噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的研究

目的建立快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性测定中的应用价值。方法应用噬菌体生物扩增法测定112株结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性,并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株采用Bactec MGIT 960测定其最低抑菌浓度(MIC)。以细菌接种量为10-3mg/ml,药物浓度5μg/ml、37℃作用24 h为药敏试验条件。结果噬菌体法测定112株结核分枝杆菌临床分离株卷曲霉素敏感91株、耐药21株,绝对浓度法敏感92株、耐药20株;两法测定均为敏感89株、均为耐药18株。在5株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中,3株噬菌体法与MIC测定结果相符合。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则噬菌体法测定卷曲霉素耐药性的敏感性为90%(18/20),特异性为96.7%(89/92),阳性预测值为85.7%(18/21),阴性预测值为97.8%(89/91),准确性为95.5%(107/112)。结论噬菌体生物扩增法测定卷曲霉素耐药性简便快速,只需2 d时间,操作不需特殊仪器设备,具有很高的敏感性和特异性,可作为MTB的卷曲霉素耐药性快速筛选方法,建议临床推广应用...     

噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的研究

目的 建立快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性测定中的应用价值。方法 应用噬菌体生物扩增法测定112株结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性,并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株采用Bactec MGIT 960测定其最低抑菌浓度(MIC)。以细菌接种量为10^-3mg/ml,药物浓度5μg/ml、37℃作用24 h为药敏试验条件。结果 噬菌体法测定112株结核分枝杆菌临床分离株卷曲霉素敏感91株、耐药21株,绝对浓度法敏感92株、耐药20株;两法测定均为敏感89株、均为耐药18株。在5株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中,3株噬菌体法与MIC测定结果相符合。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则噬菌体法测定卷曲霉素耐药性的敏感性为90%(18/20),特异性为96.7%(89/92),阳性预测值为85.7%(18/21),阴性预测值为97.8%(89/91),准确性为95.5%(107/112)。结论噬菌体生物扩增法测定卷曲霉素耐药性简便快速,只需2 d时间,操作不需特殊仪器设备,具有很高的敏感性和特异性,可作为MTB的卷曲霉素耐药性快速筛选方法,建议临床推广应用。     

噬菌体法与BACTEC-960检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性的比较研究

目的建立噬菌体生物扩增法(PhaB)快速测定乙胺丁醇(EMB)耐药性,探讨其在结核分枝杆菌(MTB)EMB耐药性测定中的应用价值。方法应用PhaB测定138株MTB临床分离株EMB耐药性,并与BACTEC960药敏试验结果比较,对耐药性测定结果不符合的菌株测定其最低抑菌浓度(MIC)。结果138株MTB临床分离株,BACTEC960测定敏感114株,耐药24株;PhaB测定敏感118株、耐药20株。两种方法测定均为敏感112株,均为耐药18株。共计130株两法测定药敏结果相符,符合率942%;结果不符8株,不符合率58%。如以BACTEC960药敏结果为判断标准,则PhaB检测EMB耐药性的敏感性为750%(18/24),特异性为982%(112/114),阳性预测值为900%(18/20),阴性预测值为949%(112/118),准确性为942%(130/138)。结论PhaB检测EMB耐药性只需3d时间,操作简便,不需特殊仪器设备,可作为MTB的EMB耐药性快速筛选方法。     

吡嗪酰胺耐药性结核分枝杆菌的噬菌体检测技术研究

目的 建立噬菌体生物扩增法（PhaB）快速测定吡嗪酰胺耐药性，并探讨其在结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性测定中的应用价值。方法 应用建立的PhaB测定108株结核分枝杆菌临床分离株的吡嗪酰胺耐药性，并与绝对浓度法的药敏结果进行比较，对不符合的菌株进行最低抑菌浓度（MIC）测定和序列测定分析。结果 PhaB检测吡嗪酰胺耐药性的最佳测定条件为pH值5．5、药物浓度200μg／ml、37℃作用48h。用绝对浓度法检测108株结核分枝杆菌临床分离株，其中吡嗪酰胺敏感33株、耐药75株；用PhaB检测该108株结核分枝杆菌临床分离株，若以噬菌斑减少95％为判断标准。则吡嗪酰胺敏感32株，耐药76株。2种方法检测均为敏感的为28株，均为耐药的为71株，符合率为91．7％；2种方法检测结果不符的为9株，其中5株的PhaB结果与MIC结果相符，4株的结果不符，测序结果表明9株中有7株的PhaB结果与测序结果相符。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准，PhaB检测吡嗪酰胺耐药性的敏感性为94．7％，特异性为84．8％，阳性预测值为93．4％，阴性预测值为87．5％，准确性为91．7％。结论 PhaB测定吡嗪酰胺耐药性简便、快速，3d即可获得药敏结果，可作为吡嗪酰胺耐药性的快速筛选方法。     

