TLMV5′非编码区基因的克隆与序列分析

目的　调查TTV阴性的非甲～庚型肝炎患者中TTV -likeminivirus(TLMV)感染情况 ,对TLMV5′非编码区 (5′NCR)部分基因进行分子克隆与序列分析。方法　采用巢式PCR技术检测5 3例TTV阴性的非甲～庚肝炎患者血清TLMVDNA ,对PCR产物进行克隆、测序和分析。结果　 5 3例病例中TLMVDNA阳性 37例 (6 9 8% ) ,对其中 8株TLMV基因克隆测序 ,并与Takahashi报道的TLMV序列 (GenBankAccessionNo ab 0 2 6 930、ab0 2 6 931)比较 ,其核苷酸序列同源性在 6 4%～ 83%之间。结论　在TTV阴性的非甲～庚肝炎患者中存在TLMV感染。TLMV5′NCR基因变异性较大。TLMV的致病性及其与非甲～庚肝炎的关系尚有待进一步研究     

328例血清TT病毒DNA及其IgG抗体的检测

目的 了解不同人群中TT病毒（TTV）感染情况。方法 根据Okamoto报道的TTV全序列设计引物,建立TTV DNA套式聚合酶链反应,利用该法对81例正常人、92例献血员、123例甲－庚型肝炎,32例非甲－庚型肝炎病人进行TTV DNA检测,同时用ELISA法检测抗TTV IgG。结果 TTV在以上四种人群中阳性率分别为2．5％、2．2％、19．5％、28．1％,抗TTV IgG的阳性率分别为1．2％、3．7％、26．8％、34．4％。前者与后者两者比较差异存在显著性（P＜0．05）;重叠感染中TTV合并HBV的二重感染率最高为75．0％。结论 不同人群匀存在TTV感染;正常人群和职业献血员存在健康携带状态;甲－庚型肝炎和非甲－肝炎病人为高危人群;TTV可与各型肝炎存在重叠感染;TTV除经血传播外,存在其他传播途径,抗TTV IgG可作为TT病毒感染的检测手段。     

TLMV5＇非编码区基因的克隆与序列分析

目的　调查TTV阴性的非甲～庚型肝炎患者中TTV～like mini virus(TLMV)感染情况,对TLMV5＇非编码区(5＇NCR)部分基因进行分子克隆与序列分析。方法　采用巢式PCR技术检测53例T T V阴性的非甲～庚肝炎患者血清TLMV DNA,对PCR产物进行克隆、测序和分析。结果　53例病例中TLMV DNA阳性37例(69.8％),对其中8株TLMV基因克隆测序,并与Takahashi报道的TLMV序列(GenBank Accession No ab 026930、ab026931)比较,其核苷酸序列同源性在64％～83％之间。结论　在T TV阴性的非甲～庚肝炎患者中存在TLMV感染。TLMV5＇NCR基因变异性较大。TLMV的致病性及其与非甲～庚肝炎的关系尚有待进一步研究。     

TTV酶联免疫方法的建立及其初步应用

目的 建立检测TTV的酶免疫技术,了解不同型肝炎患者血清中抗－TTV抗体的分布情况,并结合TTV DNA的检测分析两者的关系。方法 以原核表达的TTV ORF1蛋白为抗原建立检测抗－TTV的酶联免疫吸附试验（ELISA）方法,采用该方法检测不同肝炎患者中抗－TTV抗体;在套式聚合酶链反应（PCR）方法检测血清标本中TTV DNA。结果 所建立的检测TTV的ELISA方法具有较好的特异性,不同别肝炎患者中抗－TTV抗体阳性率分别为：甲型肝炎患者10.5%（4／38）,乙型肝炎患者12.5%（16／128）,丙型肝炎患者8.3%(7/84),丁型肝炎患者7.7%(30/93),健康人群1.3%(1/78)。统计学分析表明,非甲－庚型肝炎患者抗－TTV阳性率显著高于其他型肝炎患者（P＜0.01）,而正常人群则显著低于肝炎患者（P＜0.05）。抗－TTV阳性率与TTV DNA阳性率存在相关性（P＜0.05）。结论 在不同型肝炎患者中均可检出抗-TTV抗体,但以非甲－庚型肝炎患者阳性率高;TTV抗体可与基因同时存在于患者血清中,抗－TTV抗体可能类似抗－HCV, 是一传染性标志。     

