；免疫组化鉴定分化状况。结果：含LIF的培养液使细胞的增殖活性增加，细胞处于未分化状况。结论：10^6u／L的LIF对细胞增殖起促进作用，并能有效抑制分化。     

单独或联合应用酸性成纤维细胞生长因子与转化生长因子对猪牙乳头细胞增殖的影响

目的研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和转化生长因子(TGF)β1单独或联合应用后对猪牙乳头细胞(pDPCs)增殖的影响。方法通过体外细胞培养技术,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测aFGF、TGFβ1不同浓度、不同时间单独及联合应用后对pDPCs增殖的影响,所得数据用单因素方差进行分析。结果aFGF在5~100ng/ml和8d范围内能促进pDPCs增殖,最强效应浓度为10ng/ml和25ng/ml,最强效应时间为8d;TGFβ1在5~50ng/ml和8d范围内能抑制pDPCs增殖,其中以5ng/ml和10ng/ml抑制作用较弱;以aFGF最强效应浓度与TGFβ1较弱抑制浓度交互联合后对pDPCs有显著的促进增殖作用,其中以aFGF25ng/ml+TGFβ110ng/ml的效果最明显。结论在一定的浓度范围内,aFGF促进pDPCs增殖,TGFβ1抑制pDPCs增殖,两者联合可以促进pDPCs增殖。