噬菌体法检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性的研究

目的 建立噬菌体生物扩增法（PhaB法）快速测定乙胺丁醇耐药性的实验体系,探讨PhaB法在测定结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性的应用价值.方法 应用PhaB法测定115株临床分离结核分枝杆菌耐药性,并与BacT/ALERT 3D药敏试验结果相比较,对耐药性测定结果不一致的菌株测定其最低抑菌浓度.结果 115株结核分枝杆菌临床分离株中经BacT/ALERT 3D测定敏感89株,耐药26株;PhaB法测定敏感93株,耐药22株.两种方法测定均为敏感87株,均为耐药20株,两种方法测定药敏结果相符率为93.0%;结果不符8株,不符合率6.96%.如以BacT/ALERT 3D药敏结果为判断标准,则PhaB法检测乙胺丁醇耐药性的敏感性为76.9%（20/26）,特异性为97.8%（87/89）,阳性预测值为90.9%（20/22）,阴性预测值为93.5%（87/93）,准确性为93.0%（107/115）.结论 PhaB法检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性只需3天时间,操作简便,不需特殊仪器设备,可作为结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性快速筛选方法之一.     

噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性研究

目的 建立快速测定结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性测定中的应用价值。探讨噬菌体检测技术(PhaB)快速检测氧氟沙星抗结核药物耐药性的可能性,分析其临床应用价值。 方法 应用PhaB测定205株结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对氧氟沙星的耐药性,并与绝对浓度法药敏结果比较,对两法检测结果不一致的菌株进行比例法测定。 结果 以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则PhaB检测OFX的敏感度、特异度、阳性和阴性预测值(PPV、NPV)及准确度分别为95.4%、93.2%、91.2%、96.5% 和94.1%,共有12株菌株PhaB法药敏结果与绝对浓度法检测结果不符,其中9株PhaB法药敏结果与比例法相符合。 结论 PhaB检测氧氟沙星药敏结果与绝对浓度法有较高的一致率,可作为MTB耐药性的快速筛选方法。     

噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性

目的建立快速测定结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在耐药性测定中的应用价值。方法应用噬菌体生物扩增法测定456株结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性。并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株采用BactecMGIT960测定其最低抑菌浓度(MIC)。结果噬菌体测定456株结核分枝杆菌临床分离株左氧氟沙星敏感267株,耐药189株,绝对浓度法敏感279株,耐药177株。两法测定均为敏感257株,均为耐药167株。在32株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符合的菌株中30株噬菌体法与MIC测定结果相符。如以绝对浓度法药敏结果判断标准,则噬菌体法测左氧氟沙星耐药性的敏感性为94.35%,特异性为92.11%,阳性预测值为88.36%。阴性预测值为96.26%,准确性为92.98%。结论噬菌体生物扩增法测定左氧氟沙星耐药性需2d,操作简便.不需要特殊仪器设备,可作为结核分枝杆菌左氧氟沙星耐药性的快速筛选方法。     

噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌利福平耐药性

目的　建立快速测定结核分枝杆菌利福平耐药性的噬菌体生物扩增法 ,并探讨其在结核分枝杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法　应用噬菌体生物扩增法测定 5 2 4株结核分枝杆菌利福平耐药性 ,并与绝对浓度法结果进行比较 ,对不符合的菌株采用BactecMGIT 96 0测定其最低抑菌浓度 (MIC)。结果　噬菌体法测定 5 2 4株结核分枝杆菌临床分离株利福平敏感 30 1株、耐药 2 2 3株 ,绝对浓度法敏感 313株、耐药 2 11株 ;两法测定均为敏感 2 88株、均为耐药 198株。在 38株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中 ,35株噬菌体法与MIC测定结果相符合。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准 ,则噬菌体法测定利福平耐药性的敏感性为 93 8%、特异性为 92 0 %、阳性预测值为88 8%、阴性预测值为 95 7%、准确性为 92 7%。结论　噬菌体生物扩增法测定利福平耐药性只需 2天时间 ,操作简便 ,不需特殊仪器设备 ,可作为结核分枝杆菌利福平耐药性的快速筛选方法。     