原位杂交法检测非甲～庚型肝炎患者肝组织中TT病毒DNA

目的 证实在非甲－庚型病毒性肝炎患者肝组织中TT病毒（transfusion-transmitted virus,TTV)的存在。方法 采用地高辛素标记TTV DNA探针以原位杂交技术对51例血清学病毒标记非甲－戊型、免疫组化检测肝组织中HBsAg、HCV NS3Ag及HGV N55Aag阴性的病毒性肝炎患者石蜡包埋肝组织进行了检测。结果 各型病毒性肝炎肝组织中TTV基因的总检出率为27．5％,其中急性轻型肝炎的检出率为30．8％（4 ／13）,急性重型肝炎为1／8,亚急性重型肝炎为3／7,慢性肝炎为2／6,活动性肝硬化为2／9,慢性重肝肝炎为1／4,原发性肝癌为1／4。TTV DNA表达于肝细胞核或胞质内,以核型多见。在急性肝炎,TTV阳性细胞弥漫分布于肝小叶内,慢性肝炎于汇管区附近较为密集,而在肝硬化病例,阳性细胞在假小叶内多呈片族状不规则分布。结论 在不明原因病毒性肝炎患者血清及肝组织中TTV DNA的检出表明TTV为一种新型的肝炎病毒,TTV为一种嗜肝性病毒。     

中国不同人群的抗TTV血清流行病学及TTV基因不同区段的分子流行病学研究

目的　了解不同人群血清中抗 TTV抗体及ORF1 、ORF2 区段基因的分布状况 ,并分析其间的关系。方法　根据TTV的ORF1 、ORF2 区段的基因序列分别合成巢式PCR引物 ,扩增 2 46例血清标本中的TTV部分基因片段 ;采用TTVORF2 部分基因原核表达抗原 ,应用酶联免疫吸附试验(ELISA) ,检测相同血清标本中TTV抗体。结果　不同人群TTVORF1 、ORF2 基因及抗体检测的阳性率分别为 :有偿献血者 16 0 % (12 75 ) ,10 7% (8 75 )和 2 5 3% (19 75 ) ,甲型肝炎患者 10 0 % (3 30 ) ,16 7% (5 30 )和 16 7% (5 30 ) ;乙型肝炎患者 47 5 % (19 40 ) ,42 5 % (17 40 )和 2 2 5 % (9 40 ) ,丙型肝炎患者 42 9% (15 35 ) ,37 1% (13 35 )和 2 8 6 % (10 35 ) ;丁型肝炎患者 2 0 0 % (3 15 ) ,2 6 7% (4 15 )和13 3% (2 15 ) ;戊型肝炎患者 16 7% (2 12 )、16 7% (2 12 )、33 3% (4 12 ) ;庚型肝炎患者 2 3 8% (5 2 1) ,38 1% (8 2 1)和 2 3 8% (5 2 1) ;非甲～庚型肝炎患者 6 1 1% (11 18) ,5 0 0 % (9 18)和 44 4% (8 18)。统计分析TTVORF1 与ORF2 基因的检出率相关有统计学意义 (P =0 0 0 0 <0 0 1) ;不同人群间基因检出率相差有统计学意义 (P <0 0 1) ;TTV抗体的检出率与TTVDNA的检出率相关无     

TT病毒在肝炎患者中的检测及意义

自1997年底,日本学者报道ＴＴ病毒(ＴＴＶ)以来,国内外已相继有ＴＴＶ感染的报道。为了解西安地区ＴＴＶ感染情况,我们采用ＰＣＲ法检测了25例肝炎患者并对3例进行序列分析,证实西安地区也存在ＴＴＶ感染。25例肝炎患者经检测各型肝炎病毒标志,18例为非甲～庚型肝炎,7例为...     

部分人群TT病毒的分子流行病学研究

继甲、乙、丙、丁、戊、庚型肝炎的相继发现后 ,仍有部分肝炎病人未能进行病原学的分型。日本学者Ｎｉｓｈｉｚａｗａ等〔1〕 报道了一种可能与输血后肝炎相关的病毒 ,暂称为输血传播病毒 (ＴＴｖｉｒｕｓ) ,它可能是原因不明的非甲～庚型肝炎的病原。目前对ＴＴＶ的研究尚处在起步阶段 ,其病毒特性、临床情况和流行病学状况均有待研究。我们对部分人群血清进行了ＴＴＶＤＮＡ的检测 ,并分析了部分片段的ＤＮＡ序列。1　材料和方法1.1　化学试剂及工具酶　ＴａｑＤＮＡ聚合酶、ＰＣＲ仪来自ＰＥＲＫＩＮＥＬＭＥＲ公司 (美国 ) ,限制性内切…     