基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性临床应用评价

目的评价基因芯片技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性的临床应用效果。方法利用基因芯片技术对涂阳肺结核患者的痰标本和临床分离株进行利福平和异烟肼耐药基因位点检测,比较痰标本与菌株检测结果的差异;并以BACTEC MGIT 960药敏试验结果为对照评价基因芯片的检测性能。另外,通过对999株鉴定为结核分枝杆菌的临床分离菌株进行rpoB、katG和inhA基因耐药相关区域扩增产物测序,以验证基因芯片对核酸序列检测的准确性。结果在涂阳的1 108例标本中有100例经基因芯片菌种鉴定为非结核分枝杆菌。其余的1 008例痰标本基因芯片结果与BACTEC MGIT960培养阳性的菌株基因芯片结果比较仅有9例结果不一致,符合率为99.1%。以BACTEC MGIT960培养法药敏结果为对照,999株菌株基因芯片法检测利福平耐药性的符合率为98.1%,异烟肼的耐药性的符合率为94.5%。与DNA测序法相比,基因芯片法检测利福平和异烟肼耐药性的准确率分别为99.6%和99.8%。结论基因芯片技术能够快速、准确地进行结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性检测,并能直接用于痰标本检测。     

结核分枝杆菌异烟肼耐药性的噬菌体测定技术研究

目的建立噬菌体生物扩增法快速测定异烟肼（INH）耐药性的方法．并探讨其在结核分枝杆菌（MTB）INH耐药性测定中的应用价值。方法用PhaB法检测167株MTB临床分离株INH耐药性，并与Bactec-960测定结果比较，分析PhaB法的敏感性、特异性和准确性。结果0．2μg／ml INH与菌液37℃作用48h后，通过噬菌体检测．以噬菌斑减少95％为最适判断标准．噬菌斑减少高于95％的判为敏感株，噬菌斑减少低于95％的为耐药株。以Bactec-960测定结果为判断标准，则PhaB的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值及符合率分别为96．4％、96、4彤、93．1％、98．2％和96．4％。结论PhaB检测INH耐药性具有很高的敏感性和特异性．与Bactec-960的符合率达96．4％，只需3d时间．且操作简便、不需特殊仪器设备．可作为MTB的INH耐药性快速筛选方法。     

噬菌体生物扩增法检测痰结核分枝杆菌的临床研究

目的评价噬菌体生物扩增(PhaB)法检测痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法分别应用PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法和BACTECMGIT960快速培养法检测2005年8月至10月沈阳市胸科医院53例疑诊肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌,并对检测结果进行比较。结果PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法、BACTECMGIT960快速培养法检出阳性标本数分别为24,11,17和22份;以培养结果为评价标准,PhaB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为86.4%,83.9%,79.2%和89.7%;集菌涂片法和PhaB法联合检测的敏感性为90.9%,特异性为83.9%,阳性、阴性预测值分别为80.0%和92.9%。结论PhaB法检测痰中结核菌操作简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核分枝杆菌的快速检测方法;PhaB法联合集菌涂片法进行检测可进一步提高敏感性,减少漏诊率。     

Susceptibility testing to second-line drugs and ethambutol by Genotype MTBDRsl and Bactec MGIT 960 comparing with agar proportion method

The incidence of multidrug-resistant tuberculosis (MDRTB) is increasing. Rapid detection of resistance to second-line drugs is essential for patient management and efficient control of tuberculosis. The aim of the present study was to assess the ability of the GenoType MTBDRsl DNA strip and the Bactec MGIT 960 assay to detect resistance to second-line drugs and ethambutol in multidrug-resistant clinical isolates using the agar proportion method as a reference technique. Twenty-six Mycobacterium tuberculosis complex isolates identified as multidrug-resistant on the basis of conventional drug susceptibility testing were retrieved from our laboratory archive (1992-2010) for evaluation. The susceptibility of these strains to second-line drugs and ethambutol was tested prospectively using MGIT 960 and GenoType MTBDRsl. The turnaround time for agar proportion, MGIT 960, and GenoType MTBDRsl were, respectively, 21 days, 8 days, and 8?h. Sensitivity values for MGIT 960 and GenoType MTBDRsl were, respectively, ethambutol (85.7, 28.6%), amikacin (50, 75%), and ofloxacin (50, 83.3%). Specificity values were, respectively, ethambutol (73.7, 89.5%), amikacin (72.7, 95.5%), and ofloxacin (100, 100%). Our data show that both methods have significant limitations and cannot replace conventional drug susceptibility testing. The results of resistance testing should be interpreted with caution and confirmed using the reference method.     

对BACTEC^TM MGIT960培养报告结果为阴性的培养管中颗粒性物质的研究

目的 探讨使用BACTEC^TM MGIT960进行分枝杆菌培养时,仪器报告结果为阴性的MGIT960培养管中颗粒的性质及成因。 方法 收集北京市结核病胸部肿瘤研究所2010年1月至2010年12月进行分枝杆菌培养的标本中31份仪器报告阴性但有颗粒形成的培养管,分别对颗粒性物质进行抗酸染色、罗氏培养和BACTEC^TM MGIT960传代培养。对培养阳性的标本进行菌种鉴定、药敏试验。选择8株培养阳性的标本进行低细菌载量接种试验来分析颗粒形成的原因,包括2株结核分枝杆菌复合群,3株蟾蜍分枝杆菌和3株胞内分枝杆菌,每株将1个麦氏浓度的菌悬液用生理盐水连续稀释至10^-5、 10^-6、10^-7、 10^-8 倍,各接种到2支培养管。 结果 31份仪器报告阴性但有颗粒形成的培养管,有29份经再次传代培养后获得阳性培养结果,其中24份（24/29）用颗粒直接涂片后进行显微镜抗酸杆菌检查结果为阳性。29份培养阳性的菌株包括7株蟾蜍分枝杆菌,4株胞内分枝杆菌和18株结核分枝杆菌复合群。接种量为10^-6、10^-7、 10^-8 浓度的蟾蜍分枝杆菌培养管中均有颗粒形成,阳性比例分别为4/6、5/6、6/6。 结论 BACTEC^TM MGIT960进行结核分枝杆菌培养时,仪器报告阴性的MGIT960培养管中颗粒多为活的分枝杆菌;BACTEC^TM MGIT960系统颗粒的形成与低细菌载量有关,颗粒形成也有一定的种属特异性,主要集中在蟾蜍分枝杆菌和胞内分枝杆菌。     

显微镜观察药物敏感性技术检测结核分枝杆菌应用效果观察

目的 探讨显微镜观察药物敏感性检测（MODS）方法用于结核分枝杆菌（MTB）分离培养和耐药检测的应用效果.方法 收集276份肺结核临床疑似患者的痰标本,用MGIT 960 TB、罗氏法、MODS法检测MTB.用MODS法对80株MTB临床分离株进行药敏检测,并将结果与传统罗氏法进行比较.结果 MODS技术直接检测痰标本的阳性率为46％,阳性检出时间中位数为9 d（7～12 d）.MODS检测链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏结果与传统罗氏法符合率分别为95.0％、96.25％、97.5％、85.0％,检测敏感度分别为83.3％、95.65％、96.15％、70.83％,特异度分别为98.3％、96.50％、98.15％、91.07％.结论 MODS方法是一种快速简便、费用低、准确的诊断和药敏检测方法,具有广泛的应用前景.     