输血传播病毒（TTV）的研究进展与检测

在急慢性输血后肝炎、散发性肝炎、暴发型肝炎及肝硬变病例中,有相当部分病例无法用已建立的甲、乙、丙、丁、戊、庚型肝炎的实验室诊断方法进行病原学分型。因此,可能还存在尚未发现的致急慢性肝炎的其他病毒。1997年,日本学者Nishizawa等报道^⑴,应用代表性分析法(RDA)发现了一种可能与输血后肝炎相关的病毒,暂称为输血传播病毒(TTV)。目前,已成为国内外的研究热点,现将其研究进展与检测作一综述。     

分子杂交法研究肝炎病人血清和肝组织中输血传播病毒

目的 对各型肝炎病人血清和肝组织中输血传播病毒（TTV）核酸检测分析,探讨病毒的致病性。方法 以地高辛为标记物制备TTV DNA探针,斑点杂交法、原位杂交法分别检测血清中及肝组织中TTV DNA。结果 检测103例血清,TTV总阳性率为25．24％（26／103）;甲－戊型肝炎组检出率21．81％（12／55）、非甲－非庚型患者检出率47．37％（9／19）,显著高于正常对照组15％（3／20）。临床可见TTV的单独感染和重叠感染;出现急性、慢性甚至重度肝损伤。12 肝组织可见TTV阳性,阳性颗粒主要见于肝细胞核内。结论 从血清和肝组织证实了TTV的存在,提示这种病毒可能是导致肝脏炎症的一种新病原。     

临床诊断为非甲～戊型肝炎患者的病原学研究

目的探讨临床诊断为非甲-戊型肝炎患者的病原学。方法 采用巢式PCR（nPCR)检测HBV、TTV、B19、和SENV DNA；用逆转录巢式PCR（RT-nPCR)检测HGV和HCV RNA。结果 60例临床诊断为非甲-戊型肝炎患者中，单独HBVDNA阳性30例（阳性率为50.0%)，HBV和TTVDNA阳性10例（16.7%)，HBV和B19DNA阳性6例（10.0%)，HCVRNA、HBV和SENVDNA阳性1例（1.7%)，单独HCVRNA阳性1例（1.7%)，HCVRNA和B19DNA阳性1例（1.7%),HGVRNA无一例阳性，单独B19DNA阳性2例（3.3%)。单独TTVDNA阳性1例（1.7%)，另8例（13.3%)上述病毒核酸均为阴性。HBV合并感染TTV或B19对其血清学生化指标无影响。结论HBV是临床诊断为非甲-戊型肝炎的主要病原，HGV、TTV、B19和SENV与非甲-戊型肝炎无关。     

肾透析病人血清中乙型丙型及庚型肝炎病毒的检测

肾透析病人血清中乙型丙型及庚型肝炎病毒的检测董忠马雪梅根据有关资料报道〔１，２〕，在甲～庚型病毒性肝炎中，乙型、丙型及庚型肝炎与血源传播途径有关。目前临床中对尿毒症病人血液透析后，乙型、丙型及庚型病毒肝炎感染状况报告较少，我们在该方面做了一些研究。１...     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

国内存在庚肝病毒C型感染

我学者在分子生物学水平上证实,我国肝炎病人和无病症供血员中均存在庚型肝炎病毒C型感染,而且该病毒基因的部分核苷酸和氨基酸序列与美国报道的庚型肝炎病毒C型具有很高的同源性。这是北京医科大学微生物系和中国药品生物制品检定所协作,从分子生物学水平上研究得出的结论。 庚型肝炎是国外新近发现的一种病毒性肝炎,已知感染途径为经血液传播,其病毒至少可分为A、B、C三型,北京医大微生物系和中国药品生物制品核定所协作,从国内单采血浆供血员和非甲、乙、丙、丁、     

铜陵地区献血员等人群中庚型肝炎病毒感染状况的初步调查

为调查铜陵地区献血员等人群中瘐型肝炎病毒的感染状况,采用ＰＣＲ技术检测了献血员,慢性丙型肝炎及非甲～戊型肝炎患者的血清ＨＧＶＲＮＡ。结果表明;献血员、慢性丙型肝炎及非甲～戊型肝炎患者血清ＨＧＶ ＲＮＡ的阳性率分别为６．４７％（１３／２０１）、２１．４３％（９／４２）及８．３３％（１／１２）。铜陵地区存在较为严重的ＨＧＶ感染;献血员中ＨＧＶ感染率高于ＨＣＶ,所以,加强献血员ＨＧＶ筛选意义重大。     

庚型肝炎病毒致病性的研究现况

目前,仍有10%～15%的病毒性肝炎为原因不明的非甲～戊型肝炎(HNA～E)。1995年,Simons等[1]在1名急性非甲～戊型肝炎患者的血清中分离出一种新型病毒,命名为GBvirusC(GBV-C)。不久,Linnen等[2]也克隆并命名了另一种肝炎相关病毒,即庚型肝炎病毒(HGV)。研究表明,这两个病毒株核甘酸序列的同源性为95%,氨基酸序列同源性为100%,是同一种病毒的不同分离株,与丙型肝炎病毒(HCV)同属于黄病毒科。GBV-C/HGV发现后,立即成为肝炎领域研究的热点。有关GBV-C/HGV致病性的问题目前国内外尚有争议,多数人认为没有致病性,但也有报道GBV-C/H…     

血透患者乙、丙、庚型肝炎病毒感染检测的临床意义

目的:研究血透患者(HDP)乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、庚型肝炎病毒(HGV)的感染状况、相关因素及防治措施。方法:对68例血透患者用ELISA法检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc、抗HCV、抗HGV;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HBVDNA、HCVRNA。结果:输血组肝炎病毒感染率明显高于单纯血透组(P<0.01)。血透患者的HCV、HGV感染率明显高于对照组(P<0.01),HBV感染率高于对照组(P<0.05)。结论:血透患者HCV、HGV、HBV感染率高,输血和血制品是主要因素,其次与透析器及管路的交叉使用有关。应尽量减少输血,加强透析过程中的消毒隔离措施。     

贵州地区不同人群TTV核酸检测及部分核苷酸序列分析

目的 了解贵州地区TTV感染状况，分析TTV贵州株的基因特点。方法 以公布的TTV第1读码区序列设计两对寡核苷酸引物，用套式聚合酶链反应法(nested—PCR)检测贵州地区不同人群血清中TTV核酸(TTV DNA)，并对3份TTV DNA阳性血清的PcR产物，用直接测序法测定核苷酸序列。结果 62例正常人，37例志愿献血员，50例血液透析患者，107例静脉药瘾者及139例肝病患者血清中TTV DNA阳性率分别为6．45％(4／62)，8．1％(3／37)，26.0％(13／50)，25.23％(27／107)和16.55％(23／139)。在肝病组中，重型肝炎、肝硬化、肝癌患者的TTV DNA阳性率分别为35.71％(5／14)，14．15％(15／106)和15．79(3／19)。测定的282个核苷酸中，3株贵州株的同源性均高于99％，与日本株N22相比，同源性都为98％。结论 贵州存在TTV感染，血透患者中有较高的TTV感染率，TTV可能是重型肝炎的病原因子，3株贵州株可能为同一基因型。     

输血传播病毒部分基因的克隆表达及表达产物活性的初步鉴定

目的　构建含输血传播病毒(TTV)部分基因序列的原核表达载体并进行表达及产物活性的鉴定。方法　在计算机模拟基础上,采用PCR的方法　,从一名非甲～庚肝炎患者血清中,扩增编码蛋白具有抗原活性的TTVORF2部分基因片段。将该片段插入表达载体pQE-30,在大肠埃希菌中进行表达并利用酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定表达产物活性。结果　SDS-PAGE电泳后经电脑分析显示,表达产物相对分子质量与预计相同,表达量占菌体总蛋白量的22.33％。经ELISA检测表明表达产物有结合抗体活性。结论　成功构建了含TTV部分基因的原核表达载体,表达产物具有抗原活性。     

输血传播病毒（TTV）与乙型肝炎病毒混合感染的研究

目的　探讨输血传播病毒 (TTV)与HBV混合感染的情况及其对肝脏病变程度和对HBV复制的影响 .方法　应用微板核酸杂交—ELISA法检测 152例HBV患者血清中的TTVDNA和ELISA进行乙型肝炎相关病毒标志物检测 .结果　 152例HBV患者中TTV -DNA阳性 2 3例 (15.1% ) ,其中无症状携带者、慢性肝炎、活动性肝硬化、原发性肝癌患者中的TTV -DNA检出率分别为 2 / 18(11.1% )、8/ 54(14 .8% )、6/ 4 0 (15.0 % )、7/ 3 8(18.4% ) ,各组间无差异 .在慢性肝炎、活动性肝硬化、原发性肝癌患者中 ,TTV -DNA阳性组与TTV -DNA阴性组各项肝功能指标改变相似 .HBV和TTV混合感染组中HBeAg和抗 -HBcIgM阳性率低于单纯HBV感染组 (p <0 .0 5) ,而血清抗 -HBe阳性率则高于单纯HBV感染组 .结论　TTV的混合感染似乎并不影响HBV所致的肝脏病变程度 ,对HBV的复制可能有一定的抑制作用