结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性四种测定方法的比较

目的探讨噬菌体生物扩增(PhaB)、Bactec-960、最低抑菌浓度(MIC)和基因芯片方法在结核分枝杆菌(MTB)异烟肼(INH)耐药性测定中的应用价值。方法应用4种方法检测167株MTB临床分离株INH耐药性，并比较测定结果的敏感性、特异性和准确性。结果Bactec-960检测敏感株111株，耐药株56株。若以Bactec-960测定结果为判断标准，则PhaB的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为96．4％、96．4％、93．1％、98．2％和96．4％；MIC的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为92．9％、99．1％、98．1％、96．5％和97．0％；基因芯片的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为83．9％、96．4％、92．2％、92．2％和92．2％。若以MIC测定耐药性结果为判断标准，则PhaB检测INH耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为100％、95．6％、91．4％、100％和97．0％；Bactec-960的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为98．1％、96．5％、92．9％、99．1％和97．0％；基因芯片的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为88．7％、96．5％、92．2％、94．8％和94．0％。结论PhaB检测INH耐药性具有很高的敏感性和特异性，与Bactec-960及MIC的符合率很高，只需3d时间，且操作简便、不需特殊仪器设备，可作为MTB的INH耐药性快速筛选方法。MIC测定INH耐药性结果与Bactec-960符合率较高，是否用于INH耐药性测定的判断标准有待进一步研究。基因芯片检测INH耐药性敏感性偏低，只能作为参考方法。     

噬菌体法同时检测四种一线抗结核药物耐药性

目的探讨噬菌体检测技术（PhaB）同时快速检测四种一线抗结核药物耐药性的可能性,分析其临床应用价值.方法应用PhaB同时测定139株结核分枝杆菌（MTB）临床分离株对链霉素（S）、异烟肼（H）、利福平（R）和乙胺丁醇（E）的耐药性,并与Bactec-960药敏结果比较,对两法检测结果不符的菌株进行最低抑菌浓度（MIC）测定.结果 PhaB检测S、H、R、E药敏结果与Bactec-960药敏结果符合率分别为97.1%、99.3%、95.7%和95.0%.如以Bactec-960药敏结果为判断标准,则PhaB检测S的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值（PPV、NPV）及准确性分别为90.0%、99.1%、96.4%、98.2%和97.1%;检测H的敏感性、特异性、PPV、NPV及准确性为97.9%、98.9%、97.9%、98.9%和95.0%;检测R的敏感性、特异性、PPV、NPV及准确性为86.2%、97.3%、89.3%、96.4%和95.0%;检测E的敏感性、特异性、PPV、NPV及准确性为81.0%、97.5%、85.0%、96.6%和95.0%.共有13株菌株19个药敏结果PhaB与Bactec-960检测结果不符.MIC检测结果有12株18个药敏结果支持PhaB结果,1株1个药敏结果支持Bactec-960结果.结论 PhB同时检测S、H、R、E药敏结果与Bactec-960结果有较高的符合率,可作为MTB耐药性的快速筛选方法.     

70例MDR-TB病例抗结核二线药物敏感性检测结果分析

了解耐多药结核分枝杆菌临床分离株对二线药物耐药情况,评价BACTEC MGIT960系统在抗结核二线药敏试验中的临床应用价值。方法 收集本院的痰培养阳性、经菌种鉴定和一线药物的药物敏感性试验确定为耐多药的结核分枝杆菌菌株。采用BACTEC MGIT960对4种二线药氧氟沙星（OFLX）、左氧氟沙星（LVFX）、阿米卡星（AMK）和卷曲霉素（CPM）进行药物敏感性检测,并与改良 L-J罗氏培养法相比较。结果 (1)2008年10月-2009年4月,70例MDR-TB分离到的菌株,包括初治病例26例、复治病例44例,对四种药的总耐药率为61.4%（43/70）。对OFLX、LVFX、AMK和CPM耐药率分别为48.6%、40.0%、17.1%、7.1%。初治耐药率为57.7%（15/26）,复治耐药率达63.6%（28/44）。符合XDR-TB诊断者5例（7.1%）,包括初治者1例（1.4%）,复治者4例（5.7%）。（2）BACTEC MGIT960二线药物敏感试验与改良L-J法相比,平均报告时间仅10.2天,明显短于L-J法,符合率在90%以上。结论 （1） 在住院耐多药结核病患者中对这四种抗结核二线药物的耐药率已经到了一个较高水平;同时,当地存在XDR-TB,应该引起重视。（2）BACTEC MGIT960系统可以准确而快速地检测结核分枝杆菌对二线药物的耐受性.